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Desnaturalización y Renaturalización de la cadena de ADN

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Desnaturalización y renaturalización del ADN, propiedades de Hibridación

Veröffentlicht in: Wissenschaft
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Desnaturalización y Renaturalización de la cadena de ADN

  1. 1. DESNATURALIZACIÓN DE LA CADENA DE ADN Altas temperaturas produce una separación de la doble hélice Ocurre porque los enlaces o puentes de hidrogeno se rompen Esto puede ocurrir durante la reacción en cadena de la polimerasa PCR: Consiste en la amplificación in vitro de un fragmento de ADN específico
  2. 2. Cuando se calienta un DNA de doble hebra se rompen las fuerzas de unión entre las dos hebras y acaban por separarse Por tanto, el DNA desnaturalizado es de una sola hebra. DESNATURALIZACIÓN DE LA CADENA DE ADN
  3. 3. Desnaturalización del ADN. Una doble hebra de ADN se calienta, y los pares de bases comienzan a separarse de forma cooperativa. Al final, las dos hebras están totalmente separadas.
  4. 4. Factores que interviene en la Desnaturalización de la cadena de ADN • La forma más corriente de desnaturalizar el DNA es por calentamiento Calentamiento • El pH elevado porque cambia la carga de algunos grupos que forman parte de los puentes de hidrógeno pH • Se produce la separación de las hebrasAgua Destilada
  5. 5. Relación de la desnaturalización del ADN con la temperatura °C
  6. 6. Relación entre la temperatura °C y la inclusión del ADN en etanol y agua normal. Los reactivos que incrementan la solubilidad de las bases (como el etanol) disminuy en la Tm, ya que reducen la interacción hidrofóbica que las mantiene unidas. De esto se deduce que tanto los puentes de hidrógeno como las interacciones hidrofóbicas coo peran para formar una estructura estable Si se reduce o elimina cualquiera de estas interacciones, la estabilidad disminuye y la Tm es menor
  7. 7. RENATURALIZACIÓN DEL DNA Una vez que el ADN ha sido desnaturalizado se hace descender lentamente la temperatura hasta casi 25 oC por debajo de Tm, las dos cadenas vuelven a unirse por completo
  8. 8. Para que tenga lugar la renaturalización deben cumplirse dos requisitos La concentración salina debe ser alta ([NaCl] entre 0,15 y 0,5 M) para eliminar la repulsión entre los grupos fosfato de las dos hebras La temperatura deber ser lo suficientemente elevada como para romper los puentes de hidrógeno
  9. 9. HIBRIDACIÓN DEL DNA Cuando el DNA renaturalizado se forma a partir de moléculas de DNA de distinto origen la renaturalización se conoce como hibridación Una característica importante de la hibridación es que no sólo se puede producir entre dos DNA distintos, sino también entre DNA y RNA Siempre que sus secuencias de nucleótido sean complementarias.
  10. 10. Hibridación del ADN con ARN

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