1. Tema 2: Estructura y Función de las Proteínas (5/5) Prof. Vanessa Miguel [email_address] @bioquitips Noviembre 2011 Universidad Central de Venezuela Facultad de Medicina Escuela de Medicina Luis Razetti Cátedra de Bioquímica

2. ¿Cómo se estudian las proteínas?

4. Aislando fracciones subcelulares

8. Purificación de proteínas

14. Aplicación de fuerza centrífuga

17. Fundamento de la cromatografía Muestra: tres componentes mezclados Fase móvil Fase estacionaria Se hace fluir una fase móvil sobre la estacionaria Dependiendo de la afinidad relativa por ambas fases, los componentes de la mezcla se separan Se dispone una mezcla sobre una fase estacionaria

20. Exclusión Molecular A: Pasa s ólo por fuera de las perlas Menos recorrido, sale primero B: Pasa por dentro y por fuera de las perlas Mayor recorrido, Sale después Resina porosa Fase estacionaria Amortiguador Fase m óvil Resina B A

21. Exclusión molecular

22. Volumen de exclusión Proteínas de gran tamaño no penetran los poros permaneciendo en el volumen de exclusión de la columna Vo

23. Exclusión Molecular 1 . La column a se equilibra con el buffer de corrida 2. Aplicación de la muestra ( 0.5 - 5% volumen de columna) 3. Elu c i ó n. .

26. Cromatografía de intercambio iónico

29. Intercambiadores aniónicos

30. Intercambiadores catiónicos

32. Cromatografía de intercambio iónico Retenidas por la resina Para separar A de la resina es necesario cambiar el pH por arriba del pI Resina carga (-) Atrae cationes A: (+) B: (-)

33. - Proteínas adsorbidas al intercambiador iónico A baja concentración de sal, se desprenden las proteínas menos electronegativas A mayor concentración de sal se desprenden las proteínas más electronegativas + + + + + + + + + - - - - - - - - - - + + + + + + + + + - - - - - - - - - - - - - - - - - - - + + + + + + + + + - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -

36. 1. Se realiza sobre un soporte sólido o semisólido, para minimizar efectos de difusión 2. Se somete el conjunto a un campo eléctrico constante, a un pH fijo; las proteínas migran conforme a su carga eléctrica 3. Terminada la electroforesis, las proteínas se tiñen con un colorante adecuado (ej., Azul de Coomassie) Muestra + - Ánodo Cátodo

41. Electroforesis

46. Electroforesis

47. Electroforesis bidimensional