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SEP                                      DGETI                                SEMS


        CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO Industrial y de servicios N° 107
                              TUXTEPEC OAXACA.



                  NOMBRE DEL ALUMNO: ÁUREA AÍDA AGUILAR FELIPE




                CATEDRÁTICO: I.B.Q. MARIA DE JESUS ROBLES ORTEGA




      SUBMÓDULO PROFESIONAL: APLICAR TECNICAS DE VALORACION METABOLICAS




                                  PRACTICA:
             DETERMINACION CUANTITATIVA-COLORIMETRICA ENZIMATICA
                          DE TRIGLICERIDOS EN SUERO




                    SEMESTRE: 6°                   GRUPO: “AL”




               FECHA DE ENTREGA: ____ DE __________________ DEL 201_




        CALIFICACIÓN Y OBSERVACIONES: _____________________________________
INTRODUCCION

La determinación de los niveles de triglicéridos, cuando se lleva a cabo en conjunto con
otros ensayos de lípidos, proporciona una ayuda en el diagnóstico de hiperlipoproteinemia
primaria y secundaria. También es útil para dar seguimiento a la diabetes mellitus, nefrosis,
obstrucción biliar y varias anormalidades metabólicas que resultan de disturbios endocrinos.
         1. El glicerol y los ácidos grasos se forman en una primera etapa por la acción de la
            lipasa sobre los triglicéridos.
         2. El glicerol se fosforila por l adenosin-5’-trifosfato (ATP) para producir glicerol-3
            fosfato (G-3-P) y adenosión-5’-difosfato (ADP) n una reacción catalizada por el
            glicerol-cinasa (GK).

              Glicerol       +      ATP          GK            G-3-P +   ADP

         3. La G-3-P es oxidada por la glicerolfosfato oxidasa, (GPO) produciendo
            dihidroxiacetona fosfato (DAP) y peróxido de hidrogeno.

              G-3-P + O2          GPO      DAP +       H2O2

         4. Los peróxidos reaccionan con 4-aminoantipirina y 4-clorofenol bajo la influencia
            catalítica de las peroxidasas (POD) para formar una quinoneimina de color rojo.

              2H2O2 +            4-aminoantipirina +     POD    quinoneimina + HCl + 4H2O
              4-clorofenol


OBJETIVO

Determinar la concentración de los triglicéridos en el suero


PROCEDIMIENTO

   1. extraer 5ml de sangre sin anticoagulante
   2. centrifugar a 2500 r.p.m. durante 5 min.
   3. Separar el suero en un nuevo tubo debidamente rotulado y llevar a centrifugar a 2500
      r.p.m. por 3 minutos.
   4. Observar si hay un botón eritrocitario, si lo hay, vaciar el suero a otro tubo ya rotulado,
      sin desprender el botón, y obtenernos suero libre de células.
   5. Continuamos agregando 2.0ml a un tubo rotulado con la letra “M” de muestra.
   6. Al tubo “M” le agregamos 200µl de suero problema, mezclar y llevar a incubar a 37°C
      por 5 min.
   7. Procedemos a leer en el espectrofotómetro a 500nm
   8. Realizar cálculos.
Blanco “B”                Estándar “St”   Muestra “M”
      Reactivo                   2,0ml                      2.0ml         2.0ml
      estándar                     -                        200µl            -
      muestra                      -                          -           200 µl


INTERPRETACION

      Reactivo 1: es incoloro
      Al adicionar el suero al reactivo 1 se torna un
      color crema




CALCULOS

        Resultados.
Los valores se derivan de la siguiente ecuación:
1. Triglicéridos en suero (mg/dL) = A M x 200
                                    AE

Donde AM y AE son los valores de absorbancia de la muestra y del estándar
respectivamente, 200 es la concentración del estándar (mg/dL).
SEP                                         DGETI                                     SEMS
                                          Tuxtepec, OAX.

                         APLICAR TÉCNICAS DE VALORACIÓN METABOLICAS

                                            PRÁCTICA

            DETERMINACION CUANTITATIVA-COLORIMETRICA ENZIMATICA
                         DE TRIGLICERIDOS EN SUERO



                        NOMBRE DEL PACIENTE: JUNCO GARCÍA PERLA RUBÍ
                SEXO: F    EDAD: 18 AÑOS      FECHA: 22/03/11 HORA: 9:40AM




                                             REPORTE




RESULTADOS:                                                           VALORES DE REFERENCIA

                                                                       En suero/plasma:
                                                                        30 – 150 mg/dL
______________________




OBSERVACIONES:
___________________________________________________________________________________________________
_______________________




ANALISTA:


                                AUREA AIDA AGUILAR FELIPE 6°“AL”
                                            FIRMA
SEP                                      DGETI                                SEMS


        CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO Industrial y de servicios N° 107
                              TUXTEPEC OAXACA.



                  NOMBRE DEL ALUMNO: ÁUREA AÍDA AGUILAR FELIPE




                CATEDRÁTICO: I.B.Q. MARIA DE JESUS ROBLES ORTEGA




      SUBMÓDULO PROFESIONAL: APLICAR TECNICAS DE VALORACION METABOLICAS




                                    PRACTICA:
                         DETERMINACION DE LIPOPROTEÍNAS
                         DE ALTA DENSIDAD (HDL) EN SUERO




                    SEMESTRE: 6°                   GRUPO: “AL”




               FECHA DE ENTREGA: ____ DE __________________ DEL 201_




        CALIFICACIÓN Y OBSERVACIONES: _____________________________________
INTRODUCCION
El colesterol HDL constituye la parte de las lipoproteínas de alta densidad (High Density
Lipoproteins), formadas por el 50.0% de proteínas (de las cuales el 90.0% apoA); el 18.0%,
colesterol; el 2.0%, triglicéridos; y el 30.0%, fosfolípidos.
El colesterol HDL es producido en el hígado. El colesterol que se encuentra en las células está
inmerso en las secreciones biliares y, a través de la bilis, es eliminado en el intestino.
Las fracciones de lipoproteínas de baja densidad (LD) y las lipoproteínas de muy baja
densidad (VLDL) son precipitadas del suero o plasma, por medio del reactivo de cloruro de
magnesio/dextran sulfato, de acuerdo a Finely et al.
Las lipoproteínas de alta densidad (HDL) son determinadas en el fluido sobrenadante,
utilizando el factor de dilución derivado en el cálculo.


OBJETIVO
La determinación de este parámetro es un procedimiento analítico básico para el
diagnóstico y seguimiento de enfermedades metabólicas, primarias o secundarias.

PROCEDIMIENTO

   1. Extraer 5ml de sangre sin anticoagulante
   2. centrifugar a 2500 r.p.m. durante 5 min.
   3. Separar el suero en un nuevo tubo debidamente rotulado y llevar a centrifugar a 2500
       r.p.m. por 3 minutos.
   4. Observar si hay un botón eritrocitario, si lo hay, vaciar el suero a otro tubo ya rotulado,
       sin desprender el botón, y obtenernos suero libre de células.
   5. Continuamos agregando 50µl de reactivo 1 a un tubo rotulado con la letra “M” de
       muestra.
   6. Al tubo “M” le agregamos 500µl de suero problema, mezclar y llevar a …
   7. Centrifugar a 7000r.pm. durante 10 minutos.
   8. Medimos 2.0ml de reactivo de trabajo al tubo “MF”
   9. Tomar 50µl de precipitado al tubo “MF”
   10. Incubar a 37°C por 5 minutos.
   11. Procedemos a leer en el espectrofotómetro a 500nm
   12. Realizar cálculos.

                                                    CALCULOS
INTERPRETACION                                           Resultados
Reactivos: Incoloro                                 HDL-colesterol (mg/dL) =     Abs M     x 55
Reactivo y suero: se torna color rosáceo/crema.                                  Abs St
SEP                                         DGETI                                     SEMS
                                          Tuxtepec, OAX.

                         APLICAR TÉCNICAS DE VALORACIÓN METABOLICAS

                                            PRÁCTICA

                            DETERMINACION DE LIPOPROTEÍNAS
                            DE ALTA DENSIDAD (HDL) EN SUERO


                          NOMBRE DEL PACIENTE: JUNCO GARCÍA PERLA RUBÍ
                SEXO: F      EDAD: 18 AÑOS      FECHA: 22/03/11 HORA: 9:40AM




                                             REPORTE




RESULTADOS:                                                           VALORES DE REFERENCIA
                                                                Edad     Hombre      Mujer
                                                                 0-14     30-65      30-65
                                                                15-19     30-65      30-70
______________________                                          20-29     30-70      30-75
                                                                30-39     30-70      30-80
                                                                 >40      30-70      30-85
                                                                Media      45         55

                                                             Raza Negra: Aproximadamente
                                                                  10 mg/dL más altos.



OBSERVACIONES:
___________________________________________________________________________________________________
_______________________




ANALISTA:


                                AUREA AIDA AGUILAR FELIPE 6°“AL”
SEP                                      DGETI                                SEMS


        CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO Industrial y de servicios N° 107
                              TUXTEPEC OAXACA.



                  NOMBRE DEL ALUMNO: ÁUREA AÍDA AGUILAR FELIPE




                CATEDRÁTICO: I.B.Q. MARIA DE JESUS ROBLES ORTEGA




      SUBMÓDULO PROFESIONAL: APLICAR TECNICAS DE VALORACION METABOLICAS




                                  PRACTICA:
             DETERMINACION CUANTITATIVA-ENZIMATICO-COLORIMETRICA
                         DE COLESTROL TOTAL EN SUERO




                    SEMESTRE: 6°                   GRUPO: “AL”




               FECHA DE ENTREGA: ____ DE __________________ DEL 201_




        CALIFICACIÓN Y OBSERVACIONES: _____________________________________
INTRODUCCION

El método enzimático para colesterol fue introducido en 1973 por Flegg1 y Richmond2,
utilizando colesterol oxidasa de origen bacteriano seguida de saponificación química de los
ésteres del colesterol. Roeschlau3 modificó ésta técnica y Allain y Col4 publicó los primeros
ensayos enzimáticos completos combinando el colesterol oxidasa y el colesterol estearasa.
Este método se basa en el de Allain y utiliza estas enzimas en combinación con el reactivo
peroxidasa/fenol-4-antipirina, de Trinder5.
La colesterol estearasa (CE) hidroliza a los ésteres del colesterol para dar colesterol libre y
ácidos grasos. El colesterol libre así producido más el colesterol preformado se oxida en
presencia del colesterol oxidasa (COx) para dar colesten-4-3-cetona y peróxido de
hidrógeno. Un cromógeno quinonaimina, con absorción máxima a 500 nm, se produce
cuando el fenol se acopla oxidativamente con 4-aminofenazona en presencia de
peroxidasa (POD) con peróxido de hidrógeno. La intensidad final del color rojo es
proporcional a la concentración total del colesterol. El Factor Aclarador Lipemico (LCF) es
una mezcla de aditivos especialmente diseñados por Stanbio integrados dentro del reactivo
de colesterol para ayudar a minimizarlas interferencias debidas a la Lipemia.

Esteres del colesterol       CE       Colesterol     +       Ácidos Grasos

Colesterol    +   O2          COx            Colesten-4-3-cetona             +   H2O2

H2O2 + 4-Aminofenazona + fenol        POD      H2O       +     O-Quinonaimina colorante


OBJETIVO

En el laboratorio clínico, la aplicación más importante de la electroforesis es la separación
de proteínas presentes en el suero, orina y otros fluidos biológicos como el líquido
cefalorraquídeo y el líquido sinovial. El objetivo principal de la práctica estará dirigido a la
comprensión e identificación de conceptos físicos teóricos relacionados con este tipo de
técnicas, así como la descripción de las mismas y su uso.

PROCEDIMIENTO

   1. Extraer 5ml de sangre sin anticoagulante
   2. centrifugar a 2500 r.p.m. durante 5 min.
   3. Separar el suero en un nuevo tubo debidamente rotulado y llevar a centrifugar a 2500
      r.p.m. por 3 minutos.
   4. Observar si hay un botón eritrocitario, si lo hay, vaciar el suero a otro tubo ya rotulado,
      sin desprender el botón, y obtenernos suero libre de células.
   5. Continuamos agregando 2.0ml de reactivo a un tubo rotulado con la letra “M” de
      muestra.
   6. Al tubo “M” le agregamos 20µl de suero problema, mezclar y llevar a …
   7. Incubar a 37°C por 5 minutos.
   8. Procedemos a leer en el espectrofotómetro a 500nm
   9. Realizar cálculos.
Blanco (B)        Estándar (S)   Muestra(U)
                Reactivo                2.0ml              2.0ml         2.0ml
                Estándar                                    20µl
                Muestra                                                   20µl




INTERPRETACION

Reactivos: Incoloro
Reactivo y suero: se torna color rosáceo/crema.




CALCULOS
      RESULTADOS

Los valores se derivan de los siguientes cálculos:


Colesterol total en suero (mg/dL) =     AM      x 200
                                        AE


Donde AM y AE son los valores de absorbancias de la muestra y del estándar
respectivamente y 20 es la concentración del estándar (mg/dL).
SEP                                         DGETI                                     SEMS
                                          Tuxtepec, OAX.

                         APLICAR TÉCNICAS DE VALORACIÓN METABOLICAS

                                            PRÁCTICA

                     DETERMINACIÓN CUANTITATIVA-ENZIMATICO-
                        COLORIMETRICA DE COLESTEROL TOTAL


                          NOMBRE DEL PACIENTE: JUNCO GARCÍA PERLA RUBÍ
                SEXO: F      EDAD: 18 AÑOS      FECHA: 22/03/11 HORA: 9:40AM




                                             REPORTE




RESULTADOS:                                                           VALORES DE REFERENCIA
                                                              Colesterol Total     mg/dL
                                                              Cordón               45-100
                                                              Recién Nacido        53-135
______________________                                        Infante              70-175
                                                              Niños                120-200
                                                              Adolescentes         120-210
                                                              Adultos              140-310
                                                              Ideal p/adultos      140-200

                                                             Raza Negra: Aproximadamente
                                                                  10 mg/dL más altos.


OBSERVACIONES:
___________________________________________________________________________________________________
_______________________




ANALISTA:


                                AUREA AIDA AGUILAR FELIPE 6°“AL”
SEP                                      DGETI                                SEMS


        CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO Industrial y de servicios N° 107
                              TUXTEPEC OAXACA.



                  NOMBRE DEL ALUMNO: ÁUREA AÍDA AGUILAR FELIPE




                CATEDRÁTICO: I.B.Q. MARIA DE JESUS ROBLES ORTEGA




      SUBMÓDULO PROFESIONAL: APLICAR TECNICAS DE VALORACION METABOLICAS




                                 PRACTICA:
                 DETERMINACION CUANTITATIVA DE LIPIDOS TOTALES




                    SEMESTRE: 6°                   GRUPO: “AL”




               FECHA DE ENTREGA: ____ DE __________________ DEL 201_




        CALIFICACIÓN Y OBSERVACIONES: _____________________________________
INTRODUCCION

Los lípidos insaturados reaccionan con el ácido sulfúrico en caliente con formación de iones
carbonio.
En una segunda etapa, éstos, en presencia de fosfovainillina dan una coloración rosada.
La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de lípidos totales
presente en la muestra ensayada.

SIGNIFICADO CLINICO

Los lípidos son compuestos orgánicos cuya función más importante es la de actuar como
combustible.
Poseen un extraordinario rendimiento, favorecido por la posibilidad de almacenarse en
notables cantidades como tejido adiposo. Otras funciones: son constituyentes de las
membranas biológicas, forman estructuras adiposas protectoras de los órganos internos, y
proveen compuestos importantes en la formación de diversas hormonas.
Gran parte del interés en el estudio del aumento de estos compuestos se debe a la conexión
entre hiperlipemia y arteriosclerosis, diabetes y enfermedad cardiaca.
El diagnostico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de
laboratorio.

PROCEDIMIENTO

   1. Extraer 5ml de sangre sin anticoagulante
   2. centrifugar a 2500 r.p.m. durante 5 min.
   3. Separar el suero en un nuevo tubo debidamente rotulado y llevar a centrifugar a 2500
      r.p.m. por 3 minutos.
   4. Observar si hay un botón eritrocitario, si lo hay, vaciar el suero a otro tubo ya rotulado,
      sin desprender el botón, y obtenernos suero libre de células.
   5. Pipetear en tubos.


                               (Preparación del Hidrolizado)


                                    Blanco (B)       Estándar (S)       Muestra(U)
                 H2SO4                2.5ml             2.5ml              2.5ml
                Patrón                                  100µl
                Muestra                                                    100µl


   6. Mezclar energéticamente en ayuda de un agitador mecánico
   7. Incubar 10 minutos en un baño hirviendo (100°C)
   8. Enfriar en baño de agua fría, dosificar en cubetas y pipetear en tubos.
(Preparación Prueba)

                                   Blanco (B)      Estándar (S)    Muestra(U)
               Reactivo              2.0ml            2.0ml           2.0ml
           Hidrolizado de la                                          100µl
               Muestra
            Hidrolizado del                           100µl
              Calibrador


   9. Mezclar energéticamente con ayuda de un agitador mecánico
   10. Incubar a 37°C durante 15 minutos.
   11. Llevar a leer a 520nm


INTERPRETACION

      Reactivo con suero: se torna color crema
      El Hidrolizado: es de color café pardo
      Reactivo de Lípidos con Hidrolizado: Color
      crema/rosáceo




CALCULOS

 Ab Muestra__ x 750 (Conc. Cal.) =mg/dL de lípidos totales en la muestra
Ab Calibrador
SEP                                         DGETI                                      SEMS
                                          Tuxtepec, OAX.

                         APLICAR TÉCNICAS DE VALORACIÓN METABOLICAS

                                            PRÁCTICA

                              DETERMINACIÓN CUANTITATIVA
                                   DE LIPIDOS TOTALES


                          NOMBRE DEL PACIENTE: JUNCO GARCÍA PERLA RUBÍ
                SEXO: F      EDAD: 18 AÑOS      FECHA: 29/03/11 HORA: 9:40AM




                                             REPORTE




RESULTADOS:                                                           VALORES DE REFERENCIA
                                                                        Suero o plasma:
                                                                        450 – 800 mg/dL
______________________




OBSERVACIONES:
___________________________________________________________________________________________________
_______________________




ANALISTA:


                                AUREA AIDA AGUILAR FELIPE 6°“AL”
SEP                                      DGETI                                SEMS


        CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO Industrial y de servicios N° 107
                              TUXTEPEC OAXACA.



                  NOMBRE DEL ALUMNO: ÁUREA AÍDA AGUILAR FELIPE




                CATEDRÁTICO: I.B.Q. MARIA DE JESUS ROBLES ORTEGA




      SUBMÓDULO PROFESIONAL: APLICAR TECNICAS DE VALORACION METABOLICAS




                                   PRACTICA:
                   DETERMINACION COLORIMETRICA CUANTITATIVA
                             DE ALBÚMINA EN SUERO




                    SEMESTRE: 6°                   GRUPO: “AL”




               FECHA DE ENTREGA: ____ DE __________________ DEL 201_




        CALIFICACIÓN Y OBSERVACIONES: _____________________________________
INTRODUCCION

En 1964, el verde de bromocresol (BCG) fue reportado como útil en la determinación
cuantitativa de albúmina sérica por Bartholomew y Delaney y por Rodkey. Esta técnica de
unión fue publicada nuevamente un año más tarde por Rodkey quien describió un
procedimiento colorimétrico inverso de BCG específico para la albúmina a un pH de 7.05 y
615 nm.
Al mismo tiempo Watson reporto que el BCG era más sensible para la albúmina que el
anaranjado de metilo o el HABA (ácido 2-(4'-hidroxiazo benceno) benzoico), dos
compuestos también utilizados en la cuantificación de albúmina sérica por unión coloreada
(teñida).
Posteriormente Dow-Pinto y Miyada et al reportaron la linealidad del método de BCG en 5
g/dL, con interferencias mínimas por lípidos, hemoglobina y bilirrubina, además de
evidencias de una gran especificidad y sensibilidad así como una excelente correlación
para los valores de albúmina entre la técnica de BCG y la de electroforesis.
El método presentado es esencialmente el de Dumas, Watson y Biggs modificado por el uso
de citrato en lugar del amortiguador de succinato, un amortiguador de baja concentración
y una lectura colorimétrica final a 550 nm en lugar de 630 nm.


PROCEDIMIENTO


   1. Extraer 5ml de sangre sin anticoagulante
   2. centrifugar a 2500 r.p.m. durante 5 min.
   3. Separar el suero en un nuevo tubo debidamente rotulado y llevar a centrifugar a 2500
      r.p.m. por 3 minutos.
   4. Observar si hay un botón eritrocitario, si lo hay, vaciar el suero a otro tubo ya rotulado,
      sin desprender el botón, y obtenernos suero libre de células.
   5. Pipetear en tubos los siguientes volúmenes.


                                    Blanco (B)       Estándar (S)       Muestra(U)
                Reactivo              2.0ml             2.0ml              2.0ml
                Estándar                                 20µl
                Muestra                                                     20µl


   6. Mezclar el contenido e incubar a 37°C por 15 segundos o 30 segundos a temperatura
      ambiente.
   7. Inmediatamente lea las muestras y el estándar contra el reactivo Blanco a 550nm
INTERPRETACION

      Reactivo: color verde pantano
      Reactivo con suero: Color verde bandera




CALCULOS

Calcule los resultados usando la siguiente ecuación:

Albúmina en suero o plasma (g/dL) =    AM     x 6.0
                                       AE


Donde AM y AE son los valores de absorbancia de la muestra y del estándar
respectivamente y 6.0 es la concentración del estándar (g/dL).
SEP                                         DGETI                                      SEMS
                                          Tuxtepec, OAX.

                         APLICAR TÉCNICAS DE VALORACIÓN METABOLICAS

                                            PRÁCTICA

                   DETERMINACIÓN COLORIMETRICA-CUANTITATIVA
                             DE ALBÚMINA EN SUERO


                          NOMBRE DEL PACIENTE: JUNCO GARCÍA PERLA RUBÍ
                SEXO: F      EDAD: 18 AÑOS      FECHA: 29/03/11 HORA: 9:40AM




                                             REPORTE




RESULTADOS:                                                           VALORES DE REFERENCIA
                                                                        Suero o plasma:
                                                                        3.8 a 5.1 g/dL
______________________




OBSERVACIONES:
___________________________________________________________________________________________________
_______________________




ANALISTA:


                                AUREA AIDA AGUILAR FELIPE 6°“AL”
SEP                                      DGETI                                SEMS


        CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO Industrial y de servicios N° 107
                              TUXTEPEC OAXACA.



                  NOMBRE DEL ALUMNO: ÁUREA AÍDA AGUILAR FELIPE




                CATEDRÁTICO: I.B.Q. MARIA DE JESUS ROBLES ORTEGA




      SUBMÓDULO PROFESIONAL: APLICAR TECNICAS DE VALORACION METABOLICAS




                                   PRACTICA:
                   DETERMINACION CUANTITATIVA COLORIMETRICA
                         DE PROTEÍNAS TOTALES EN SUERO




                    SEMESTRE: 6°                   GRUPO: “AL”




               FECHA DE ENTREGA: ____ DE __________________ DEL 201_




        CALIFICACIÓN Y OBSERVACIONES: _____________________________________
INTRODUCCION

Las moléculas de Proteínas contienen un gran número de péptidos unidos. Cuando se tratan
con iones de cobre (Cu2+) en solución alcalina, se forma un complejo coloreado entre el
cobre y los grupos amino/carbonil de estos péptidos. Una reacción igual ocurre con el Biuret
(compuestos más simples formados por el calentamiento de la urea). Así fue adoptado el
término de “Reacción de Biuret”
El método descrito está basado en los reportes de Weischselbaum y Gornal et al. El color
violeta desarrollado es directamente proporcional al número de enlaces peptidicos de las
proteínas e independiente de la concentración relativa de albúmina y globulina.


OBJETIVO

Determinar la concentración de nitrógeno presente en la muestra para luego ser
transformado a través de un factor en proteína.



PROCEDIMIENTO

   1. Extraer 5ml de sangre sin anticoagulante
   2. centrifugar a 2500 r.p.m. durante 5 min.
   3. Separar el suero en un nuevo tubo debidamente rotulado y llevar a centrifugar a 2500
      r.p.m. por 3 minutos.
   4. Observar si hay un botón eritrocitario, si lo hay, vaciar el suero a otro tubo ya rotulado,
      sin desprender el botón, y obtenernos suero libre de células.
   5. Pipetear en tubos.


                                    Reactivo         Estándar (S)       Muestra(U)
                                   Blanco (RB)
                Reactivo              2.0ml             2.0ml              2.0ml
                Estándar                                 20µl
                Muestra                                                     20µl


   6. Dejar los tubos incubando por lo menos 5 minutos a 37°C o a temperatura ambiente
      por 10 minutos.
   7. Leer el estándar y muestra contra RB a 500-505nm en el transcurso de una hora.
INTERPRETACION



      Reactivo proteínas: Color Azul Claro
      Reactivo con suero e incubación: color azul un poco más
      denso




CALCULOS

Los valores se derivan de la siguiente ecuación:

Proteínas Totales séricas (g/dL) = AM      x (10)
                                 AE

Donde AM y AE son los valores de las absorbancias de la muestra y el estándar
respectivamente y 10 g/dL es la concentración del estándar.
SEP                                         DGETI                                      SEMS
                                          Tuxtepec, OAX.

                         APLICAR TÉCNICAS DE VALORACIÓN METABOLICAS

                                            PRÁCTICA

                   DETERMINACIÓN CUANTITATIVA-COLORIMETRICA
                          DE PROTEÍNAS TOTALES EN SUERO


                     NOMBRE DEL PACIENTE: GARDOZO VARGAS EMMANUEL
                SEXO: M   EDAD: 18 AÑOS     FECHA: 01/04/11 HORA: 9:40AM




                                             REPORTE




RESULTADOS:                                                           VALORES DE REFERENCIA
                                                                        Suero o plasma:
                                                                        6.6 a 8.3 g/dL.
______________________




OBSERVACIONES:
___________________________________________________________________________________________________
_______________________




ANALISTA:


                                AUREA AIDA AGUILAR FELIPE 6°“AL”
SEP                                      DGETI                                SEMS


        CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO Industrial y de servicios N° 107
                              TUXTEPEC OAXACA.



                  NOMBRE DEL ALUMNO: ÁUREA AÍDA AGUILAR FELIPE




                CATEDRÁTICO: I.B.Q. MARIA DE JESUS ROBLES ORTEGA




      SUBMÓDULO PROFESIONAL: APLICAR TECNICAS DE VALORACION METABOLICAS




                                  PRACTICA:
                   DETERMINACION CUANTITATIVA-COLORIMETRICA
                    DE LA GLICOHEMOGLOBINA EN SANGRE TOTAL




                    SEMESTRE: 6°                   GRUPO: “AL”




               FECHA DE ENTREGA: ____ DE __________________ DEL 201_




        CALIFICACIÓN Y OBSERVACIONES: _____________________________________
INTRODUCCION

La Glicohemoglobina es formada progresivamente e irreversiblemente en los eritrocitos
durante sus 120 días de vida. La concentración de Glicohemoglobina en los glóbulos rojos
depende del promedio de concentración de glucosa durante un cierto periodo de semanas
y es estable durante la vida de la célula. Por lo tanto la medición de la Glicohemoglobina,
como por ciento de la hemoglobina total, brinda un método de ayuda para el control del
paciente diabético, ya que los niveles de glycohemoglobina se acercan a los valores
normales dependiendo de cómo el diabético responda al tratamiento.
Abraham et. al reportó una excelente correlación entre la concentración de
Glicohemoglobina y el control diabético.
En el método presentado, se mezcla un hemolizado de sangre total con una resina de
intercambio catiónico. La hemoglobina no glicosilada (HbA 0) se une a la resina, dejando la
(HbA1) libre para que se pueda remover mediante un separador de resina en el
sobrenadante. El porcentaje de HbA1, se determina midiendo los valores de absorbancia a
415 nm de la fracción HbA1 y de la fracción de Hb total, calculando la proporción de
absorbancias (R) y comparando esta proporción con un estándar de glicohemoglobina al
que se le practicó el mismo procedimiento.
Los resultados son expresados como HbA1 también se puede convertir o reportar como
HbA1c


OBJETIVO

Cuando se determina la Glicohemoglobina en el control del diabético, se está evaluando el
comportamiento de su glicemia durante un período previo mínimo de cuatro semanas, lo
cual da una imagen global del manejo del paciente que no se ve afectada por
fluctuaciones de la glicemia de corto término.


PROCEDIMIENTO

   1. Extraer 5ml de sangre sin anticoagulante
   2. centrifugar a 2500 r.p.m. durante 5 min.
   3. Separar el suero en un nuevo tubo debidamente rotulado y llevar a centrifugar a 2500
      r.p.m. por 3 minutos.
   4. Observar si hay un botón eritrocitario, si lo hay, vaciar el suero a otro tubo ya rotulado,
      sin desprender el botón, y obtenernos suero libre de células.
   5. Pipetear en tubos.
                                     (Preparación del Hemolizado)

                                                  Estándar (S)   Muestra(U)
                        Reactivo de lisis             500µl         500µl
                           Estándar de                100µl
                       Glicohemoglobina
                      Muestra (sangre Total)                        500µl
6. Medir 500µl del reactivo de lisis, pasarlo a la sangre 100µl - hemolizado
     7. Medir 100µl de lisado y vaciar resina, mezclar metiéndoles al tubo el manguillo y
     8. Se mezcla por 5 minutos. Se deja reposar por 60 minutos aproximadamente.


                                                Resina +
                  Mezclar:                                              Manguillo
                                                100µl de
                  destapar y
                                                sangre                  Mezclar 5
                  mezclar
                                                                        minutos.




     9. Pasados los 5 minutos, se introduce un poco más el manguillo
     10. Esperar 60 minutos.


CALCULOS

Para cada Estándar y Muestra calcule el Rango (R) de absorbancia de la Glicohemoglobina
y de la absorbancia de la hemoglobina total como sigue:


R=    A gly___
      A tot



Glicohemoglobina (%) = R (Muestra)        x     Concentración del x
                       R (Estándar)             Estándar de la
                                                Glicohemoglobina (%)
SEP                                         DGETI                                     SEMS
                                          Tuxtepec, OAX.

                         APLICAR TÉCNICAS DE VALORACIÓN METABOLICAS

                                            PRÁCTICA

                   DETERMINACIÓN CUANTITATIVA-COLORIMETRICA
                     DE GLICOHEMOGLOBINA EN SANGRE TOTAL


                     NOMBRE DEL PACIENTE: GARDOZO VARGAS EMMANUEL
                SEXO: M   EDAD: 18 AÑOS     FECHA: 01/04/11 HORA: 9:40AM




                                             REPORTE




RESULTADOS                                               VALORES DE REFERENCIA
                                   Glicohemoglobina        Valores    Glicohemoglobi     valores
                                          A1                               na A1C
                                   Rango normal         6.0 – 8.0 %   Rango normal      4.2 – 6.2 %
______________________                 Diabético                         Diabético
                                      Buen control      7.5 – 8.9 %     Buen control    5.5 – 6.8 %
                                     Control medio     9.0 – 10.0 %    Control medio    6.8 – 7.6 %
                                     Control pobre      Arriba de      Control pobre    Arriba de
                                                          10.0 %                           7.6 %




OBSERVACIONES:
___________________________________________________________________________________________________
_______________________




ANALISTA:



                                AUREA AIDA AGUILAR FELIPE 6°“AL”

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Pruebas de cinetica enzimatica

  • 1. SEP DGETI SEMS CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO Industrial y de servicios N° 107 TUXTEPEC OAXACA. NOMBRE DEL ALUMNO: ÁUREA AÍDA AGUILAR FELIPE CATEDRÁTICO: I.B.Q. MARIA DE JESUS ROBLES ORTEGA SUBMÓDULO PROFESIONAL: APLICAR TECNICAS DE VALORACION METABOLICAS PRACTICA: DETERMINACION CUANTITATIVA-COLORIMETRICA ENZIMATICA DE TRIGLICERIDOS EN SUERO SEMESTRE: 6° GRUPO: “AL” FECHA DE ENTREGA: ____ DE __________________ DEL 201_ CALIFICACIÓN Y OBSERVACIONES: _____________________________________
  • 2. INTRODUCCION La determinación de los niveles de triglicéridos, cuando se lleva a cabo en conjunto con otros ensayos de lípidos, proporciona una ayuda en el diagnóstico de hiperlipoproteinemia primaria y secundaria. También es útil para dar seguimiento a la diabetes mellitus, nefrosis, obstrucción biliar y varias anormalidades metabólicas que resultan de disturbios endocrinos. 1. El glicerol y los ácidos grasos se forman en una primera etapa por la acción de la lipasa sobre los triglicéridos. 2. El glicerol se fosforila por l adenosin-5’-trifosfato (ATP) para producir glicerol-3 fosfato (G-3-P) y adenosión-5’-difosfato (ADP) n una reacción catalizada por el glicerol-cinasa (GK). Glicerol + ATP GK G-3-P + ADP 3. La G-3-P es oxidada por la glicerolfosfato oxidasa, (GPO) produciendo dihidroxiacetona fosfato (DAP) y peróxido de hidrogeno. G-3-P + O2 GPO DAP + H2O2 4. Los peróxidos reaccionan con 4-aminoantipirina y 4-clorofenol bajo la influencia catalítica de las peroxidasas (POD) para formar una quinoneimina de color rojo. 2H2O2 + 4-aminoantipirina + POD quinoneimina + HCl + 4H2O 4-clorofenol OBJETIVO Determinar la concentración de los triglicéridos en el suero PROCEDIMIENTO 1. extraer 5ml de sangre sin anticoagulante 2. centrifugar a 2500 r.p.m. durante 5 min. 3. Separar el suero en un nuevo tubo debidamente rotulado y llevar a centrifugar a 2500 r.p.m. por 3 minutos. 4. Observar si hay un botón eritrocitario, si lo hay, vaciar el suero a otro tubo ya rotulado, sin desprender el botón, y obtenernos suero libre de células. 5. Continuamos agregando 2.0ml a un tubo rotulado con la letra “M” de muestra. 6. Al tubo “M” le agregamos 200µl de suero problema, mezclar y llevar a incubar a 37°C por 5 min. 7. Procedemos a leer en el espectrofotómetro a 500nm 8. Realizar cálculos.
  • 3. Blanco “B” Estándar “St” Muestra “M” Reactivo 2,0ml 2.0ml 2.0ml estándar - 200µl - muestra - - 200 µl INTERPRETACION Reactivo 1: es incoloro Al adicionar el suero al reactivo 1 se torna un color crema CALCULOS Resultados. Los valores se derivan de la siguiente ecuación: 1. Triglicéridos en suero (mg/dL) = A M x 200 AE Donde AM y AE son los valores de absorbancia de la muestra y del estándar respectivamente, 200 es la concentración del estándar (mg/dL).
  • 4. SEP DGETI SEMS Tuxtepec, OAX. APLICAR TÉCNICAS DE VALORACIÓN METABOLICAS PRÁCTICA DETERMINACION CUANTITATIVA-COLORIMETRICA ENZIMATICA DE TRIGLICERIDOS EN SUERO NOMBRE DEL PACIENTE: JUNCO GARCÍA PERLA RUBÍ SEXO: F EDAD: 18 AÑOS FECHA: 22/03/11 HORA: 9:40AM REPORTE RESULTADOS: VALORES DE REFERENCIA En suero/plasma: 30 – 150 mg/dL ______________________ OBSERVACIONES: ___________________________________________________________________________________________________ _______________________ ANALISTA: AUREA AIDA AGUILAR FELIPE 6°“AL” FIRMA
  • 5. SEP DGETI SEMS CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO Industrial y de servicios N° 107 TUXTEPEC OAXACA. NOMBRE DEL ALUMNO: ÁUREA AÍDA AGUILAR FELIPE CATEDRÁTICO: I.B.Q. MARIA DE JESUS ROBLES ORTEGA SUBMÓDULO PROFESIONAL: APLICAR TECNICAS DE VALORACION METABOLICAS PRACTICA: DETERMINACION DE LIPOPROTEÍNAS DE ALTA DENSIDAD (HDL) EN SUERO SEMESTRE: 6° GRUPO: “AL” FECHA DE ENTREGA: ____ DE __________________ DEL 201_ CALIFICACIÓN Y OBSERVACIONES: _____________________________________
  • 6. INTRODUCCION El colesterol HDL constituye la parte de las lipoproteínas de alta densidad (High Density Lipoproteins), formadas por el 50.0% de proteínas (de las cuales el 90.0% apoA); el 18.0%, colesterol; el 2.0%, triglicéridos; y el 30.0%, fosfolípidos. El colesterol HDL es producido en el hígado. El colesterol que se encuentra en las células está inmerso en las secreciones biliares y, a través de la bilis, es eliminado en el intestino. Las fracciones de lipoproteínas de baja densidad (LD) y las lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL) son precipitadas del suero o plasma, por medio del reactivo de cloruro de magnesio/dextran sulfato, de acuerdo a Finely et al. Las lipoproteínas de alta densidad (HDL) son determinadas en el fluido sobrenadante, utilizando el factor de dilución derivado en el cálculo. OBJETIVO La determinación de este parámetro es un procedimiento analítico básico para el diagnóstico y seguimiento de enfermedades metabólicas, primarias o secundarias. PROCEDIMIENTO 1. Extraer 5ml de sangre sin anticoagulante 2. centrifugar a 2500 r.p.m. durante 5 min. 3. Separar el suero en un nuevo tubo debidamente rotulado y llevar a centrifugar a 2500 r.p.m. por 3 minutos. 4. Observar si hay un botón eritrocitario, si lo hay, vaciar el suero a otro tubo ya rotulado, sin desprender el botón, y obtenernos suero libre de células. 5. Continuamos agregando 50µl de reactivo 1 a un tubo rotulado con la letra “M” de muestra. 6. Al tubo “M” le agregamos 500µl de suero problema, mezclar y llevar a … 7. Centrifugar a 7000r.pm. durante 10 minutos. 8. Medimos 2.0ml de reactivo de trabajo al tubo “MF” 9. Tomar 50µl de precipitado al tubo “MF” 10. Incubar a 37°C por 5 minutos. 11. Procedemos a leer en el espectrofotómetro a 500nm 12. Realizar cálculos. CALCULOS INTERPRETACION Resultados Reactivos: Incoloro HDL-colesterol (mg/dL) = Abs M x 55 Reactivo y suero: se torna color rosáceo/crema. Abs St
  • 7. SEP DGETI SEMS Tuxtepec, OAX. APLICAR TÉCNICAS DE VALORACIÓN METABOLICAS PRÁCTICA DETERMINACION DE LIPOPROTEÍNAS DE ALTA DENSIDAD (HDL) EN SUERO NOMBRE DEL PACIENTE: JUNCO GARCÍA PERLA RUBÍ SEXO: F EDAD: 18 AÑOS FECHA: 22/03/11 HORA: 9:40AM REPORTE RESULTADOS: VALORES DE REFERENCIA Edad Hombre Mujer 0-14 30-65 30-65 15-19 30-65 30-70 ______________________ 20-29 30-70 30-75 30-39 30-70 30-80 >40 30-70 30-85 Media 45 55 Raza Negra: Aproximadamente 10 mg/dL más altos. OBSERVACIONES: ___________________________________________________________________________________________________ _______________________ ANALISTA: AUREA AIDA AGUILAR FELIPE 6°“AL”
  • 8. SEP DGETI SEMS CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO Industrial y de servicios N° 107 TUXTEPEC OAXACA. NOMBRE DEL ALUMNO: ÁUREA AÍDA AGUILAR FELIPE CATEDRÁTICO: I.B.Q. MARIA DE JESUS ROBLES ORTEGA SUBMÓDULO PROFESIONAL: APLICAR TECNICAS DE VALORACION METABOLICAS PRACTICA: DETERMINACION CUANTITATIVA-ENZIMATICO-COLORIMETRICA DE COLESTROL TOTAL EN SUERO SEMESTRE: 6° GRUPO: “AL” FECHA DE ENTREGA: ____ DE __________________ DEL 201_ CALIFICACIÓN Y OBSERVACIONES: _____________________________________
  • 9. INTRODUCCION El método enzimático para colesterol fue introducido en 1973 por Flegg1 y Richmond2, utilizando colesterol oxidasa de origen bacteriano seguida de saponificación química de los ésteres del colesterol. Roeschlau3 modificó ésta técnica y Allain y Col4 publicó los primeros ensayos enzimáticos completos combinando el colesterol oxidasa y el colesterol estearasa. Este método se basa en el de Allain y utiliza estas enzimas en combinación con el reactivo peroxidasa/fenol-4-antipirina, de Trinder5. La colesterol estearasa (CE) hidroliza a los ésteres del colesterol para dar colesterol libre y ácidos grasos. El colesterol libre así producido más el colesterol preformado se oxida en presencia del colesterol oxidasa (COx) para dar colesten-4-3-cetona y peróxido de hidrógeno. Un cromógeno quinonaimina, con absorción máxima a 500 nm, se produce cuando el fenol se acopla oxidativamente con 4-aminofenazona en presencia de peroxidasa (POD) con peróxido de hidrógeno. La intensidad final del color rojo es proporcional a la concentración total del colesterol. El Factor Aclarador Lipemico (LCF) es una mezcla de aditivos especialmente diseñados por Stanbio integrados dentro del reactivo de colesterol para ayudar a minimizarlas interferencias debidas a la Lipemia. Esteres del colesterol CE Colesterol + Ácidos Grasos Colesterol + O2 COx Colesten-4-3-cetona + H2O2 H2O2 + 4-Aminofenazona + fenol POD H2O + O-Quinonaimina colorante OBJETIVO En el laboratorio clínico, la aplicación más importante de la electroforesis es la separación de proteínas presentes en el suero, orina y otros fluidos biológicos como el líquido cefalorraquídeo y el líquido sinovial. El objetivo principal de la práctica estará dirigido a la comprensión e identificación de conceptos físicos teóricos relacionados con este tipo de técnicas, así como la descripción de las mismas y su uso. PROCEDIMIENTO 1. Extraer 5ml de sangre sin anticoagulante 2. centrifugar a 2500 r.p.m. durante 5 min. 3. Separar el suero en un nuevo tubo debidamente rotulado y llevar a centrifugar a 2500 r.p.m. por 3 minutos. 4. Observar si hay un botón eritrocitario, si lo hay, vaciar el suero a otro tubo ya rotulado, sin desprender el botón, y obtenernos suero libre de células. 5. Continuamos agregando 2.0ml de reactivo a un tubo rotulado con la letra “M” de muestra. 6. Al tubo “M” le agregamos 20µl de suero problema, mezclar y llevar a … 7. Incubar a 37°C por 5 minutos. 8. Procedemos a leer en el espectrofotómetro a 500nm 9. Realizar cálculos.
  • 10. Blanco (B) Estándar (S) Muestra(U) Reactivo 2.0ml 2.0ml 2.0ml Estándar 20µl Muestra 20µl INTERPRETACION Reactivos: Incoloro Reactivo y suero: se torna color rosáceo/crema. CALCULOS RESULTADOS Los valores se derivan de los siguientes cálculos: Colesterol total en suero (mg/dL) = AM x 200 AE Donde AM y AE son los valores de absorbancias de la muestra y del estándar respectivamente y 20 es la concentración del estándar (mg/dL).
  • 11. SEP DGETI SEMS Tuxtepec, OAX. APLICAR TÉCNICAS DE VALORACIÓN METABOLICAS PRÁCTICA DETERMINACIÓN CUANTITATIVA-ENZIMATICO- COLORIMETRICA DE COLESTEROL TOTAL NOMBRE DEL PACIENTE: JUNCO GARCÍA PERLA RUBÍ SEXO: F EDAD: 18 AÑOS FECHA: 22/03/11 HORA: 9:40AM REPORTE RESULTADOS: VALORES DE REFERENCIA Colesterol Total mg/dL Cordón 45-100 Recién Nacido 53-135 ______________________ Infante 70-175 Niños 120-200 Adolescentes 120-210 Adultos 140-310 Ideal p/adultos 140-200 Raza Negra: Aproximadamente 10 mg/dL más altos. OBSERVACIONES: ___________________________________________________________________________________________________ _______________________ ANALISTA: AUREA AIDA AGUILAR FELIPE 6°“AL”
  • 12. SEP DGETI SEMS CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO Industrial y de servicios N° 107 TUXTEPEC OAXACA. NOMBRE DEL ALUMNO: ÁUREA AÍDA AGUILAR FELIPE CATEDRÁTICO: I.B.Q. MARIA DE JESUS ROBLES ORTEGA SUBMÓDULO PROFESIONAL: APLICAR TECNICAS DE VALORACION METABOLICAS PRACTICA: DETERMINACION CUANTITATIVA DE LIPIDOS TOTALES SEMESTRE: 6° GRUPO: “AL” FECHA DE ENTREGA: ____ DE __________________ DEL 201_ CALIFICACIÓN Y OBSERVACIONES: _____________________________________
  • 13. INTRODUCCION Los lípidos insaturados reaccionan con el ácido sulfúrico en caliente con formación de iones carbonio. En una segunda etapa, éstos, en presencia de fosfovainillina dan una coloración rosada. La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de lípidos totales presente en la muestra ensayada. SIGNIFICADO CLINICO Los lípidos son compuestos orgánicos cuya función más importante es la de actuar como combustible. Poseen un extraordinario rendimiento, favorecido por la posibilidad de almacenarse en notables cantidades como tejido adiposo. Otras funciones: son constituyentes de las membranas biológicas, forman estructuras adiposas protectoras de los órganos internos, y proveen compuestos importantes en la formación de diversas hormonas. Gran parte del interés en el estudio del aumento de estos compuestos se debe a la conexión entre hiperlipemia y arteriosclerosis, diabetes y enfermedad cardiaca. El diagnostico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio. PROCEDIMIENTO 1. Extraer 5ml de sangre sin anticoagulante 2. centrifugar a 2500 r.p.m. durante 5 min. 3. Separar el suero en un nuevo tubo debidamente rotulado y llevar a centrifugar a 2500 r.p.m. por 3 minutos. 4. Observar si hay un botón eritrocitario, si lo hay, vaciar el suero a otro tubo ya rotulado, sin desprender el botón, y obtenernos suero libre de células. 5. Pipetear en tubos. (Preparación del Hidrolizado) Blanco (B) Estándar (S) Muestra(U) H2SO4 2.5ml 2.5ml 2.5ml Patrón 100µl Muestra 100µl 6. Mezclar energéticamente en ayuda de un agitador mecánico 7. Incubar 10 minutos en un baño hirviendo (100°C) 8. Enfriar en baño de agua fría, dosificar en cubetas y pipetear en tubos.
  • 14. (Preparación Prueba) Blanco (B) Estándar (S) Muestra(U) Reactivo 2.0ml 2.0ml 2.0ml Hidrolizado de la 100µl Muestra Hidrolizado del 100µl Calibrador 9. Mezclar energéticamente con ayuda de un agitador mecánico 10. Incubar a 37°C durante 15 minutos. 11. Llevar a leer a 520nm INTERPRETACION Reactivo con suero: se torna color crema El Hidrolizado: es de color café pardo Reactivo de Lípidos con Hidrolizado: Color crema/rosáceo CALCULOS Ab Muestra__ x 750 (Conc. Cal.) =mg/dL de lípidos totales en la muestra Ab Calibrador
  • 15. SEP DGETI SEMS Tuxtepec, OAX. APLICAR TÉCNICAS DE VALORACIÓN METABOLICAS PRÁCTICA DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE LIPIDOS TOTALES NOMBRE DEL PACIENTE: JUNCO GARCÍA PERLA RUBÍ SEXO: F EDAD: 18 AÑOS FECHA: 29/03/11 HORA: 9:40AM REPORTE RESULTADOS: VALORES DE REFERENCIA Suero o plasma: 450 – 800 mg/dL ______________________ OBSERVACIONES: ___________________________________________________________________________________________________ _______________________ ANALISTA: AUREA AIDA AGUILAR FELIPE 6°“AL”
  • 16. SEP DGETI SEMS CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO Industrial y de servicios N° 107 TUXTEPEC OAXACA. NOMBRE DEL ALUMNO: ÁUREA AÍDA AGUILAR FELIPE CATEDRÁTICO: I.B.Q. MARIA DE JESUS ROBLES ORTEGA SUBMÓDULO PROFESIONAL: APLICAR TECNICAS DE VALORACION METABOLICAS PRACTICA: DETERMINACION COLORIMETRICA CUANTITATIVA DE ALBÚMINA EN SUERO SEMESTRE: 6° GRUPO: “AL” FECHA DE ENTREGA: ____ DE __________________ DEL 201_ CALIFICACIÓN Y OBSERVACIONES: _____________________________________
  • 17. INTRODUCCION En 1964, el verde de bromocresol (BCG) fue reportado como útil en la determinación cuantitativa de albúmina sérica por Bartholomew y Delaney y por Rodkey. Esta técnica de unión fue publicada nuevamente un año más tarde por Rodkey quien describió un procedimiento colorimétrico inverso de BCG específico para la albúmina a un pH de 7.05 y 615 nm. Al mismo tiempo Watson reporto que el BCG era más sensible para la albúmina que el anaranjado de metilo o el HABA (ácido 2-(4'-hidroxiazo benceno) benzoico), dos compuestos también utilizados en la cuantificación de albúmina sérica por unión coloreada (teñida). Posteriormente Dow-Pinto y Miyada et al reportaron la linealidad del método de BCG en 5 g/dL, con interferencias mínimas por lípidos, hemoglobina y bilirrubina, además de evidencias de una gran especificidad y sensibilidad así como una excelente correlación para los valores de albúmina entre la técnica de BCG y la de electroforesis. El método presentado es esencialmente el de Dumas, Watson y Biggs modificado por el uso de citrato en lugar del amortiguador de succinato, un amortiguador de baja concentración y una lectura colorimétrica final a 550 nm en lugar de 630 nm. PROCEDIMIENTO 1. Extraer 5ml de sangre sin anticoagulante 2. centrifugar a 2500 r.p.m. durante 5 min. 3. Separar el suero en un nuevo tubo debidamente rotulado y llevar a centrifugar a 2500 r.p.m. por 3 minutos. 4. Observar si hay un botón eritrocitario, si lo hay, vaciar el suero a otro tubo ya rotulado, sin desprender el botón, y obtenernos suero libre de células. 5. Pipetear en tubos los siguientes volúmenes. Blanco (B) Estándar (S) Muestra(U) Reactivo 2.0ml 2.0ml 2.0ml Estándar 20µl Muestra 20µl 6. Mezclar el contenido e incubar a 37°C por 15 segundos o 30 segundos a temperatura ambiente. 7. Inmediatamente lea las muestras y el estándar contra el reactivo Blanco a 550nm
  • 18. INTERPRETACION Reactivo: color verde pantano Reactivo con suero: Color verde bandera CALCULOS Calcule los resultados usando la siguiente ecuación: Albúmina en suero o plasma (g/dL) = AM x 6.0 AE Donde AM y AE son los valores de absorbancia de la muestra y del estándar respectivamente y 6.0 es la concentración del estándar (g/dL).
  • 19. SEP DGETI SEMS Tuxtepec, OAX. APLICAR TÉCNICAS DE VALORACIÓN METABOLICAS PRÁCTICA DETERMINACIÓN COLORIMETRICA-CUANTITATIVA DE ALBÚMINA EN SUERO NOMBRE DEL PACIENTE: JUNCO GARCÍA PERLA RUBÍ SEXO: F EDAD: 18 AÑOS FECHA: 29/03/11 HORA: 9:40AM REPORTE RESULTADOS: VALORES DE REFERENCIA Suero o plasma: 3.8 a 5.1 g/dL ______________________ OBSERVACIONES: ___________________________________________________________________________________________________ _______________________ ANALISTA: AUREA AIDA AGUILAR FELIPE 6°“AL”
  • 20. SEP DGETI SEMS CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO Industrial y de servicios N° 107 TUXTEPEC OAXACA. NOMBRE DEL ALUMNO: ÁUREA AÍDA AGUILAR FELIPE CATEDRÁTICO: I.B.Q. MARIA DE JESUS ROBLES ORTEGA SUBMÓDULO PROFESIONAL: APLICAR TECNICAS DE VALORACION METABOLICAS PRACTICA: DETERMINACION CUANTITATIVA COLORIMETRICA DE PROTEÍNAS TOTALES EN SUERO SEMESTRE: 6° GRUPO: “AL” FECHA DE ENTREGA: ____ DE __________________ DEL 201_ CALIFICACIÓN Y OBSERVACIONES: _____________________________________
  • 21. INTRODUCCION Las moléculas de Proteínas contienen un gran número de péptidos unidos. Cuando se tratan con iones de cobre (Cu2+) en solución alcalina, se forma un complejo coloreado entre el cobre y los grupos amino/carbonil de estos péptidos. Una reacción igual ocurre con el Biuret (compuestos más simples formados por el calentamiento de la urea). Así fue adoptado el término de “Reacción de Biuret” El método descrito está basado en los reportes de Weischselbaum y Gornal et al. El color violeta desarrollado es directamente proporcional al número de enlaces peptidicos de las proteínas e independiente de la concentración relativa de albúmina y globulina. OBJETIVO Determinar la concentración de nitrógeno presente en la muestra para luego ser transformado a través de un factor en proteína. PROCEDIMIENTO 1. Extraer 5ml de sangre sin anticoagulante 2. centrifugar a 2500 r.p.m. durante 5 min. 3. Separar el suero en un nuevo tubo debidamente rotulado y llevar a centrifugar a 2500 r.p.m. por 3 minutos. 4. Observar si hay un botón eritrocitario, si lo hay, vaciar el suero a otro tubo ya rotulado, sin desprender el botón, y obtenernos suero libre de células. 5. Pipetear en tubos. Reactivo Estándar (S) Muestra(U) Blanco (RB) Reactivo 2.0ml 2.0ml 2.0ml Estándar 20µl Muestra 20µl 6. Dejar los tubos incubando por lo menos 5 minutos a 37°C o a temperatura ambiente por 10 minutos. 7. Leer el estándar y muestra contra RB a 500-505nm en el transcurso de una hora.
  • 22. INTERPRETACION Reactivo proteínas: Color Azul Claro Reactivo con suero e incubación: color azul un poco más denso CALCULOS Los valores se derivan de la siguiente ecuación: Proteínas Totales séricas (g/dL) = AM x (10) AE Donde AM y AE son los valores de las absorbancias de la muestra y el estándar respectivamente y 10 g/dL es la concentración del estándar.
  • 23. SEP DGETI SEMS Tuxtepec, OAX. APLICAR TÉCNICAS DE VALORACIÓN METABOLICAS PRÁCTICA DETERMINACIÓN CUANTITATIVA-COLORIMETRICA DE PROTEÍNAS TOTALES EN SUERO NOMBRE DEL PACIENTE: GARDOZO VARGAS EMMANUEL SEXO: M EDAD: 18 AÑOS FECHA: 01/04/11 HORA: 9:40AM REPORTE RESULTADOS: VALORES DE REFERENCIA Suero o plasma: 6.6 a 8.3 g/dL. ______________________ OBSERVACIONES: ___________________________________________________________________________________________________ _______________________ ANALISTA: AUREA AIDA AGUILAR FELIPE 6°“AL”
  • 24. SEP DGETI SEMS CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO Industrial y de servicios N° 107 TUXTEPEC OAXACA. NOMBRE DEL ALUMNO: ÁUREA AÍDA AGUILAR FELIPE CATEDRÁTICO: I.B.Q. MARIA DE JESUS ROBLES ORTEGA SUBMÓDULO PROFESIONAL: APLICAR TECNICAS DE VALORACION METABOLICAS PRACTICA: DETERMINACION CUANTITATIVA-COLORIMETRICA DE LA GLICOHEMOGLOBINA EN SANGRE TOTAL SEMESTRE: 6° GRUPO: “AL” FECHA DE ENTREGA: ____ DE __________________ DEL 201_ CALIFICACIÓN Y OBSERVACIONES: _____________________________________
  • 25. INTRODUCCION La Glicohemoglobina es formada progresivamente e irreversiblemente en los eritrocitos durante sus 120 días de vida. La concentración de Glicohemoglobina en los glóbulos rojos depende del promedio de concentración de glucosa durante un cierto periodo de semanas y es estable durante la vida de la célula. Por lo tanto la medición de la Glicohemoglobina, como por ciento de la hemoglobina total, brinda un método de ayuda para el control del paciente diabético, ya que los niveles de glycohemoglobina se acercan a los valores normales dependiendo de cómo el diabético responda al tratamiento. Abraham et. al reportó una excelente correlación entre la concentración de Glicohemoglobina y el control diabético. En el método presentado, se mezcla un hemolizado de sangre total con una resina de intercambio catiónico. La hemoglobina no glicosilada (HbA 0) se une a la resina, dejando la (HbA1) libre para que se pueda remover mediante un separador de resina en el sobrenadante. El porcentaje de HbA1, se determina midiendo los valores de absorbancia a 415 nm de la fracción HbA1 y de la fracción de Hb total, calculando la proporción de absorbancias (R) y comparando esta proporción con un estándar de glicohemoglobina al que se le practicó el mismo procedimiento. Los resultados son expresados como HbA1 también se puede convertir o reportar como HbA1c OBJETIVO Cuando se determina la Glicohemoglobina en el control del diabético, se está evaluando el comportamiento de su glicemia durante un período previo mínimo de cuatro semanas, lo cual da una imagen global del manejo del paciente que no se ve afectada por fluctuaciones de la glicemia de corto término. PROCEDIMIENTO 1. Extraer 5ml de sangre sin anticoagulante 2. centrifugar a 2500 r.p.m. durante 5 min. 3. Separar el suero en un nuevo tubo debidamente rotulado y llevar a centrifugar a 2500 r.p.m. por 3 minutos. 4. Observar si hay un botón eritrocitario, si lo hay, vaciar el suero a otro tubo ya rotulado, sin desprender el botón, y obtenernos suero libre de células. 5. Pipetear en tubos. (Preparación del Hemolizado) Estándar (S) Muestra(U) Reactivo de lisis 500µl 500µl Estándar de 100µl Glicohemoglobina Muestra (sangre Total) 500µl
  • 26. 6. Medir 500µl del reactivo de lisis, pasarlo a la sangre 100µl - hemolizado 7. Medir 100µl de lisado y vaciar resina, mezclar metiéndoles al tubo el manguillo y 8. Se mezcla por 5 minutos. Se deja reposar por 60 minutos aproximadamente. Resina + Mezclar: Manguillo 100µl de destapar y sangre Mezclar 5 mezclar minutos. 9. Pasados los 5 minutos, se introduce un poco más el manguillo 10. Esperar 60 minutos. CALCULOS Para cada Estándar y Muestra calcule el Rango (R) de absorbancia de la Glicohemoglobina y de la absorbancia de la hemoglobina total como sigue: R= A gly___ A tot Glicohemoglobina (%) = R (Muestra) x Concentración del x R (Estándar) Estándar de la Glicohemoglobina (%)
  • 27. SEP DGETI SEMS Tuxtepec, OAX. APLICAR TÉCNICAS DE VALORACIÓN METABOLICAS PRÁCTICA DETERMINACIÓN CUANTITATIVA-COLORIMETRICA DE GLICOHEMOGLOBINA EN SANGRE TOTAL NOMBRE DEL PACIENTE: GARDOZO VARGAS EMMANUEL SEXO: M EDAD: 18 AÑOS FECHA: 01/04/11 HORA: 9:40AM REPORTE RESULTADOS VALORES DE REFERENCIA Glicohemoglobina Valores Glicohemoglobi valores A1 na A1C Rango normal 6.0 – 8.0 % Rango normal 4.2 – 6.2 % ______________________ Diabético Diabético Buen control 7.5 – 8.9 % Buen control 5.5 – 6.8 % Control medio 9.0 – 10.0 % Control medio 6.8 – 7.6 % Control pobre Arriba de Control pobre Arriba de 10.0 % 7.6 % OBSERVACIONES: ___________________________________________________________________________________________________ _______________________ ANALISTA: AUREA AIDA AGUILAR FELIPE 6°“AL”