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Docente: JORGE WILLIAM ARBOLEDA VALENCIA
MAESTRÍA EN DESARROLLO SOSTENIBLE Y MEDIO AMBIENTE
COHORTE XVI -2017
MODULO: BIOTECONOLOGIA AMBIENTAL
Contaminación de suelos por Hidrocarburos
Aromáticos Policiclicos en Colombia y
Biorremediacion como estrategia biotecnológica
de su recuperación
Presentado por: ÁNGELA MARÍA ARISTIZABAL LÓPEZ
LUIS LEONARDO LUGO MANCILLA
HAROLD O JAVIER OROBIO ROSERO
.
Introducción
El problema de la contaminación está ligado a
factores económicos, sociales y políticos.
Los Hidrocarburos derivados del petróleo participan
en el deterioro de los Ecosistemas, inclusive en gran
magnitud para aquellos con elevado peso molecular
como los Hidrocarburos aromaticos policiclicos
(HAP)
En este trabajo se presenta la Biorremediación como
alternativa de Solución para la recuperación de los
suelos en Colombia por la contaminación de HAP.
Que son los Hidrocarburos
Aromáticos policíclicos ?
Son contaminantes hidrófobos orgánicos también generados por la producción de
coque y la mayoría de procesos que requieren combustión (Cerniglia, C, E, 1992), y
se encuentran con frecuencia en los sitios de zonas industriales.
Consecuencias ambientales de la contaminación por Hidrocarburos
Aromaticos Policiclicos HAP.
 La afectación en el suelo por estos contaminantes:
 Afectan el intercambio gaseoso con la atmósfera.
 Germinacion y crecimiento vegetativo de diferentes
especies vegetales.
 Ecosistemas forestales y plantas madereras
Modelo del destino de los HAP en el suelo a través del tiempo. Tomado de
(Kuppusamy, S., et al, 2017)
Hidrocarburos Aromáticos Policíclicos,
contaminantes tratados por biorremediación
Tecnologíasderemediaciónparasuelos
contaminadosconHAP
Tratamientos
biológicos
Tratamientos
fisicoquímicos
Tratamientos
térmicos
Biorremediacion
La extracción con
disolvente / lavado
de suelos (SE/SW)
La oxidación
química (CIUO)
Incineración
Desorción térmica
(DT)
Pirolisis
Cotos en función al tipo de remediación. Los valores presentados son
el promedio de un total de 230 proyectos aplicados para una variedad
de contaminantes biodegradables como gasolinas, lubricantes y HAP
(EPA, 2001).
Biorremediación
Principios bioquímicos del metabolismo de los
hidrocarburos aromáticos policíclicos HAP
Las bacterias se han implicado en la degradación de los HAP a través de procesos
metabólicos o transformaciones de co-metabolismo (Peng et al., 2008).
Según los investigadores en los hongos se reportan al menos dos mecanismos
implicados en la biodegradación de los HAP
 Utiliza el sistema de citocromo P-450
 Utiliza enzimas extracelulares solubles del catabolismo de la lignina: peroxidasas
de lignina (LiP), la peroxidasa de manganeso (MnP) y lacasas. (Steffen et al., 2003)
Catabolismo de los HAP por bacterias y hongos
Los mecanismos de Biodegradación requieren la
presencia de oxígeno molecular para iniciar el
ataque enzimático de los anillos del HAP.
Oxidación catalizada por la enzima
dioxigenasa cis-dihydrodiols
Intermediarios dihidroxilados en los ácidos
tricarboxílicos (TCA) que son intermediarios del ciclo
(Gibson and Parales, 2000).
Estos hongos se pueden clasificar en dos grupos
( Cerniglia, 1997).
• Hongos LIGNOLÍTICOS
• Hongos NO LIGNOLITICOS
En los procesos que utilizan las enzimas extracelulares
solubles de catabolismo por lignina, se generan enzimas que
no son específicas y oxidan una amplia variedad de
compuestos orgánicos.
En los hongos no lignoliticos, las enzimas monooxigenasas del
citocromo P450 catalizan la oxidación del HAP aportando
óxidos, que son productos iniciales del metabolismo del HAP
(Peng et al., 2008).
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Pseudomonas
Hongos lignoliticos
Gammaproteobacteria
Pseudomonas aeruginosa
Bacillus
Mycobacterium
Sphingomonas
Alphaproteobacteria
Negibacteria
Proteobacteria
Principales Microorganismos Utilizados
Principales tipos de bacterias, hongos y especies de
microorganismos para el tema de la biorremediacion de HAP
derivados del petróleo.
Dinámica de los principales tipos de microorganismos (hongos y bacterias) utilizados en las investigaciones de consulta (Fuente: Unidad de
Bibliometría - USTABUCA, cálculos basados en información de Scopus (Elsevier, 2016), procesados con VantagePoint (Versión 9.0, Search
Technology). Fecha de consulta: 21/02/17
Factores determinan la eficacia de la biorremediacion
Tendencia de la biotecnología en la biorremediacion
de HAP
1
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1996
1999
2001
2003
2005
2007
2009
2011
2013
2015
Dinamica de patentes por años
130
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3
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1
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China
Japon
Federacion Rusa
Canada
Australia
Italia
Taiwan
Brasil
Holanda
Noruega
Dinamica de patentes por países
Dinámica de patentes (Fuente: Unidad de Bibliometría - USTABUCA, cálculos basados en información de Derwent Innovations index, procesados con VantagePoint (Versión
9.0, Search Technology). Fecha de consulta: 08/05/2017
Tendencia del uso de microorganismos en las
invenciones
0 1 2 3 4 5 6
Sphingomonas
Pseudomonas aureofaciens
Burkholderia
Pseudomonas putida
Acinetobacter sp. Bap30 (CGMCC…
Bacillus pumilus strain.Bap9…
Bacterial consortium VUN 10009
Celeribacter indica P73 CGMCC…
Cycloclasticus sp. CGMCC No. 4339
Diaphorobacter sp. Phe82 (NITE P-16)
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RU.MBI.1997 (FERM P-17934)
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Pseudomonas aureofaciens
Bacillus cereus
Burkholderia
Pseudomonas aeruginosa
Pseudomonas putida
Dinámica de patentes (Fuente: Unidad de Bibliometría - USTABUCA, cálculos basados en información de Derwent Innovations index, procesados con VantagePoint (Versión
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BIORREMEDIACIÓN OFF-SITE CON MICROORGANISMO DEL
GÉNERO Pseudomona aeruginosa SOBRE HIDROCARBUROS
DERIVADOS DEL PETRÓLEO EN SUELO CONTAMINADO CON
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RECOLECCION DE MUESTRAS
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(BIORREMEDIACION)
CROMATOGRAFIA DE GASES EN SUELO INICIAL CROMATOGRAFIA DE GASES EN SUELO FINAL
RESULTADOS DE LABORATORIO
• La biorremediación es una práctica que está tomando importancia a nivel mundial
porque el aumento de la actividad industrial está degradando cada vez más los recursos
naturales.
• La biorremediación ha generado buenas expectativas por su bajo costo y eficiencia en
la remoción de contaminantes, el proceso depende de:
- La concentración del residuo.
- La composición del residuo.
- La intervención de factores físico-químicos que le brindan a los microorganismos
las condiciones óptimas de crecimiento
Según lo establecido, las investigaciones demuestran que el uso de los microorganismos es
una buena opción para la biorremediación de contaminantes de hidrocarburos aromáticos
policíclicos derivados por petróleo.
Conclusiones
• En países en vía de desarrollo como Colombia, se ha encontrado en el petróleo una creciente fuente de
riqueza. Durante la extracción, transporte y refinación del crudo ocurren derrames accidentales o
intencionales, como es el caso actual de los ataques terroristas generados por los grupos al margen de la
ley sobre los ductos de conducción que en el País causan contaminación en aguas y suelos afectando
los ecosistemas. Por lo cual se espera ofrecer una panorámica global del problema, que sirva para
estimular futuros trabajos e investigaciones como una alternativa para la mitigación de contaminantes
derivados del petróleo como los HAP, que constituyen una amenaza para la vida y se exponen en los
derrames del crudo.
• Sin embargo, existen en la naturaleza microorganismos capaces de metabolizarlos y durante la última
década, una variedad de estos microorganismos se ha aislado y caracterizado por su capacidad para
degradar HAP. Por lo que se espera que a largo o mediano plazo dependiendo del peso molecular del
contaminante el proceso de biorremediación tenga una respuesta eficiente.
• La tendencia en este tipo de biotecnología ambiental muestra claramente el interés de los investigadores
en los enfoques ecológicos y sostenibles. Aunque la mayoría de las tecnologías verdes o de
biorremediación discutidos en esta revisión han sido reconocidos desde hace más de un siglo como ser
capaz de remediar con éxito los suelos contaminado por HAP.
• Christofi, N., Ivshina, I., 2002. Microbial surfactants and their use in field studies of soil remediation. J. Appl. Microbiol. 93, 915e929.
• Potin, O, et al. 2004. Bioremediation of an aged polycylic aromatic hydrocarbons (PAHs)-contaminated soil by filamentous fungi isolated from
the soil. International Biodeterioration and Biodegradation. 54(1):45-52.
• Peng, R, H., Xiong, A, S., Xue, Y., Fu, X, Y., Gao, F., Zhao, W., Tian, Y, S., Yao, Q, H. 2008. Microbial biodegradation of polyaromatic
hydrocarbons. FEMS Microbiol. 32: 927–955.
• Pineda-Flores, G., Mesta, A, M. 2001. Petroleum asphaltenes: generated problematic and possible biodegradation mechanisms. Latinoam
Microbiol. 43(3):143-150.
• Restrepo, R. 2002. Derrame de hidrocarburos. Impacto en los ecosistemas tropicales. ECOPETROL Instituto Colombiano de Petróleo.
• Rodríguez-Vázquez R., Roldán-Martín G.A. y Del Río Galván C.P., Patente Mexicana No. Número 291975: “Proceso de biorremediación en
cultivo sólido con la adición de granos de café”, otorgada el 9 de noviembre de 2011 por el Instituto Mexicano de la Propiedad Industrial.
• Schmidt, W. 2000. Suelos contaminados con hidrocarburos: la biorremediación como una solución ecológicamente compatible. Cooperación
Técnica Alemana (GTZ). En: w. g t z. o r g .m x / s i t i o s - c o n t a m / a r t i c u lo s / biorremed_Mex2.pdf.
• U.S. Environmental Proteccion Agency (EPA).2001. Treatment Technologies for Site Cleanup: Annual Status Report. 10th Edition. Office of Solid
Waste and Emergency Response. http://www.epa.gov/TIO.
• Ravelet, C., Krivobok, S., Sage, L., Steiman, R. 2000. Biodegradation of pyrene by sediment fungi. Chemosphere. 40: 557-563.
• Oliveira, R., Alves, F. 2013. Diversidade microbiana utilizada na biorremediação de solos contaminados por petróleo e derivados. NBC, Belo
Horizonte, MG. 03(05): 2238-1945.
• Hammel, K, E. 1992. Oxidation of aromatic pollutants by lignindegrading fungi and their extracellular peroxidases. Met Ions Biol Sys. 28:41–60.
• Cerniglia, C, E.1992. Biodegradation of polycyclic aromatic hydrocarbons. Biodegradation. 3:351-368.
• Cerniglia, C, E. 1997. Fungal metabolism of polycyclic aromatic hydrocarbons: past, present and future applications in bioremediation. J Ind
Microbiol Biotechnol. 19:324–333.
• Dean-Ross, D., Moody, J., Cerniglia, C, E. 2002 Utilization of mixtures of polycyclic aromatic hydrocarbons by bacteria isolated from
contaminated sediment. FEMS Microbiol Ecol. 41: 1–7.
• FUNDACION IDEAS PARA LA PAZ. (2013). EL ELN Y LA INDUSTRIA PETROLERA: BOGOTA: FUNDACION IDEAS PARA LA PAZ.
• Gibson, D, T., Parales, R, E. 2000. Aromatic hydrocarbon dioxygenases in environmental biotechnology. Curr Opin Biotechnol.11: 236–243.
• Atlas, R. M., Bartha, R., 1992. Hydrocarbon biodegradation and oil spill bioremediation. Advances in Microbiology Ecology. 12: 287-338.
• Alexander, M. 2004. Biodegradation and bioremediation. Academic Press.
• Semple, K.T., B.J. Reid y T.R. Fermor 2001. Impact of composting strategies on the treatment of soils contaminated with organic pollutants.
Environ. Pollution 112: 269-283.
• .
Bibliografía

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  • 1. Docente: JORGE WILLIAM ARBOLEDA VALENCIA MAESTRÍA EN DESARROLLO SOSTENIBLE Y MEDIO AMBIENTE COHORTE XVI -2017 MODULO: BIOTECONOLOGIA AMBIENTAL Contaminación de suelos por Hidrocarburos Aromáticos Policiclicos en Colombia y Biorremediacion como estrategia biotecnológica de su recuperación Presentado por: ÁNGELA MARÍA ARISTIZABAL LÓPEZ LUIS LEONARDO LUGO MANCILLA HAROLD O JAVIER OROBIO ROSERO
  • 2. . Introducción El problema de la contaminación está ligado a factores económicos, sociales y políticos. Los Hidrocarburos derivados del petróleo participan en el deterioro de los Ecosistemas, inclusive en gran magnitud para aquellos con elevado peso molecular como los Hidrocarburos aromaticos policiclicos (HAP) En este trabajo se presenta la Biorremediación como alternativa de Solución para la recuperación de los suelos en Colombia por la contaminación de HAP.
  • 3. Que son los Hidrocarburos Aromáticos policíclicos ? Son contaminantes hidrófobos orgánicos también generados por la producción de coque y la mayoría de procesos que requieren combustión (Cerniglia, C, E, 1992), y se encuentran con frecuencia en los sitios de zonas industriales. Consecuencias ambientales de la contaminación por Hidrocarburos Aromaticos Policiclicos HAP.  La afectación en el suelo por estos contaminantes:  Afectan el intercambio gaseoso con la atmósfera.  Germinacion y crecimiento vegetativo de diferentes especies vegetales.  Ecosistemas forestales y plantas madereras Modelo del destino de los HAP en el suelo a través del tiempo. Tomado de (Kuppusamy, S., et al, 2017)
  • 6. Cotos en función al tipo de remediación. Los valores presentados son el promedio de un total de 230 proyectos aplicados para una variedad de contaminantes biodegradables como gasolinas, lubricantes y HAP (EPA, 2001).
  • 8. Principios bioquímicos del metabolismo de los hidrocarburos aromáticos policíclicos HAP Las bacterias se han implicado en la degradación de los HAP a través de procesos metabólicos o transformaciones de co-metabolismo (Peng et al., 2008). Según los investigadores en los hongos se reportan al menos dos mecanismos implicados en la biodegradación de los HAP  Utiliza el sistema de citocromo P-450  Utiliza enzimas extracelulares solubles del catabolismo de la lignina: peroxidasas de lignina (LiP), la peroxidasa de manganeso (MnP) y lacasas. (Steffen et al., 2003)
  • 9. Catabolismo de los HAP por bacterias y hongos Los mecanismos de Biodegradación requieren la presencia de oxígeno molecular para iniciar el ataque enzimático de los anillos del HAP. Oxidación catalizada por la enzima dioxigenasa cis-dihydrodiols Intermediarios dihidroxilados en los ácidos tricarboxílicos (TCA) que son intermediarios del ciclo (Gibson and Parales, 2000). Estos hongos se pueden clasificar en dos grupos ( Cerniglia, 1997). • Hongos LIGNOLÍTICOS • Hongos NO LIGNOLITICOS En los procesos que utilizan las enzimas extracelulares solubles de catabolismo por lignina, se generan enzimas que no son específicas y oxidan una amplia variedad de compuestos orgánicos. En los hongos no lignoliticos, las enzimas monooxigenasas del citocromo P450 catalizan la oxidación del HAP aportando óxidos, que son productos iniciales del metabolismo del HAP (Peng et al., 2008).
  • 10. 60 27 24 23 20 18 17 15 15 14 Pseudomonas Hongos lignoliticos Gammaproteobacteria Pseudomonas aeruginosa Bacillus Mycobacterium Sphingomonas Alphaproteobacteria Negibacteria Proteobacteria Principales Microorganismos Utilizados Principales tipos de bacterias, hongos y especies de microorganismos para el tema de la biorremediacion de HAP derivados del petróleo. Dinámica de los principales tipos de microorganismos (hongos y bacterias) utilizados en las investigaciones de consulta (Fuente: Unidad de Bibliometría - USTABUCA, cálculos basados en información de Scopus (Elsevier, 2016), procesados con VantagePoint (Versión 9.0, Search Technology). Fecha de consulta: 21/02/17
  • 11. Factores determinan la eficacia de la biorremediacion
  • 12. Tendencia de la biotecnología en la biorremediacion de HAP 1 4 5 7 6 8 6 10 11 18 18 23 15 16 24 20 25 21 27 16 1996 1999 2001 2003 2005 2007 2009 2011 2013 2015 Dinamica de patentes por años 130 37 21 12 11 7 6 4 3 3 2 2 2 1 1 1 1 1 1 1 China Japon Federacion Rusa Canada Australia Italia Taiwan Brasil Holanda Noruega Dinamica de patentes por países Dinámica de patentes (Fuente: Unidad de Bibliometría - USTABUCA, cálculos basados en información de Derwent Innovations index, procesados con VantagePoint (Versión 9.0, Search Technology). Fecha de consulta: 08/05/2017
  • 13. Tendencia del uso de microorganismos en las invenciones 0 1 2 3 4 5 6 Sphingomonas Pseudomonas aureofaciens Burkholderia Pseudomonas putida Acinetobacter sp. Bap30 (CGMCC… Bacillus pumilus strain.Bap9… Bacterial consortium VUN 10009 Celeribacter indica P73 CGMCC… Cycloclasticus sp. CGMCC No. 4339 Diaphorobacter sp. Phe82 (NITE P-16) Enterobacter cloacae tzyx2 Galactomyces geotrichum strain… Klebsiella strain M2012239 Methylobacterium (1xb-3) Mucor species FMM strain Novosphingobium sp. 1 MP25 strain… Penicillium janthinellum Pseudomonas alcaligenes MEV Pseudomonas sp. F14 (CCTCC M… Rhodococcus C2 FERM P-18509 -… RU.MBI.1997 (FERM P-17934) Sulfurospirillum sp. Phe91 (NITE P-13) Thiobacillus denitrificans Microorganismos usados en las patentes Sphingomonas Mycobacterium gilvum Pseudomonas aureofaciens Bacillus cereus Burkholderia Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas putida Dinámica de patentes (Fuente: Unidad de Bibliometría - USTABUCA, cálculos basados en información de Derwent Innovations index, procesados con VantagePoint (Versión 9.0, Search Technology). Fecha de consulta: 08/05/2017
  • 14. BIORREMEDIACIÓN OFF-SITE CON MICROORGANISMO DEL GÉNERO Pseudomona aeruginosa SOBRE HIDROCARBUROS DERIVADOS DEL PETRÓLEO EN SUELO CONTAMINADO CON DIESEL.
  • 15. RECOLECCION DE MUESTRAS PRUEBAS DE LABORATORIO Metodología Tamizaje textura Potencial de hidrogeno Conductividad Eléctrica Pesaje Agregación de Muestra mas cultivo de Microorganismos Pseudomona aeruginosa (BIORREMEDIACION)
  • 16. CROMATOGRAFIA DE GASES EN SUELO INICIAL CROMATOGRAFIA DE GASES EN SUELO FINAL RESULTADOS DE LABORATORIO
  • 17. • La biorremediación es una práctica que está tomando importancia a nivel mundial porque el aumento de la actividad industrial está degradando cada vez más los recursos naturales. • La biorremediación ha generado buenas expectativas por su bajo costo y eficiencia en la remoción de contaminantes, el proceso depende de: - La concentración del residuo. - La composición del residuo. - La intervención de factores físico-químicos que le brindan a los microorganismos las condiciones óptimas de crecimiento Según lo establecido, las investigaciones demuestran que el uso de los microorganismos es una buena opción para la biorremediación de contaminantes de hidrocarburos aromáticos policíclicos derivados por petróleo. Conclusiones
  • 18. • En países en vía de desarrollo como Colombia, se ha encontrado en el petróleo una creciente fuente de riqueza. Durante la extracción, transporte y refinación del crudo ocurren derrames accidentales o intencionales, como es el caso actual de los ataques terroristas generados por los grupos al margen de la ley sobre los ductos de conducción que en el País causan contaminación en aguas y suelos afectando los ecosistemas. Por lo cual se espera ofrecer una panorámica global del problema, que sirva para estimular futuros trabajos e investigaciones como una alternativa para la mitigación de contaminantes derivados del petróleo como los HAP, que constituyen una amenaza para la vida y se exponen en los derrames del crudo. • Sin embargo, existen en la naturaleza microorganismos capaces de metabolizarlos y durante la última década, una variedad de estos microorganismos se ha aislado y caracterizado por su capacidad para degradar HAP. Por lo que se espera que a largo o mediano plazo dependiendo del peso molecular del contaminante el proceso de biorremediación tenga una respuesta eficiente. • La tendencia en este tipo de biotecnología ambiental muestra claramente el interés de los investigadores en los enfoques ecológicos y sostenibles. Aunque la mayoría de las tecnologías verdes o de biorremediación discutidos en esta revisión han sido reconocidos desde hace más de un siglo como ser capaz de remediar con éxito los suelos contaminado por HAP.
  • 19. • Christofi, N., Ivshina, I., 2002. Microbial surfactants and their use in field studies of soil remediation. J. Appl. Microbiol. 93, 915e929. • Potin, O, et al. 2004. Bioremediation of an aged polycylic aromatic hydrocarbons (PAHs)-contaminated soil by filamentous fungi isolated from the soil. International Biodeterioration and Biodegradation. 54(1):45-52. • Peng, R, H., Xiong, A, S., Xue, Y., Fu, X, Y., Gao, F., Zhao, W., Tian, Y, S., Yao, Q, H. 2008. Microbial biodegradation of polyaromatic hydrocarbons. FEMS Microbiol. 32: 927–955. • Pineda-Flores, G., Mesta, A, M. 2001. Petroleum asphaltenes: generated problematic and possible biodegradation mechanisms. Latinoam Microbiol. 43(3):143-150. • Restrepo, R. 2002. Derrame de hidrocarburos. Impacto en los ecosistemas tropicales. ECOPETROL Instituto Colombiano de Petróleo. • Rodríguez-Vázquez R., Roldán-Martín G.A. y Del Río Galván C.P., Patente Mexicana No. Número 291975: “Proceso de biorremediación en cultivo sólido con la adición de granos de café”, otorgada el 9 de noviembre de 2011 por el Instituto Mexicano de la Propiedad Industrial. • Schmidt, W. 2000. Suelos contaminados con hidrocarburos: la biorremediación como una solución ecológicamente compatible. Cooperación Técnica Alemana (GTZ). En: w. g t z. o r g .m x / s i t i o s - c o n t a m / a r t i c u lo s / biorremed_Mex2.pdf. • U.S. Environmental Proteccion Agency (EPA).2001. Treatment Technologies for Site Cleanup: Annual Status Report. 10th Edition. Office of Solid Waste and Emergency Response. http://www.epa.gov/TIO. • Ravelet, C., Krivobok, S., Sage, L., Steiman, R. 2000. Biodegradation of pyrene by sediment fungi. Chemosphere. 40: 557-563. • Oliveira, R., Alves, F. 2013. Diversidade microbiana utilizada na biorremediação de solos contaminados por petróleo e derivados. NBC, Belo Horizonte, MG. 03(05): 2238-1945. • Hammel, K, E. 1992. Oxidation of aromatic pollutants by lignindegrading fungi and their extracellular peroxidases. Met Ions Biol Sys. 28:41–60. • Cerniglia, C, E.1992. Biodegradation of polycyclic aromatic hydrocarbons. Biodegradation. 3:351-368. • Cerniglia, C, E. 1997. Fungal metabolism of polycyclic aromatic hydrocarbons: past, present and future applications in bioremediation. J Ind Microbiol Biotechnol. 19:324–333. • Dean-Ross, D., Moody, J., Cerniglia, C, E. 2002 Utilization of mixtures of polycyclic aromatic hydrocarbons by bacteria isolated from contaminated sediment. FEMS Microbiol Ecol. 41: 1–7. • FUNDACION IDEAS PARA LA PAZ. (2013). EL ELN Y LA INDUSTRIA PETROLERA: BOGOTA: FUNDACION IDEAS PARA LA PAZ. • Gibson, D, T., Parales, R, E. 2000. Aromatic hydrocarbon dioxygenases in environmental biotechnology. Curr Opin Biotechnol.11: 236–243. • Atlas, R. M., Bartha, R., 1992. Hydrocarbon biodegradation and oil spill bioremediation. Advances in Microbiology Ecology. 12: 287-338. • Alexander, M. 2004. Biodegradation and bioremediation. Academic Press. • Semple, K.T., B.J. Reid y T.R. Fermor 2001. Impact of composting strategies on the treatment of soils contaminated with organic pollutants. Environ. Pollution 112: 269-283. • . Bibliografía