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- 1. UNIVERSIDADE FEDERAL DA BAHIA INSTITUTO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE – ICSDEPARTAMENTO DE BIOINTERAÇÃODISCIPLINA: IMUNOLOGIA I – ICS 045 ELISA (enzyme-linkedimmunosorbentassay) http://www.elisa-development.com/ Trabalho realizado pela Acadêmica de Medicina Veterinária da UFBA Ludmilla Soares Sena sob orientação dos Professores Robert Schaer, Roberto Meyer, Claudia Brodskin e Ricardo Portela. Atualizado em Fevereiro de 2010.
- 4. Une a especificidade de uma ligação Ag-Ac com a sensibilidade de uma reação enzimática, permitindo assim a detecção de quantidades mínimas de uma substância em particular e com grande confiabilidade.
- 7. Ag purificado (caso deseje-se detectar ou quantificar Ac)
- 8. Ac purificado (caso deseje-se detectar ou quantificar Ag)
- 9. Controles (Positivo, Negativo, Ponto de Corte) – nos ensaios qualitativos
- 10. Padrões (soluções com concentração conhecida do analito a ser dosado) – nos ensaios quantitativos
- 11. Amostras a serem testadas
- 12. Placa de poliestireno
- 13. Tampão de lavagem: utilizado para remover o Ag ou Ac livres na placa, Ag ou Ac ligados com pouca avidez e outras moléculas interferentes
- 14. Conjugado: Ac ou Ag ligados covalentemente a uma enzima
- 15. Cromógeno: substância incolor que, ao ser oxidada pela reação enzimática, produz cor
- 18. Teste com alta sensibilidade (habilidade de detectar quantidades mínimas do Ag ou Ac pesquisados (O ELISA detecta moléculas na ordem de nanogramas) – menor risco de falsos-negativos.
- 19. Teste com alta especificidade (característica que indica que o teste em questão identificará somente o Ag ou Ac desejado) – menor risco de falsos-positivos.
- 20. Permite que várias amostras sejam testadas ao mesmo tempo.
- 22. Necessidade de mão de obraespecializada.
- 23. Algunsreagentespodemdegradar-se com facilidade, com exposição à luz do sol ou a elevadastemperaturas.
- 27. COMPETIÇÃO: detecta Agcom baixo peso molecular (monovalentes)
- 30. A intensidade da cor é diretamente proporcional à concentração de Ac da amostra pesquisada.
- 32. Diagnóstico sorológico de doenças infecto-contagiosas, onde a detecção de AcIgG, IgA ou IgE seja significativa.
- 33. Exemplos na Medicina Humana: diagnóstico sorológico da Doença de Chagas e da SIDA/AIDS.
- 34. Exemplos na Medicina Veterinária: diagnóstico da LinfadeniteCaseosa e da Leishmaniose.
- 36. ELISA SANDUÍCHE Y Y Y Y Y Y Y Y Y 1) Um Ac conhecido é adicionado à placa e se liga à sua superfície 2) Lavagens são feitas para retirar os Ac livres 3) Adiciona-se a solução com o Ag a ser pesquisado e este, caso presente, se liga aos Ac nos poços Y Y Y Y Y 4) Realiza-se lavagens para retirar o Ag não capturado Y Y 5) Adiciona-se conjugado específico para o Ag procurado Y 6) Novas lavagens retiram o conjugado livre 7) O cromógeno e o substrato são adicionados, e se o cromógeno for oxidado pela ação da reação enzimática, haverá desenvolvimento de cor Antígeno Conjugado Y Anticorpo Cromógeno
- 38. A intensidade da cor é diretamente proporcional à concentração de Ag da amostra pesquisada.
- 39. Para este teste se tornar quantitativo, é necessária a construção de uma curva com os valores de densidade ótica obtidos a partir da reação de padrões com concentrações conhecidas do antígeno a ser dosado. A curva serve como padrão de comparação para deduzir as quantidades de antígenos nas soluções-teste. Curva Padrão (exemplo) Absorvância (450/620) Concentração de IgE http://www.shibayagi.co.jp/Prod-E/prod_akrie-211.htm
- 41. Muito usado para a dosagem de hormônios, marcadores tumorais e outras proteínas séricas, bem como para a detecção de antígenos virais e de outros patógenos nas fezes, na urina e em secreções. Pode detectar 10-12 a 10-14g.
- 42. Exemplos na Medicina Humana: Teste de Gravidez (teste de detecção da gonadotropina coriônica humana (HCG) no soro).
- 46. Dosagem de hormônios, marcadores tumorais e outras proteínas séricas. Diagnóstico sorológico de algumas doenças.
- 47. Exemplo na Medicina Humana: dosagem de T3, T4, testosterona, estradiol, progesterona.
- 50. Intensidade da cor diretamente proporcional à concentração de Acs.
- 52. Principalmente usado para a detecção de anticorpos da classe IgM contra os mais diversos antígenos (virais, bacterianos, de protozoários) em todas as doenças em que seja importante identificar o seu recente aparecimento. Apesar de ser mais utilizado para a detecção de IgM, o ELISA de Captura também pode ser utilizado para a dosagem de outros Acs.
- 53. Exemplos na Medicina Humana: diagnóstico de rubéola, toxoplasmose, herpesvírus e citomegalia, em suas fases agudas, da gestante (complexo TORCH).