DETERMINACIÓN CROMATOGRÁFICA DE RIFAMPICINA 
EN PACIENTES CON TUBERCULOSIS Y SUJETOS SANOS 
Montejo-López René1, Milán Ros...
estándar de RIF en concentración de 20 μg/mL (figura 
1b), muestra que el compuesto presentó un tiempo de 
retención de 4....
Bibliografía 
1. Burman W. J., Gallicano K., Peloquin C. (2001). Rev. Clin. Pharmacokinet, 40(5): 327-341. 
2. Milán Segov...
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02. articulo determinación cromatográfica de rifampicina

  1. 1. DETERMINACIÓN CROMATOGRÁFICA DE RIFAMPICINA EN PACIENTES CON TUBERCULOSIS Y SUJETOS SANOS Montejo-López René1, Milán Rosa del C2, Medellín Susana E.2, Romano Silvia2. 1Facultad de Ciencias Químicas, Universidad Autónoma de Chiapas. 2Facultad de Ciencias Químicas, Universidad Autónoma de San Luis Potosí. qfb_rene_lili@hotmail.com Palabras clave: Tuberculosis, Rifampicina, Cromatografía de líquidos de alta resolución. Introducción La tuberculosis (TB) es una enfermedad bacteriana producida por Mycobacterium tuberculosis. En México, durante 2011 se reportaron 19,445 casos nuevos de TB, el 81.5% son de forma pulmonar (5). El Tratamiento Acortado Estrictamente Supervisado (TAES) permite la curación del 86% de los enfermo, e incluye el uso de fármacos como la rifampicina (RIF), isoniacida, pirazinamida y etambutol. La RIF ejerce su acción bactericida al unirse a la subunidad β de la RNA polimerasa bacteriana. En el hígado la RIF se convierte a 25-O-desacetil rifampicina, metabolito de actividad antifímica (1). La RIF presenta un proceso de absorción rápido, con biodisponibilidad variable, la cual se ve afectada por el consumo de antiácidos y alimentos ricos en grasa. Este fármaco es un compuesto de baja solubilidad y alta permeabilidad, características que afectan su absorción en el tracto gastrointestinal (2,3). Se administra en dosis de 600 mg a pacientes con peso corporal de 50 Kg o más, o de 450 mg para pacientes de menor peso. Estas dosis deben proporcionar concentraciones plasmáticas de 8 a 20μg/mL entre 2 y 4 h postdosis (4). Objetivo Cuantificar niveles plasmáticos de RIF en muestras de sujetos sanos y pacientes con TB, mediante cromatografía de líquidos de alta resolución, metodología de aplicabilidad en estudios de monitorización de fármacos y farmacocinética clínica. Material Estándar USP de RIF, fosfato de sodio grado analítico; acetonitrilo, metanol (CH3OH) y agua grado HPLC. Equipo HPLC marca Waters. Métodos Se prepararon estándares en plasma mediante adición de RIF para obtener una curva de calibración. Ésta se analizó por triplicado para corroborar la linealidad del método. Los estándares en plasma y las muestras problema se procesaron como sigue: se desproteinizaron 100 μL de plasma con 100 μL de acetonitrilo en tubos Eppendorf. La mezcla se agitó en vortex durante 1 min y se centrifugó por un periodo de 20 min a 14,000 rpm. Finalmente se depositaron 150 μL del sobrenadante en un inserto, a partir del cual el sistema automatizado del cromatógrafo inyectó 20 μL. La fase móvil consistió de una mezcla de buffer de fosfato de sodio (10 mM, pH=4.29): acetonitrilo: metanol (60:37:3 v/v/v). La separación cromatográfica se realizó utilizando una columna X-Terra RP18 (30x150 mm, con un tamaño de partícula de 3.5 mm) y una precolumna Guard Pak X-Terra RP18 (10 x 30 mm). La velocidad de flujo fue 0.4 ml/min y la detección de RIF se realizo a 334 nm. La metodología descrita se aplicó al análisis de muestras plasmáticas obtenidas previamente de otra fase del proyecto aprobado por el Comité de Ética del Hospital Central de San Luis Potosí. Estas muestras correspondían a 3 sujetos sanos (SS) y 3 pacientes con TB, quienes dieron su consentimiento firmado de participación en el proyecto. Cada participante recibió en ayuno una dosis oral de 600 mg de RIF. En la vena antecubital de cada sujeto se colocó un sitio de inyección para tomar muestras de 3 mL de sangre en tubos heparinizados. Los tiempos de muestreo fueron 0 h, 0.33, 0.66, 1, 1.5, 2, 2.5, 3, 4, 6, 9 y 12 h postdosis. Se separó el plasma por centrifugación en frío a 4˚C durante 10 min a 1,500 rpm. Los datos de concentración plasmática fueron graficados versus el tiempo de muestreo con el programa Microsoft Excel® 2010. Se realizó un análisis farmacocinético no compartimental (programa WinNonlin versión 5.1 -Pharsight, St Louis, MO, EE.UU-). Los parámetros estimados fueron la constante de eliminación (Ke), la vida media de eliminación t1/2, la concentración plasmática máxima (Cmax) y el tiempo para alcanzar la Cmax (Tmax), así como el área bajo la curva de concentración-tiempo hasta las 12 horas (AUC0-12h), el volumen de distribución (Vd), el aclaramiento plasmático (CL) y del tiempo medio de residencia (TMR) de RIF. Resultados En la figura 1 se muestran los cromatogramas obtenidos de una muestra de plasma blanco (figura 1a). No se detectó presencia de compuestos endógenos y exógenos que pudieran causar interferencia alguna con la RIF. El Cromatograma de plasma adicionado con
  2. 2. estándar de RIF en concentración de 20 μg/mL (figura 1b), muestra que el compuesto presentó un tiempo de retención de 4.5 min aproximadamente. Figura 1. Cromatogramas en plasma. (a) Plasma blanco. (b) Plasma con estándar de RIF. A partir de los datos de la curva de calibración (figura 2) se constató la linealidad del método con un coeficiente de determinación (R2) de 0.9995. Figura 2. Curva de calibración de RIF en plasma. En la figura 3. Se observa que la mayor variabilidad, representada por las barras de desviación estándar de los datos, se presentó en la etapa de absorción. Además es interesante visualizar que los menores niveles plasmáticos de RIF se obtuvieron en los pacientes con TB a diferencia de los SS en quienes se presentó un rápido proceso de absorción. En los dos grupos se obtuvieron concentraciones plasmáticas de RIF en el rango de referencia para ejercer su acción bactericida4. En la tabla 1 se reportan los parámetros farmacocinéticos de la RIF que fueron calculados para ambos grupos de sujetos. En general los datos concuerdan con los que se reportan otros autores en la literatura científica3. El valor de Cmax y ABC0-12h fue mayor en los voluntarios sanos en relación a los enfermos de TB. Menor rapidez de absorción se presentó en los pacientes. Figura 3. Concentraciones plasmáticas promedio (±DE) de RIF vs tiempo en SS (n=3) y pacientes con TB (n=3). Estos parámetros pueden ser indicativos de la problemática de absorción de RIF en casos de TB. El proceso de eliminación de RIF fue más lento en los pacientes al encontrarse un valor de t1/2 casi dos veces mayor que en los participantes sanos. La distribución del fármaco se extendió en mayor volumen en enfermos que en personas sanas. Variaciones menores se observaron para el CL y el TMR entre los dos grupos de sujetos estudiados. Tabla 1. Parámetros Farmacocinéticos de RIF promedio obtenidos mediante análisis no compartimental. PARÁMETROS Sujetos sanos Pacientes con TB Tmax (h) 0.889 ± 0.19 1.333 ± 0.58 Cmax (μg/mL) 19.26 ± 4.80 12.22 ± 1.82 ABC0-12h 78.08 ± 11.23 67.87 ± 5.92 Ke (1/h) 0.301 ± 0.10 0.153 ± 0.01 t1/2 eliminación (h) 2.534 ± 1.04 4.579 ± 0.33 Vd (L/kg) 26.55 ± 8.26 44.44 ± 9.31 CL (L/h) 7.492 ± 1.40 6.803 ± 1.62 TMR (h) 3.703 ± 0.65 4.671 ± 0.04 Conclusiones A partir de los datos de concentración plasmática y el tiempo postdosis fue factible la determinación de los parámetros más importantes que caracterizan la farmacocinética de RIF en dosis única de 600 mg y que se requieren para su monitorización terapéutica. La aplicación de esta metodología analítica tendrá beneficios directos en los pacientes con TB para monitorización de concentraciones plasmáticas y su la posterior individualización de dosis que permitan disminuir el desarrollo de farmacorresistencia. Agradecimientos Este trabajo fue realizado con apoyo C10-FAI-05- 19.46 (UASLP) y SALUD-2011-1-162333(Fondos Sectoriales de Investigación en Salud).
  3. 3. Bibliografía 1. Burman W. J., Gallicano K., Peloquin C. (2001). Rev. Clin. Pharmacokinet, 40(5): 327-341. 2. Milán Segovia R. C., Domínguez Ramírez A. M., Jung Cook H., Magaña Aquino M., Romero Méndez M. C., et al. (2010). Int J Tuberc Lung Dis, 14(11):1454–1460. 3. Panchagnula R., Agrawal S. (2004). Int J Pharm, 271:1-4. 4. Peloquin C. (2002). Rev. Drugs, 62: 2169-83. 5.- Castellanos Joya Martin. (2011). “Situación actual de la Tuberculosis en México. Avances y desafíos”. Centro Nacional de Programas Preventivos y Control de Enfermedades; Gobierno Federal. México: http://www.cenave.gob.mx/tuberculosis/diamundial/Presentaci%C3%B3n%20oficial%20TB%202010%20M%C3%A9xico.pdf [fecha de consulta: 29/07/2012].

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