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Anticuerpos monoclonales

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Veröffentlicht in: Gesundheit & Medizin
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Anticuerpos monoclonales

  1. 1. OBTENCION DEANTICUERPOSMONOCLONALESEsmeralda Murcia
  2. 2. TOPICOS 1. Antecedentes 2. Aspectos técnicos 3. Aplicaciones
  3. 3. TEORIA DE LA SELECCIONCLONAL El Ag activa un clon específico preexistente de linfocitos B induciendo proliferación Cada linfocito B sintetiza unicamente una clase de inmunoglobulina específicica para el antígenoBurnet, F.M. Australian Journal of Science 20:67-69, 1957.
  4. 4. SE BUSCA Fuente contínua de Ac Especificidad pre-definida
  5. 5. ANTECEDENTES1962 Fusión por el virus Sendai Okada1962 Inducción de plasmacitomas Potter y Boyce1964 Medios selectivos HAT Littlefield1970 Cultivo continuo de plasmacitomas Horibata y Harris1973 Fusión de células de mieloma Cotton y Milstein
  6. 6. INMORTALIZACION DECELULAS B Cultivo continuo de células fusionadas secretoras de anticuerpos con especificidad predefinida Köhler, G. Milstein,C. Nature 256 :1 495-7. 1975
  7. 7. TOPICOS 1. Antecedentes 2. Aspectos técnicos 3. Aplicaciones
  8. 8. ASPECTOS TECNICOS Inmunización Fusión Tamizaje Clonación Caracterización Purificación
  9. 9. INMUNIZACION Ag Inmunización primaria Inmunización secundaria Inmunización in vitro
  10. 10. FUSION Biológica: Virus Sendai Química: Polietilenglicol Física: Electrofusión
  11. 11. CELULAS LINFOCITO B P3 X63 Ag8.653  BALB/c  Tumoral plasmática  Crecimiento limitado  Crecen in vitro  Anticuerpos  c-myc  HGPRT+  HGPRT- ESPECIFICIDAD INMORTALIDAD
  12. 12. SINTESIS DE NOVO 5- aminoimidazol 4-carboxinucleótido UMP A A DHFR DHFRAcidos Acidos GMP IMP AMP TMPNucleicos Nucleicos HGPRT HGPRT APRT TK G H A TVIA DE SALVAMENTO
  13. 13. TAMIZAJE ELISA RIA Inmunofluorescencia Inmunoblot
  14. 14. CLONAJEAgar semi sólidoDilución límiteSorter (Citómetro de flujo)
  15. 15. EXPANSION IN VITRO IN VIVO Cultivo celular Ascitis Larga escala Manipulación Mayor costo Menor costo Adaptación Purificación 10-60µg/ml 1-10 mg/ml
  16. 16. CARACTERIZACION Ouchterlony ELISA isotyping
  17. 17. PURIFICACION
  18. 18. APLICACIONES MOLECULAS ASOCIADAS A SUPERFICIE  Diagnostico de infecciones.  Diagnóstico e inmunolocalización de tumores.  Determinación de tipos celulares.
  19. 19. APLICACIONES MOLECULAS SOLUBLES  Determinación y/o cuantificación de proteínas, hormonas, enzimas medicamentos y drogas entre otros.
  20. 20. CONJUGACION
  21. 21. AcMo anti - β tubulina
  22. 22. AcMo anti-FNTα

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