Este documento describe diferentes tincciones ácido-resistentes utilizadas para identificar bacterias y protozoos. Explica los protocolos de las tincciones de Ziehl-Neelsen, Kinyoun y Auramina-Rodamina, incluyendo los reactivos, procedimientos y organismos que identifican. También resume las principales diferencias entre estas tincciones en términos de mordientes, decolorantes, contraste, necesidad de calor y facilidad de identificación de organismos.

1. TINCIONES ÁCIDO-RESISTENTES

2. TINCIONES ÁCIDO-RESISTENTES
MYCOBACTERIAS
Se utiliza en
BACTERIAS GRAM POSITIVAS
BACILOS
Presentan
SUSTANCIAS CEROSAS
EN LA SUPERFICIE DE SU PARED CELULAR
ACIDO MICOLICO (Factor Cordón).
Sustancia hidrofobica cerosa e impermeable,
compuesto por un grupo de lípidos hidroxilicos
de cadena ramificada.
ALGUNOS
Actinomicetos
Nocardia
Corynebacterium
Protozoos
(Apicomplexos)

3. PRINCIPALES MYCOBACTERIIAS Y ACTINOMICETOS QUE
UTILIZAN LA TINCIÓN ACIDO-RESISTENTE
MYCOBACTERIAS




Aerobios
No esporuladores
Sin capsula
ÁCIDO MICÓLICO (Factor Cordón)
1. M. Tuberculosis (Tuberculosis
Pulmonar)
2. M. Leprae (Lepra)
3. M. Bovis (Similar a la tuberculosis),
4. M. Kansasi (enfermedades
pulmonares en bovinos)
5. M. Africanum, M. Genavense, M.
Haemoplhium, M. Simiae (Presente en
pacientes con SIDA)
6. M. Ulcerans (Ulceras y Nódulos
subcutáneos)
7. M. Xenopi (Similar a la tuberculosis).
ACTINOMICETOS
•
•
•
•
•
Anaerobios Estrictos
Forman Cadenas o Filamentos (1um
de ancho)
La mayoría esporuladores
Saprófitos
3 infecciones: Actinomicosis,
nocardiosis y actinomicetoma
1. A. Israelí (infecciones confundidas
con cáncer),
2. A. Naeslundi
3. A. Odontolycitus
4. A. Viscosus
5. A. Meyeri

4. FUNDAMENTO
6.6 - Dimicolitrehalosa
2 di alcoholes
idénticos de
cadena larga
FUCSINA

5. REACTIVOS NECESARIOS
CARBOL FUCSINA
Fucsina básica............................................. 0.3 g
Etanol 95°C.............................................….10.0 ml
Cristales de fenol fundidos por calor....... 5. 0ml
Agua destilada.......................................... 95.0ml
Disuelva la fucsina básica en el alcohol y el fenol en el agua. Mezcle las dos soluciones y deje en
reposo por una semana antes de usar. Almacene en frascos ámbar a temperatura ambiente.
ALCOHOL- ÁCIDO:
Etanol 95°C.................................................97.0ml
Ácido clorhídrico concentrado................ 3.0ml
Agregue el HCL al alcohol, homogenice y almacene en frascos a temperatura ambiente.
AZUL DE METILENO
Azul de metileno...................................... 0.3 g
Agua destilada....................................... 100.0ml
Disuelva el azul de metileno en el agua mediante agitación. Almacene en frascos ámbar a
temperatura ambiente.
SOLUCIÓN DE FUCSINA FENICADA
Preparación utilizada en el tratamiento de infecciones micóticas superficiales. Contiene ácido
bórico, fenol, resorcinol, fucsina, acetona y alcohol en una solución acuosa.

6. TINCIÓN DE ZIEHL - NEELSEN
PROTOCOLO
MATERIALES.
* ALCOHOL ACIDO (Etanol 95%, HCl 3%)
* FUSCINA FENICADA( Solución con Fenol y mayor concentración
de Fucsina) o CARBOLFUCSINA (Colorante primario y un primer
mordiente)
* PORTAY CUBRE OBJETOS
* AZUL DE METILENO (Contraste)
* MECHERO BUNSEN
* MICROSCOPIO
* AGUA DESTILADA

7. PROCEDIMIENTO
 Ehrlich (1882) usaba ACEITE DE ANILINA con VIOLETA DE METILO
 Franz Zeihl (1882) reemplaza ACEITE DE ANILINA por FENOL
 Friedrich Neelsen (1883) reemplaza VIOLETA DE METILO por la
FUCSINA BÁSICA
SE HACE EL FROTIS
LAVAR SECAR Y
OBSERVAR AL
MIROSCOPIO
CON ACEITE DE
INMERCION
SE FIJA A UNA LLAMA
COLORACION DE
CONTRASTE CON
AZUL DE METILENO O
ACIDO PIRICO
(1 minuto)
SE COLOREA CON
FUCSINA FENICADA
(3-5 minutos)
DECOLORAR
CONALCHOL ACIDOQUITANDO EL
COLORANTE
(7 minutos)
CALIENTA EN LA
LLAMA
DEJAENFRIAR
Y LAVAR
CON AGUA
DESTILADA

8. Mycobacterium leprae
Mycobacter phlei Y Staphilococccus aereus
Cyclospora cayetanensis
Mycobacterium tuberculosis

9. Nocardia

10. TINCIÓN DE KINYOUN
PROTOCOLO
MATERIALES
 FUSCINA FENICADA( Solución con Fenol y mayor
concentración de Fucsina)
 ACIDO SULFÚRICO (H2SO4) al 3%(reemplazando al
alcohol ácido)
 PORTAY CUBRE OBJETOS
 AZUL DE METILENO (Contraste)
 MICROSCOPIO
 AGUA DESTILADA

11. PROCEDIMIENTO
 Se conoce también como la tinción de Zeihl- Neelsen modificada
 Requiere menos tiempo que la anterior
 Diferencia el genero Nocardia con el Mycobacterium
SE HACE EL FROTIS
OBSERVAR AL
MIROSCOPIO
CON ACEITE DE
INMERCION
SE COLOREA CON
FUCSINA FENICADA
(5 minutos)
COLORACION DE
CONTRASTE CON
AZUL DE METILENO O
ACIDO PIRICO
(3 minutos)
DECOLORAR CON UN
ACIDO DEBIL
QUITANDO EL
COLORANTE
(3 minutos)
LAVAR
CON AGUA
DESTILADA

12. Nocardia
Oocistos de Cryptosporidium parvum
Mycobacter chelonei
Mycobacter tuberculosis

13. TINCIÓN DE AURAMINA - RODAMINA
PROTOCOLO
MATERIALES
 FLUOROCROMOS:
- AURAMINA (11,1 g 10,5 g)
- RODAMINA B (5,25 g, 5,6 g)
 PORTA Y CUBRE OBJETOS
 MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA
 PERMANGANAO DE POTASIO (CONTRASTE)
 GLICEROL (525,0 ml o 556,0 ml)
 FENOL (70,0 ml o 74 ml)
 AGUA DESTILADA (350,0 ml o 370 ml)

14. PROCEDIMIENTO
 Es simplemente una herramienta de detección
 Diferencia el genero Nocardia con el Mycobacterium, incluyendo
a todos los esporozoarios parásitos.
SE HACE EL FROTIS
MUESTRA
REUSABLE
SE COLOREA CON
EL FLUOROCROMO
SE OBSERVA AL
MICROSCOPIO DE
FLUORESCENCIA O
DE CAMPO OSCURO
COLORACION DE
CONTRASTE CON
PERMANGANATO DE
POTASIO
LAVAR
CON AGUA
DESTILADA

15. Mycobacter avium
Cyclospora cayetanensis
Oocistos de Cryptosporidium parvum

16. Mycobacter tuberculosis

17. Mycobacter tuberculosis

18. PRINCIPALES DIFERENCIAS DE LAS TINCIONES ACIDORRESISTENTES
ZEHIL-NEELSEN
KINYOUN
RODAMINA AURAMINA
1° MORDIENTE
FUCSINA FENICADA
FUCSINA FENICADA
NO
2° MORDIENTE
FISICO (MECHERO)
NO
NO
DECOLORANTE
ALCOHOL ÁCIDO
ÁCIDO DEBIL
NO
CONTRASTE
AZUL DE METILENO
AZUL DE METILENO
PERMANGANATO DE
POTASIO
CALOR
SI
NO
NO
DIFICULTAD
ALTA
MEDIA
MEDIA
MICROSCOPIO
ÓPTICO O DE CAMPO
CLARO
ÓPTICO O DE CAMPO
CLARO
DE FLUORESCENCIA O
DE CAMPO OSCURO
TIEMPO
Aprox. 20 min
Aprox. 15 min
Aprox. 10 min
ORGANISMOS
(Facilidad)
MYCBACTERIAS Y
ACTINOMICETOS
ACTINOMICETOS
PROTOZOARIOS
COLOR FINAL DE
LA MUESTRA
BAAR:
VIOLETA
VIOLETA
AMARILLO O
ANARANJADO
OTROS:
AZUL
AZUL
NEGRO

19. REFERENCIAS
• NEGRONI M. (2009), Microbiología Estomatológica. Fundamentos y Guía
práctica, 2da Ed., Editorial Médico Panamericana S.A., Buenos Aires. p. 547 –
548
• BROOKS G.F., BUTEL J.S., MORSE S.A.(2005), Microbiología Médica de Jawertz,
Melnick y Adelberg, 18ava Ed., El Manual Moderno, México. p. 38-39, 312 –
323
• LANSING M. P., JOHN P. H., DONALD A. K. (2004), Microbiología, 5ta Ed.,
McGRAW-HILL-Interamericana De España, España. p. 28 – 31
• AGURTO SAENZ T. (1983), Colorantes y Coloraciones, LOS ANDES, Lima. p. 29
• AMÁBILE CUEVAS C. F. (2008), Diccionario de InfectologÍa y Microbiología
Clínica, Fundación LUSARA para investigación científica, México. p. 8 – 10, 79
- 80, 134 – 135
• MADIGAN M.T. , MARTINKO J.M., PARKER J., Biología de los Microorganismos,
Pearson, Madrid. p. 352,412

20. GRACIAS