1. Identification bactérienne à partir
d’une culture de 18 à 24 heures
Antibiogramme
TP 3 (DCEM1)
Section de Microbiologie
Département des Sciences de Base B
Faculté de Médecine de Tunis

2. IDENTIFICATION
CARACTÈRES:
1- MORPHOLOGIQUES
2- CULTURAUX
3- BIOCHIMIQUES

3. Caractères culturaux
• Taille et aspect des colonies sur la gélose,
pigmentation
• L’exigence nutritive des bactéries en culture

4. Caractères culturaux
• Hémolyse sur GS
β α γ

5. Caractères morphologiques
• Etat frais : forme & mobilité
• Coloration de Gram :
– Forme des bactéries : bacille ou cocci
– Gram + ou –
– Mode regroupement (cocci ++)

6. Caractères biochimiques
• Type respiratoire
• Caractères biochimiques de base
Catalase (+ Staphylococcus) Oxydase (BGN)

7. BGN
1er test d’identification = cytochrome oxydase
Positif Négatif
-BGN non fermentaires -Entérobactéries
- Vibrio/ Aeromonas - Acinetobacter
Type respiratoire
AAF Aerobie strict AAF Aérobie strict
Vibrio/Aeromonas Pseudomonas Entérobactéries Acinetobacter
Identification biochimique
complète : galerie classique ou
système Api

8. Cocci à Gram positif
Test catalase
Négatif
Positif
Streptocoques
Staphylococcaceae Entérocoques

9. Cocci à Gram positif en amas
catalase +
Croissance milieu hypersalé sélectif avec ou sans virage
(Milieu Chapmann)
Staphylococcaceae
Plusieurs tests
Le plus important : Coagulase
Négatif
Positif = S. aureus Staphylocoques à coagulase négative
Galerie d’identification Api Staph

10. Cocci Gram positif catalase négative
Exigent
Non exigent Absence de croissance en milieux hostiles
Croissance en milieux hostiles :
NaCl 6,5% , bile esculine Hémolyse
Béta
Alpha
Enterococcus
Sensibilité à
l’optochine Streptocoques groupables
A, C, B, G, F …
Galerie d’identification
biochimique S
S.pneumoniae R  Autres
streptocoques non
groupables Sérogroupage
de Lancefield
Galerie identification : Api

11. ETUDE DE LA SENSIBILITE AUX ANTIBIOTIQUES
ANTIBIOGRAMME

12. MÉTHODE DE DIFFUSION
= Antibiogramme
Conditions standardisées +++
• Milieu de culture (nature et épaisseur) : gélose Mueller Hinton (MH)
• Suspension bactérienne (inoculum)
• Disques d’antibiotiques : concentration d’antibiotique bien déterminée
• Choix des molécules par famille d’antibiotique +++
 Déduire les mécanismes de résistance
 Suivre les Normes proposés par les Comités d’experts
• Ensemencement par écouvillonnage
• Déposer les disques à la surface
• Incuber 18 à 24 h à 37°C

13. Antibiogramme
Culture pure de 24h
Préparer inoculum
Ensemencer par stries serrées dans
trois sens en tournant la boîte de 1/3
de tour chaque fois

14. ANTIBIOGRAMME
3cm
Diffusion de l’antibiotique

15. Résultat après 24 h à 37°C

16. ANTIBIOGRAMME
24h incubation 37°C
Lecture et interprétation des
diamètres d’inhibition: comparer
aux valeurs de référence (d et D)
S–I-R

17. Lecture brute : insuffisante
Parfois ne permet pas d’évaluer correctement la
sensibilité de certains antibiotiques vis-à-vis de certaines
espèces bactériennes
Tests de dépistage et tests complémentaires
Lecture interprétative de l’antibiogramme ++
But : rechercher une résistance insuffisamment exprimée
à l’antibiogramme
 Transformé un résultat S en I ou R
 Risque échec thérapeutique

18. Pneumocoque de sensibilité diminuée aux
pénicillines : PSDP
PSDP = Résistance croisée entre
les β-lactamines à des degrés
variés
Oxacilline< 26mm
Faire CMI β-lactamines
E-test +++

19. β-lactamase à spectre étendue : BLSE
• Essentiellement, les entérobactéries : Klebsiella et E. coli …
• Test double synergie ++
 Image en bouchon de champagne
 Souche R à toutes β-lactamines sauf les céphamycines et les
carbapénèmes

20. S. aureus résistant à la méticilline : SARM
Céfoxitine R
Résistance croisée à toutes les
β-lactamines
Oxacilline R

21. SALLE DE TP
• 20 min : Présentation du topo à la salle de Staff
• 10 min : Démonstration aspect des colonies sur différents milieux de culture
• 20 min : Préparation de l’étalement pour la coloration de Gram
Réalisation de la coloration de Gram
Lecture au microscope optique (objectif 100)
• 10 min : Réalisation des tests biochimiques : catalase et oxydase en démonstration
• 10 min : réalisation d’un antibiogramme : démonstration (10min)
• 20 min : Démonstration de certains phénotypes de résistances acquises aux
antibiotiques (20min)
PSDP
BLSE
SARM