11. Células madre embrionarias: autorenovación y pluripotencialidad Autorenovación Diferenciación Division asimétrica
12. Modelo de enfermedades y desarrollo de fármacos Terapia celular Estudio del desarrollo y organogénesis
13.
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16. Eliminación de la zona pellucida - 5mg/ml pronasa - Ac. Tyrode’s Eliminación del trofectodermo mediante inmunocirugía (anticuerpos) Monocapa de fibroblastos humanos (HFF-1) irradiados (CCD1112SkATCC) , en placas cubiertas de gelatina (0.1%) Feeders cells Descongelación embriones Cultivo hasta blastocisto D+5/6 Derivación células madre embrionarias
17. Siembra y cultivo del blastocisto o MCI sobre monocapa de fibroblastos humanos (HFF-1) irradiados, en placas cubiertas de gelatina (0.1%) Derivación células madre embrionarias CULTIVO KO-DME Medium supplementado con: 2 mmol/l Glutamax 0,05 mmol/l 2-mercaptoethanol 8 ng/ml basic fibroblast growth factor (FGF) 1% non-essential amino acids 20% KO-Serum Replacement 0,5% penicillin-streptomycin 37ºC y 5%CO2
22. Fosfatasa alcalina cariotipo Microsatélites & HLA Actividad Telomerasa Immunocitoquimica para marcadores de diferenciación In vitro Formación de cuerpos embrioideos Inmunohistoquímica para marcadores de diferenciación In vivo (formación teratomas) Caracterización Inmunocitoquimica para marcadores de pluripotencialidad
33. DIFERENCIACIÓN Quedan por establecer los factores genéticos y/o ambientales que controlan el desarrollo de las CME y su importancia durante los distintos estadíos de diferenciación
34.
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37.
38.
39. CLONACIÓN TRANSFERENCIA DE NUCLEAR (SCNT) embrión Transferencia a oveja portadora Dolly célula de glándula mamária Transferencia a ovocito enucleado
47. KIPS: Generación a partir de keratinocitos Aasen, 2008 Nat Biotech. Keratinocitos Dia 0 Pequeña colonia ES-like 10 días post-infección Típica colonia iPS 20 días post-infección Colonias iPS AP positivas
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