Obtención de molécula de ADN recombinante
La clonación del DNA puede definirse como la recombinación in vitro de un fragmento de
DNA con un DNA vector con capacidad de replicación autónoma. El fragmento de DNA se
replicará junto con el DNA vector en la célula hospedadora y así será posible obtenerlo en
un número elevado de copias.
Las etapas básicas son:
1) Extracción y fragmentación específica del DNA del organismo que nos interesa.
Utilización de las enzimas de restricción
GENOTECAS
Una librería de DNA es una colección de los fragmentos derivados del genoma de un organismo
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2) Unión de los fragmentos de ADN a nuestro vector.
Ya tenemos DNA aislado, hemos fragmentado el DNA de nuestro vector y queremos insertar en
él nuestro gen, con el objetivo de clonarlo.
A.-Vectores de clonación.
Un vector es una molécula de DNA con un origen de replicación autónomo y que posee zonas
donde pueden introducirse fragmentos de DNA exógeno. Así, el DNA exógeno se replica como
parte del vector en la célula receptora y hospedadora. Los vectores más usados son :
1.-Plásmidos.
Moléculas de DNA bicatenario circular
extracromosómico.
Suelen conferir a la célula que hospedan alguna
característica como la resistencia a antibióticos.
Para ser utilizados como vectores los plásmidos deben
cumplir unas características:
-pequeño tamaño (mejor manipulación y aislamiento)
-capacidad de replicación independiente de la célula
hospedadora (permite obtener el DNA clonado en
grandes cantidades)

2.-Virus y bacteriófagos.
Ventajas frente a plásmidos:
-Su introducción en las células hospedadoras es más eficaz que la que sucede con los plásmidos.
-Admiten y replican fragmentos de ADN mayores que los plásmidos.
-La infección viral permite que cada célula hospedadora contenga muchas copias del gen
exógeno y que éste se exprese abundantemente bajo el control de los virus que son muy
activos.
Inconvenientes:
-Su manipulación es más compleja.
El bacteriófago más conocido es el λ de E.coli
B.-Fusión del vector con el segmento de
interés:
Para unir los fragmentos de DNA al vector
utilizamos las DNA ligasas.
Para ello hay que tener en cuenta los extremos
que se nos han originado a partir de la acción de
los enzimas de restricción.
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3) Introducción en las células receptoras del DNA recombinante.
Las más usada es E. coli .
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4) Selección de colonias que porten las moléculas de ADN recombinante.
Seleccionar aquellas colonias bacterianas que expresen nuestro DNA recombinante.
En el caso de los plásmidos, lo podemos hacer utilizando la característica de resistencia a
antibióticos.
Sembramos las colonias de bacterias en una placa con antibiótico y sólo aquellas en las que se
haya introducido el plásmido sobrevivirán(porque son las que resisten a los antibióticos)
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5) Multiplicación del organismo transgénico

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