Como produzir spawn de cogumelo

2. Módulo I: Produção de Inóculo
1. Breves Noções de Micologia: O que é um cogumelo?
2. Preparação do Laboratório e Protocolos
3. Preparação dos Meios de Cultura
4. Clonagem e Selecção de Estirpes
5. Preparação do Inóculo: Grão e Cavilhas
6. Produção do Inóculo: G2G
7. Parâmetros de Incubação
8. Contaminações
www.cogusbox.com

3. 1. O que é um Cogumelo??

4. As 3 Fases do Cultivo de Cogumelos

5. Laboratório
www.cogusbox.com

6. 2. Protocolos
 Limpeza/Assepsia
 Fluxo de trabalho: limpo > menos limpo, e.g.
 Tempo: ciclo de autoclave > inoculação, e.g.
 Inventário/Perdas
 Identificação e Registo de Pontos Críticos/Reais e Potenciais Vectores de Contaminação
 Resolução de Problemas
 Máquinas/Equipamento/Materiais
 Pesagem/Rotulagem/Registos
 Limpeza/Assepsia
www.cogusbox.com

7. 3. 1 Prep. Meios de Cultura
Composição: Agar + Meio nutritivo: malte, batata, dextrose, etc
Preparação:
 10g de Agar
 9g de Extrato de Malte
 500ml Água destilada
Modus Operandi:
 Capacidade do Recipiente: 1/3
 Tampa ligeiramente fechada
 Alumínio
 Em suspensão 15min
 Autoclavar 15 mins a 115ºC
www.cogusbox.com

8. 3.2 Meios de Cultura: Agar>Placas
 Arrefecer no AC/CFL
 Não deixar solidificar
 Muito quente=condensação
 Deixar placas solidificar
www.cogusbox.com

9. 4.1 Clonagem
 Seleção do espécime
 Abrir longitudinalmente
 Retirar um pedaço do interior
 Colocar no meio de cultura
 Rotular
 Selar com parafilme
 Incubar a 15-20ºC
www.cogusbox.com

10. 4.2 Isolamento de Estirpes
 Seleção do espécime
 Abrir longitudinalmente
 Retirar pedaço do interior
 Colocar no meio de cultura
 Rotular
 Selar com parafilme
 Incubar a 15-20ºC
 Repicar até rizomorfos
 Testar
 Registar
www.cogusbox.com

11. 5. Prep. Grão
• Limpar o grão de impurezas(água límpida)
• Demolhar o grão 6 a 16h
• Cozer durante 10 minutos (al dente)
• Escorrer/Secar Superfície
• Tampa ligeiramente fechada/Alumínio
• Esterilizar
• Arrefecer
• Inocular com cultura pura ou grão colonizado
• Tempo de colonização: 15 a 30 dias (aprox.)

12. 6. Produção de Inóculo
• Técnica: G2G (Grain to Grain)
• Rácio aumento peso/vol: 1-20/geração
• Taxa de inoc 2-5% peso/vol
• Máx. de expansão recomendado: G3 (geração 3):
G0 (mother) – G1 – G2 – G3
• Geração óptima para substrato: G2

13. 7. Parâmetros de Incubação
Temp: 15-20ºC
HR da Câmara: 30/40%
Luz: Ausência
www.cogusbox.com

14. 8. Contaminações
• Trichoderma, Aspergillus, etc
• Identificar vectores
• Manter Registos-Rastreabilidade
• Rever formulações, tempos,
protocolos,etc
• Remover das Instalações
• Limpeza
www.cogusbox.com

15. Agora, mãos no grão 
www.cogusbox.com