1. 1
CAPÍTULO I
PLANTEAMIENTO METODOLÓGICO
1.1 DESCRIPCIÓN DE LA REALIDAD PROBLEMÁTICA
Puesto que en nuestra población peruana la medicina natural y alternativa esta en
apogeo y hay un mayor mal uso de estas plantas medicinales se ha visto por
conveniente realizar este trabajo de investigación por ello que en esta temporada hay
mas enfermedades aéreas se vio por conveniente realizar este trabajo para ver si
esta planta podría tener un efecto antibacteriano ante cepa de Staphylococcus
aureus.
1.2 DELIMITACIONES Y DEFINICIÓN DEL PROBLEMA
1.2.1 DELIMITACIONES
A. DELIMITACIÓN ESPACIAL: La parte experimental del presente trabajo de
investigación se realizó en los laboratorios de la Universidad Alas Peruanas-
Filial Arequipa.
B. DELIMITACIÓN TEMPORAL: El presente estudio se llevó a cabo en los
meses de marzo, abril, mayo y junio.
C. DELIMITACIÓN SOCIAL:El presente trabajo de investigación beneficiara a los
estudiantes y especialmente a la población por el contenido de información
importante para el mejoramiento de la salud y el buen uso de estas plantas
medicinales.

2. 2
D. DELIMITACIÓN CONCEPTUAL:
1. Área: Ciencias de la Salud.
2. Campo: Farmacia y Bioquímica.
3. Línea: microbiología, y biotecnología.
4. Tema General: Evaluación del efecto antibacteriano del Tarwi (Lupinus
mutabilis) ante cepas de Staphylococcus aureus.
5. Especificación del tema: Evaluación del efecto antibacteriano del extracto
acuoso de las semillas de Tarwi (Lupinus mutabilis) sobre cepas de
Staphylococcus aureus, en los laboratorios de Universidad Alas Peruanas
Arequipa 2013.
6. Problema a Investigar: El efecto antibacteriano del Tarwi (Lupinus
mutabilis).
1.2.2 DEFINICIÓN DEL PROBLEMA
El conocimiento de las propiedades curativas de las plantas ha sido y es un reto
constante que nos ha llevado por los caminos de la investigación para descubrir la
cura de enfermedades. Lupinus mutabilis (Tarwi) es una planta poco conocida, sin
embargo, es utilizada frecuentemente en la zona en la que crece, lo cual podría
ocasionar que se produzca un mal uso debido al desconocimiento en cuanto a la
composición química propia de la planta
1.3 FORMULACIÓN DEL PROBLEMA
1.3.1. FORMULACIÓN DEL PROBLEMA A INVESTIGAR
¿El Tarwi (Lupinus mutabilis) tiene efecto antibacteriano sobre Staphylococcus
aureus?
1.4. OBJETIVOS DE LA INVESTIGACIÓN
1.4.1. OBJETIVO GENERAL
Evaluar el efecto antibacteriano del extracto acuoso de las semillas de Tarwi
(Lupinus mutabilis) sobre cepas de Staphylococcus aureus, Arequipa 2013.

3. 3
1.4.2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS
Determinar el pH, densidad, características organolépticas, del extracto acuoso
de las semillas de Tarwi.
Establecer el efecto bacteriostático del extracto acuoso deLupinus mutabilis,
sobre Staphylococcus aureus.
Determinar la actividad bactericida del extracto acuoso deLupinusmutabilis,
sobre Staphylococcus aureus
1.5. HIPÓTESIS DE LA INVESTIGACIÓN
Dado que las semillas del Tarwi presentan alcaloides dentro de su composición
fitoquímica, los mismos que generalmente poseen propiedades antimicrobianas, es
probable que el extracto acuoso de las semillas de Tarwi presente actividad
antibacteriana.
1.6. VARIABLES E INDICADORES
VARIABLE DIMENSION INDICADOR CATEGORIZACION
Actividad
Antibacteriana sobre
las Cepas de
Staphylococcus
aureus.
Método de
dilución
C.I.M.
C.M.B.
Cualitativo
Cuantitativo
1.7. JUSTIFICACIÓN E IMPORTANCIA DE LA INVESTIGACIÓN
En la actualidad cientos de especies vegetales son utilizadas en la medicina; Sin
embargo, la ciencia moderna, analizando y estudiando los efectos terapéuticos de
las plantas, quiere precisar, comparar y clasificar las diversas propiedades, no con el
fin de disminuir la confianza en los productos naturales, sino más bien para agrupar
a las plantas de efectos similares con la finalidad de conocer los principios activos
responsables de la cura de enfermedades, de esta forma determinar sus estructuras
químicas y procurar su síntesis.

4. 4
En el Perú existe una diversidad cuantiosa de especies vegetales que poseen
propiedades farmacológicas con fines terapéuticos diferentes, dado que posee
climas y microclimas variados, esto permite que se desarrollen diferentes principios
activos.
Dentro de la flora nativa del Valle del Mantaro, en Huancayo (Junín), Puno, Cusco y
Ayacucho, se encuentra el Tarwi (Lupinus mutabilis), especie utilizada por los
comuneros de la zona para tratar proceso infecciosos y otros fines terapéuticos;
Cabe resaltar que es importante el estudio las plantas nativas, asimismo que dichos
estudios presenten garantías científicas. Es debido a esto que en el presente
estudio, tiene como objetivo realizar la evaluación del efecto antibacteriano del
extracto acuoso de las semillas de Tarwi (Lupinus mutabilis) sobre cepas de
Staphylococcus aureus, por lo cual cabe significar un inicio o una base para el
desarrollo de futuras investigaciones sobre esta especie vegetal
1.9. TIPO Y NIVEL DE INVESTIGACIÓN
1.9.1. TIPO DE INVESTIGACIÓN
El tipo de investigación fue descriptivo.
1.9.2. NIVEL DE INVESTIGACIÓN
El nivel de investigación fue de nivel básico.
1.10. MÉTODO DE LA INVESTIGACIÓN
1.10.1. INSTRUMENTOS
• Tubos de ensayo
• Gradilla
• Papel filtro y pabilo
• Balón de gas
• Mechero bunsen
• Trípode
• Malla de asbesto
• Autoclave
• Pipeta Pasteur

5. 5
• Placas
• Matraz
• Tampón
• Asa de necrón
• Asa de digaski
• Vaso beacker
• Mechero y encendor
• Papel kraf
• Porta objetos
• Microscopio
• Gotero
• Fiola
• Jeringas de 1ml, 5ml, 20ml.
• Gasa y algodón
• Lapicero tinta indeleble
1.10.2. EQUIPOS:
• Autoclave (Allamerican, Modelo 1925X).
• Balanza analítica (Nahita, Modelo 5034/120).
• Incubadora (Nahita, Modelo 636/13).
• Refrigeradora (LG, GR-T342GV)
• PH metro (Fisher Scientific).
• Densimetro
1.10.3. REACTIVOS
• Reactivo de Mayer
• HgCl2
• KI
• Peróxido de hidrogeno
• Agar sangre
• Agua destilada estéril.
• Agar manitol salado.
• Agar Mueller Hinton.

6. 6
• Agar baird Parker
• Plasma sanguíneo
• H2O2
• Tinción gram
1.10.4. ACONDICIONAMIENTO DEL MATERIAL VEGETAL
1. OBTENCIÓN DE LA PLANTA(LA PARTE DEL ESTUDIO)
La planta (semilla) de estudio Tarwi (Lupinus mutabilis) se obtuvó en el
mercado Túpac Amaru, Juliaca.
Se elegirá semillas sanas que no posean signos de infestación parasitaria.
2. LIMPIEZA DE LA SEMILLA DEL VEGETAL
Se limpiaran las semillas ya seleccionadas.
3. MOLIENDA
Se procederá a moler la muestra con el fin de almacenarla y conservarla para
los estudios de investigación, se utilizara un molino de grano domestico hierro
hasta obtener un grado de división de la semilla adecuado 0.5mm.
4. ALMACENAMIENTO Y CONSERVACIÓN
Para el almacenamiento se trabajó con cantidades adecuadas de muestra
(1kg), se utilizaran papel kraft, protegidos de la luz y la humedad.
1.10.5. MÉTODO DE OBTENCIÓN DEL EXTRACTO POR COCCIÓN
Fundamento:
Se fundamenta en la extracción de los principios activos de un material
vegetal al poner en contacto la droga y el solvente (agua), a fuego lento
durante 15 minutos, después del hervor.
Se pesó 20gr. de semilla de Tarwi en 100ml. de agua (concentración a 20%).
CONSERVACIÓN DEL EXTRACTO
El extracto será conservado en un recipiente color ámbar previamente
esterilizado, verificando que el recipiente estuviera correctamente cerrado. El
extracto se mantendrá a una temperatura adecuada, en un lugar fresco y
oscuro para prolongar su estabilidad.

7. 7
1.10.6. IDENTIFICACIÓN DE METABOLITOS
1.10.6.1. IDENTIFICACIÓN DE ALCALOIDES
a. Reacción de Mayer
Se colocara en un tubo de ensayo 2 mL del extracto acuoso, se adicionaron
20 gotas de HCl al 8% y luego se agitara suavemente hasta disolver. Se
calentara a baño maría por 5 minutos, para luego adicionar gota a gota el
Reactivo de Mayer (Preparado con bicloruro de mercurio y yoduro de potasio)
hasta observar cambios.
La aparición de un precipitado amarillento se considerara como prueba
presuntiva (+) de la presencia de alcaloides.
b. Reacción de Wagner
Se colocara en un tubo de ensayo 2 mL del extracto acuoso, se adicionaron
20 gotas de HCl al 8% y luego se agitara suavemente hasta disolver. Se
calentara a baño maría por 5 minutos, para luego adicionar gota a gota el
Reactivo de Wagner hasta observar cambios.
La aparición de un precipitado marrón se considerara como prueba presuntiva
(+) de la presencia de alcaloides.
1.10.6.2. IDENTIFICACIÓN DE SAPONINAS
a. Ensayo del índice afrosimétrico
Fundamento: Las saponinas se caracterizan porque al entrar en contacto con
el agua producen una espuma persistente, esta es formada debido a que los
saponósidos disminuyen la tensión superficial del agua.
Procedimiento: Se colocara en un tubo de ensayo 1 mL del extracto acuoso,
se le añadieron 5 mL de agua destilada (proporción 1:5) y se agitara
vigorosamente durante 3 minutos.
La formación de espuma mayor a 2mm de altura y con una duración mayor a 2
minutos se considerara como prueba presuntiva positiva (+) de la presencia
de saponinas.
1.10.6.3. IDENTIFICACIÓN DE FLAVONOIDES
a. Reacción de Shinoda
Fundamento: Cuando se ponen en contacto el magnesio metálico y el HCl
concentrado, el magnesio es oxidado, dando como productos el H2, que es
eliminado en forma de gas y el Cloruro de magnesio (MgCl2), que es el que
forma complejos con los flavonoides dando coloraciones características.

8. 8
Procedimiento: Se colocara en un tubo de ensayo un trozo de magnesio
metálico, luego se añadirá 2 mL del extracto acuoso y unas pocas gotas de
HCl al 8% v/v por la pared del tubo, agitando suavemente.
La presencia de coloraciones que varían de amarillo a rojo, se considerara
prueba positiva (+) de la presencia de flavonas y flavonoles.
1.10.6.4. IDENTIFICACIÓN DE TANINOS
a. Reacción con FeCl3
Fundamento: Los taninos al ser mezclados con sales férricas, reaccionan
dando lugar a coloraciones o precipitados de color verde y azul intensos,
debido a la formación de tanato férrico.
Procedimiento: Se colocara 1 mL del extracto acuoso en un tubo de ensayo y
se le añadirá gota a gota FeCl3, luego se procederá a agitar suavemente.
La coloración verde a azul nos indicara la presencia de compuestos fenólicos,
sales férricas galotaninos y elagitaninos dan una coloración azul oscuro,
mientras que los taninos condensados dan positivo a coloración verde
parduzco.
1.10.7. DETERMINACIÓN DE LAS CARACTERÍSTICAS ORGANOLÉPTICO Y
FISICOQUIMICAS DEL EXTRACTO
1.10.7.1. Determinación de olor
Se tomó una tira de papel secante de aproximadamente 1 cm de ancho por 10
cm de largo y se introdujo un extremo en la muestra. Se deberá oler y determinar
si corresponde con la característica del producto.
1.10.7.2. Determinación del color
Se tomó un tubo de ensayo bien limpio y seco; se llenó hasta las tres cuartas
partes con la muestra de ensayo y se observó el color.
1.10.7.3. Determinación del pH
Se realizó con ayuda de un peachimetro y cinta reactivas introduciéndolo en la
muestra de ensayo.
1.10.7.4. Determinación e la densidad
Se realizó con ayuda del densímetro introduciéndolo en la muestra de ensayo.

9. 9
1.10.8. IDENTIFICACIÓN DE LAS CEPAS DE ESTUDIO
1.10.8.1. Prueba de la Catalasa1
Fundamento: La enzima catalasa descompone el peróxido de hidrógeno (H2O2)
en agua y oxígeno bajo la fórmula 2 H2O2----2 H2O + O2. De esta manera las
bacterias se protegen del efecto tóxico del H2O2, que es un producto final del
metabolismo aerobio de los azúcares.
Procedimiento: Se colocó una gota de H2O2 al 3% sobre un portaobjetos y luego
se transferirá una porción de colonia, proveniente de un cultivo en agar Mueller
Hinton, sobre el H2O2 realizándose una emulsión.
La aparición de burbujas es prueba positiva para Estafilococos, la prueba
negativa indica la presencia de Estreptococos.
1.10.8.2. Prueba de la Coagulasa1
Fundamento: S. aureus posee dos tipos de coagulasa:
Una endocoagulasa o coagulasa ligada o "clumping factor" que está unida a la
pared celular. Esta actúa directamente sobre el fibrinógeno provocando la
formación de coágulos o grumos cuando se mezcla una suspensión bacteriana
con plasma citratado (test en lámina).
Una exocoagulasa o coagulasa libre que actúa mediante la activación de un
factor (CRF), formándose un complejo coagulasa-CRF, el cual reacciona con el
fibrinógeno produciéndose un coágulo de fibrina (test en tubo).
Procedimiento: Se emulsionaran varias colonias en un tubo con 0,5mL de
plasma sanguíneo. Se incubó a 37°C y se observara la formación del coágulo a
las 4 horas y a las 18 horas. La formación de un coágulo total o parcial se
considerara como test positivo.
1.10.8.3. Tinción Gram
1) El primer paso es preparar y fijar un frotis de la siguiente manera:
• Con la ayuda de un mechero, flamear un asa bacteriológica y esperar que
enfríe un poco. - Tomar el asa (previamente flameada) y con ésta coger un poco
de muestra. - Una vez obtenida una pequeña cantidad de la muestra (con el asa),
hacer que ésta tenga contacto con una lámina portaobjetos, la cual servirá para
depositar la muestra contenida en el asa.
• Con el asa (conteniendo la muestra) sobre la lámina portaobjetos, proceder a
realizar la extensión de la muestra en el portaobjetos mediante movimientos

10. 10
giratorios (dar vueltas con el asa) sobre la lámina, de tal forma que al terminar la
extensión, tengamos como producto un espiral en la parte media la lámina.
• Esperar que seque al aire libre o ayudarse con la llama de un mechero para fijar
la muestra, teniendo en cuenta que el calor no debe ser directo (sólo se pasa por
la llama), puesto que el calor excesivo puede cambiar la morfología celular de las
bacterias a observar. El calor deseable es aquel en el que el portaobjetos sea
apenas demasiado caliente para ser colocado sobre el dorso de la mano.
2) Una vez obtenido el frotis con la muestra, se procede a teñir la misma con
violeta cristal o violeta de genciana, utilizando una cantidad suficiente de dicho
colorante sobre la muestra, como para lograr cubrirla por completo. Se deja
actuar al colorante por 1 minuto. Esta tinción de 1 minuto está dada para trabajar
a una temperatura ambiente de 25 grados.
3) Al transcurrir el minuto, se debe enjuagar la lámina conteniendo la muestra con
agua corriente. Para realizar el lavado, se debe tener en cuenta que el chorro de
agua NO debe caer directamente sobre la muestra, ésta debe caer sobre la parte
superior de la lámina que no contiene muestra. El chorro debe ser un chorro
delgado, aproximadamente de medio a un centímetro de espesor. También el
enjuague se debe realizar poniendo la lámina en posición inclinada hacia abajo.
4) Una vez enjuagado el portaobjetos, se aplica como mordiente yodo o lugol
durante 1 minuto más.
• El mordiente es cualquier sustancia que forme compuestos insolubles con
colorantes y determine su fijación a las bacterias.
5) Pasado el minuto de haber actuado el mordiente, el frotis se decolora con
etanol al 75 %, etanol al 95 %, acetona o alcohol-acetona, hasta que ya no
escurra más líquido azul. Para esto se utiliza el gotero del frasco del decolorante.
Se van añadiendo cantidades suficientes del decolorante, hasta lograr que éste
salga totalmente transparente, es decir, hasta que ya no escurra más líquido
azul.
6) Lavar con agua para quitar los residuos de decolorante y esperar que seque la
lámina al aire libre o con la ayuda de la llama de un mechero de la forma
anteriormente descrita.
7) Una vez que la lámina ya secó, procedemos a teñir nuevamente, pero esta vez
se va a utilizar un colorante de contraste como por ejemplo la safranina, dejar
actuar durante 1 minuto.

11. 11
8) Pasado el minuto correspondiente, se procede a enjuagar la lámina con agua,
se escurre el agua sobrante y se seca en la forma anteriormente descrita.
1.10.8.4. Prueba de Manitol Salado1
Fundamento: Medio de cultivo selectivo y diferencial, utilizado para el
aislamiento y diferenciación de estafilococos.
Es recomendado para el aislamiento de estafilococos patogénicos a partir de
muestras clínicas, alimentos, productos cosméticos y otros materiales de
importancia sanitaria.
El medio contiene manitol (1%), cloruro de sodio (7,5 %), rojo de fenol y
peptonas.
Procedimiento: Sembrar la cepa e incubar 18 a 24 hs a 35ºC, el crecimiento se
puede identificar por el viraje de color rojo a amarillo.
El S. aureus el crecimiento sin viraje, es por la alta concentración de sal inhibe
otros microorganismos excepto S. aureus (por lo tanto usar la placa para
identificación, no para aislamiento).
1.10.8.5. prueba de baird parker
Fundamento:En el medio de cultivo preparado y completo la peptona y el
extracto de carne constituyen la fuente de carbono y nitrógeno, el extracto de
levadura aporta vitaminas del complejo B, la glicina y el piruvato estimulan el
crecimiento de los estafilococos.
Este medio de cultivo es selectivo y diferencial debido al telurito de potasio y al
cloruro de litio, los cuales inhiben el desarrollo de la flora acompañante. La yema
de huevo permite demostrar la actividad lecitinásica.
Los estafilococos coagulasa positiva reducen el telurito a teluro y originan
colonias de color grisáceo-negro, y dan reacción sobre la yema de huevo
produciendo alrededor de la colonia una zona opaca que a menudo tiene una
zona clara más externa.
Se pueden encontrar cepas no lipolíticas, que presentan igual características de
colonias pero sin la zona opaca y clara.
Se debe confirmar la presencia de S. aureus mediante pruebas bioquímicas.
Procedimiento
Siembra
- Directa, estriando la superficie del medio de cultivo.

12. 12
Incubación
En aerobiosis, a 35-37 ºC durante 24 a 48 horas.
Interpretación de los resultados
Observar las características de las colonias.
Bacterias que reducen el telurito de potasio: colonias de color grisáceo-negro.
Bacterias que no reducen el telurito de potasio: colonias del color del medio,
transparentes.
Bacterias con actividad lecitinásica: halo claro en el medio de cultivo alrededor de
la colonia. Puede existir también un halo opaco alrededor de la colonia con un
halo claro externo.
Bacterias sin actividad lecitinásica: ausencia de halo claro alrededor de la
colonia.
1.10.9. PREPARACIÓN DEL INÓCULO BACTERIANO1
Con un asa de kollé se tomaran 3 a 5 colonias de Staphylococcus aureus
provenientes del cultivo en agar Mueller Hinton; que se van a transferir a un tubo
con 5 mL de solución salina al 0.9%.
Se homogeneizaran las colonias y seguidamente se estandarizara el inóculo por
comparación de turbidez con el tubo 0.5 de la escala de Mc Farland que
corresponde a 108
células/ml.
1.10.10. DETERMIANCION DE LA CONCENTRACIÓN INHIBITORIA MÍNIMA
1.10.10.1. Método de Macro dilución en Caldo
Es un método referencial para la determinación de la sensibilidad a los
antimicrobianos. Se requiere de una serie de tubos con caldo a los cuales se les
agrega el antimicrobiano en distintas concentraciones, luego se inoculan con una
suspensión estandarizada del microorganismo en estudio y se incuban bajo
condiciones y tiempos recomendados.
Procedimiento:
Se prepara una suspensión del germen problema procedente de un cultivo de no
más de 24 horas. Se ajusta esa suspensión con el 0.5 de la escala turbidimétrica
de Mac Farland equivalente 108
UFC por ml

13. 13
Se realiza una dilución posterio1:100 (fiola) para obtener una concentración de
106
UFC/ ml.
Se realiza diluciones seriadas, el tubo n°10 no posee sangre de grado y sirve
como control de crecimiento (T)
Se agrega 1 ml de suspensión microbiana con 106
UFC/ ml a la serie de 10 tubos
y se incuba a 37 ° C durante 18 horas.
Una vez transcurrido dicho lapso se procede a la observación a simple vista de
los tubos y la interpretación de los resultados obtenidos
Primero se observa el tubo testigo (ultimo tubo de la serie) que debe tener
desarrollo bacteriano (turbidez), y que solo contiene caldo nutritivo y la
suspensión del microorganismo. Luego se observa cual es el primer tubo de la
serie que presenta turbidez, el tubo anterior a este (ultimo tubo de la serie que no
presenta turbidez) es el que corresponde a la concentración inhibitoria minina.
1.10.11. CONCENTRACIÓN MÍNIMA BACTERICIDA
En el método de siembra incorporada o por inclusión se procede a depositar 1ml
de cada dilución en placas estériles, vacías y por duplicado. Posteriormente se
agrega a cada placa 15 a 20 ml de medio de cultivo a emplear, se agita moviendo
la placa tapada sobre la superficie de la mesa con movimiento circular. Así, la
muestra se mezcla con el medio de agar. En cualquiera de los casos luego de la
siembra es necesario llevar las placas a estufa para permitir el crecimiento de los
microorganismos.
Se incuba durante 18 horas.
Transcurrido dicho tiempo, puede determinarse el número real de UFC
delinoculo. Para obtener un resultado con precisión estadística suficiente se
aplica la siguiente fórmula:
N° de colonias obtenidas x el factor de dilución
ml sembrados en la placa

14. 14
1.11. TÉCNICAS E INSTRUMENTOS DE RECOLECCIÓN DE INFORMACIÓN
1.11.1. TÉCNICAS
La presente investigación utilizó la observación laboratorial como técnica para la
recolección de los datos de la investigación:
- Recopilación bibliográfica (Técnica de macro dilución en caldo, CIM, CMB).
1.11.2. INSTRUMENTOS
Libros, tesis, artículos científicos.
1.12. COBERTURA DEL ESTUDIO
1.12.1. UNIVERSO
Cultivo de cepas de Staphylococcus aureus, cultivadas en medio Agar Mueller
Hinton.
1.12.2. MUESTRA
Colonias aisladas de Staphylococcus aureus que fueron utilizadas para la
preparación de los correspondientes inóculos.

15. 15
CAPÍTULO II
MARCO TEÓRICO
2.1. ANTECEDENTES INVESTIGATIVOS
Roque. M, Tristán, M” flavonoides y alcaloides de Lupinus mutabilis c. p. Smith con
actividad antifúngica”. Instituto de química orgánica aplicada a la farmacia, unmsm.
Facultad de farmacia y bioquímica, instituto de microbiología. Unmsm. Facultad de
farmacia y bioquímica.
RESUMEN
Las hojas de Lupinus mutabilisde Smith, procedente de las zonas altas del
departamento de Lima, contiene entre otros metabolitos, flavonoides y alcaloides. El
espectro IR revela la presencia del alcaloide lupinina o hidroxilupanina. El flavonoide
y el alcaloide tienen marcada acción antibacteriana y el último muestra además una
actividad antifúngica.
Efecto antibacteriano del extracto alcohólico y del extracto acuoso de té verde
(Camellia sinensis) sobre bacterias orales de Importancia Estomatológica,
Streptococcus mutans, Streptococcus mitis y Streptococcus salivarius. UAP.2010
(Villalba).

16. 16
RESUMEN
Las hojas de té verde que se utilizaron tuvieron actividad antibacteriana por la
cual utilizaron para evidenciar este efecto, la técnica de difusión en pozos la cual
se utilizó para realizar el presente trabajo de investigación.
2.2. MARCO CONCEPTUAL
2.2.1. TARWI
A. DESCRIPCIÓN BOTÁNICA
Es una leguminosa herbácea erecta de tallos robustos, algo leñosa. Alcanza una
altura de 1,8-2 m. Se cultiva principalmente entre los 2.000 y 3.800 msnm, en climas
templados y fríos.
Tallo. Robustos algo leñosa.
Hojas. Las hojas tienen forma alargada, generalmente compuesta por ocho folíolos
que varían entre ovalados a lanceolados. Se diferencia de otras especies de Lupinus
en que las hojas tienen menos vellosidades. Referente las semillas de Tarwi, están
incluidas en número variable en una vaina de 5 a 12 cm y varían deforma (redonda,
ovalada a casi cuadrangular), miden entre 0,5 a 1,5 cm.
Flores varían en color desde el azul el morado y penden de las hojas para atraer a
los insectos polinizadores. Estas emiten un aroma parecido al de la miel. La vainas de
5 a 10 cms.de largo
Semilla. Contienen de 2 a 6 semillas ovaladas de 0.6 a 1 cm de diámetro.
B. DISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA Y HÁBITAT
Es una planta sudamericana, se encuentra en los países de Perú, Bolivia y Argentina
en mayor proporción, se desarrolla en cualquier época del año, habitat en suelos
areno-arcillosos, pedregosos, muy húmedos.
Su hábitat depende de la elevación, esta puede ser: Elevación extrema muy por
encima de la línea del bosque (la elevación absoluta depende de la latitud); o
elevación alta (cerca del límite del bosque), (la elevación absoluta depende de la
latitud).
Depende también de las condiciones de agua, donde el período seco sin
precipitaciones dura 6 - 10 meses. Las precipitaciones alcanzan 100 - 300 mm
anuales, concentrándose en invierno.

17. 17
Respecto a las condiciones de luz esta planta se encuentra expuesta en Pleno sol sin
ninguna protección. Partes planas o laderas de exposición norte.
C. CLASIFICACIÓN TAXONÓMICA
Reino: Plantae
División: Magnoliophyta
Clase: Magnoliopsida
Orden:Fabales
Familia: Fabaceae
Género: Lupinus
Especie:mutabilis
Nombre Científico:Lupinus mutabilis
Nombre Común: Tarwi.
D. COMPOSICIÓN QUÍMICA
El componente más importante, según antecedentes teóricos y al que se atribuye en
parte sus virtudes antibacterianas, es el alcaloide. Esta sustancia se encuentra en
una concentración mayor con relación a los demás metabolitos como son taninos,
flavonoides y saponinas presentes en la planta.
E. USOS
En algunos países como Perú, Bolivia y Argentina se le da un uso netamente
nutricional. La medicina tradicional le atribuye propiedades anti fúngicas para
infecciones micóticas, para ectoparásitos.
F. METABOLITOS SECUNDARIOS
Un aspecto metabólico que distingue el reino animal del vegetal es la capacidad de
las plantas para producir sustancias que no son esenciales para su supervivencia. A
esas sustancias se les denomina metabolitos secundarios, los animales superiores
raramente los producen, si acaso pueden ser encontrados ocasionalmente en
insectos y otros invertebrados.
El metabolismo secundario compromete aquellos procesos químicos que son únicos
para una planta dada, y no son universales. Dicho metabolismo es la química que
conduce a la formación de un producto natural.

18. 18
Especies muy relacionadas taxonómicamente del mismo género pueden tener
distintos tipos de metabolitos secundarios, o si tienen los mismos, pueden
presentarlos en proporciones variables de uno a otro.
Las plantas están constantemente expuestas a numerosos patógenos microbianos,
principalmente hongos. Durante la evolución, algunas plantas han desarrollado
diversos sistemas para defenderse de sus atacantes microbianos, tales como
sistemas de defensa inducibles y constitutivos o mediante proteínas anti fúngicas,
polímeros estructurales resistentes a los patógenos y antibióticos. Las plantas
también utilizan los metabolitos secundarios como agentes de señalización durante la
interacción con patógenos.
Su potencial radica también en la importancia para la defensa de la planta frente a
microorganismos, los metabolitos secundarios también permiten atraer a
microorganismos simbiontes. Así es el caso de los flavonoides que producen las
leguminosas para atraer a las bacterias fijadoras de nitrógeno.
Las plantas han sido utilizadas por el hombre a lo largo de muchos años como fuente
para elaborar medicinas, conservantes, aromatizantes o pigmentos. Además de ser
importantes como medicamentos, también hay evidencias de que los metabolitos
secundarios son importantes para nuestro estado de salud en general.
G. ALCALOIDES
Los alcaloides son compuestos orgánicos que contienen uno o más átomos de
nitrógeno, generalmente en anillo heterocíclico y con actividad fisiológica específica.
Son sustancias de origen biológico y sobre todo de origen vegetal. Por lo general
presentan un nitrógeno heterocíclico, como amina primaria (R-NH2), secundaria (R’-
NH) o terciaria (R’’-N).
Son particularmente activos en el Metabolismo vegetal. Se los considera como
depósitos para síntesis proteicas y estimulantes o reguladores de actividades como el
crecimiento, metabolismo y reproducción.
2.2.2. Staphylococcus aureus
A. GENERALIDADES
Conocido como Staphylococcus aureus o comúnmente Estafilococo dorado, es
una bacteria anaerobia facultativa, Gram positiva, productora de coagulasa, catalasa,
inmóvil y no esporulada que se encuentra ampliamente distribuida por todo el mundo.

19. 19
Además, también puede afectar al aparato gastrointestinal, ya sea por presencia
física de Staphylococcus aureus o por la ingesta de la entero toxina
estafilocócica secretada por la bacteria.
En la actualidad, este microorganismo se encuentra como el principal causante de
las infecciones nosocomiales. Esta situación se ve favorecida por el hecho de que
esta especie habita tanto en las mucosas como en la piel de los seres humanos, lo
que permite que a través de las heridas quirúrgicas pueda penetrar en el torrente
sanguíneo del paciente por medio del contacto directo o indirecto con el personal
sanitario, con un objeto contaminado o incluso con otro paciente.
Puede mantenerse viable por 6-14 semanas en pus y se necesitan 15 minutos de
exposición al alcohol de 70° para su eliminación.
B. DIVISIÓN TAXONÓMICA
Reino: Bacteria
Phillum: Fimicutes
Clase: Bacilli
Orden: Bacillales
Familia: Micrococcaceae
Género: Staphylococcus
Especie: S. aureus.
C. ESTRUCTURA ANTIGÉNICA
En la estructura de la pared celular, los estafilococos contienen polisacáridos,
proteínas antigénicas y también otras sustancias importantes. El peptidoglucano (un
polímero polisacárido formado por la unión de subunidades) suministra el
exoesqueleto rígido de la pared celular. La exposición a un ácido fuerte o a la
lisozima destruye a los peptidoglucanos. El peptidoglucano es importante en la
patogenia de la infección: induce la producción de interleucina-1 (pirógeno endógeno)
y de anticuerpos opsónicos en los monocitos; y puede atraer químicamente a los
leucocitos polimorfonucleares, posee actividad parecida a endotoxina, genera un
fenómeno de Shwartzman localizado y activa al complemento.
Los ácidos teicoicos, polímeros de glicerol o fosfato ribitol, están unidos al
peptidoglucano y pueden ser antigénicos. Los anticuerpos antiteicoicos detectables
mediante difusión en gel pueden observarse en pacientes con endocarditis activa por
S. aureus.

20. 20
Algunas cepas del S. aureus poseen cápsulas que inhiben la fagocitosis por los
leucocitos polimorfonucleares a menos que se encuentren presentes anticuerpos
específicos.
D. ENFERMEDADES
Síndrome del choque tóxico (SST). Infecciones intrahospitalarias.
Durante la convalecencia, después de las intervenciones quirúrgicas o de
quemaduras graves, uno de los principales riesgos consiste en la infección de los
tejidos lesionados por microorganismos típicos del ambiente hospitalario cuyas más
destacadas características son su invariable virulencia y multirresistencia a los
antimicrobianos; las especies bacterianas más frecuentes en este rubro son
Pseudomonas aureginosa y Staphylococcus aureus. Una vez que el agente infectante
ha colonizado los tejidos dañados, puede penetrar al torrente circulatorio,
ocasionando septicemias y, consecuentemente endocarditis, artritis, meningitis, etc.

21. 21
CAPÍTULO III
ANÁLISIS E INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
3.1. POBLACIÓN Y MUESTRA
3.1.1. POBLACIÓN:
Cultivo de cepa de Staphylococcus aureus, cultivadas en medio Agar Mueller
Hinton.
3.1.2. MUESTRA
Colonias aisladas de Staphylococcus aureus que fueron utilizadas para la
preparación de los correspondientes inóculos
3.2. NIVEL Y GRADO DE SIGNIFICANCIA
El nivel de confianza es de 95% y el grado de significancia es 0.05
3.3. ANÁLISIS E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
CUADRO No. 1
Determinación fitoquímica y pH
Extracto acuoso de Tarwi
Color Amarillo claro
Sabor Amargo
Olor Característico
PH 6.7
Densidad 1.5
Fuente: Propia

22. 22
CUADRO No. 2
Identificación de metabolitos con potencia
Metabolito Ensayo Resultado
Alcaloides
R. Wagner +
R. Mayer +
Taninos R. Cloruro Férrico +/-
Flavonoides R. Shinoda +
Saponinas I. Afrosimétrico +
Leyenda: (+) Presenta; (+/-) presencia regular; (-) no presenta
Fuente: Propia
Interpretación: Según el cuadro No. 2 se pudo observar la presencia de alcaloides,
saponinas y flavonoides, y en regular presencia los taninos.
CUADRO No. 3
CIM (turbidez)
No. de tubo CIM (turbidez)
Extracto + agua
peptonada
-
1 (100 µg/ml) -
2 (50 µg/ml) -
3 (25 µg/ml) -
4 (12.5 µg/ml) -
5 (6.25 µg/ml) +
6 (3.12 µg/ml) +
7 (1.6 µg/ml) +
8 (0.8 µg/ml) +
9 (0.4 µg/ml) +
Inoculo + agua
peptonada
+
Fuente: Propia
Leyenda: (+) presencia de turbidez, inhibición de crecimiento bacteriano.
(-) no presencia de turbidez, crecimiento bacteriano.

23. 23
CAPÍTULO IV
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
CONCLUSIONES
PRIMERA: Se concluye que el extracto acuoso de Tarwi presenta efecto antibacteriano
frente a Staphylococcus aureus.
SEGUNDA:Se determinó que el extracto de la semilla de Tarwi (Lupinus mutabilis)obtuvó
un pH de 6.7, densidad 1.5, color amarillo claro, olor característico, sabor amargo.
TERCERA:Se determinó que el extracto acuoso de Tarwi (Lupinus mutabilis) tiene
actividad bacteriostática, ya que se observó la presencia de turbidez en el tubo 5
(concentración de 6,25 µg/ml).
CUARTA:Se determinó que el extracto acuoso de Tarwi (Lupinus mutabilis) no tiene
efecto bactericida a una concentración del 20 %.

24. 24
RECOMENDACIONES
1. Realizar estudios posteriores con concentraciones mayores a 20% para poder
determinan el efecto bactericida del extracto acuoso de semilla de Tarwi (Lupinus
mutabilis).
2. Se recomienda continuar con el trabajo, realizando estudios cuantitativos del efecto
antibacterianodel extracto acuoso de Tarwi (Lupinus mutabilis) frente a cepas de
Staphylococcus aureus.

25. 25
BIBLIOGRAFIA
LIBROS
1. Diaz R., Gamazo C., Goñi I., Manual Práctico de Microbiología, 2° Edición, Editorial
Masson, 2006.
2. Kennethj. Ryan Md, C. George Ray, Md. Microbiology, Prescott, Harley Y Klein. Mc
Graw-Hill.Interamerican.2005
3. Martínez Miranda Migdalia; Cuéllar Cuéllar Armando. Farmacognosia y productos
naturales. 1° Ed. La Habana, Cuba: Editorial Félix Varela.
ARTICULOS Y REVISTAS CIENTIFICAS
1. AGUWA, C. C.; LAWAL, A. M., Pharmacologic studies on the active principIes of
Calliandra portoticensis leaf extracts. J-Ethnopharmacol. Jan; 22(1): 63-71, 2005.
2. ALARCÓN DE LA LASTRA, C.; LÓPEZ, A.; MOTILVA, V. Gastroprotección and
prostaglandin E2 generation in rats by flavonoids of Dittrichia viscose. Planta Med. Dec;
59(6): 497-501, 2002.
3. ALARCÓN DE LA LASTRA, C.; MARTÍN, M. J. Antiulcerogenicity of the flavonoid
fraction fron Bidens aurea: comparison with Ranitidine and Omeprazole. J.
Ethnopharmacology. May; 42(3): 161-8, 1994
4. Bucay Morocho, Luis Carlos. Estudio Farmacognóstico y actividad antimicrobiana
de la violetilla (Hybanthus parviflorus). Universidad de Chimborazo, Riobamba Ecuador.
2009
5. Sarmiento LA. Efecto antibacteriano del extracto alcohólico y del extracto acuoso
de té verde (Camellia sinensis) sobre bacterias orales de Importancia Estomatológica,
Streptococcus mutans, Streptococcus mitis y Streptococcus salivarius. UAP.2010. [Tesis
para optar al título de Cirujano Dentista]. Arequipa. Universidad Alas Peruanas. 2010.

26. 26
ANEXO NRO
1
TITULO: Preparación del Material y equipos. (Fuente: Propia)
Figura 1 figura 2 figura 3 figura 4 figura 5
ANEXO NRO
2
TITULO: Preparación de agares y extracto (Fuente: Propia)
Figura 6 figura 7 figura 8
ANEXO NRO
3
TITULO: Plaqueado (Fuente: Propia)
Figura 9 figura 10 figura 11
ANEXO NRO
4
TITULO: Medición de pH y pruebas fitoquimicas (Fuente: Propia)
Figura12 figura 13 figura 14
TITULO: Inoculo y escala (Fuente: Propia)

27. 27
Figura 15figura 16 figura 17
ANEXO NRO
5
TITULO: Pruebas experimentales (Fuente: Propia)
Figura 18 figura 19 figura 20
ANEXO NRO
6
TITULO: Crecimiento de cepas (Fuente: Propia)
Figura 21 figura 22 figura 23
ANEXO NRO
7
TITULO: Incubación y congelamiento (Fuente: Propia)
Figura 24 figura 25

28. 28
ANEXO NRO
8
TITULO: Identificación y realización de CIM-CMB (Fuente: Propia)
Figura 26 figura 27 figura 28
C.E. C.I.
C.I.E.(-) C.I.E.(+)
Leyenda: C.E.= Crecimiento estéril (agua peptonada+extracto)
C.I.= Crecimiento de inoculo (agua peptonada+bacteria)
CIE= Crecimiento inoculo y extracto (agua peptonada+bacteria+extracto)