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- 2. MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA PRÁCTICAS DE LABORATORIO
- 3. PRACTICA N°04 ANTIBIOGRAMA 10/09/2022 Medicina Humana - Microbiología y Parasitología 2
- 4. Importancia
- 5. MICROORGANISMO ANTIMICROBIANO PACIENTE Infección Inmunidad TRIÁNGULO DEDAVIS 10/09/2022 Medicina Humana - Microbiología y Parasitología 3 ENFERMEDAD
- 6. 10/09/2022 Medicina Humana - Microbiología y Parasitología 4 OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA • Enumerar y describir los pasos requeridos para la realización del antibiograma. • Comprender las bases teóricas y metodológicas del antibiograma. • Mencionar las variables que deben ser controladas cuando se realiza la difusión por disco, y reconocer los problemas que podrían ocurrir si dichas variables no son controladas apropiadamente. • Realizar la interpretación del antibiograma basados en las recomendaciones del Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) de Norteamérica, categorizando las bacterias/antibióticos específicos en sensibles, intermediarios y resistentes.
- 7. ANTIBIOGRAMA (Susceptibilidad Antimicrobiana) • Estudio de la sensibilidad “in vitro” de un microorganismo patógeno frente a las sustancias antimicrobianas. • Se basa en el patrón de resistencia de cada bacteria. • Establece la terapia antibiótica adecuada. 10/09/2022 Medicina Humana - Microbiología y Parasitología 5
- 8. 10/09/2022 Medicina Humana - Microbiología y Parasitología 6
- 9. ANTIBIOGRAMA • No se informa en el ATBgrama: – Resistencia intrínseca – Sensibilidad que puede inferirse por otros antibióticos • Patrones de ATBgrama poco frecuentes o imposibles requieren confirmación. 10/09/2022 Medicina Humana - Microbiología y Parasitología 7
- 10. ANTIBIOGRAMA - UTILIDAD • Terapia antimicrobiana dirigida. • Conocer el fenotipo de sensibilidad de un microoorganismo. • Perfil epidemiológico institucional. • Seguimiento y análisis de brotes. 10/09/2022 Medicina Humana - Microbiología y Parasitología 8
- 11. ANTIBIOGRAMA - IMPORTANCIA • Prueba microbiológica de más relevancia en el cuidado directo de los pacientes. 1.Traducción de las CIM o los puntos de corte en categorías de sensibilidad. 2. Valor predictivo de las pruebas de sensibilidad “in vitro”. 3.Importancia de los informes de sensibilidad. 4.Detección directa de los genes de resistencia. 10/09/2022 Medicina Humana - Microbiología y Parasitología 9
- 12. ACCIÓNANTIMICROBIANA 10/09/2022 Medicina Humana - Microbiología y Parasitología 10 ConcentraciónMínimaInhibitoria(CMI)Laconcentración másbajadeun antimicrobianocapazdedetener el crecimiento ConcentraciónMínimaBactericida(CMB)Laconcentración másbajadeun antimicrobianocapaz dedestruir
- 13. CATEGORÍASCLÍNICAS • Sensible(S) • Intermedio(I) • Resistente(R) CMI Concentraciónde antimicrobiano alcanzable enel focoinfeccioso 10/09/2022 Medicina Humana - Microbiología y Parasitología 11
- 14. CATEGORÍASCLÍNICAS • Sensible(S): Una infección puede ser tratada con la dosis de ATB recomendada para el tipo de infección y la especie infectante. • Intermedio (I): Las cepas bacterianas pueden ser inhibidas por concentraciones del ATB superiores a las obtenidas con las dosis habituales. • Resistente (R): Las cepas bacterianas no son inhibidas por las concentraciones séricas del antibiótico normalmente alcanzadas. 10/09/2022 Medicina Humana - Microbiología y Parasitología 11
- 15. ANTIBIOGRAMA:TIPOS 10/09/2022 Medicina Humana - Microbiología y Parasitología 12 • Cualitativo: difusióncondiscos(S,I, R) • Cuantitativo(CMIenmg/L) - Diluciónenagar - Diluciónencaldo - Épsilon-test
- 16. ANTIBIOGRAMA:FACTORESQUEINFLUYEN 10/09/2022 Medicina Humana - Microbiología y Parasitología 13 • Mediodecultivo • pH • Densidaddelinóculo • Difusibilidadysolubilidaddelantimicrobiano • Tiempo,temperaturayatmósferadeincubación
- 17. ANTIBIOGRAMA:DIFUSIÓNCONDISCOS 10/09/2022 Medicina Humana - Microbiología y Parasitología 14
- 18. ANTIBIOGRAMA CUALITATIVO MÉTODO DE DISCO DIFUSIÓN EN AGAR (KIRBY BAUER) 10/09/2022 Medicina Humana - Microbiología y Parasitología 15 Principio: medida de halo de inhibición (mm)
- 19. PASOS A SEGUIR: • Agite la suspensión bacteriana para asegurarse que esté bien mezclada. • Sumerja un hisopo de algodón estéril en la suspensión. Remueva el exceso de líquido. • Colocar discos de antibióticos dentro de los 15 minutos siguientes a la inoculación de la placa MHA. • Invierta las placas MHA y colóquelas dentro de la incubadora a 35 ± 2°C
- 20. ANTIBIOGRAMA CUALITATIVO MÉTODO DE DISCO DIFUSIÓN EN AGAR (KIRBY BAUER) 10/09/2022 Medicina Humana - Microbiología y Parasitología 16 HALO DE INHIBICIÓN.
- 21. • El diámetro de los discos según las normas de la Organización Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm. • Distribuir los discos uniformemente, de modo que estén a una distancia mínima de 24 mm de centro a centro PASOS A SEGUIR:
- 22. PASOS A SEGUIR: • Medir los diámetros de los halos de inhibición usando una regla o caliper.
- 25. RESUMEN….. • Preparacióndelaplaca • Inoculacióndelaplaca • Aplicacióndelosdiscos • Incubaciondelasplacas • Lectura einterpretacióndelasplacas
- 26. ANTIBIOGRAMA:DILUCIÓNENCALDO 10/09/2022 Medicina Humana - Microbiología y Parasitología 17
- 27. DILUCIÓN EN TUBO Aerobiosis ~24 H - 37ºC Agar Caldo + droga en concentraciones crecientes Caldo Control 0,0625µg/mL -1024,0 µg/mL 10/09/2022 Medicina Humana - Microbiología y Parasitología 18 ANTIBIOGRAMA CUANTITATIVO DETERMINACIÓN DE CONCENTRACIÓN INHIBITORIAMÍNIMA(MIC) CIM 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Inóculo estandarizado
- 28. DILUCIÓN EN TUBO Aerobiosis ~24 H - 37ºC Agar Caldo + droga en concentraciones crecientes Caldo Control 0,0625µg/mL -1024,0 µg/mL 10/09/2022 Medicina Humana - Microbiología y Parasitología 18 ANTIBIOGRAMA CUANTITATIVO DETERMINACIÓN DE CONCENTRACIÓN INHIBITORIAMÍNIMA(MIC) CIM 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Inóculo estandarizado Concentración más débil de un antibiótico capaz de inhibir el crecimiento bacteriano
- 29. Aerobiose 24h - 35ºC Suspensão bacteriana (0,5 McFarland) 10/09/2022 Medicina Humana - Microbiología y Parasitología 19 Controle Concentração InibitóriaMínima Replicador deSteers Ágar + Droga ANTIBIOGRAMA CUANTITATIVO DETERMINACIÓN DE CONCENTRACIÓN INHIBITORIA MÍNIMA (MIC) DILUCIÓN EN PLACA
- 30. 0,0 µg/mL 0,0625 µg/mL 0,125µg/mL 0,25µg/mL 0,5µg/mL 1,0µg/mL 2,0µg/mL 4,0µg/mL 8,0µg/mL ? 10/09/2022 Medicina Humana - Microbiología y Parasitología 20
- 31. E-TEST ANTIBIOGRAMA CUANTITATIVO DETERMINACIÓN DE CONCENTRACIÓN INHIBITORIA MÍNIMA (MIC) 10/09/2022 Medicina Humana - Microbiología y Parasitología 21 “Tira absobente” [ATB]
- 32. ANTIBIOGRAMA CUANTITATIVO DETERMINACIÓN DE CONCENTRACIÓN INHIBITORIA MÍNIMA (MIC) 10/09/2022 Medicina Humana - Microbiología y Parasitología 22 E-TEST (Pruebaepsilométrica)
- 33. ANTIBIOGRAMA CUANTITATIVO 10/09/2022 Medicina Humana - Microbiología y Parasitología 23 DETERMINACIÓN DE CONCENTRACIÓN INHIBITORIAMÍNIMA(MIC) Varios estudios demuestran que una MIC determinada por Etest® presenta concordancia con los métodos de dilución en agar o tubo, para diferentes antimicrobianos, en general con una variación permitida de +/- 1 dilución. E-TEST (Pruebaepsilométrica)
- 34. ANTIBIOGRAMA CUANTITATIVO DETERMINACIÓN DE CONCENTRACIÓN INHIBITORIA MÍNIMA (MIC) 10/09/2022 Medicina Humana - Microbiología y Parasitología 24 E-TEST (Pruebaepsilométrica)
- 35. 10/09/2022 Medicina Humana - Microbiología y Parasitología 25
- 36. PROCEDIMIENTO 10/09/2022 Medicina Humana - Microbiología y Parasitología 26
- 37. 1. Identificación del microorganismo (género – especie) 2. Análisis de fenotipos: susceptibilidad/resistencia a) Grupos (familias) de agentes antimicrobianos b) Indicadores de resistencia a los antimicrobianos 3. Definir fenotipo a) Fenotipos comunes b) Fenotipos inusuales c) Fenotipos “imposibles” 4. Deducir mecanismos bioquímicos de resistencia 5. Importancia clínica de la resistencia 6. Redefinir categorías de identificación clínica LECTURA INTERPRETADA DEL ANTIBIOGRAMA 10/09/2022 Medicina Humana - Microbiología y Parasitología 27
- 39. REVISION
Notas del editor
- Triángulo de Davis: en él se establecen los tres elementos necesarios que se necesitan ante una infección como son Huésped, Microorganismo y Antimicrobiano
- El antibiograma es una prueba de laboratorio destinada a estudiar la susceptibilidad anti-microbiana de las bacterias aisladas a partir de muestras biológicas provenientes de los pacientes infectados con el objetivo de ayudar a establecer la terapia antibiótica más apropiada para cada caso. Se expresa en función del diametro del Halo ( De no crecimiento) formado alrededor del disco del ATB en la superficie de un medio de cultivo sembradoi con la bacteria a estudiar.
- El fenotipo de sensibilidad o de resistencia se define como el conjunto de datos obtenidos en el antibiograma para antibióticos de la misma familia o relacionados por mecanismos de actuación comunes o mecanismos de resistencia compartidos. Se clasifican en habituales, raros e imposibles18. Los primeros, fenotipos habituales, recogen los aislamientos con mecanismos de resistencia cuya presencia es epidemiológicamente normal en el medio donde se realiza el estudio de sensibilidad. Como ejemplo clásico incluiríamos la resistencia a la penicilina, la sensibilidad a la oxacilina en S. aureus por producción de penicilinasa
- Los halos de inhibición están relacionados con la “concentración inhibitoria mínima” (CIM), y es esta relación la que sirve para establecer los valores para la interpretación del antibiograma. -CIM: CONCENTRACION MINIMA INHIBITORIA): se define como la concentración más débil de un antibiótico capaz de inhibir el crecimiento bacteriano al cabo de 18 – 24 horas de incubación . - CMB ( CONCENTRAC MINIMA BACTERICIDA) :Es la menor concentración capaz de matar el 99,9% dela población bacteriana.
- Los halos de inhibición están relacionados con la “concentración inhibitoria mínima” (CIM), y es esta relación la que sirve para establecer los valores para la interpretación del antibiograma. • La CIM se define como la concentración más débil de un antibiótico capaz de inhibir el crecimiento visible de una cepa bacteriana al cabo de 18 – 24 horas de incubación .
- Microorganismo sensible (S): Categoría clínica definida para las pruebas de susceptibilidad in vitro. Implica que una infección debida a la cepa bacteriana estudiada puede ser tratada apropiadamente con la dosis de antibiótico recomendada para el tipo de infección y la especie infectante, a menos que existan contraindicaciones. • Microorganismo intermedio (I): Categoría clínica definida para las pruebas de susceptibilidad in vitro. Esta categoría incluye las cepas bacterianas que pueden ser inhibidas por concentraciones del antibiótico superiores a las obtenidas con las dosis habituales, siempre y cuando se puedan aumentar las dosis empleadas y/o que el antibiótico se concentre fisiológicamente en el tejido o lugar infectado. • Microorganismo resistente (R): Categoría clínica definida para las pruebas de susceptibilidad in vitro Las cepas bacterianas incluidas en esta categoría no son inhibidas por las concentraciones séricas del antibiótico normalmente alcanzadas con las dosis habituales del mismo, poseen comúnmente mecanismos específicos de resistencia bacteriana o la eficacia clínica del antibiótico frente a la bacteria no ha sido comprobada
- Permitir que la placa de agar Mueller-Hinton (MHA) se caliente a temperatura ambiente durante una o dos horas para que cualquier exceso de humedad se absorba dentro del medio. • Permitir que los discos de antibióticos se equilibren a la temperatura ambiente durante una o dos horas para minimizar la condensación y reducir la posibilidad de que la humedad afecte la concentración de los antibióticos. • Agite la suspensión bacteriana para asegurarse que esté bien mezclada. • Sumerja un hisopo de algodón estéril en la suspensión. Antes de retirar el hisopo remueva el exceso de líquido presionándolo contra la pared del tubo. • Aplique el hisopo contra la superficie de la placa MHA y cubra la superficie de la misma frotando de ida y vuelta de un borde al otro. Rote la placa unos 60º y repita el procedimiento. Rote nuevamente la placa 60º y frote toda la placa por tercera vez para garantizar que el inóculo sea distribuido homogéneamente. de las placas • Invierta las placas MHA y colóquelas dentro de la incubadora a 35 ± 2°C dentro de los 15 minutos posteriores a la aplicación de los discos. Lectura de las placas • Observar si las bacterias crecen alrededor de los discos impregnados con antibióticos o si existen zonas de no crecimiento denominados “halos de inhibición”. • Medir los diámetros de los halos de inhibición completa en la base de la placa (incluyendo el diámetro del disco), usando una regla o caliper. • La lectura obtenida se debe aproximar al valor entero en milímetros más cercano. • Para la lectura sostener la placa contra un fondo negro e iluminada con luz reflejada. Tener la precaución de observar la placa siguiendo una vertical directa para evitar una lectura errónea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo.
- La concentración del antibiótico disminuye a medida que se aleja del disco, y en un punto crítico determinado, la concentración de antibiótico es incapaz de inhibir el crecimiento de la bacteria estudiada. Este fenómeno determina la formación de un halo de inhibición. Aplicación de los discos de antibióticos • Colocar con una pinza los discos de antibióticos dentro de los 15 minutos siguientes a la inoculación de la placa MHA. • El diámetro de los discos según las normas de la Organización Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm. • Distribuir los discos uniformemente, de modo que estén a una distancia mínima de 24 mm de centro a centro. • Pueden aplicarse hasta 12 discos en una placa de 150 mm de diámetro o hasta 5 discos en una placa de 100 mm, para evitar la superposición de las zonas de inhibición. • Presionar cada disco aplicado para asegurar el contacto completo de éste con la superficie del agar. • No reubicar los discos una vez que estos han tocado la superficie del agar.
- • La CIM se define como la concentración más débil de un antibiótico capaz de inhibir el crecimiento bacteriano al cabo de 18 – 24 horas de incubación . - CMB: Es la menor concentración capaz de matar el 99,9% dela población bacteriana.
- • La CIM se define como la concentración más débil de un antibiótico capaz de inhibir el crecimiento bacteriano al cabo de 18 – 24 horas de incubación . CMB: Es la menor concentración capaz de matar el 99,9% dela población bacteriana. ¿Qué es la CMI? La CMI, o concentración mínima inhibitoria, es la concentración más baja (en μg/ml) de un antibiótico que inhibe el crecimiento de una determinada cepa bacteriana.
- 0.25 UG/ML ANTIBIOGRAMA
- Utiliza una tira absorbente con un gradiente conocido de concentración de antibiótico a lo largo de su longitud. Cuando la tira se coloca en la placa de agar inoculada con el organismo de prueba, el antibiótico de prueba se difunde en el medio. La MIC se registra como la concentración más baja del gradiente que inhibe el crecimiento del organismo.
- ¿Qué es un fenotipo de resistencia? El conjunto de datos del antibiograma (valores de concentración mínima inhibitoria [CMI] o halos de inhibición) y su interpretación (sensible, intermedio, resistente) se denomina fenotipo de resistencia