1. CONTAMINACION BACTERIANA DE HEMOCOMPONENTES ESTADO ACTUAL Dr. Oscar W. Torres [email_address]

4. Staphylococcus sp. Piezas Streptococcus viridans Dentarias Serratia liquefaciens Yersinia enterocolitica Intestino Salmonella sp. Campylobacter sp. Via Endógena Osteomielitis Staphylococcus S. cholerasuis Difícil comprobación científica concentración < 10 2 CFU/ml

5. Via Exógena Piel Normal Staphylococcus epidermidis Staphylococcus aureus Diphteroids sp. Micrococcus sp. Pseudomonas sp. Bacillus cereus Propionibacterium acnes Flavobacterium sp.

9. Barreras de defensa de la sangre La entrada de las bacterias en un producto sanguíneo está determinada por las oportunidades que ocurren durante su manipulación, pero las bacterias que se desrrollan después de penetrar en el sistema son seleccionadas de acuerdo con su posibilidad de reproducirse en un producto. Los factores que puedem influenciar su reproducción son: la insensibilidad a alguma actividad bactericida del producto, la capacidad de utilizar nutrientes disponibles y la reproducción a una temperatura a la cual el producto es mantenido. Pittman M – J. Lab. Clin. Med 42:273-281,1953

11. Perez y col. Transfusion, 2001 Acinetobacter Klebsiella E. coli Serratia Enterobacter Pseudomonas Staphylococcus Sterptococcus Enterococcus B. cereus P. acnes

12. GRD P. fluorescens Pseudomonas Flavobacterium Campylobacter Serratia Enterobacter E. coli Y. enterocolitica Wagner, 1994

13. Concentrado de Plaquetas S. aureus E. coli, Flavobacterium Enterobacter Salmonella, Bacillus Staphylococcus epidermidis coagulase neg. AUTOR Índice em 100.000 Unidades Morrow 8 Barrett 23 Wendel 176 Yomtovian 41 Chiu 46 Blajchman 51 Leiby 80

14. Sepsis Transfusional Encuentro concomitante de un mismo agente en la circulación del receptor y del hemocomponente involucrado, con signos clínicos evidentes, debido a la respuesta sistemica del organismo al agente (hipotensión sostenida, taquicardia, falla multiorgánica)

16. Sepsis Transfusional Estudio GRD P.D.U. CP Total Bacthem 5,8 (17) 31,8 (22,5) 9,4 (0) 7,4 (15) Bacon 0,7 (25) 18,4 (18) 15,5 (27) -- Incidencia de reacciones (x 1.000.000 componentes) Mortalidad (%)

17. Sepsis transfusional por Yersinia enterocolitica % Obs. Escalofríos 80 Fiebre 70 Hipotensión 65 CID 35 † 6/7 (86%) Mortalidad 60 Mediana = 25 horas! Diarrea <50 Vómitos <50

19. Desarrollo Bacteriano Gram Negativo (4 o C) Gram Positivo (22 o C)

24. Mecanismos de Prevención 3- Inspección visual - Formación de coágulos (  citrato ) - Coloración violácea - Hemólisis ( > 4x10 8 CFU/mL ) -  pO2 - Metahemoglobina - ↓ Remolino perlado ( pH dependiente, poco sensible y específico )

25. Hemólisis por Yersinia enterocolitica (Kim e cols - Transfusion 32:221, 1992) Bolsa con hemólisis Segmento sin hemólisis

27. Mecanismos de Prevención 5- Agentes inactivadores - Antibióticos ( Gentamicina ) - 8 Metoxipsoraleno ( 8-MOP ) - 23,4  g/mL Rayos UV-A - 3j/cm2 - Aminopsoralencos – S59 (Helinx ™ - 2002) - Fase III (Pl, Plt) - S303 – Fase II (GRD) - Riboflavina (Vitamina B2) + Ascorbato + Fotoinativación - Tionina + UV-B Reducción ~ 10 5 CFU/mL

31. Mecanismos de Prevención 8- Control bacteriológico a) Examen microscópico - Coloración de Gram - 10 5 - 10 6 CFU/mL - Citocentrifugación- 10 4 CFU/mL ( Naranja de Acridina ) b) Análisis gasométrico  pCO 2  ácido láctico  pO 2  pH

32. Mecanismos de Prevención 8- Control bacteriológico c) Sondas RNA – 16S rRNA (1x10 3 - 10 4 CFU/mL) - 4,5S rRNA (97% 10 5 CFU/mL – Hibri Scan  ) d) PCR - 16S rRNA Sensibilidad – 1-8 GRAM- 5-15 GRAM+

33. Mecanismos de Prevención 8- Control bacteriológico e) Cultivos bacterianos - Métodos tradicionales - Normatización universal - largo tiempo de ejecución - BacT/Alert  - Aumento conservación de plaquetas (5  7 dias)

36. Enero/1997 – Abril/ 2001 N=32.848 R.R. = 97 (0,29%) 295:100.000 IR=181 (0,55%) 551:100.000 N=18.202 IR=52 (0,29%) 286:100.000 R.R. = 32 (0,17%) 176:100.000 N=5.646 IR=27 (0,48%) 478:100.000 R.R. = 19 (0,33%) 336:100.000 GLÓBULOS CONC. PLAQUETAS PLAQUETOFERESIS

37. Pruebas para detección en hemocomponentes Pruebas Limite de detección UFC/mL Ejecución Tiempo para Ejecución Gram 10 6 (G+) – 10 8 (G-) Pretransfusion. Minutos Naranja de Acridina 10 5 – 10 5 Pretransfusion. Minutos Sondas de rRNA ~10 4 Pretransfusion. ~2 h (quimioluminescencia) pH (tiras) 10 7 – 10 8 Pretransfusion. Segundos Glucosa (tiras) 10 7 – 10 8 Pretransfusion. Segundos Remolino Perlado (swirling) 10 7 – 10 8 Pretransfusion. Segundos Cultivo bacteriano 1 / muestra Pre – o - peri- 1-2 d almacenamiento

40. CONTROL BACTERIOLOGICO Normas internacionales Alemania : Pruebas mínimas requeridas por ley ( Paul Ehrlich Institute) Bélgica: 1998 Cruz Roja – Todos los CP deben ser estudiados para contaminación bacteriana. Holanda : 100% estudios en CP a partir de 2001.

42. Bolsas múltiples para extracción de sangre Eliminación de los primeros 10-30 ml. de sangre

43. GRACIAS !!!