1. Expression of trisomic proteins in
Down syndrome model systems
Claire Spellman, Mahiuddin Ahmed , Daphne Dubacha, Katheleen J. Gardiner.
Alexander Betancur
Sara Sofía Villegas Molina
III Semester
2. Introduction
Down syndrome is a naturally occurring
chromosomal arrangement that has
always been a part of the human
condition, being universally present
across racial, gender or socioeconomic
lines, and affecting approximately 1 in
800 live births, although there is
considerable variation worldwide.
Down syndrome usually causes varying
degrees of intellectual and physical
disability and associated medical issues
3. Introduction
genetic damage caused by a
triplication of genetic material for
the chromosome 21
neurological diseases at present,
and have a cardiac phenotype
similar to typical Mongoloid
4. trisomy 21
today there are three types
of trisomy
in error in the
5% has its origin in an
distribution of genetic
existing additional
material that occurs at
genetic contribution in
the moment of
one of the parents, but
fertilization or the first
attached to another
cell division
chromosome
5% present mosaicism, ie the body cells
appear with trisomy 21 and others are
normal, the disorder occurs in advanced
stages of cell division
7. Relationship
LCL lymphocytes
Antibodies
Search anomalies (proteins)
(abnormalities)
chromosomal
See alterations down
trisomies
syndrome
8. Objetive
This study aims to study the genes overexpressed in
trisomy effects, especially at the protein level so
relied on lymphoblastic cell line and expression of
antibodies to thereby provide resources for further
investigation of the molecular basis of intellectual
disability and phenotypic factors in the DS
9. Materiales y Métodos
LCL
en las líneas celulares se utilizaron 3 controles y 3 DS.
Todas las líneas celulares se obtuvieron de individuos
entre los 24 y 41 años.
En dos de las tres líneas todos eran hombres.
Luego las cell se cultivaron en condiciones
estándares, se recogieron se lisaron y se preparo el
buffer.
10. Materiales y Métodos
Ratón y el tejido cerebral:
Los cerebros se congelaron en nitrógeno liquido
Se les hizo control a los machos con edades entre los 7 y 8
meses
Luego se lisan las proteínas para obtener el buffer.
11. Materiales y Métodos
Anticuerpos primarios:
Los anticuerpos van dirigidos al
HSA21 (20)
Luego se estudia con
profundidad 6 anticuerpos
sobre el brazo largo del
cromosoma 21 HSA21
12. Materiales y Métodos
Western blotting
Se determina 20 microorganismos de proteínas lisadas
estandarizadas antes por el del intervalo lineal de
detección de anticuerpos
En geles SDS-PAGE se separaran a 170 voltios por 2. ½
horas
Luego de la electroforesis se pasa a la membrana
Luego las membranas se bloquean con tris
Se incuba durante toda la noche a 4 grados centígrados
con anticuerpos primarios
13. Materiales y Métodos
la detecciones de los anticuerpos primarios se hizo
con fosfatasa alcalina.
Se detectaron señales con quimioluminiscencia.
Se despojan las membranas.
Se reprobaron con anticuerpos.
Luego se determino la expresión de proteínas en la
trisomía Vs controles.
14. Materiales y Métodos
Bloqueo péptido:
Los péptidos se incubaron a una concentración final de 1 mg / ml, junto
con anticuerpo primario en 5% (w / v) de leche desnatada seca en TBST
durante 1 hora a temperatura ambiente.
Las membranas que contienen lisados de control LCL o el control del
ratón se incubaron con el anticuerpo primario ± péptido a 4 ° C durante
la noche.
Tratamientos secundarios de anticuerpos, lavados y detección de señal
Se llevaron a cabo como se describió anteriormente por Western Blot.
15. RESULTADOS
LCL ( derivados de
controles de
pacientes con SD)
Corteza de 2
populares modelos
de ratones:
• Ts65dn
• Tc1
16. Tc1
• Un cromosoma humano 21
Dentro de los
tejidos
• Permite que se segregue libremente
la HSA21 (96%) Especies de
ratones
• 3 deleciones internas 40 genes que codifican
proteínas
Elimina la expresión de
• Gen APP proteínas
Tc1 es efectivamente trisómico para
aproximadamente 120 H2SA1 de
ratones (Genes ortólogos)
17. 1.Validación de anticuerpos
Se ensayaron los anticuerpos con 20 proteínas
7 proteínas
detectaron
• 12 anticuerpos detectaron bandas del tamaño bandas
esperado en LCL correspondiente
s a la corteza del
ratón
• 8 anticuerpos detectaron bandas del
tamaño esperado solo en corteza de ratón.
18.
19. • Conjunto de anticuerpos detectaron otras
bandas del tamaño correcto (Bandas
adicionales) • Isoformas
• Modificaciones post-
transducción
• Reactividad cruzada
Anticuerpos contra secuencias
Solo se detectaron bandas en peptídicas humanas:
corteza del ratón mas no en LCL
humanos. -Péptido bloqueo con 8 AC.
-Baja expresión
-No expresión -Péptida antigénico con
secuencias de ortólogos para las
20 proteínas
20. • ZNF294, SIM2, ADARB1 Solo difieren 0, 1 y 3 aa
• Donson, SH3BGR, PRMT Tienen menores identidades
globales ( 23-60 aa)
• Bloqueos de 8 anticuerpos detectaron los objetivos
correctos
• 6 de 8 proteínas se expresan en el cerebro del ratón
22. DISCUSSION
• The Tc1 model, expression at the RNA level was available only
for whole embryo (E14.5) and only for the human gene.
• Most DS expression studies have focused on RNA analysis,
Maier and because RNA levels are not well correlated with protein
Schwanhä- levels .
usse
• Two RNA datasets available for DS LCLs
Aït Yahya-
Graison
23. CONCLUSIONS
• Increases in trisomy are relative to 100% for the respective
controls.
• A little more in proteins with expression in LCLs like mouse
cortex I shows high levels of DS.
• Between sequences of human antigens and mouse protein
there is reactivity of antibodies.
• Antigenic peptide blocked detected the correct objetive.
24. MAPAS
SINDROME DE DOWN John Langdon Down
Error en la meiosis
Trisomía del cromosoma 21
Región critica del cromosoma (DSCR)
Retardo mental y rasgos característicos
5 millones de PB y 33 genes
Estudio mediante ratones
Para verificar la expresión de
proteínas trisómicas
Sara Villegas Molina
