tecnicas moleculares

1. César Eduardo Agundis Torres
Sela Patricia Camacho Rodríguez
Perla Adilene Cruz Valdez
Daniela Colmenares Arias
Fernanda Quezada del Ángel
Kathia Fernanda López Pérez
María Isabel Sánchez Díaz
2° “C” M.C.

2. FISH (Hibridación in situ con fluorescencia)
• Requiere saber lo que se busca
• Tener la sonda adecuada
Otras técnicas:
• Requieren equipos muy sofisticados y apoyo
informático
SKY (Cariotipo espectral multicolor)
CGH (Hibridación Genómica Comparada)

3. Se puede realizar en
núcleos interfásicos o
en división
Se suelen utilizar
simultáneamente
distintas sondas,
marcadas con
flurorocromos de
diferentes colores :
•Rojo: rodamina
•Verde: fluoresceína
•Azul: dapi

5. Tipos de sondas
 Especificas de regiones: Sondas teloméricas
Sondas centroméricas
 Especificas de cromosomas: Pintados cromosómicos
 Especificas de secuencia: Sondas únicas, Sondas génicas

6. Sondas teloméricas
Especificas de regiones

7. Sondas centroméricas
Repeticiones Alfoides:
(secuencias repetidas del
centrómero que son
específicas de cromosomas)
Útiles para localizar
cromosomas concretos
Centrómero del
cromosoma 21

8. Pintados
cromosómicos
Especificas de cromosomas
Pintan completamente el
cromosoma elegido
útiles en la detección
de reorganizaciones
cromosómicas
t (2;8)
cromosoma 8 rosa
cromosoma 2 verde

9. Pintados cromosómicos
Especificas de cromosomas
pintado del cromosoma Y
en rosa, el resto con dapi

10. Pintado del
cromosoma X
Pintados cromosómicos
Especificas de cromosomas

11. Pintados cromosómicos
Especificas de cromosomas
cromosoma X rosa
cromosoma Y verde

12. Pintados cromosómicos
Especificas de cromosomas
Pintado del
cromosoma 22

13. Síndrome de Williams
(del 7q11.23)
7q11.23 rojo, centrómero
cromosoma 7 verde
Sondas específicas
de secuencia
Dirigidas a una región
concreta
útiles para detectar
síndromes por
microdelección

15. Cariotipo Espectral Multicolor (SKY)
• Hibridación in situ con sondas específicas de
cada cromosoma (El aparato es capaz de
diferenciar 24 colores).
• Identificación unívoca del material cromosómico
reordenado en translocaciones y marcadores
complejos

18.  Es una técnica cuyo objetivo es
obtener una gran cantidad de copias
de un fragmento de ADN de interés,
partiendo de una pequeña muestra
 Con la amplificación resulta mas fácil
identificar virus o bacterias causantes
de enfermedades , identificar
personas ,o hacer investigación
científica sobre el ADN amplificado.

31.  Permite identificar regiones específicas de
ADN que han sido fragmentadas por una
enzima de restricción.

32. 1. Extracción del ADN
2. Digestión del ADN con una endonucleasa de restricción
3. Electroforesis en gel de agarosa
4. Preparación de un ensayo de Southern ("Southern blot")
5. Hibridación con sonda radioactiva
6. Detección de los RFLPs mediante autorradiografía
7. Reensayar el resultado del Southern con sondas adicionales

33.  El producto del Southern puede ser
hibridado con una sonda de ADN marcada
radiactivamente específica para el gen o
región del ADN objeto de estudio

36.  El procedimiento
general comienza con
la extracción del RNA
total de una muestra de
tejido homogenizado.
 Las muestras de ARN
son entonces separadas
por electroforesis en
gel.
 Dada la fragilidad de
los geles y la
incapacidad de las
sondas para penetrar
en la matriz, las
muestras de RNA,
separadas por tamaño
tras la electroforesis,
serán transferidas a
una membrana de
Nailon por medio de
capilaridad o un
sistema de
transferencia al vacío.
 Los sistemas de
capilaridad iónica se
utilizan para
transferir el ARN
desde un gel de
electroforesis a una
membrana de
Northern blot.
 Después del marcaje
de la sonda, ésta se
hibrida con el RNA
en la membrana.
 Finalmente, la
membrana debe de
lavarse para
asegurar que la
sonda se ha unido
de forma específica
y para evitar ruido
de fondo en las
señales emitidas por
la misma.

37.  El northern Blot permite
observar un patrón particular
de expresión genética entre
tejidos, órganos, estadios del
desarrollo, niveles de estrés
ambiental, infecciones
causadas por patógenos y
durante el curso del
tratamiento de las mismas.
 Esta técnica se ha utilizado
para mostrar la sobreexpresión
de oncogenes y la
desregulación de genes
supresores tumorales en
células cancerosas cuando son
comparadas con tejidos
normales.
 Los patrones de expresión
obtenidos nos ayudan a conocer
las funciones de los genes. Desde
que el RNA se separó por su
tamaño, las sondas contra el
mismo pueden darnos una idea
de su tamaño, sugerir ayuste
alternativo, o motivos repetidos
en la secuencia.
 La variación en el tamaño del
producto de un gen puede
además indicarnos delecciones o
errores en el proceso de
transcripción.
 Alterando la sonda podemos
conocer la secuencia e incluso
determinar que región del RNA
ha sido deleccionada.

39. Es una técnica que se utiliza para identificar y
localizar proteínas con base en su capacidad
para unirse a anticuerpos específicos.

40. Proteína Obtenida
Se coloca
Gel de poliacrilamida
En forma
Laminas delgadas
Se efectúa
ELECTROFORESIS
Donde

41. Proteínas de menor peso
(p17, p24)
Proteínas de mayor peso
Migran mas lejos Se mantienen cerca
al lugar de deposito

42. Después de transferirlo a una tira de
nitrocelulosa y haber pasado por unos
procesos de incubación revelara una banda
coloreada en las zonas correspondientes a los
Ac específicos.

43. Positivo
Negativo
Indeterminado

44. Requiere al menos de dos bandas de
envoltura, que se considera la más
específica.
Se obtiene por la ausencia de bandas.
Aparece algunas bandas pero no
para considerarse como positivo.

45. A. Principal desventaja es el elevado precio, que lo
hace inviable como prueba de confirmación en
algunos países.
B. La variabilidad reaccional que existe en las
bandas según el tipo de ensayo, el tipo de las
muestras, las condiciones técnicas y la
subjetividad de la interpretación de la intensidad
de las bandas, que siempre depende del
observador.

46. Detección de mutaciones puntuales: como delecciones,
inversiones cromosómicas, entre otras.
Diagnostico Prenatal: como enfermedades genéticas de
una forma temprana
Diagnostico de infecciones por virus, bacterias y parásitos.
Oncogenes