2. Tinción de Gram Descubierta por Hans Christian Gram. Usada con frecuencia para examen microscópico directo de muestras y subcultivos.
3. Técnica de tinción de Gram Realizar frotis delgado del material a estudiar y dejar secar al Fijar el material en el portaobjeto pasándolo 3 ó 4 veces a través de la llama de un mechero Bunsen. Colocar el frotis sobre un soporte para tinción y cubrir la superficie con solución de cristal violeta por el lapso de 1 min. Lavar con agua destilada o buffer. Cubrir el frotis con solución de yodo, durante 1 min. Lavar nuevamente con agua. Cubrir la placa con decolorante de alcohol acetona hasta que no desprenda mas el color violeta, (10 seg.). Lavar con agua corriente. Cubrir la placa con safranina durante 1 min. Lavar con agua corriente y colocar la placa en una posición que drene el exceso de agua y el frotis seque. Observar el frotis con 1 gota de aceite de inmersión con objetivo x 100.
5. Fundamento de la Tinción de Gram 1. Las bacterias Gram positivas, fijan el colorante cristal violeta (colorante primario), que al unirse al lugol (mordiente), forman un complejo insoluble en agua, debido a que las bacterias GP, poseen en su pared celular, RNA en forma de ribonucleato de magnesio. Este complejo imposibilita que el colorante cristal sea barrido por el alcohol acetona, quedando teñida de color morado. 2.Las bacteriasGram negativas, no poseen este compuesto en su pared celular, por lo tanto no forman el complejo insoluble, se tiñen con el último colorante ( fucsina básica) que es de color rosado.
6. Gram Positivos Cocos: Cocos en racimos = estafilococos Cocos en cadenas = estreptococos Diplococos Grampositivos = Streptocococuspneumoniae. Grandes bacilos Grampositivos como: Especies de Bacillus o Clostridium Pequeños bacilos Grampositivos como: Especies de listeria ó Corynebacterium
7. Gram Negativos Bacilos: Bastones Gramnegativos curvos: especies de vibrio (en heces diarreicas), Campylobacter. Bacilos: Haemóphilus. Diplococos en forma arriñonada: especies de Neisseria Bacilos GramNeg.
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11. Técnica de tinción de Ziehl- Neelsen Realizar frotis delgado del material a estudiar, dejar secar al aire. Fijar el material en el portaobjeto pasándolo 3 ó 4 veces a través de la llama de un mechero Bunsen. Colocar el frotis sobre un soporte para tinción y cubrir la superficie con solución fucsina fenicada por 3 min. Mientras se calienta la placa de la siguiente manera: Pasar la llama por debajo de la placa, hasta la emisión de vapores, dejar enfriar. Repetir esta operación tres veces. Lavar la placa con abundante agua corriente para eliminar el exceso de colorante.
12. Decolorar con la solución de alcohol ácido hasta que el extendido no elimine mas colorante, 30 seg. Lavar la placa con agua. Cubrir la placa con azul de metileno por el lapso de 1 min. Lavar con agua el exceso de colorante. Dejar secar la preparación y examinar al microscopio aplicando una gota de aceite de inmersión X100.
