Practica de bioquimica sobre las proteinas

1. PRACTICA DE
PROTEÍNAS
30/05/2016
INTEGRANTES;
ALFARO VALENCIA ALINE MELINA
ALMANZA LÓPEZ LILIANA MARGARITA
GONZÁLEZ LAGUNA VÍCTOR
HERNÁNDEZ YÉPEZ RENATA
PÉREZ GABRIELA
6° “E” LABORATORIO CLÍNICO

2. FUNDAMENTO;
Las proteínas son elementos vitales para los organismos,
encontrándose en plantas y animales en una proporción elevada. Hay
una gran variedad de proteínas y cada una desempeñauna función
biológicaespecíficaque puede ser de reserva, de sostén, transporte,
estructural, etc. Químicamente las proteínas están constituidas por
combinaciones complejas de carbono, hidrogeno,oxigeno, nitrógeno y
otros elementos en menor proporcióncomo son azufre cobre y fosforo.
Las proteínas debido al gran tamaño de sus moléculas forman con el
agua soluciones coloidalesque puedenprecipitar formándose
coágulos al ser calentadas a temperaturas superiores a 70ºC o al ser
tratadas con soluciones salinas, ácidos,alcohol, etc.

3. REACCIONES COLOREADAS ESPECÍFICAS (BIURET)
MATERIAL
1 gradilla
pescado, espinaca, levadura,
Tubos de ensaye
Albúmina, grenetina y caseína
REACTIVOS
NaOH al 10%
Sulfato cúprico al 1% en gotero
PROCEDIMIENTO
1. En cada tubo de ensaye colocar 2ml de solución de proteína (diluida al 1%).
2. Añadir a cada tubo 2ml de NaOH al 10% y agitar.
3. Agregar gota a gota solución de sulfato cúprico al 1% hasta la
aparición de un color rosa o violeta (máximo 10 gotas).
4. Reportar a que gota aparece el color.
RESULTADOS:
Observaciones:
Algunas de las proteínas usadas como las espinacas y el
pescado se diluyeron a un 25% las demás se pudieron
diluir casi al 1%. Las gotas contadas fueron hasta que
apareció un tono más fuerte o aceptable
Proteína Gota a la que se coloreo
Espinaca No tomo color
Albúmina 4
Levadura 5
Caseína 4
Pescado 3
Grenetina 5

4. REACCION XANTOPROTEICA
MATERIAL REACTIVOS
Tubos de ensaye proteínas
Gradilla NaOH concentrado (gotero)
Baño maría HNO3 concentrado
PROCEDIMIENTO
1. Colocar en cada tubo de ensaye 3ml de proteína.
2. Añadir con cuidado y lentamente 1ml de HNO3 concentrado.
3. Calentar en baño maría por 2min, y enfriar a chorro de agua.
4. Agregar gota a gota solución de NaOH concentrado (máximo 10 gotas) a él
vire de color. Observar y reportar resultados.
RESULTADO
Pescado = 7 gotas
Grenetina = 10 gotas
Levadura = 10 gotas toma un color anaranjado
Clara de huevo = 8 gotas
Espinaca =no cambia de color
Leche = 9 gotas

5. COAGULACION POR CALOR
MATERIAL REACTIVOS
16 Tubos de ensaye Acido acético al 1%
Gradilla Acetona
Baño maría Éter
Tetracloruro de carbono
Butanol
Proteínas
NaOH concentrado con
gotero
PROCEDIMIENTO
1. Calentar a hervir 5ml de solución de proteína
2. Añadir 2 gotas de acido acético al 1%
3. Colocar en 4 tubos, la solución repartida por igual y agregar de la siguiente
manera:
Tubo1= 1ml acetona
Tubo2= 1ml de éter
Tubo3= 1ml de butanol
Tubo4= 1ml tolueno
4. Agitar fuertemente para tratar de disolver el coagulo. Reportar en tabla.
5. Los tubos que no disolvieron el coagulo, agregar 3 gotas de NaOH
concentrado, y agitar.
6. Observar y anotar diferencias.
RESULTADOS
Acetona Éter Butanol Tolueno
Albumina No No No No
Espinaca Si Si No No
Grenetina Si Si No No
Leche Si Si Si No
Pescado Si Si Si No
Levadura Si Si Si No
Nota.
Insoluble= No
Soluble = Si

6. OBTENCION DE CASEINA DE LA LECHE
MATERIAL REACTIVOS
2 vasos de precipitados de 250ml leche entera
1 probeta de 100ml HCl 0.2N
1 embudo acetona
2 papel filtro éter
PROCEDIMIENTO
1. Colocar 100ml de leche en un vaso de precipitado
2. Agregar 100ml de agua destilada
3. Con una pipeta añadir HCl 0.2N hasta obtener un pH de 4.8
4. Dejar reposar hasta que el sedimento precipite.
5. Suspender el precipitado en 100ml de agua destilada y dejar reposar.
6. Repetir este lavado 4 veces.
7. Filtrar el precipitado final en un embudo Buchner, colectando en el papel la
proteína.
8. Suspender la caseína en 25ml de agua destilada, agitar para homogeneizar
y filtrar. Repetir 4 veces.
9. Después del último lavado, suspender la proteína en 5ml de éter y 5ml de
acetona, y filtrar.
10.Colocar el polvo obtenido en un desecador con cloruro de calcio y pesar el
polvo 24 horas después.

7. CUESTIONARIO
1. ¿Cómo se manifiesta la desnaturalización de las PROTEINAS?
En la solidificación o la separación de la sustancia.
2. ¿Cuál de los tres agentes utilizados tiene mayor poder de
desnaturalización?
Los ácidos son los que tienen mayor poder de desnaturalización ya que la
llevan a cabo en un tiempo más corto.
3. ¿Cómo podríamos saber que una sustancia desconocida es una proteína?
Haciendo pruebas como la de Biuret que nos ayudan a determinar las
concentraciones proteicas de una sustancia.
4. Que coloración da la reacción del Biuret?
Un color de morado a violeta
5. ¿Una proteína coagulada podría dar la reacción del Biuret?
Sí, porque al desnaturalzarse una proteína, ésta cambia su estructura pero
no se rompen los enlaces que la conforman, lo que hace esta prueba es
romper los enlaces peptídicos para comprobar la presencia de estas.
6. Si se realiza la reacción del Biuret sobre un aminoácido como la Glicina ¿es
positiva o negativa? ¿Por qué?
No porque se necesita tener una cadena de aminoácidos con al menos un
enlace peptídico para que la prueba de positiva. La glicina al no estar unida
con otro aminoácido, dará negativa
7. Explica la reacción Xantoproteíca.
Esta reacción se debe a la formación de un compuesto aromático nitrado de color
amarillo, cuando las proteínas son tratadas con ácido nítrico concentrado.
Generalmente, se forma primero un precipitado blanco que cambia a amarillo al
calentarlo. El color se empieza a tornarse anaranjado cuando la solución se vuelve
básica. La prueba da resultado positivo en aquellas proteínas con aminoácidos
portadores de grupos bencénicos, tirosina, fenilalanina y triptofano, obteniéndose
nitrocompuestos de color amarillo, que se vuelven anaranjados en medio
fuertemente alcalino (formación del ácido pirámico o trinitrofenol). En esta prueba
se produce la nitración del anillo bencénico presente en dichos aminoácidos. Las
manchas amarillas en la piel se causan por el ácido nítrico son el resultado de una
reacción xantoprotéica.