Roteiro de aula sobre técnica de Antibiograma realizado na aula de Biologia de Microrganismos no curso de biologia UFES

1. UNIVERSIDADE FEDERAL DO ESPÍRITO SANTO
Centro de Ciências Humanas e Naturais
Departamento de Ciências Biológicas
Biologia dos Microrganismos 2016/1
Roteiro de Aula Prática - Ciências Biológicas
Aula 7. Antibiograma.
Introdução
Antibiogramas são bioensaios conduzidos
bactérias aos agentes antimicrobianos
agentes, e auxiliar no mapeamento da emergência de bactérias resistentes. A suscetibilidade
antimicrobiana pode ser reportada qualitativamente como sensível, intermediário ou resistente; ou
quantitativamente em termos de MIC (
bactericidal concentration).
1- Teste Quantitativo da sensibilidade aos antimicrobianos:
Método de diluição: consiste em preparar suc
ou líquido e em seguida semear a bactéria em estudo. Após incubação determina
2- Método de difusão de Bawer e Kirk (modificado pela FDA): é um tes
de papel impregnados com um agente antimicrobiano são colocados na superfície do ágar
uniformemente semeado com o microrganismo a ser testado. A droga se difunde no ágar e produz
inibição do crescimento do microrganismo sensí
medido e comparado com tabelas padronizadas. Para a garantia desta técnica, alguns fatores são
essenciais:
• Meio de Cultura: normalmente é utilizado o meio Mu
meio enriquecedor e com ausência de substâncias antagônicas;
• Cultura Bacteriana: o teste deve ser realizado com cultura pura de bactérias, devendo
coloração de Gram.
Objetivos
Analisar a resistência de microrganismos
difusão.
Material:
- Swab
- Alça de platina
- Placas de cultura da aula anterior
- Pinças
- Álcool 70%
Procedimento
Antibiograma
1. Inocular as culturas de bactéria cultivadas em meio sólido em tubos de ensaio contendo BHI e
incubar estas culturas na estufa a 37
2. Introduzir nas culturas um swab estéril, retirar o excesso de líquido comprimindo a ponta
nas paredes do tubo;
3. Espalhar o conteúdo do swab sobre o meio de cultura sólido distribuído numa placa de Petri (meio
Mueller-Hinton). Espalhar bem, de modo a obter um “tapete” de bactérias em toda a superfície do
meio sólido;
4. Esperar a cultura sobre o agar secar bem (2 minutos);
5. Colocar os discos de papel contendo os antibacterianos sobre a cultura seca (usar pinças);
6. Incubar em estufa a 37ºC por 16 a 24 horas;
7. Medir os halos formados (em mm), registrar os dados obtidos e
(ANEXO).
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Ciências Biológicas – Profa Luciana Bueno
Antibiogramas são bioensaios conduzidos in vitro que visam testar a sensibilidade de
bactérias aos agentes antimicrobianos. Estes testes são utilizados para avaliar a atividade de novos
agentes, e auxiliar no mapeamento da emergência de bactérias resistentes. A suscetibilidade
portada qualitativamente como sensível, intermediário ou resistente; ou
quantitativamente em termos de MIC (minimun inhibitory concentration) ou MBC (
Teste Quantitativo da sensibilidade aos antimicrobianos:
de diluição: consiste em preparar sucessivas diluições dos antimicrobianos em meio sólido
ou líquido e em seguida semear a bactéria em estudo. Após incubação determina-se MIC e/ou MBC.
Método de difusão de Bawer e Kirk (modificado pela FDA): é um teste qualitativo, no qual discos
de papel impregnados com um agente antimicrobiano são colocados na superfície do ágar
uniformemente semeado com o microrganismo a ser testado. A droga se difunde no ágar e produz
inibição do crescimento do microrganismo sensível, formando um halo de inibição que deve ser
medido e comparado com tabelas padronizadas. Para a garantia desta técnica, alguns fatores são
Meio de Cultura: normalmente é utilizado o meio Mueller-Hinton, que se caracteriza por ser um
nriquecedor e com ausência de substâncias antagônicas;
Cultura Bacteriana: o teste deve ser realizado com cultura pura de bactérias, devendo
Analisar a resistência de microrganismos frente algumas drogas antimicrobianas pelo método de
- Suspensão bacteriana (culturas puras
- Placas com ágar Mueller Hinton
- Lamparina
- Discos de antimicrobianos
- Régua
Inocular as culturas de bactéria cultivadas em meio sólido em tubos de ensaio contendo BHI e
a 37˚C;
Introduzir nas culturas um swab estéril, retirar o excesso de líquido comprimindo a ponta
Espalhar o conteúdo do swab sobre o meio de cultura sólido distribuído numa placa de Petri (meio
Hinton). Espalhar bem, de modo a obter um “tapete” de bactérias em toda a superfície do
tura sobre o agar secar bem (2 minutos);
Colocar os discos de papel contendo os antibacterianos sobre a cultura seca (usar pinças);
Incubar em estufa a 37ºC por 16 a 24 horas;
Medir os halos formados (em mm), registrar os dados obtidos e relacionar com a tabela 2
que visam testar a sensibilidade de
Estes testes são utilizados para avaliar a atividade de novos
agentes, e auxiliar no mapeamento da emergência de bactérias resistentes. A suscetibilidade
portada qualitativamente como sensível, intermediário ou resistente; ou
) ou MBC (minimun
ianos em meio sólido
se MIC e/ou MBC.
te qualitativo, no qual discos
de papel impregnados com um agente antimicrobiano são colocados na superfície do ágar
uniformemente semeado com o microrganismo a ser testado. A droga se difunde no ágar e produz
vel, formando um halo de inibição que deve ser
medido e comparado com tabelas padronizadas. Para a garantia desta técnica, alguns fatores são
Hinton, que se caracteriza por ser um
Cultura Bacteriana: o teste deve ser realizado com cultura pura de bactérias, devendo-se realizar a
pelo método de
Inocular as culturas de bactéria cultivadas em meio sólido em tubos de ensaio contendo BHI e
Introduzir nas culturas um swab estéril, retirar o excesso de líquido comprimindo a ponta do swab
Espalhar o conteúdo do swab sobre o meio de cultura sólido distribuído numa placa de Petri (meio
Hinton). Espalhar bem, de modo a obter um “tapete” de bactérias em toda a superfície do
Colocar os discos de papel contendo os antibacterianos sobre a cultura seca (usar pinças);
relacionar com a tabela 2

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Resultados
Tabela 1. Resultados do experimento de sensibilidade dos microrganismos da microbiota normal a
agentes antimicrobianos.
Antibacteriano
Penicilina G – PEN – 10UI
Gentamicina – GEN – 10 mcg
Ampicilina – AMP – 10 mcg
Cotrimoxazol
(Sulfamotoxazol + Trimetoprim) –
SUT – 25 mcg
Discussão
1. O que é um antibiograma e para que serve?
2. É importante fazer um antibiograma antes de tratar uma infecção?
3. A resistência a antibacterianos é um evento tão comum que justifique o trabalho de realizar um
ensaio de antibiograma?
4. Discuta a importância da resistência aos antibióticos para a saúde pública.
5. Quais são os fatores que influenciam a formação do halo de inibição?
6. Dos antibacterianos testados no experimento qual deles seria o mais indicado para tratar uma
infecção por cada bactéria utilizada? Por quê?
Referências
RIBEIRO, M. A. & SOARES, M. M. S. R. Microbiologia prática: roteiro e manual: bactérias e fungos. 1a ed. São Paulo: Editora
Atheneu, 2000. ANVISA.Manual de Microbiologia Clínica para o Controle de Infecção em Serviços de Saúde.
Disponível:www.anvisa.gov.br/servicosaude/manuais/microbiologia.asp
Fig. 1. Inoculação nas placas
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Tabela 1. Resultados do experimento de sensibilidade dos microrganismos da microbiota normal a
Diâmetro do halo (mm) Interpretação (S, I ou R)
O que é um antibiograma e para que serve?
2. É importante fazer um antibiograma antes de tratar uma infecção?
3. A resistência a antibacterianos é um evento tão comum que justifique o trabalho de realizar um
Discuta a importância da resistência aos antibióticos para a saúde pública.
5. Quais são os fatores que influenciam a formação do halo de inibição?
6. Dos antibacterianos testados no experimento qual deles seria o mais indicado para tratar uma
r cada bactéria utilizada? Por quê?
RIBEIRO, M. A. & SOARES, M. M. S. R. Microbiologia prática: roteiro e manual: bactérias e fungos. 1a ed. São Paulo: Editora
ANVISA.Manual de Microbiologia Clínica para o Controle de Infecção em Serviços de Saúde.
isponível:www.anvisa.gov.br/servicosaude/manuais/microbiologia.asp
Fig. 1. Inoculação nas placas Fig. 2. Distribuição de discos
Tabela 1. Resultados do experimento de sensibilidade dos microrganismos da microbiota normal a
Interpretação (S, I ou R)
3. A resistência a antibacterianos é um evento tão comum que justifique o trabalho de realizar um
6. Dos antibacterianos testados no experimento qual deles seria o mais indicado para tratar uma
RIBEIRO, M. A. & SOARES, M. M. S. R. Microbiologia prática: roteiro e manual: bactérias e fungos. 1a ed. São Paulo: Editora
ANVISA.Manual de Microbiologia Clínica para o Controle de Infecção em Serviços de Saúde. 2004.

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Tabela 2. Limites para interpretação do antibiograma com antibacterianos de uso corrente
Antibacteriano Símbolo
Ampicilina ao testar
microrganismos Gram-
negativos e enterococos
AMP
Ampicilina ao testar
estafilococos e
microrganismos
sensíveis à penicilina G
AMP
Ampicilina ao testar
Haemophilus sp.
AMP
Cloranfenicol CLO
Eritromicina ERI
Estreptomicina EST
Gentamicina GEN
Neomicina NEO
Penicilina G em
Staphylococcus
PEN
Penicilina G em
enterococos
PEN
Penicilina G emoutros
Gram positivos
PEN
Sulfamotoxazol +
Trimetoprim
SUT
Sulfonamidas SUL
Tetraciclina TET
Fig. 3. Modelo de resultado de um antibiograma.
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Tabela 2. Limites para interpretação do antibiograma com antibacterianos de uso corrente
terapêutica clínica
Símbolo
Concentração
do disco
Zona de inibição (em mm)
Resistente Intermediário
10 mcg 11 ou < 12 - 13
10 mcg 20 ou < 21 - 28
10 mcg 19 ou < ----
30 mcg 12 ou < 13 - 17
15 mcg 13 ou < 14 - 17
10 mcg 11 ou < 12 - 14
10 mcg 12 ou < 13 - 14
30 mcg 12 ou < 13 - 16
10UI 28 ou < ----
10UI 14 ou <
10UI 19 ou < 20 - 27
25 mcg 10 ou < 11 - 15
300 mcg 12 ou < 13 - 16
30 mcg 14 ou < 15 - 18
Fig. 3. Modelo de resultado de um antibiograma.
Tabela 2. Limites para interpretação do antibiograma com antibacterianos de uso corrente na
Zona de inibição (em mm)
Intermediário Sensível
14 ou >
29 ou >
20 ou >
18 ou >
18 ou >
15 ou >
15 ou >
17 ou >
29 ou >
15 ou >
(moderada
mente
sensível)
28 ou >
16 ou >
17 ou >
19 ou >