O documento resume uma apresentação sobre a implantação de um banco de células e tecidos germinativos (BCTG) tipo 2 em total conformidade com as normas da Agência Nacional de Vigilância Sanitária (Anvisa) em relação ao controle da qualidade do ar. A apresentação discute porque a Anvisa incluiu exigências para o controle da qualidade do ar nas salas técnicas do BCTG, o que é necessário para estar em conformidade e se é possível trabalhar nesses ambientes sem prejudicar os resultados.

1. Simpósio Gestão da Qualidade em BCTG, ANVISA, São Paulo – Nov 15
Implantação de BCTG tipo 2 em
Total Conformidade com a
Norma da Anvisa quanto ao
Controle da Qualidade do Ar
Sandro Esteves
Diretor, ANDROFERT
Centro de Referência para Reprodução Masculina
Campinas, SP

2. Por que devo assistir
esta aula?
Entender por que a ANVISA incluiu exigências
para controle da qualidade do ar nas salas
técnicas do BCTG.
O que é preciso para estar em conformidade
no que se refere à qualidade do ar.
É possível trabalhar nestes ambientes sem
prejudicar os resultados?
Esteves, 2

3. ANVISA
Regulamento Técnico BCTG*
Ambientes Controlados:
RDC 33 (2006); RDC 23 (2011)
Criopreservação
Laboratório de Sêmen (Andrologia)
Sala de Coleta Oócitos e Tecidos (ovário,
testículo)
Laboratório de FIV (Micromanipulação)
*Engloba todas as clínicas de reprodução humana que praticam
técnicas de RA (baixa e/ou alta complexidade)
Esteves, 3

4. RDC nos. 33; 23: Foco na segurança sanitária:
 material biológico manuseado (células,
tecidos germinativos, embriões).
 saúde pública (prevenção da transmissão de
doenças infecciosas via
células/tecidos/embriões transplantados)
Princípio da Precaução*:
É um princípio moral e político que determina que se uma
ação pode originar um dano irreversível público ou
ambiental, na ausência de consenso cientifico irrefutável
da ausência de risco, o ónus da prova pertence a quem
pretende praticar o ato ou ação que pode causar o dolo.
*Convenção Sobre Diversidade Biológica (CBD; Eco-92, 1992) da qual o Brasil é signatário
Esteves, 4 (decreto Nº 2.519 de 16 de março de 1998)

5. CONTAMINAÇÃO e BCTG
Qualquer material, substância ou radiação indesejável,
que possa afetar a QUALIDADE do produto.
Partículas (suspensão temporária; > 1μ e < 100μ)
Resíduos de processo de limpeza, cinzas em suspenção,
resíduos de vestimentas, escamas de pele
Microorganismos
Vírus, esporos, bactérias
Partículas em suspensão constante (<1-8µm )
Gases Voláteis
Compostos químicos orgânicos que evaporam e reagem com o
ozônio: gera partículas sub-micrônicas com potencial efeito
nocivo à saúde (tolueno, benzeno, álcools, acetona, gases
Esteves, 5 refrigerantes, aldeído).

7. Contaminação por Particulados e/ou
Gases Voláteis e Resultados FIV
Experimentais
Estudos
Autor Ano Principais conclusões
Little and Mirkes 1990 Níveis elevados de VOC no ar ambiente e
incubadoras dos laboratórios FIV;
Cohen et al. 1997
Redução VOC pela filtração ar;
Schimmel et al. 1997 Relação inversa níveis VOC,
Hall et al. 1998 desenvolvimento embrionário e
implantação
Worrilow et al. 2000
Fonte: Esteves & Agarwal: Explaining How Reproductive Laboratories Work. In: Bento et al
(Eds). Quality Management in ART Clinics, Springer, NY 2012, pp. 95-96
Esteves, 7

8. Contaminação por Particulados e/ou
Gases Voláteis e Resultados FIV
Estudos Clínicos
Autor Ano Principais conclusões
Mayer et al. 1999 Melhora taxas gravidez cultivo de embriões
Racowsky et al. 1999 em incubadoras equipadas filtros VOC;
Worrilow et al. 2002 Redução abortamento espontâneo
tratamentos FIV em laboratórios
von Wyl and Bersinger 2004 equipados filtros HEPA e VOC;
Boone et al. 1999 Relação inversa entre implantação
Esteves et al. 2004 embrionária e níveis VOC;
Melhora taxas gravidez e redução
Esteves et al. 2006
abortamento espontâneo tratamentos FIV
Knaggs et al 2007 realizados em salas limpas.
Fonte: Esteves & Agarwal: Explaining How Reproductive Laboratories Work. In: Bento et al
Esteves, 8 (Eds). Quality Management in ART Clinics, Springer, NY 2012, pp. 95-96

9. Como Filtrar o Ar Ambiente?
Partículas e Microorganismos
Pré-Filtros: >10µ
Filtros Finos: 1<10µ
Filtros Absolutos: 0,3µ = 99,97%
Gases Voláteis:
Carvão ativado (Aldeídos, Gases Refrigerantes,
Estirenos, Benzeno, Tolueno)
Permanganato potássio (Alcools, Acetona)
Esteves, 9

10. Ambientes Controlados:
O que a Norma Exige?
Laboratório de Pressão Positiva; Vazão = ND; Renovação de Ar = ND; Tomada de
Sêmen Ar com filtro G3
Manipulação Amostras: Cabine de Segurança Biológica Classe II
tipo A
Criopreservação Pressão Negativa; Vazão = 75 m3/h por m2
Tomada de Ar com filtro G1
Centro Cirúrgico Pressão Positiva; Vazão = 18 m3/h por m2
Renovação de Ar = 6 m3/h por m2; Filtragem: G4
Laboratório de Pressão Positiva; Vazão = 45 m3/h por m2
FIV Renovação de Ar = 15 m3/h por m2;
Filtragem: G3/Carvão Ativado/F8
Manipulação Amostras: Área Limpa Classificada ISO 5 (3 opções)
Requisitos Mínimos; RDC 23; ANVISA 2011
Esteves, 10

11. Manipulação Amostras:
Laboratório de Fertilização
Cabine de
Segurança Biológica
Módulo Fluxo Laminar Ambiente ISO Classe 5
Unidirecional
Esteves, 11

12. Classificação
Áreas Limpas
Partículas em
Suspensão no Ar
Tamanho Partículas/m3 de Ar: ISO 14.644-1
0.3 µM 0.5 µM 1 µM 5 µM
ISO 1
ISO 2 10 4
ISO 3 102 35 8
ISO 4 1,020 352 83
ISO 5 10,200 3,520 832 29
ISO 6 102,000 35,200 8,320 293
ISO 7 352,000 83,200 2,930
ISO 8 3,520,000 832,000 29,300
ISO 9 35,200,000 8,320,000 293,000
Esteves, 12

13. Ambientes Controlados:
Norma Brasileira vs. Européia
Esteves, SC, Bento FC. Implementation of air quality control in reproductive laboratories in
full compliance with the Brazilian Cells and Tissue Directive. RBM Online 2012;
Esteves, 13 http://dx.doi.org/10.1016/j.rbmo.2012.10.010

14. Debate: Impacto do Sistema de
Filtração nos Resultados da Reprodução
Assistida
David Mortimer (Canadá), 2005: Efeito adverso
Douglas Saunders & Adrianne Pope (Australia)
Princípio da Precaução
Geraldine Hartshorne (Reino Unido)
Conceito de Validação
Brasil: SBRA, SBRH, Pronucleo
Mortimer DM (2005), RBM Online 11:162-76; Saunders D & Pope A (2005), RBM Online
11:47-8; Hartshorne G (2005), RBM Online 11:44-7; SBRA (2006), MInuta
Esteves, 14

15. Esteves, 15
REDLARA 2000-2009

16. Esteves, 16

17. Estrutura Física
Esteves, SC, Bento FC.
RBM Online 2012;
http://dx.doi.org/10.1016/j.rbmo.2012.10.010
Esteves, 17

18. Esteves, 18 Esteves, SC, Bento FC. RBM Online 2012;http://dx.doi.org/10.1016/j.rbmo.2012.10.010

19. Esteves, 19
Ante-sala - FIV

21. Estação de Trabalho - FIV
Esteves, 21

23. Esteves, 23
Centro Cirúrgico

24. Módulo Fluxo
Esteves, 24
Laminar - CC

25. Laboratório de
Esteves, 25
Andrologia

26. Esteves, 26
Criopreservação

27. Validação
Teste Equipmento
Vazão do fluxo do ar Termo-anemômetro
Trocas de ar dos ambientes por hora Termo-anemômetro
Medida do diferencial de pressão entre salas Micro-anemômetro e balômetro
Integridade dos Filtros HEPA Gerador de aerosol
Contegem de partículas em suspernsão Contedor eletrônico de partículas
Teste de recuperação Gerador de fumaça
Luminosidade Luminímetro
Nível ruído Decibelímetro
Temperaturea e umidade Termômetro e higrômetro
Esteves, 27

28. Esteves, 28

29. Resultados Testes Validação
Esteves, SC, Bento FC. Implementation of air quality control in reproductive laboratories in
full compliance with the Brazilian Cells and Tissue Directive. RBM Online 2012;
Esteves, 29 http://dx.doi.org/10.1016/j.rbmo.2012.10.010

30. Resultados Laboratoriais
Esteves, SC, Bento FC. Implementation of air quality control in reproductive laboratories in
full compliance with the Brazilian Cells and Tissue Directive. RBM Online 2012;
Esteves, 30 http://dx.doi.org/10.1016/j.rbmo.2012.10.010

31. Resultados Clínicos
Esteves, SC, Bento FC. Implementation of air quality control in reproductive laboratories in
full compliance with the Brazilian Cells and Tissue Directive. RBM Online 2012;
Esteves, 31 http://dx.doi.org/10.1016/j.rbmo.2012.10.010

32. P < 0.05
Qualidade Embrionária
Gestação Clínica
Nascidos Vivos
Aborto
Esteves, SC, Bento FC. Implementation of air quality control in reproductive laboratories in full
Esteves, 32 compliance with the Brazilian Cells and Tissue Directive. RBM Online 2012;
http://dx.doi.org/10.1016/j.rbmo.2012.10.010

33. Discussão
Análise retrospectiva;
Efeito outras co-variáveis;
Embora sem mudança significativa técnica
cultura embrionária descartáveis utilizados,
pessoal.
Custos
Implantação: USD 150,000.00
Operação (filtros, materiais para uso sala limpa,
manutenção, certificação): USD 15,000.00/ano
Custo adicional/ciclo: USD 131.00
Esteves, SC, Bento FC. Implementation of air quality control in reproductive laboratories in
full compliance with the Brazilian Cells and Tissue Directive. RBM Online 2012;
http://dx.doi.org/10.1016/j.rbmo.2012.10.010
Esteves, 33

34. Implantação e Manutenção
Controle da Qualidade do Ar em
Conformidade com as Normas da
Anvisa (particulados e VOC)
Conclusões
Controle adequado contaminação ambiental e
gestão risco:
associada boas práticas laboratoriais;
Viabilidade realizar TRA ambientes controlados
sem prejuízo resultados;
Manutenção resultados sustentáveis
possibilidade melhora qualidade embrionária.
Esteves, SC, Bento FC. Implementation of air quality control in reproductive laboratories in
full compliance with the Brazilian Cells and Tissue Directive. RBM Online 2012;
Esteves, 34 http://dx.doi.org/10.1016/j.rbmo.2012.10.010

35. Mais Informações
Guia Prático:
Manuais Técnico-Operacionais;
Pessoal;
Montagem Laboratório;
Controle Qualidade Ar;
Mecanismos Controle
Contaminação;
Bio-Segurança Laboratorial
Disponível 30 Nov 2012
http://www.springer.com/medicine/gynecology/book/978-1-4419-7138-8
Esteves, 35

36. Esteves, 36