Evaluation de l’activité anti-mutagène / anti-génotoxique des huiles essentielles et leur potentiel anti-carcinogène Conférence au : 12e Symposium international d'aromathérapie"La plante entre matière et lumière". Grasse 26, 27 et 28 mars 2010 Dr Abdesselam Zhiri, PhD Directeur de R&D Pranarôm International S.A

1. Evaluation de l’activité anti-mutagène /
anti-génotoxique des huiles essentielles et
leur potentiel anti-carcinogène
Pranarôm International S.A. 37, Av. des Artisans. B-7822 Ghislenghien, Belgique
Web: www.pranarom.com Mail: azhiri@pranarom.com
12e
Symposium international d'aromathérapie
"La plante entre matière et lumière"
Grasse 26, 27 et 28 mars 2010
Dr Abdesselam Zhiri, PhD
Directeur de R&D

2. MenuMenu
 Introduction
 Objectifs
 Généralités & définitions:
 Toxicité génétique
 Génotoxines, Génotoxicité, Anti-génotoxicité
Mutagènes, Anti-mutagènes & Anti-carcinogènes
 Conclusions
 Perspectives
 Matériels & Méthodes
 Résultats & Discussion

3.  Introduction
De quoi sont faits les petits enfants ?
De sucre et d’épices, nous dit la comptine !
De sucre, assurément, mais aussi de quantité
d’autres hydrates de carbone, de protéines,
d’acides nucléiques et d’autres composés
chimiques.
La vie de chacun d’entre nous est une
interminable chaîne de réactions chimiques qui
permettent à notre corps de fonctionner.
Ce que nous mangeons, l’air que nous respirons,
l’eau que nous buvons procurent à notre système
les éléments nécessaires pour produire ces
réactions chimiques et notre corps arrive
généralement à expulser la plupart des produits
inutiles.
Cependant, on s’est inquiété du fait que les
aliments, l’eau et l’air pouvaient introduire dans
notre organisme des substances chimiques
toxiques !.
* Toxicologie, Guide pour les éducateurs. 1997. Alberta Environmental Protection. le réseau canadien des centres de toxicologie
*

4.  Introduction
♣ Notre alimentation peut contenir des substances mutagènes
et carcinogènes variables
♣ Mais elle est également composée de substances anti-
mutagènes et anti-carcinogènes.
♣ On estime que jusqu’à un tiers des cancers sont attribuables
à une mauvaise alimentation
♣ Un taux de gras élevé dans le sang, une diète faible en fibres,…
30% des décès enregistrés suite à
un cancer résulte de la
consommation de tabac
Centre international de recherche sur le
cancer 2007 (Circ).
L’obésité joue un rôle
dans presque 4% des
cancers.
Tim Key du Cancer Research
UK, 2006
Oui, l’alcool est cancérogène pour
l’Homme. Les études épidémiologiques
ont montré clairement que la
consommation de boissons alcoolisées
augmente le risque de cancers.
International Agency for Research on Cancer: Alcohol
Drinking. IARC Monographs on the Evaluation of the
Carcinogenic Risks to Humans, vol 44. IARC, Lyon, 1988.
…pouvaient contribuer à l’incidence de cancer.
l’obésité l’abus d’alcool l’abus de tabac

5.  Introduction
La corrélation qui pourrait s'établir entre la mutagenèse et la carcinogenèse
L’évaluation de l’activité génotoxique des produits naturels et surtout des huiles
essentielles est devenue primordiale pour assurer l’absence de risques à long terme.
Test SMART Test Ames
Génotoxicité des HE
Anti-génotoxicité des HE
Cytotoxicité des HEToxicité générale
chronique et aigue des HE
Propriétés anti-mutagènes des HE
Réduction des taux des mutations induites par les mutagènes et les génotoxines
Simulation du métabolisme* in vivo à celui
des mammifères par l’addition d’1 fraction
microsomale d’extrait de foie de rats (S9-mix)
EtudieretEvaluer
Anti-cancéreux à base d’HE et
Prévention du cancer
‘Chimioprévention’
*Certains produits chimiques ne peuvent exprimer leur activité génotoxique qu’après leur métabolisation dans le foie
Mise au point d’une série de tests de toxicité génétique pour les huiles essentielles
chez les Procaryotes et les Eucaryotes.




6.  Objectifs
Attirer l'attention des aromathérapeutes et des aromatologues sur
l’importance de la génotoxicité dans le domaine de la toxicité des HE
 Montrer les opportunités que pourraient offrir les HE dans le domaine
de cancérologie
 Evaluer l’innocuité des HE en utilisant des outils de toxicologie
génétique ‘génotoxicité’ :
 Test SMART: Drosophila melanogaster
 Test Ames : dans 2 systèmes différents
- Salmonella typhimurium
- Saccharomyces cerevisiae
 Evaluer l’activité anti-génotoxique et anti-mutagènes de plusieurs
HE et de leur action sur la mutagenèse induite

7. Le cancer était responsable de 7,6 millions
de décès en 2007.
*Centre international de recherche sur le cancer (Circ).
En 2010, le cancer est la première cause de
mortalité dans le monde.
Le cancer représentait 13% de tous les
décès en 2005.
Estimation de l’OMS
11.4 millions de personnes
en 2030
9 millions de personnes
en 2015
 Généralités & définitions:

8. Les études épidémiologiques ont
montré que l’incidence des cancers
est hétérogène.
L’incidence du cancer dans le monde
La différence au niveau de l'incidence du cancer dans le
monde ne peut pas être attribuée à la variation au niveau de
l’ADN
Puisque les êtres humains sont identiques à 99.1%
dans leur séquence génétique
Elle peut être liée aux facteurs
environnementaux et au mode de vie
 Généralités & définitions:
80% des cancers sont dus aux facteurs environnementaux dont 30
à 60% sont liés à l’alimentation

9.  Généralités & définitions:
Produits naturels
Constituants de plantes:

Quercetine; Flavonoïde présent dans plusieurs fruits et légumes
Psoralène; présent dans le persil, le fenouil, les figues…
Safrol; Phénol présent dans le gingembre, le poivre noir…
Gyromitrine; hydrazine présente dans Gyromitra esculenta, champignon comestible
Génotoxicité; Mutagènes et Carcinogènes alimentaires
Produits formés au cours des préparations alimentaires
Hydrocarbures Aromatiques Polycycliques
Amines Aromatiques

Formés dans les grillades
de poissons et de viandes
Les plus rencontrés dans les aliments
benzo[a]pyrène
benzo[a]anthracène
benzo[b]fluoranthène
dibenzo[a,h]anthracène
Contaminants chimiques
Pesticides

Métaux lourds

10. La réparation de ces altérations est nécessaire pour le maintien de
l'intégrité des chromosomes, la multiplication des cellules et leur survie.
Mutations spontanées Mutations induites
Désoxyribose
Phosphate
Groupe R-alkyle
Dimère
pyrimidique
Site apyrimidique
Liaison ADN-ADN
Cassure simple
brin
Altération de base
Alkylation
Cassure double
brin
Site apurinique
Liaison ADN-
Protéine
Différents types d’altération de l’ADN (Muller et coll., 1981)
A tout instant, l'ADN subit des lésions et des altérations
Génotoxicité; génotoxines et mutagènes
Modifications de l’ADN,
altérant le génome (mutagenèse)
Telles lésions du matériel
génétique peuvent avoir des
effets cancérogènes, tératogènes,
héréditaires
Intérêt d’Identifier les agents
synthétiques et/ou naturels
(génotoxines) potentiellement
génotoxiques et cancérogènes
pour l’homme

11. Anti-génotoxicité; anti-mutagènes & anti-carcinogènes
Substances d’origine végétale, animale ou synthétique capables
d’inhiber ou de réduire les effets mutagènes et/ou carcinogènes
spontanés ou induits.

Elles agissent au niveau extracellulaire comme intracellulaire,
directement avec le mutagène et ses électrophiles ou sur les
processus menant à leur activation.
Les anti-mutagènes et les anti-carcinogènes agissent aussi sur le
processus de la réparation de l’ADN.

Chlorophylle Fibres alimentairesCurcumine
Flavonoïdes
Tocophérol
Vanilline
Beta-Carotène
Acide AscorbiqueEugénol Limonène
Polyphénols Zingibérone
Quelques Anti-mutagènes alimentaires

12. Activateurs des enzymes de
détoxification Piégeurs des électrophiles
Stimulateurs de la réparationInhibiteurs de l’activation
des promutagènes
Inhibiteurs de la prise des
mutagènes
Réparation
ADN normal
Pénétration
Xénobiotique
Xénobiotique
Inhibiteurs de promotion et
de la progression
Excrétion
Métabolisme
phase II
Conjugué
Métabolite
électrophile
Métabolisme
phase I ADN muté
Cellules pré-
néoplasiques
Cellules
néoplasiques
Cellule initiée
Progression
Promotion
CELLULE
Anti-génotoxicité; Anti-mutagènes & Anti-carcinogènes
Mécanismes de réparation de l’ADN
ADN

13. La possibilité de modérer la réponse des cellules envers un
mutagène par des substances phyto-aromatiques ouvre plusieurs
horizons dans le contrôle du cancer.
Les anti-mutagènes sont regroupés en deux classes majeures:
Anti-génotoxicité; anti-mutagènes & anti-carcinogènes
De ce fait, la recherche des anti-mutagènes dans les HE pourrait
intervenir dans la chimio-prévention, voire nous donner de nouvelles
substances anti-carcinogènes
les intercepteurs
des inhibiteurs qui agissent directement sur les mutagènes ou leurs
précurseurs pour les désactiver.
les bio-antimutagènes
inhibiteurs des processus de mutagenèse ou des réparateurs des
altérations de l’ADN

14. La mise au point de la technique SMART
Test de Mutations et de Recombinaisons Somatiques
des ailes de Drosophila melanogaster
Avoir une technique d’analyse et de dosage de
toxicité, de cytotoxicité et de génotoxicité des HE.
Déterminer, avec ce procédé, les seuils de toxicité
des HE et de toutes les formulations à base d’HE
 Matériels & Méthodes
Perte de l'hétérozygotie pour deux marqueurs
des ailes qui se manifeste phénotypiquement par
des mutations au niveau des poils des ailes
PRINCIPE
BUT

15. Collecte des oeufs
Χ♂
+mwh +
mwh ++
mwh/mwh
flr3
++
♀
Bds++
flr3
/TM3 Bds
24h
72h
48h
120h
24h
48h
Traitement aigu
Oeuf
2h 3h 4h
6h
2h
3h 4h
6h
72h
Traitement chronique
Etude de la génotoxicité
Agedeslarves
Dr A. ZHIRI
PRANAROM
Isolement et traitement des larves

16. Collecte des oeufs
Isolement et traitement des larves
Χ♂
+mwh +
mwh ++
mwh/mwh
flr3
++
♀
Bds++
flr3
/TM3 Bds
24h
72h
48h
120h
Oeuf
Inhibiteur
Mutagène
Inhibiteur
Mutagène
et
Inhibiteur
Co-traitement Pré-traitement Post-traitement
Mutagène
Agedeslarves
Dr A. ZHIRI
PRANAROM

17. Collecte des oeufs
Isolement et traitement des larves
Χ♂
+mwh +
mwh ++
mwh/mwh
flr3
++
♀
Bds++
flr3
/TM3 Bds
mwh flr+
/mwh+
flr3
(Phénotype sauvage)
Analyse microscopique des ailes
mwh + +mwh
Bds++ flr3 ++
mwh /mwh+
Bds
(Phénotype serrate)
+ +
Dr A. ZHIRI
PRANAROM

18. mwh +
+
flr
flr
mwh +
Cellules filles Phénotype final
mitose
mitoses
mwh
mwh
+ flr
+
flr
+
Délétions
Cellule mère
Dr A. ZHIRI
PRANAROM
La toxicité et la génotoxicité des huiles essentielles

19. mwh
mwh
+ flr
+
flr+
+
mwh +
+
flr+
flr
mwh
Cellule mère Cellules filles Phénotype final
mitose
mitoses
Mutations ponctuelles
Dr A. ZHIRI
PRANAROM
La toxicité et la génotoxicité des huiles essentielles

20. mwh
+
flr
+
+
mwh
++
flr
Recombinaisons
mwh +
flr+
flr
mwh +
Cellule mère Cellules filles Phénotype final
mitose
mitoses
Dr A. ZHIRI
PRANAROM
La toxicité et la génotoxicité des huiles essentielles

21. mwh
+
+
flr
mwh
+
flr
+
mwh +
flr+
mwh +
flr+
Recombinaisons
Cellule mère Cellules filles
mitose
Dr A. ZHIRI
PRANAROM
La toxicité et la génotoxicité des huiles essentielles

22. Les résultats de ce test sont ils applicables à
l’Homme ?Le séquençage du génome de Drososphile (Drosophila
Genome project 2000, vol 278 N° 5461) montre que:
 50% des séquences protéiques sont
identiques à celles des mammifères
 61% des gènes hortologues aux gènes de
maladies héréditaires chez l’Homme
 68% des gènes hortologues aux gènes de
Cancers chez l’Homme
 Matériels & Méthodes
La mouche représente donc, une plateforme expérimentale
appropriée pour les études des maladies humaines
impliquant la réplication, la réparation, la traduction de
l’ADN, et le métabolisme des drogues et des toxines.

23.  Matériels & Méthodes
Ce test d’Ames est un test
bactérien qui utilise une
batterie de souches de
Salmonella typhimurium
auxotrophes pour
l’histidine. Il consiste à
évaluer la capacité d’une
substance à induire des
réversions HIS+ dans des
souches de S. typhimurium
sur un milieu exempt
d’histidine.
La mise au point de test Ames
pour Salmonella typhimurium
S9-mix
Top agar
Salmonella thyphimurium
TA100 ou TA98-Huile essentielle
-Témoin
-Contrôle positif
Pro-mutagène
mutagène
48heures / 37ºC

24.  Matériels & Méthodes
Ce test d’Ames utilise une
levure le Saccharomyces
cerevisiae D7 auxotrophe
pour l’isoleucine, le
tryptophane et l’adénine.
Elle est capable d’exprimer
simultanément trois
événements génotoxiques
différents. (mutation
ponctuelle, recombinaison
intra-génique et
recombinaison inter-
génique). Elle permet aussi
de détecter la mutation
cytoplasmique «petite» qui
affecte les mitochondries
La mise au point de test Ames
pour Saccharomyces cerevisiae D7

25. Huile Concentration Degré de toxicité
larvaire
H. italicum
5% 100%
4% >75%
3% 50%
2% 5-10%
1% 5-10%
L. groenlandicum
4% 100%
3% >90%
2% 50%
1% 25%
C. Camphora
Ct. 1,8-cinéole
5% 75%
4% 50%
3% 25%
2% 5-10%
1% 5%
Mélange
5% >75%
4% 50%
3% 25%
2% 5-10%
1% 5%
Toxicité de 3 HE et
celle de leur
mélange
équiproportionnel
exprimée par des %
de létalité larvaire
Toxicité générale
 Résultats & Discussion SMART

26. Génotoxicité des différentes doses des trois huiles essentielles et leur mélange
Concentrations (%) Nombre
des ailes
Mutations par aile (Nombre de mutations)
Clones simples
petits
(1-2 cellules)
Clones simples
grands
(> 2 cellules)
Clones jumeaux Total des clones
Contrôle (Twen-80)
0.1% 240 0.45 (107) 0.03 (07) 0.01 (03) 0.49a
(117)
Helichrysum italicum
1 % 80 0.51 (41) 0.03 (02) 00 (00) 054 a
(43)
2 % 80 0.45 (36) 0.01 (01) 00 (00) 0.46 a
(37)
3 % 80 0.34 (27) 0.04 (03) 00 (00) 0.38 a
(30)
Ledum groendandicum
1 % 79 0.51 (40) 0.05 (04) 0.01 (01) 0.57 a
(45)
2 % 77 0.58 (45) 0.03 (02) 0.00 (00) 0.61 a
(47)
C. camphora Ct. 1,8-
cinéole
1 % 84 0.38 (32) 0.01 (01) 0.01 (01) 0.40 a
(34)
2 % 86 0.50 (43) 0.09 (08) 0.00 (00) 0.59 a
(51)
3 % 80 0.40 (32) 0.08 (06) 0.01 (01) 0.49 a
(39)
Mélange
1 % 81 0.37 (30) 0.00 (00) 0.86 (07) 0.46 a
(37)
2 % 40 0.45 (18) 0.13 (05) 0.00 (00) 0.58 a
(23)
3 % 80 0.36 (29) 0.05 (04) 0.03 (02) 0.44a
(35)
 Résultats & Discussion SMART

27. Concentrations
(%)
Nombre
des ailes
Mutations par aile (Nombre de mutations)
Clone simple et petit
(1-2 cellules)
Clone simple et grand
(> 2 cellules) Clone jumeau Total des clones‡ %
inhibition*
Tween-80 0.1%
240 0.45 (107) 0.03 (07) 0.01 (03) 0.49 (117)
Ure 81 1.00 (81) 0.58 (47) 0.05 (04) 1.63a
(132)
Ure et H. it. 1% 81 0.59 (48) 0.11 (09) 0.03 (01) 0.72b
(58) 56
Ure et H. it. 2% 40 0.60 (24) 0.08 (03) 0.02 (01) 0.70b
(28) 57
Ure et H. it. 3% 32 0.69 (22) 0.06 (02) 0.00 (00) 0.75b
(24) 54
Ure 81 1.00 (81) 0.58 (47) 0.05 (04) 1.63a
(132)
Ure et L. gr. 1% 80 0.75 (60) 0.25 (20) 0.04 (03) 1.04b
(83) 36
Ure et L. gr. 2% 40 0.7 (28) 0.20 (08) 0.03 (01) 0.93b
(37) 43
Ure 80 1.41 (113) 0.26 (21) 0.00 (00) 1.67a
(134)
Ure et C. cam. 1% 80 1.13 (90) 0.23 (19) 0.04 (03) 1.40a
(112) 16
Ure et C. cam. 2% 82 0.85 (70) 0.21 (17) 0.01 (01) 1.07b
(78) 36
Ure et C. cam. 3% 57 0.82 (47) 0.09 (05) 0.00 (00) 0.91b
(52) 46
Ure 78 1.63 (127) 0.36 (28) 0.01 (01) 2.00a
(156)
Ure et mélange 1% 80 0.75 (60) 0.21 (17) 0.03 (0.3) 1.00b
(80) 50
Ure et mélange 2% 67 1.00 (67) 0.15 (10) 0.06 (04) 1.21b
(81) 40
Ure et mélange 3% 39 0.36 (14) 0.13 (05) 0.05 (02) 0.54c
(21) 73
Anti-génotoxicité des différentes doses des trois huiles essentielles et leur mélange
 Résultats & Discussion SMART

28. 1 2 3 4 5 6 7
5mM Ure+0,3%
5mM Ure+0,2%
5mM Ure+0,1%
5mM Ure
0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
Singlespotsper
wing
Spot size class
(a)
Helichrysum
1 2 3 4 5 6 7
5mM Ure+0,2%
5mM Ure+0,1%
5mM Ure
0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
Singlespotsper
wing
Spot size class
(b)
Ledum
1 2 3 4 5 6 7
5mM Ure+0,3%
5mM Ure+0,2%
5mM Ure+0,1%
5mM Ure
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
1,2
Singlespotsper
wing
Spot size class
( c )
Ravintsara
1
2
3
4
5
6
7
5mMUre+0,3
5mM Ure+0,2
5mMUre+0,1
5mM Ure
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
Singlespotsperwing
Spot size class
(d)
Mixture
5656
5757
5454
% d’inhibition
moyenne
3636
4343
1616
3636
4646
5050
4040
7373
% d’inhibition
moyenne
% d’inhibition
moyenne
% d’inhibition
moyenne
*Spot size distributions and single spot induction frequencies after larvae feeding
with Urethane alone and in combination with (a) Helichrysum, (b) Ledum,
(c) Ravintsara and (d) the mixture. Clone size classes: 1, 1 cell; 2, 2 cells; 3, 3 to cells;
4, 5 to 8 cells; 5, 9 to 16 cells; 6, 17 to 32 cells, 7, more than 32 cells
*Pranarom Publication:
Genotoxicity and antigenotoxicity of some essential oils evaluated by wing spot test of Drosophila melanogaster. Mutation Research 513 (2002) 61–68
SMART

29. H.italicum L.
groenlandicum
C. Camphora Ct.
1,8-cinéole
Effets Biologiques
Alpha-pinène 28.67 0.94 4.51 Inhibe les CYP2B1 mono-
oxygenase, anticarcinogène contre
DMBA.
Sabinène nd 1.44 12.99
Limonène 1.75 36.16 2.67
Antimutagène contre l’acide 1-
methyl-1,2,3,4-tetrahydro-beta-
carboline-3-carboxylic,
anticarcinogène.
1,8-Cinéole 0.55 nd 56.45 Induit l’activité de P450.
Camphène 0.28 0.35 0.22 Antioxydant.
Terpinène gamma 0.37 0.62 1.30 Antioxydant.
Myrcène nd 0.45 1.35
Inhibiteur de l’aldose-réductase,
antimutagène, antioxydant, Inhibe
les échanges entre chromatides
sœurs (SCE) induites par
cyclophosphamide et AFB1, Inhibe
les CYP450.
Curcumène G +
Italidiones
21.31 nd nd
Béta–Caryophyllène 8.83 nd nd Cytotoxique contre certaines
lignées des cellules tumorales,
antioxydant.
Camphre nd nd 0.08 Cancer-prevetion
Les principaux constituants des 3 huiles essentielles
et leurs éventuelles actions anti-carcinogènes
 Résultats & Discussion SMART

30.  Conclusions
Ces huiles et leurs mélanges ne sont ni toxiques ni génotoxiques
Ces huiles et leurs mélanges réduisent significativement le taux de
la mutagenèse induite par l’ uréthane (agent mutagène très puissant)
Le degré d'inhibition est beaucoup plus important pour le mélange de
ces 3 huiles (73%)
L'action anti-génotoxique de ces huiles pourrait être attribuée à :
 l'interaction entre :
- certaines molécules (alpha-pinè ne , 1 , 8 ciné o le , m yrcè ne , caryo phyllè ne … )
&
- le système cytochrome P-450,
(e nz ym e s fo ndam e ntale s de la bio transfo rm atio n de s xé no bio tiq ue s )
 l'effet antioxydant de quelques composés de ces huiles essentielles
SMART

31. 95,8 ± 12***Toxique12,1 ± 2,9*Toxique0,2
99 ± 14,4**113,4 ± 19,916,1 ± 7,022,2 ± 7,20,1
109 ± 11,4*128,4 ± 14,617,3 ± 3,223,4 ± 8,50,05
116,6 ± 7,2117,3 ± 19,618,0 ± 4,123,5 ± 8,60,01
109,3 ± 9,3*117,1 ± 16,517,1 ± 2,9**25,8 ± ,60,005
nd113,2 ± 15,2nd24,3 ± 7,20,001
nd120,6 ± 10,7nd23,9 ± 8,10,0005
125,0 ± 9,1124,0 ± 14,917,8 ± 3,723,5 ± 6,80
+S9-S9+S9-S9
TA100TA98
Concentration en
µl/boîte
L’huile essentielle d’O. compactum ne révèle aucune activité mutagène telle
que mutation par décalage du cadre de lecture chez la souche TA98 ou
substitution de paires de bases GC chez la souche TA100, aussi bien en
l’absence qu’en présence de S9-mix à 10%.
Effet de l’huile essentielle d’O. compactum sur la mutagénicité dans les
souches TA98 et TA100.
 Résultats & Discussion Test Ames, Salmonella typhimurium

32. 86,486,4 ±± 19,219,2ToxiqueToxique17,617,6 ±± 2,62,6ToxiqueToxique22
93,093,0 ±± 12,912,982,482,4 ±± 12,912,917,517,5 ±± 3,33,318,918,9 ±± 6,86,811
104,3104,3 ±± 9,79,7104,2104,2 ±± 12,912,920,520,5 ±± 3,93,925,025,0 ±± 6,16,10,50,5
122,3122,3 ±± 7,07,0115,7115,7 ±± 8,18,122,822,8 ±± 5,45,426,526,5 ±± 7,77,70,10,1
115,8115,8 ±± 14,114,1123,2123,2 ±± 13,413,425,125,1 ±± 6,06,026,026,0 ±± 6,96,90,050,05
109,8109,8 ±± 5,75,7116,7116,7 ±± 16,416,426,326,3 ±± 2,82,823,923,9 ±± 6,16,10,010,01
ndnd118,5118,5 ±± 12,012,0ndnd26,226,2 ±± 7,07,00,0050,005
117,0117,0 ±± 9,59,5124,0124,0 ±± 14,914,919,819,8 ±± 5,25,223,523,5 ±± 6,86,800
+S9+S9-S9-S9+S9+S9-S9-S9
TA100TA100TA98TA98
Concentration enConcentration en
µµl/boîtel/boîte
L’huile essentielle d’A. herba alba ne produit ni substitutions de paires de bases chez
la souche TA 100 ni mutations par décalage du cadre de lecture chez la souche TA98
avec ou sans activation métabolique. Ces résultats sont en accord avec ceux obtenus
par l’analyse de ces composés (Gomes-Carneiro et coll., 1998)
Effet de l’huile essentielle d’A.herba alba sur la mutagénicité dans les
souches TA98 et TA100.
 Résultats & Discussion Test Ames, Salmonella typhimurium

33. 80,5080,50 ±± 7,8***7,8***ToxiqueToxique18,118,1 ±± 3,83,8ToxiqueToxique11
89,0089,00 ±± 14,3*14,3*90,7890,78 ±± 7,01***7,01***22,122,1 ±± 4,54,519,019,0 ±± 5,65,60,50,5
105,50105,50 ±± 10,310,3115,5115,5 ±± 14,914,923,823,8 ±± 3,73,724,624,6 ±± 8,08,00,10,1
104,17104,17 ±± 9,99,9112,5112,5 ±± 11,811,821,121,1±± 2,92,92727 ±± 4,74,70,050,05
120.6120.6 ±± 9,39,3117,1117,1 ±± 15,815,82222 ±± 4,34,324,924,9 ±± 7,47,40,010,01
97,6797,67 ±± 4,8***4,8***121,7121,7 ±± 11,311,320,320,3 ±± 4,84,828,828,8 ±± 6,56,50,0050,005
116,1116,1 ±± 14,114,1ndnd24,924,9 ±± 7,67,60,0010,001
111,67111,67 ±± 10,710,7124,0124,0 ±± 14,914,919,819,8 ±± 5,25,223,523,5 ±± 6,86,800
+S9+S9-S9-S9+S9+S9-S9-S9
TA100TA100TA98TA98
Concentration enConcentration en
µµl/boîtel/boîte
Aux concentrations utilisées chez les souches TA98 et TA100, on peut
confirmer que cette huile essentielle est exempte de toute activité mutagène
qu’elle soit directe ou indirecte par le biais de la fraction S9mix.
Effet de l’huile essentielle de C.sativum sur la mutagénicité dans les souches
TA98 et TA100.
 Résultats & Discussion Test Ames, Salmonella typhimurium

34.  Conclusions
Les trois huiles essentielles testées
dans les conditions du test d’Ames n’ont
aucune activité mutagène aussi bien
directe qu’indirecte
Test Ames, Salmonella typhimurium

35. - Le méthyl méthanesulfonate (MMS), fait dans l’ADN des méthylations de bases et
des cassures double brin
Étude de l’activité anti-génotoxique des HE
- Les radiations ultraviolettes (UVC) à 254 nm, font dans l’ADN des dimères de
pyrimidines
- Le 8-méthoxypsoralène activé par les rayons ultraviolets à 365 nm (8-MOP/UVA), fait
dans l’ADN des mono-additions et des pontages interbrins
Agents génotoxiques:
 Résultats & Discussion Test Ames, Saccharomyces cerevisiae
- Origanum compactum
- Artemisia herba alba
- Cinnamomum camphora Ct. 1,8-cinéole
Huiles essentielles étudiées:
Les cellules de la souche D7 en phase stationnaire ont été traitées par les
mutagènes et mises en incubation post-traitement pour UVC et 8-MOP/UVA.
Et en co-incubation pour MMS en présence d’huile pendant 1h30.
Après dilutions adéquates, les cellules sont ensemencées sur les milieux
sélectifs et incubées à 30°C.
Traitements:

36. Induction de réversion (ilv-  ILV+) par les mutagènes seuls ou en combinaison
avec les huiles essentielles
Pour UVC les taux de
mutations baissent
Pour 8-MOP/UVA les
taux de mutations
baissent
Pour MMS les taux de
mutations baissent très peu
Étude de l’activité anti-génotoxique des HE
 Résultats & Discussion Test Ames, Saccharomyces cerevisiae
Détection d’une très nette activité anti-génotoxique pour les trois HE

37. Induction de recombinaison (trp-  TRP+) par les mutagènes seuls ou en
combinaison avec les huiles essentielles
Étude de l’activité anti-génotoxique des HE
 Résultats & Discussion Test Ames, Saccharomyces cerevisiae
Détection d’une très nette activité anti-génotoxique pour les trois HE

38. Les huiles essentielles testées dans les
conditions du test d’Ames n’ont aucune
activité génotoxique.
Elles présentent, au contraire, une
nette activité anti-génotoxique
 Conclusions
Test Ames, Saccharomyces cerevisiae

39. Suite à cette présentation des résultats et
à travers toute la richesse bibliographique
dans le domaine, nous pensons qu’il est temps
de parier suffisamment sur l'opportunité
qu'offriraient les huiles essentielles dans le
domaine des anti-cancéreux et dans la
prévention du cancer.
 Conclusion générale
Nous mettons à votre disposition, sur simple demande par mail, des copies de nos
publications sur ce sujet. Web: www.pranarom.com Mail: azhiri@pranarom.com

40. Perfectionner ces tests et les adapter aux HE
Pratiquer des confirmations comparatives
Faire des études sur des lignées de cellules cancéreuses



 Perspectives
Evaluer l’activité anti-carcinogène in vitro et in vivo
des huiles et des synergies réclamées anti-génotoxiques
Chercher les éléments responsables de cette activité anti-génotoxique


Purification & détermination de la structure des molécules
‘actives’ issues de ces fractions

Exploitation des HE et des molécules anti-carcinogènes dans le domaine
pharmaceutique et en médecine naturelle
Techniques de fractionnement ‘chromatographies CCM, CG, HPLC’

41. Partenaires et collaborateurs :
 Direction Générale des Technologies, de la Recherche
et de l’Energie. La Région Wallonne de Belgique
 M. Idaomar, R. El Hamss, F. Bakkali, N. Mezzoug
Département de Biologie, Unité de Biologie Cellulaire et Moléculaire (BCM),
Université Abd Elmalek Essaadi, Tétouan, Morocco
 A. Muñoz-Serrano, A. Alonso-Moraga
Départamento de Genética, Universidad de Córdoba, Córdoba, Spain
 Pr. Mme & Mr. Averbeck,
Institut Curie-Section, Orsay Cedex, France
 D. Baudoux, V. Liemans, P. Debauche
S.A. PRANAROM International, Ghislenghien, Belgium.

42. Merci beaucoup
Votre attention
est méritoire
Vos réflexions le
seront plus encore…
La discussion est
la clef du progrès…