Gaussia luciferasa como marcador biológico

1. GAUSSIA LUCIFERASA COMO
MARCADOR BIOLÓGICO PARA
MONITOREO DE LA PROGRESIÓN
DEL TUMOR Y RESPUESTA AL
TRATAMIENTO DE LAS METÁSTASIS
Integrantes: A DISTANCIA
• Cárdenas Ramírez, Vanessa
• Córdova Espinoza, Leidy
• Guardia Herrero, David
• Pérez Paucar, Pedro
• Sallo Valenzuela, Patty
• Robles , Paola
• Yaranga Rojas, Kathya

2. BIOLUMINISCEN
CIA
Es la luz producida por una reacción química
dentro de un organismo.
Al menos 2 elementos se requieren. El que
produce la luz "luciferina" y otro que cataliza la
reacción "luciferasa.
luciferase
= LUZ

3. la energía de una fuente de es una radiación de vida
luz es absorbida y remitida media más prolongada y está
como otro fotón. asociada con la intensidad de
la luz absorbida.

4. Algunas especies con
actividad bioluminiscente
•Bacterias, Hongos, dinoflagelados,radiolarios, Cnidarios, Hydrozoa,
Anthozoa, Ctenóforos, Nemertinos, udibranquios,pulpos, anélidos,
picnogónidos, Quetognatos, crustáceos (Copépodos, Ostrácodos,
Anfípodos, Eufásidos), Equinodermos, Tunicados, Larváceos, Peces
•Ciempiés, Milpiés, Insectos
❶Gaussia, mide unos 27mm. ❷Hidromedusa
Producen la luz cuando hacen un Aequorea victoria
giro al escaparse.

5. ❹Japetella sp. la hembra usa su
❸Dinoflagelado Pyrocystis fusiformis.
bioluminiscencia alrededor de su boca, solo
cuando busca pareja.
❺Poliqueto Tomopteris sp. ❻Ctenóforo batipelágico Bathyctena sp.
“Luminiscencia amarilla”. Cuando es (2000 m). La bioluminiscencia amarilla
perturbado muestra la ioluminiscencia aparece cuando el animal es perturbado.
en sus parapodios.

6. Coelenteracina
Es una luciferina, molécula responsable de la emisión de luz
en algunas bacterias , algas, hongos y animales.
Es el sustrato de muchas luciferasas y fotoproteinas
incluyendo luciferasa de Renilla reniformis (Rluc), Gaussia
luciferase (Gluc), aequorina y obelina.

7. Gaussia luciferase
Es una proteína luminiscente
con rendimientos cuánticos
más altas que las luciferasas
de Renilla sp. y luciérnaga. Es
independiente de ATP, lo que
requiere sólo coelenteracina y
O 2 como sustratos.

8. Luciferasa de luciérnaga

11. Cáncer metastásico
•Cáncer que se ha diseminado
de su lugar de origen a otro
lugar en el cuerpo.
•Los lugares más comunes de
metástasis del cáncer son los
pulmones, los huesos y el
hígado.
•El tratamiento del cáncer
metastático depende,
usualmente, del tipo de cáncer y
del tamaño, ubicación y número
de tumores metastáticos.

12. Glosario
◘Ortotópico: Que está situado en su lugar normal. Se usa con
frecuencia para describir un tejido u órgano que se trasplanta a su
lugar normal en el cuerpo
◘MDA-MB-231: una sublínea de la línea celular de
adenocarcinoma de mama humano; es decir, células se
cultivaron con el fin de estudiar el papel de la acetilación y
extra-celular ubicación de 90alpha proteína de choque
térmico en la invasión de células tumorales.
Marcador biológico: molécula biológica que se encuentra en
la sangre, otros líquidos o tejidos corporales, es un signo de
un proceso normal o anormal, o de una afección o
enfermedad

13. Glosario
◘Inoculación: introducción de una sustancia en el
cuerpo para producir o aumentar su inmunidad
ante una enfermedad o proceso asociado a dicha
sustancia.
◘Luminómetro: excelente para monitoreo de
limpieza en planta, equipo portátil, su avanzado
sistema permite leer la cantidad de ATP , cuenta
con un software para realizar análisis estadísticos y
llevar un control
◘ RLU( unidad relativa de luz) : la luz emitida desde
los híbridos ARN:ADN marcados se mide como
señales de fotones en un luminómetro y se incluye
en el informe como unidades de luz relativa.
◘ Valor umbral: separa los objetos de una imagen
que nos interesan del resto

14. HER2 EGF
Receptor del factor de Crecimiento Receptor del R
factor de Crecimiento
epidérmico epidérmico
Es el nombre de una proteína producida Es el receptor celular de la Superficie
por un gen específico cuya alteración de la célula de los Miembros de la
puede producir cáncer Familia del factor de crecimiento
Las proteínas HER2 son receptores en las epidérmico (familia EGF) de los ligandos
células mamarias de las Proteínas extracelulares.
Ayudan a controlar la manera en que una
célula mamaria sana crece, se divide y se
repara así misma

15. Lapatinib
Es un agente quimioterapéutico,
un inhibidor dual de la tirosina
quinasa de EGFR y HER2
Actúa sobre una enzima específica
que se encuentra en las células
cancerosas y detiene el crecimiento
de las células.
Se usa en forma de ditosilato de
lapatinib.

16. INTRODUCCCI
ON

17. O Ratones de laboratorio
O Los ratones fueron anestesiados con
ketamina/xilazina(100/10mg/kg),
O Inyección intraperitonial

18. Línea celular y cultivo
celular
Línea celular humana 231 Br y HER2 con
sobreexpresión de contraparte, donde
ambos expresan la proteína verde
fluorescente
Las células 231 BR y 231BR Her2 se
mantuvieron en Dulbecco modificado
por Eagle, complementado con suero
fetal bovino al 10%
1% de penicilina – estreptomicina
solución

19. Gluc
Transfeccion
El vector lentiviral lleva un cassette
de expresión que codifica la proteína
Gluc y ceruleo flurescente, separados
por un sitio interno de entrada
ribosomal que se ha generado con
anterioridad. Las células 231BR y
231BR Her2 fueron transducidas con
LV-Gluc-PPC – 231BR-G y 231BR-
HER2-G a una multiplicidad de
infección.

20. Modelo de almohadilla de grasa mamaria
 Se ha diseñado células MDA-MB-231BR
(231BR), la cual se administra en un volumen
de 200 a 300 mm3 en la almohadilla de la
grasa mamaria (MFP)
 Ratones femeninos de 5 – 7 semanas de edad
 El tamaño del tumor se midió mediante una
pinza
Los tumores se resecaron y se utiliza para H &E
tinción

21. Modelo de metástasis experimental (modelo de
inyección intracardiaca)
● Ratones femeninos de 6 -7 semanas de
edad desnudos fueron inyectados con:
0.25 x 106 231 BR- HER2-G células en 0,1
ml de PBS a través del ventrículo
izquierdo.
● Fueron sacrificados los ratones que
mostraron síntomas clínicos de dolor
prolongado
o El cerebro, los huesos y los demás
órganos se recogieron y se evalúan de
inmediato para GFP mediante
microscopía de fluorescencia.

22. Ensayo Gluc De Sangre / Orina
❶Se extrajo sangre de hacer una
ligera incisión en al vena de la
cola
❷La orina se recoge
directamente de las aberturas de
la uretra
❸10 μL de sangre se recogió y
se mezcló con 2μL de 50 mM de
EDTA.
❹Las muestras de sangre u
orina se transfirió luego a una
placa de 96 pocillos.
❺La actividad de la Glu se midió
utilizando un luminómetro placa.

23. Cuantificación de tumor viable
Se utilizo la tinción
hematoxilina-eosina (H
& E) la cual nos permite
contrastar el núcleo del
citoplasma, tiñendo el
núcleo de color azul y el
citoplasma de un color
rosado.

25. MATLAB
Matlab esta diseñado para
la computación interactiva y
automatizada mediante las
funciones matemáticas y
graficas incorporadas ,
herramientas donde se
podrá analizar y visualizar
los datos
Exploración y análisis de
datos ,visualización y
procesado de imágenes

26. Biolumiscencia de Imágenes (BLI)
Es una tecnología la cual representa una poderosa herramienta para
su uso con bacterias modificadas para expresar genes reporteros
como lux (unidad del nivel de iluminación).
BLI se utiliza tradicionalmente como una modalidad 2D que resulta en
imágenes que están limitados en su capacidad para localizar
anatómicamente las poblaciones de células.

27. Biolumiscencia de Imágenes
Inyección de ctz
Ratón Línea celular MDA-
4mg/kg
anestesiado MB-231 BR(231BR)
El tiempo de adquisición de Sistema IVIS acoplado
la imagen se encontraba a un software de
en el intervalo de 15 imagen
segundos a 1 minuto

29. RESULTADOS
Resultado n 1 Comparación de la actividad Gluc en sangre,
plasma y orina

31. Resultado n 2
Seguimiento de la actividad Gluc
en la sangre, la orina e imágenes
de bioluminiscencia (BLI) del
modelo ortotópico de cáncer de
mama.

34. Resultado n 3
La sangre de ensayo
Gluc refleja la carga
tumoral viable.

38. Monitorización en tiempo real de progresión del
tumor metastásico con Gluc sangre y localización
Resultado n 4 de la metástasis, con imágenes de
Bioluminiscencia

39. metástasis
Metástasis de columna vertebral
cerebrales

40. Resultado n 5
El ensayo Gluc en sangre Ofrece monitoreo en
tiempo real de respuesta al tratamiento de la
progresión del metástasis sistémico.

43. CONCLUSIONES
• La detección del tumor viable primario se puede
detectar antes que se desarrolle la proliferación
celular, por medio del biomarcador Gaussia
luciferasa solo se da a través en ensayo de
sangre.
• La Gaussia luciferasa es el regulador que ayuda
detectar la formación y actividad de las células
tumorales, tanto en tratamiento como en el
control.

44. Muchas
gracias