1. MET: Partes Microscopio electrónico de barrido
La MET no explora superficies: el haz de electrones incidente
atraviesa la muestra y genera una sombra de la ultraestructura que es
capturada en una pantalla fosforescente , ubicada en la parte inferior En el microscopio electrónico de barrido la
de la columna.
muestra es recubierta con una capa de metal
delgado, y es barrida con electrones
Cañón de electrones, que emite los electrones que chocan contra el enviados desde un cañón. Un detector mide
espécimen, creando una imagen aumentada.
Lentes magnéticas para crear campos que dirigen y enfocan el haz la cantidad de electrones enviados que
de electrones, ya que las lentes convencionales utilizadas en los
microscopios ópticos no funcionan con los electrones. arroja la intensidad de la zona de muestra,
Sistema de vacío es una parte muy importante del microscopio
electrónico. Debido a que los electrones pueden ser desviados por las
siendo capaz de mostrar figuras en tres
moléculas del aire, se debe hacer un vacío casi total en el interior de dimensiones, proyectados en una imagen de
un microscopio de estas características.
Placa fotográfica o pantalla fluorescente que se coloca detrás del TV.
objeto a visualizar para registrar la imagen aumentada.
Sistema de registro que muestra la imagen que producen los
electrones, que suele ser una computadora.
3. Electroforesis Centrifugación
Las centrífugas son instrumentos que permiten someter a las
muestras a intensas fuerzas que producen la sedimentación en
poco tiempo de las partículas que tienen una densidad mayor
que la del medio que las rodea.
Tipo:
– centrífugas (de pocas g a aprox. 3000 g)
– super-centrífugas (o centrífugas de alta velocidad, rango de 2000
g a 20000 g)
– ultracentrífugas (de 15000 g a 600000 g).
En las centrífugas se suele controlar la temperatura de la
cámara para evitar sobrecalentamiento de las muestras debido
a la fricción. En las ultracentrífugas, la velocidad extrema (más
de 100000 rpm), hace que sea necesario hacer un intenso
vacío en la cámara de la centrífuga para evitar el
calentamiento de rotor y muestra.
Centrifugación: coeficientes de Separación por sedimentación en
sedimentación Centrifugación diferencial gradiente de sacarosa
El coeficiente de sedimentación de una partícula o
macromolécula se calcula dividiendo su velocidad constante de
sedimentación (en m/s) por la aceleración aplicada (en m/s2).
El resultado tiene dimensiones de tiempo y se expresa
habitualmente en svedbergs (S).
Los valores de coeficientes de sedimentación no son aditivos,
debido a que dependen tanto de la masa, como de la forma
que tenga la molécula. Una partícula formada por la unión de
dos partículas 5 S no tiene un coeficiente de sedimentación de
10 S. Por ejemplo, los ribosomas eucarióticos están formados
por dos subunidades, una 60 S y otra 40 S. Sin embargo, el
valor final del conjunto del ribosoma no es 100 S, sino 80.