Este documento proporciona definiciones de términos relacionados con pruebas de toxicidad, como aclimatación, respuesta, control, ensayo preliminar, ensayo definitivo, entre otros. También describe el uso de pruebas de toxicidad para determinar factores ambientales, toxicidad de contaminantes, sensibilidad de organismos, efectividad de tratamientos de desechos y concordancia con normas de calidad de agua. Finalmente, detalla consideraciones para realizar pruebas de toxicidad aguda y crónica en mamíferos y aves, incluyendo

1. TERMINOS GENERALES
ACLIMATAR: acostumbrar a los organismos a ciertas condiciones ambientales.
RESPUESTA: medición del efecto biológico (muerte, cambios en reproducción, crecimiento)
CONTROL: organismos expuestas a agua de dilución sola o el agua natural al que están
normalmente expuestos, o a ambas.
ENSAYO PRELIMINAR: prueba destinada a establecer aproximadamente la toxicidad de una
solución.Lasconcentracionesse separanexponencialmente (1,10, 100) y la exposiciónesde 8
a 24 h.
ENSAYO DEFINITIVO: prueba diseñada para establecer la concentración a la que se produce la
reacción final buscada.
PRUEBA ESTATICA: aquella en que las soluciones y los organismos estudiados se colocan en
cámaras y se mantienen allí todo el tiempo que dura la prueba.
PRUEBA DE RECIRCULACION:pruebaestática con circulaciónde la soluciónenestudioatravés
de cámaras a fin de mantener la calidad del agua.
PRUEBA DE RENOVACION: prueba estática con recambio de parte de las soluciones a las que
están expuestos los organismos.
PRUEBA DE FLUJO CONTINUO. Prueba en la cual la solución se reemplaza continuamente
durante el tiempo que dure el bioensayo.
PRUEBA IN SITU: bioensayo que se lleva a cabo en el ecosistema de donde provienen los
organismos
Uso de las pruebas de toxicidad
Las pruebas de toxicidad son útiles paradeterminar:
1.Factores favorables y desfavorables del ambiente (O.D., T°C, pH, etc.)
2. Efectos de los factores ambientales sobrela toxicidad decontaminantes
3. Toxicidad delos contaminantes sobreuna determinada especie
4. Sensibilidad delos organismos acuáticos
5. Magnitud que ha de tener el tratamiento de los desechos para no causar efectos negativos sobre los
organismos.
6. Efectividad de estos métodos de tratamiento
7. Concordancia entre las normas decalidad deagua y los permisos de descarga.
8. Las pruebas de toxicidad aguda tienen cierto poder predictivo ( a través de un factor de
aproximación):
• 0.01 toxicidad ambiental
• 0.001 toxicidad humana
• 1x10-6 cáncer
9. Las CL50 son interpretables desde el punto de vista legal.

2. Relaciones Dosis-RespuestaCategoríaspor tiempo:
• Mamíferos/Humanos:
30 d; dosiscontinuaorepetida)
-3meses;dosiscontinuaorepetida)
Ecológicos:
• Agudo(usualmente 96h o menos;mortalidadparámetromedido)
• Crónico(> 10 % ciclo de vida;parámetrossubletales)
PRUEBAS DE TOXICIDAD EN VERTEBRADOS TERRESTRES
Los vertebrados son un grupo de animales con un esqueleto interno articulado, que
actúa como soporte del cuerpo y permite su movimiento.
«Si no fuese por la experimentación con animales no tendríamos el medicamento
"....." que ha salvado muchas vidas humanas» >> ANONIMO
AVES
Las intoxicacionessonrelativamentefrecuentesenlasavesmascotas.Debidoasumetabolismo
tan elevadolosprocesosse agravanrápidamente, lascausasmás frecuentesde intoxicaciónen
aves son:
Plomo: En las aves, tras la ingestión, el objetode plomo generalmente queda depositado
enel ventrículo,en contactocon el ácidogástrico.Aunque lassalesde plomoson bastante
insolubles, un pequeño porcentaje se disuelve y se absorbe desde el sistema
gastrointestinal
El plomo absorbido se distribuye a tejidos blandos (hígado, riñón, músculos y cerebro),
aunque el 85-90%de plomoabsorbidose almacenaenel esqueleto.Losestadosfisiológicos
que causan movilización de calcio de huesos, movilizan el plomo a la sangre. Las
alteraciones hematológicas por plomo se producen principalmente por los siguientes
mecanismos:
• Inhibiciónde la síntesis del grupo Hemo en los eritroblastos. Se afecta el enzima
porfobilinógeno sintasa.
• Alteración morfológica de los precursores de los glóbulos rojos.
• Efectos sobre los glóbulos rojos circulantes.
Zinc: La intoxicación por zinc se asocia a la ingestión de metal galvanizado o monedas. El
zincesesencial paramuchasreaccionesenzimáticas;perosuexceso,sobre todo,interfiere
en la función normal del páncreas exocrino.

3. El zincabsorbidose une a la albúminaya la globulina-Beta;se distribuye enhígado,riñón,
músculoypáncreas.Menosdel 10% del zincabsorbidose eliminaenlaorinayparte vuelve
al intestinojuntoconlasecreciónpancreática,dónde se eliminavíaheces.Lasalteraciones
se observan en el páncreas y en el ventrículo o molleja; también se produce una
disminución de la puesta y se inicia la muda.
Litte y Smith(1998) describieronunaserie de casos de anemiahemolíticasecundariaala
intoxicación por zinc en loros Amazona ventrales. En la histopatología se observaron
depósitos de hemosiderina en hígado y riñón.
Cobre: El cobre es un elementoesencial para la síntesis de la hemoglobina y de sistemas
enzimáticos.Lasfuentesde cobre máshabitualessonalgunosmaterialesde cocina,cables
eléctricos, algunas telas, material para soldar y monedas como peniques. En medicina
humana,la intoxicaciónporcobre recibe el nombre de enfermedadde Wilson;se trata de
un problema metabólico debido a una alteración en el cromosoma. Esta enfermedadha
sidotratadacon zinc,ya que poseen efectosantagónicosal cobre.Aunquenose hapodido
demostrarque el zincinhibelaacumulaciónde cobre enel hígado,síinhibela absorciónde
cobre intestinal en personas. Tanto en las personas como en los animales el cobre
absorbidose acumulaenel hígado, parte regresaal intestinovía bilisyeseliminadoenlas
heces; y parte pasa a sangre circulante y se elimina en la orina. Cuando el hígado se
sobresatura de este metal, el cobre se libera masivamente a la sangre produciendo una
hemólisis severa.
Las intoxicaciones por plomo, zinc y cobre pueden presentar una sintomatología similar e
inespecífica, derivada de una afectación básicamente renal, hepática, pancreática y de los
tejidoshematopoyéticos.Asípuede aparecerletargia,anorexia,parálisis,regurgitación,poliuria,
polidipsia, diarrea, hipoproteinemia, pérdida de peso, ataxia, ceguera, temblores de cabeza,
convulsiones, anemia, hemoglobinuria y hematuria.
Mercurio: En el caso del mercurio,laintoxicaciónenmascotasesmuyinfrecuente.Lasfuentes
son losbaterías,pinturasycomponenteseléctricos.Curiosamente el mercuriode los
termómetrosde cristal estáensuforma elemental,apenasse absorbe desde el tracto
gastrointestinal,asíque nosupone ningúnriesgo.Cuandoel mercuriose encuentraensu
formaorgánica el riesgode toxicidadeselevadísimo.Laintoxicaciónporeste metal produce
necrosisrenal enlos túbulosproximales, infertilidad,yalteracionesneurológicasenel casode
mercurioorgánico. Clínicamente se observahematuria, incluyendolaintoxicaciónporplomo
enel diagnósticodiferencial.Paraconfirmarel diagnósticoesnecesariomedir concentraciones
sanguíneas.Cantidadessuperioresensangre alassiguientesindicanintoxicación
Se incluye los datos de toxicidad aguda (DL50 oral), en miligramos por kilogramo de peso
requeridoparamataral 50%de lasavesde laboratorioexpuestas.Laespecie quese utilizacomo

4. referenciaesel patocabeciverde (Anas platyrhynchos) o“mallard”.Cuandono se reporta dato
de toxicidadpara este pato,se puede reportarpara otra especie de ave.Laclasificaciónparala
toxicidad aguda en aves utilizada se muestra en el Cuadro 1.
Cuadro 1. Clasificaciónde la toxicidad aguda en aves
Clase DL50 (mg/kg)
extrema
alta
mediana
ligera
muy ligera
< 10
10 - 100
100 - 500
500 - 2000
> 2000
EN MAMIFEROS
Prueba de toxicidad aguda
Especies animales
Algunos organismos de reglamentación exigen que se utilicen al menos dos especies, una de
ellas de roedores y la otra de no roedores.
Sexo
En al menos una de las especies se utilizarán machos y hembras.
Número de animales
En el casode losroedores,cadaunode losgruposdebecomponersede al menoscincoanimales
por sexo. En el caso de los otros animales, cada grupo debe componerse de al menos dos
animales por sexo.
Vía de administración
Normalmente,lavía oral es suficiente,puesse trata de la vía de administraciónclínicanormal.
Sin embargo, algunos organismos de reglamentación proponen además la vía parenteral.
En loscasos enque se propone administrarlapreparaciónherbariaaunsujetohumanoporvía
parenteral, puede bastar con utilizar sólo esta vía para la prueba con animales.
Dosis
En roedores, se utiliza un número suficiente de dosis distintas para determinar la dosis letal
aproximada. En otros animales, se utilizará un número suficiente de dosis distintas para la
observación de signos manifiestos de toxicidad.
Frecuencia de administración
Se administrará la sustancia de prueba en una o más dosis durante un periodo de 24 horas.
Observación

5. Se observarán los signos de toxicidad, así como su gravedad, aparición, progresión y
reversibilidad y se registrarán en relación con la dosis y el tiempo. Como norma general, los
animales serán observados durante al menos siete a catorce días.
Se practicará la autopsia de los animales que mueran durante el periodo de observación y
también de los roedores que sobrevivan al final del periodo de observación.
En caso necesario,se procederáa un examenhistopatológicode cualquierórganoo tejidoque
revele cambios macroscópicos en la autopsia.
Prueba de toxicidad a largo plazo
Especies animales
Muchos organismos de reglamentación exigen que se utilicen al menos dos especies, una de
roedores y otra de no roedores.
Sexo
Normalmente, se utilizará el mismo número de animales machos y hembras.
Número de animales
En el caso de losroedores,cada grupoconstará de al menosdiezmachosy diezhembras;enel
de los otros animales, de al menos tres machos y tres hembras.
Cuando se programen exámenes intermedios, el número de animales se aumentará en
consecuencia.
Vía de administración
Normalmente se utilizará la vía de administración clínica prevista.
Periodo de administración
El periodo de administración de la sustancia de prueba dependerá del periodo previsto de
utilización clínica. El periodode administración del estudio de toxicidad puede variar de país a
país, según su reglamentación particular.
El siguiente cuadro refleja los diversos periodos de administración:
Periodoprevistode utilizaciónclínica Periodode administraciónpara el estudio
de toxicidad
Administraciónúnicaorepetidadurante menos
de una semana
Dos semanasa unmes
Administraciónrepetida,entre unaycuatro
semanas
Cuatro semanasa tresmeses
Administraciónrepetida,entre unoyseismeses Tres a seismeses
Administraciónrepetidaalargoplazodurante
más de seismeses
Nueve adoce meses
Por logeneral,se administrarálasustanciade pruebasiete días a la semana.En cada resultado
se deben registrar los periodos de administración para el estudio de toxicidad.

6. Dosis
Se deben utilizar grupos que reciban al menos tres dosis diferentes.
Una de las dosis no debe causar cambios tóxicos (dosis sin efecto) y se debe incluir una dosis
que produzca efectos tóxicos manifiestos. En este intervalo, la adición de al menos una dosis
intermedia puede aumentar la posibilidad de observar una relación dosis-respuesta en las
manifestacionestóxicas.Entodoslosestudiosse incluiráungrupotestigovehículode animales
de prueba.
Observaciones y exámenes
Se harán observaciones y exámenes de los siguientes elementos (de 1 a 6):
1. Signos generales, peso corporal e ingesta de alimento y agua
En todoslos animalesde experimentaciónse observarándiariamente lossignosgeneralesyse
medirá periódicamente el peso corporal y la ingesta de alimento. En caso de que sea útil, se
determinarátambiénlaingestade agua.La frecuenciade lasmedicionesserá,normalmente,la
siguiente:
Peso corporal: antes de iniciar la administración del medicamento, al menos una vez a la
semana durante los tres primeros meses de administración y al menos una vez cada cuatro
semanas posteriormente.
Ingestade alimento:antesde iniciarla administracióndel medicamento,al menosunaveza
la semana durante los tres primeros meses de administración y al menos una vez cada cuatro
semanas posteriormente. Si se administra la sustancia de la prueba mezclada con el alimento,
se medirá la ingesta una vez a la semana.
2. Análisis hematológico
En el caso de los roedores, se tomarán muestras de sangre antes de la autopsia; en el de los
otros animales,antesde iniciarla administraciónde medicamentos,al menosunavez durante
el periodo de administración (en el caso de estudios que duren más de un mes) y antes de la
autopsia.
Tanto en los análisis hematológicos como en los bioquímicos, es conveniente incluir el mayor
número posible de parámetros.
3. Pruebas de las funciones renal y hepática
Como el hígado y los riñones son los órganos habituales del metabolismo y la excreción,los
agentespotencialmentetóxicoslesafectanfácilmente;se vigilaránsusfuncionesenlosestudios
de toxicidad a largo plazo.
En el caso de los roedores, se seleccionará un número fijo de animales de cada grupo y se
efectuaráunanálisisde orinaantesde iniciarlaadministracióndelmedicamentoyal menosuna
vez durante el periodo de administración.
4. Pruebas de otras funciones
Si procede, se efectuarán pruebas visuales y auditivas y un encefalograma. En el caso de los
roedores,se procederáaun examenoftalmológicode unnúmerodeterminadode animalesde

7. cada uno de los grupos al menos una vez durante el periodo de administración; en los no
roedores, todos los animales serán examinados antes de iniciar la administración del
medicamento y al menos una vez durante el periodo de administración.
5. Se procederá lo antes posible a la autopsia de los animales cuya muerte se descubra en el
examen.Se haráunexamenmacroscópico de órganosytejidos.Además,cuandoseaposible,se
harán medicionesdel pesode losórganosy exámeneshistopatológicosparaintentardescubrir
la causa de la muerte yla naturaleza(gravedadogrado) de los cambios toxicológicos habidos.
6. Para obtener la mayor cantidad posible de información útil durante el periodo de
administración, se sacrificarán todos los animales moribundos en lugar de dejarlos morir.
Previamente se registrarán las observaciones clínicas y recogerán muestras de sangre para los
análisishematológicoybioquímicode lasangre.Al hacerlaautopsia,se registraránlosdatosdel
examenmacroscópicode los órganos y los tejidos,se anotará el peso de losórganos y se hará
unexamenhistopatológicocompletoparaintentarcaracterizarla naturaleza(gravedadogrado)
de todos los cambios tóxicos.
Se practicará la autopsiade todoslossupervivientesal final del periodode administraciónodel
periodode recuperacióndespuésde tomarmuestrasde sangre paralosanálisishematológicoy
bioquímico de la sangre; se efectuarán exámenesmacroscópicos de losórganos y los tejidos y
se medirá el peso de los órganos. Si se descubren cambiosen el examenmacroscópico de sus
órganos y tejidos o si el grupo que recibió la dosis superior revela cambios importantes, se
realizarán exámenes histopatológicos de los órganos y los tejidos de los animales que reciban
dosisinferiores.Porotraparte,el examenhistopatológicodetodoslosroedoresaumentaráaún
más las posibilidades de descubrir toxicidad.
Recuperación tras los efectos tóxicos
Para investigar la recuperación respecto de los cambios tóxicos, se examinarán los animales a
losque se permitavivirdurante diferenteslapsosdespuésdelfindelperiodode administración
de la sustancia de prueba.
PRUEBAS EXPERMIENTALES
El métodoexperimentalconanimalesmáscomúnenestaárea,conocidocomoel testde Draize,
fue puesto en práctica desde la década de 1940. En principio, a un conejo se le añade una
sustancia de ensayo, por goteo, bajo el párpado del ojo, y se espera a ver qué sucede con la
córnea.Es necesarioaclararque en muchoscasos la córnea del animal se vuelve turbiayel ojo
pierde su función
Si no se observanadarelevante enlacórneayla membranamucosa,la pruebacontinúa.Estas
pruebas se llevanacabo enun períodode 24 horas.Durante este tiempolacabezadel conejo
esfijadafirmemente conuncollarespecial paraque el animal nopuedafrotarse el ojocon su
pata, y para evitarque se derrame ladroga.
Durante la pruebase comparael ojode pruebacon el ojosano,para obtenerunresultadomás
fidedigno. Si la córnea se vuelve turbia, entonces el animal es observado por 21 días. Si se
determinan daños irreversibles por causa de la aplicación de la droga, el animal es sacrificado
inmediatamente.

8. Pero eso no es todo! Si la prueba dio resultados negativos, el experimento se repite en un
segundoconejo.Si el resultadoexperimental fue leve yreversible,entoncesse utilizauntercer
conejo.Nohace faltadecirque al final de cadapruebatodoslosanimalessonsacrificados,pues
reutilizarlos para otras pruebas no suele ser muy viable.
Además,no olvidemosque tambiénse utilizanotrosanimalesparaestosexperimentos:gatos,
perros, conejos, ratas, cobayas, e incluso monos. La prueba de toxicidadse aplica sobre la piel
afeitada del animal.
Los fabricantes que no utilizan animales de experimentación son conocidos como parte de la
lista blanca o ética. Esto significa que crean solamente productos vegetales, o que se emplean
métodosalternativos,ensayadossinel usode animales.Lospuedesidentificarporel logode un
conejo en un círculo, y las palabras «No testado en animales», «amigable con la naturaleza»
etc…