Diluciones seriadas

1. FACULTAD DE INGENIERÍA MARÍTIMA Y
CIENCIAS DEL MAR
FICHA DE LA PRÁCTICA PARA LABORATORIO
FMAR03749 Hoja 1 de 5
CÓDIGO
MATERIA Microbiología FMAR03749
NOMBRE David Quiñonez Acosta
PARALELO 1
TEMA DE LA PRÁCTICA Diluciones seriadas
OBJETIVOS GENERALES:
 Cultivo microbiano con método de diluciones seriadas.
 Preparar cultivo de bacterias con muestra de sedimento y agua.
 Conocer propiedades del agar cetrimide y mueller hinton.
INTRODUCCIÓN:
Diluciones seriadas:
Técnica que consiste en obtener una suspensión de la mezcla de microorganismos y hacer diluciones
seriadas que se vierten en una placa Petri hasta conseguir colonias aisladas. (Valera, 2015)
Ci = N x D x 10 Ci = Concentración inicial (unidades: número de células / ml)
N = nº de colonias
D = dilución
Fig1. Ilustración del
método de diluciones
seriadas que usaremos en
la práctica.

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Agar Cetrimide Malder Hilton:
Se utilizaparael aislamientoselectivode Pseudomonasaeruginosaapartir de muestras clínicas. (BD, 2013)
Agar Mueller hinton:
Este medio de cultivo ha sido recomendado universalmente para la prueba de sensibilidad a los
antimicrobianos. Además es útil con el agregado de sangre para el cultivo y aislamiento de
microorganismos nutricionalmente exigentes. (britanialab, 2015)
EQUIPOS Y MATERIALES:
 Caja Petri
 Pipeta de Pasteur
 Matraz
 Medios de agar (cetrimide y mueller hinton)
 Mecheros Fisher
 H2O
 Sedimentos(lodo, tierra)
 Guantes
 Parrilla de calentamiento
PROCEDIMIENTO:
1. Identificamosyprepararnosel tipode agara utilizar (Cetrimide yMuellerHinton) para la preparación de
mediosde cultivo,mediante unaestufade calentamientoprocurandoque no sobrepase los 40°C-45°C esta
estimaciónse lo realizocolocandolafiola(caliente)enla parte anterior de lo muñeco (soportando el calor
que se produce) moviendo continuamente el matroz.
2. En los tubos de ensayo ya preparados previamente con agua destilada 9ml en cada uno, se procede a
colocar 1ml de agua (de grifo) en el primer tubo de ensayo, al cual lo rotularemos como 10° este
procedimiento se lo hace preferiblemente lo más cerca del mechero para evitar el mayor grado de
contaminación posible.
3. Esta muestra se la denominara como muestra madre, de lo cual tomaremos 1ml y se lo añadimos al
siguiente tubo, esto dilución tendrá una concentración de 101
.
4. Continuamoscon el procedimiento anterior hasta (lograr una concentración de 103
esto con la muestra
de agua de grifo.
5. Para el sedimento, en un mortero se colocó una pequeña muestro de lodo paro su continuo
maceramientode lotexturay evitar que pueda obstruir lo punta de la pipeta al momento de colocarlo en
uno dilución de aguo destilada, esto dilución serio considerada como el tubo madre.
6. A continuación se realizó el mismo procedimiento que se utilizó con el aguo de grifo y se procede a
preparar el medio agar en el que serán cultivados.
7. Para lapreparacióndel medio agarse coloca en las cajasPetri la solución de malder Hilton previamente
esterilizado en autoclave. Estos medios son colocados cerco del mechero para evitar contaminación y

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entradade microorganismospresentesenel aire.Unavezsolidificadosel agarenlo caja Petri,se procede a
colocar las muestras 3 para las primeros diluciones agua y 3 para las diluciones con sedimento.
8. Se homogenizalasmuestraspormedio del hazade cristal previamente esterilizadocon etanol al 70%, se
las cierra cuidadosamente, se las rótula con cada uno de sus concentraciones y se las coloca en la
incubadora a 26.5° C y se les dejo reposar por 24 horas.
9. Uno veztranscurridolos24 horas se procede a cuantificar las colonias de microorganismos encontradas
en el medio.
ANEXO:
Fig2.-Materiales que utilizaremos para la practica.

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Fig3.-preparcacion de tubo con cada una muestra madre (agua y sedimentos), y cajas Petri con el agar.
Fig4.- incubación de las muestras con las diluciones seriadas.

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Fig5.- Muestras ya cultivadas de agua y sedimentos.
Observaciones:
 Al momento de comenzar hacer las diluciones tener en cuenta que de cada una se saca un 1ml y se le
agrega a la otra y así sucesivamente.
 Recordar que cuando pongamos el caldo de cultivo en la caja Petri no rebosar esta.
 Macerar bien el sedimento ya que si este sigue grumoso puede taponar la pipeta.
 Rotular las cajas Petri para diferenciar de la muestra con agua y sedimento.
Conclusión:
 Se aprendió como hacer diluciones seriadas.
 Las diluciones seriadas siempre tienen una muestra madre de la cual se extraerá una pequeña porción
para colocar a otra y de esa a otra y así sucesivamente.
 Se utilizó otro caldo nutritivo el cual tiene propiedades específicas para las muestras que trabajamos.
Bibliografía
BD. (Abril de 2013). https://www.bd.com. Obtenido de https://www.bd.com:
https://www.bd.com/resource.aspx?IDX=8794
britanialab. (11 de Junio de 2015). http://www.britanialab.com.ar. Obtenido de
http://www.britanialab.com.ar:
http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/muellerhintonagar.htm
Valera, D. F. (2015). http://egg.umh.es/. Obtenido de http://egg.umh.es/:
http://egg.umh.es/frvalera/manualDePracticas.pdf