Precipitacao
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O documento descreve os principais tipos de reações de precipitação, incluindo imunodifusão radial, imunodifusão dupla e imunoeletroforese. Essas técnicas são usadas para detectar anticorpos ou antígenos em fluidos corporais e têm aplicações no diagnóstico de doenças humanas e veterinárias.
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- 1. UNIVERSIDADE FEDERAL DA BAHIA INSTITUTO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE – ICSDEPARTAMENTO DE BIOINTERAÇÃODISCIPLINA: IMUNOLOGIA I – ICS 045 REAÇÕES DE PRECIPITAÇÃO TEIXEIRA, A.C.O.; Ferreira, M.A.S.V. e Marques, A.S.A.. Detecção de Erwinia psidii via enriquecimento em extrato de folhas de goiabeira e imunodifusão radial dupla. Tropical Plant Patology, vol. 33, nº 3. Brasilia, Junho de 2008. Trabalho realizado pelo Mestrando em Ciências Animais nos Trópicos Dan Loureiro Nascimento sob orientação do Prof. Dr. Ricardo Wagner Dias Portela do Laboratório de Imunologia e Biologia Molecular (LABIMUNO). Atualizado em Fevereiro de 2010.
- 4. Possui boa especificidade, porém apresenta falhas de sensibilidade
- 5. A formação do complexo ag/ace sua precipitação permite a visualização do teste
- 6. Facilidade de confecção do teste
- 8. O gel geralmente é composto de agarose ou ágarnobre (a depender do teste e o tipo de malha e afinidade eletrônica que o mesmo exige). Depois de preparado e colocado na placa o gel é perfurado e nestes poços anticorpo e/ou antígeno são colocados, de onde se difundirão.
- 9. Na região onde o antígeno e o anticorpo se encontrarem (zona de precipitação) formar-se-á uma linha de precipitação que indica a positividade da amostra e/ou controle,
- 11. Gel de Agarose ou Ágar (o gel pode ser impregnado com Ac ou não a depender do tipo de imunodifusão),
- 12. Antígeno purificado (imunodifusão dupla),
- 13. Anticorpo purificado (controle positivo),
- 14. Amostras a serem testadas,
- 15. Placa de poliestireno, Petri, ou lâmina de microscopia,
- 18. É um método de fácil execução,
- 19. Não necessita de aparato sofisticado,
- 20. Teste com boa especificidade (característica que indica que o teste em questão identificará somente o ag ou ac desejado) – menor risco de falsos-positivos,
- 21. Permite que várias amostras sejam testadas ao mesmo tempo,
- 23. Falhas em sensibilidade, o que indica um alto risco de falsos negativos,
- 24. É um teste que apresenta alguns problemas com a reprodutibilidade,
- 25. Apesar de ser um texte de rápida execução, o tempo de incubação é muito grande, de 24 até 72 horas em alguns casos.
- 29. IMUNODIFUSÃO DUPLA: detecção de ac
- 31. IMUNODIFUSÃO RADIAL (Mancini e Fahey, 1965) 1) A placa se encontra cheia de gel impregnado com um anticorpo específico, 2) Coloca-se os controles positivos e as amostras a serem testadas nos poços perfurados no gel, 3) Incuba-se a placa por 48 horas, Porf. Cruvinel, W.M.. PRECIPITAÇÃO, Laboratório de Apoio Didático – UCG –Go. 4) Os halos (zona de equivalência) formados em tono dos poços são medidos, Porf. Cruvinel, W.M.. PRECIPITAÇÃO, Laboratório de Apoio Didático – UCG –Go.
- 33. Durante a incubação ocorre a difusão do antígeno na agarose e a formação de complexos ag-ac.,
- 34. Os complexos precipitam e formam um halo ao redor do orifício,
- 35. Existe uma relação linear entre o quadrado do diâmetro do halo (d2) e a concentração do antígeno,
- 36. Utilizando antígeno de concentrações conhecidas pode-se fazer uma curva padrão, permitindo determinar a concentração em amostras desconhecidas.Porf. Cruvinel, W.M.. PRECIPITAÇÃO, Laboratório de Apoio Didático – UCG –Go. http://www.anflalab.com.br/images/Hoja%20Diffuplate%20051.jpg Porf. Cruvinel, W.M.. PRECIPITAÇÃO, Laboratório de Apoio Didático – UCG –Go.
- 38. Diagnóstico de doenças infecto-contagiosas, onde a detecção de imunoglobulinas e proteinas séricas seja significativa
- 41. A formação e localização da banda de precipitação indicam a presença de ac bem como sua concentração em relação ao ag,
- 42. Quanto mais perto do ag maior a concentração de ac na amostra . Acervo pessoal.
- 44. Muito usado no diagnóstico de doenças infecto-contagiosas,
- 45. Exemplos na Medicina Humana: Candidísase, Histoplasmose e Aspergilose
- 48. Proteínas podem ser identificadas baseado na intensidade, forma e posição das linhas de precipitação,
- 49. Cada arco de precipitação representa um antígeno.Imunoeletroforese Rocket Eletroforese
- 51. Utilizada em pacientes com suspeitas de gamopatias monoclonais e policlonais. Imunoglobulinas policlonais são distribuídas uniformemente através da fração de gama-globulina depois da separação eletroforética.
- 52. Diagnóstico sorológico de algumas doenças
- 53. Exemplo na Medicina Humana: detecção de ac e ag bacterianos (Meningite e Septicemia), Cisticercose.
- 55. ROITT,I.M.; Rabson, A.; Delves, P.J.. Really Essential Medical Immunology. Ed – 2. Blackwell Publishing. Massachusetts – USA, 2005.
- 56. TEIXEIRA, A.C.O.; Ferreira, M.A.S.V. e Marques, A.S.A.. Detecção de Erwinia psidii via enriquecimento em extrato de folhas de goiabeira e imunodifusão radial dupla. Tropical Plant Patology, vol. 33, nº 3. Brasilia, Junho de 2008.