Dx Diagnóstico Reumatología

1. Una mirada al diagnóstico de
laboratorio de las enfermedades
autoinmunes
Hospital de Especialidades CMN siglo XXI
Laboratorio Central de Análisis Clínicos
Cristopher Luna Bañuelos

2. INDICE
1. INTRODUCCIÓN
2. DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO PARA UNA
EVALUACION INICIAL
3. INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA

3. Introducción
El sistema inmunitario protege al organismo,
contra infecciones por microorganismo, al
detectarlos y eliminarlos, limita el crecimiento
de ciertas neoplasias, y elimina las células . Debe
distinguir de forma fiable entre moléculas
propias y ajenas. Cualquier trastorno en este
proceso puede llevar a la aparición de
autoinmunidad.

4. Las enfermedades autoinmunes (EA) son
provocadas por un daño intrínseco del sistema
inmunológico como consecuencia de la pérdida
de la autotolerancia que condiciona respuestas
anormales frente estructuras propias, lo que
genera un daño tisular que perdura en el
tiempo. En este caso, el sistema se conviertes en
el agresor y ataca partes del cuerpo en vez de
protegerlo.

5. Las causas son multifactoriales y la
predisposición genética es poligénica, lo que
provoca proteínas diferentes en las células
inmunológicamente activas o en las orgánicas.
La mayor contribución se debe a los genes del
sistema principal de histocompatibilidad ya que
estos genes pueden influir en la selección de los
linfocitos autorreactivos y en el desarrollo de la
autotolerancia.

6. Las influencias ambientales, principalmente
causadas por infecciones, pueden predisponer
para la autoinmunidad a través de varios
mecanismos, entre ellos la estimulación de los
coestimuladores en los tejidos y las reacciones
cruzadas entre antígenos microbianos y
autoantígenos frente a anticuerpos, al
convertirlos en auto-anticuerpos.

7. Las Enfermedades autoinmunes se
clasifican de acuerdo a su extensión en:
1) Enfermedades Órgano específico con auto-anticuerpos
órgano específicos, ejemplo: La enfermedad de
Hashimoto.
2) Enfermedades órgano específico con auto-anticuerpos
no órgano específicos, ejemplo: La
cirrosis biliar primaria y
3) Enfermedades no-órgano específico o enfermedades
autoinmunes sistémicas donde el proceso puede afectar
varios órganos, ejemplo: Lupus Eritematoso Sistémico.

8. Actualmente, el apoyo por el laboratorio para el
diagnóstico de las enfermedades autoinmunes
consiste en un gran numero de técnicas que permiten
tanto identificar como confirmar el o los anticuerpo(s)
específificos reconocidos. Además, este tipo de
técnicas han evolucionado de manera importante en
las úlltimas décadas, ya que se han desarrollado
pruebas con mayor especificidad y sensibilidad.

9. DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO PARA
UNA EVALUACIÓN INICIAL
Las alteraciones más comunes encontradas en las pruebas
iniciales de laboratorio, que en gran medida dependen del tipo
de EA que afecta al paciente, son:
La anemia normocítica-normocrómica,
la
trombocitopenia, la leucopenia,
o ambas, por ejemplo, en los
pacientes con LES.
Alteraciones en enzimas
órgano-específicas o en
procesos metabólicos, como
son: los niveles elevados de
transaminasas, bilirrubina,
proteínas séricas totales.

10. Coagulogramas alterados por incremento del
tiempo de tromboplastina activada parcial,
tiempo de protrombina, o ambos, como en el
síndrome de anticuerpos anti-fosfolípidos (aFL).
El incremento de los niveles en enzimas
musculares como la creatinina cinasa (CK), alanino
aminotransferasa (ALT o TGP) y aspartato
aminotransferasa (AST o TGO), que se pueden
encontrar en las miopatías inflamatorias
autoinmunes, como la dermatomiositis, PM y la
miositis con cuerpos de inclusión (MCI).
McPherson RA, Pincus MR. Henry's clinical diagnosis and management by laboratory
methods. 21st ed. Philadelphia: WB Saunders; 2010.

11. Los niveles de proteínas séricas
sirven para pesquisar los
incrementos anormales en los
niveles de inmunoglobulinas.
Los niveles de proteínas séricas
sirven para pesquisar los
incrementos anormales en los
niveles de inmunoglobulinas.
Seshan SV, Jennette JC. Renal disease in systemic lupus erythematosus with emphasis
on classification of lupus glomerulonephritis. Arch Pathol Lab Med. 2009.

12. En los análisis de orina se observan alteraciones
asociadas a daño renal, como proteinuria,
hematuria o sedimentos activos (leucocitos o
eritrocitos), como en la glomerulonefritis y la
nefritis intersticial.
Seshan SV, Jennette JC. Renal disease in systemic lupus erythematosus with emphasis
on classification of lupus glomerulonephritis. Arch Pathol Lab Med. 2009.

13. Los Autoanticuerpos
Las pruebas serológicas para detectar AA tienen
en su contra la presencia de AA en personas
sanas y en pacientes sin EA conocidas y la
existencia de métodos de laboratorio
La presencia de AA en un paciente por si sola no
significa el diagnóstico de un EA, pero
acompañada de los signos y síntomas asociados
ayuda a llegar al diagnóstico definitivo y tienen
una importancia crucial.
imperfectos.

14. Los anticuerpos reconocen :
Anticuerpos
órgano
específicos:
Anticuerpos
antitiroideos.
Antígenos
localizados en el
núcleo:
Anticuerpos
antinucleares.
Antígenos del
citoplasma o de
las membranas
celulares.
Proteínas
nucleares no
histonas.

15. PRINCIPALES AUTOANTICUERPOS EN REUMATOLOGÍA
GRUPOS ESTRUCTURAS ANTIGÉNICAS AUTOANTICUERPOS
A. Factor reumatoideo Fragmento Fc de IgG Ig anti IgG (generalmente IgM)
B. Anticuerpos
antinucleares
1) Nucleosoma
Anti ADN
Anti histonas
Anti DPN o complejo ADN -Histona (fenómeno LE)
2) Proteínas no histonas asociadas al ADN
Anticentrómero
Anti Scl 70
Anti Ku
Antiláminas nucleares
3) Proteínas no histonas asociadas al ARN
Anti Sm
Anti U1 RNP
Anti U2 RNP
Anti-hm RNP
Anti Ro/SSA
Anti La/SSB
Anti Jo 1
4) Nucléolos Antinucleolares
C. Anticuerpos anticitoplasma
de neutrófilo (ANCA)
Gránulos azurófilos de los neutrófilos
Antiproteasa serina y otros (C-ANCA)
Antimieloperoxidasa
y otros (P-ANCA)
D.Anticuerpos antifosfolípidos Fosfolípidos
Anticardiolipinas
Anticoagulante lúpico
Reaginas causantes de serología luética falsamente
positiva.

16. GRUPOS AUTOANTICUERPOS ENFERMEDADES
A. Factor reumatoideo IgM anti IgG
Artritis reumatoidea (AR) a títulos altos /
Conectivopatías
Vasculitis
B. Anticuerpos anti- nucleares Anti ADN nativo Lupus Eritematoso Sistémico (LES)
Anti Histonas
LES inducido por fármacos / LES / AR / Artritis crónica
juvenil
Anti RNP Enfermedad mixta del tejido conectivo (EMTC) / LES
Anti SM LES
Anti RO/SSA
Síndrome de Sjögren / LES / Lupus neonatal
LES cutáneo subagudo / LES asociado a déficit de
Complemento
Anti LA/SSB Síndrome de Sjögren / LES
Anti SCL 70 Esclerodermia difusa
Anti centrómero Esclerodermia forma CREST
Anti JO 1 Polimiositis (PM) con enf. pulmonar intersticial
Antinucléolo Esclerodermia
C. Anticuerpos
anticitoplasma
de neutrófilos
C -ANCA
P-ANCA
Predictivo en Granulomatosis de Wegener (GW)
Predictivo en otras vasculitis ANCA positivos
D. Anticuerpos
Antifosfolípidos
Anticoagulante Lúpico Anticardiolipina
Anti U1 RNP
Síndrome antifosfolípido primario / LES
EMTC / LES

17. Correlación clínica de los
autoanticuerpos
FACTOR REUMATOIDE
(FR)
En general se trata de una IgM anti IgG.
Su principal indicación es para diagnóstico de AR.
Es un anticuerpo poliespecífico que puede activar el complemento y
que puede reaccionar con diferentes determinantes antigénicos del
fragmento Fc de la IgG
Con neoantígenos formados por la IgG en inmunocomplejos
Con antígenos nucleares

18. Se detecta por pruebas:
De aglutinación
Con glóbulos rojos de carnero
sensibilizados (Waaler-Rose) que
es de menor sensibilidad.
Métodos de detección
cuantitativos.
Aglutinación del Látex: donde se
usa látex como soporte de la IgG
de conejo.

19. Las AR seropositivas tienen con mayor
frecuencia:
Nódulos reumatoideos.
Vasculitis.
Afectación pulmonar.
Niveles disminuidos de complemento sérico.
Aumento de inmunocomplejos circulantes.

20. Las enfermedades reumáticas con FR
usualmente negativo son:
Osteoartosis
Polimialgia reumática
Enfermedad por depósito de
cristales
Enfermedad de Lyme
Amiloidosis
Enfermedad de tejidos blandos

21. ANTICUERPOS ANTIPEPTIDO
CITRULINADO
Es especialmente importante en la Artritis Reumatoide
(AR), en la que se han producido avances significativos en
el tratamiento, con mejores resultados dependiendo de la
precocidad del diagnóstico. El descubrimiento de los
anticuerpos anti- péptido citrulinado cíclico o anti-CCP ha
marcado un gran avance en este sentido. Éstos son, a la
fecha, los anticuerpos más específicos identificados para
AR y la precocidad de su aparición en los enfermos hace
hoy en día su uso casi rutinario.
Van Venrooij WJ, Zendman AJ, Pruijn GJ. Autoantibodies to citrullinated antigens in (early)
rheumatoid arthritis. Autoimmun Rev 2006; 6(1):37-41.

22. La citrulinación no es un evento específico de la
membrana sinovial, sino que se puede ver en diversos
tejidos asociada a inflamación, como en músculos de
pacientes con polimiositis, tejido colónico en pacientes
con enfermedades inflamatorias intestinales y amígdalas
en pacientes con tonsilitis crónica.
En cambio, es específica la respuesta humoral a la citrulinación,
con producción de autoanticuerpos sólo en AR. Estos
anticuerpos serían producidos localmente por células
plasmáticas contra proteínas citrulinadas de la sinovial
inflamada.
Caspi D, et al. Synovial fluid levels of anti-cyclic citrullinated peptide anti- bodies and IgA
rheumatoid factor in rheumatoid arthritis, psoriatic arthri- tis, and osteoarthritis. Arthritis
Rheum 2006; 55(1):53-6.

23. La citrulinación no es un evento específico de la
membrana sinovial, sino que se puede ver en diversos
tejidos asociada a inflamación, como en músculos de
pacientes con polimiositis, tejido colónico en pacientes
con enfermedades inflamatorias intestinales y
amígdalas en pacientes con tonsilitis crónica.
En cambio, es específica la respuesta humoral a la
citrulinación, con producción de autoanticuerpos sólo en AR.
Estos anticuerpos serían producidos localmente por células
plasmáticas contra proteínas citrulinadas de la sinovial
inflamada.
Caspi D, et al. Synovial fluid levels of anti-cyclic citrullinated peptide anti- bodies and IgA
rheumatoid factor in rheumatoid arthritis, psoriatic arthri- tis, and osteoarthritis. Arthritis
Rheum 2006; 55(1):53-6.

24. Estos anticuerpos se pueden encontrar tanto en
líquido sinovial como en la sangre; los valores en
ambos fluidos se correlacionarían.
Se le ha atribuido a la citrulinación un papel
patogénico, vinculándola al epítope compartido
del HLA. En la presentación antigénica a las
células T la presencia de alelos HLA-DRB1
confiere especial susceptibilidad para el
desarrollo de la AR.

25. Los resultados se expresan en unidades/mililitro
(U/mL), y los valores de corte dependen del kit
usado.
En aquellos de mayor uso en nuestro país, se
considera positivo sobre 25 U/mL y
definitivamente positivo sobre 50 U/mL, por lo
que el rango entre 25 y 50 U/mL debe ser
interpretado por el médico en el contexto clínico
del paciente.

26. Las modificaciones postraduccionales (MPT) son
cambios químicos que sufren las proteínas
después de ser sintetizadas. Una de las MPT es
la citrulinación (conversión del residuo arginina
a citrulina), la cual es catalizada por la enzima
peptidil arginina deiminasa (PAD).
Dentro de los procesos fisiológicos, se incluye la diferenciación
terminal de células epiteliales, la regulación en la expresión de
genes y la apoptosis; en tanto que en los procesos patológicos,
las proteínas citrulinadas se han relacionado con la progresión
de la enfermedad en AR, esclerosis múltiple y Alzheimer, entre
otros.

27. La conversión de arginina en citrulina es capaz
de activar la respuesta inmune. Dicha
conversión da como resultado un cambio en la
carga del aminoácido.
Trabajos posteriores mostraron que tanto la
cadena alfa como la beta de la fibrina citrulinada
son los antígenos reconocidos por los
anticuerpos APC y que están presentes en
pacientes con AR.

29. Anticuerpos anti-RA-33
Son anticuerpos que reaccionan de forma
específica con la ribonucleoproteína
heterogénea nuclear A2 (hnRNP-A2) y sus
isoformas (B1 y B2), así como la forma
homóloga, A1, del núcleo de las células HeLa. Su
presencia en suero, sin la aparición
concomitante de anticuerpos anti-U1-RNP o Sm,
es altamente específica para la AR.

30. La detección de anticuerpos anti-RA33 se ha
propuesto como marcador serológico de AR
temprana, con una sensibilidad del 27- 28,6%.
Asimismo se ha descrito la pérdida de
positividad cuando se alcanza la remisión clínica.
También se han descrito en pacientes con LES
en su forma erosiva asociados a anticuerpos
anti-Sm. En la enfermedad mixta del tejido
conectivo se asocian a los anticuerpos anti-U1
RNP.

31. Anticuerpos anti-Sa
Sa es una proteína de 48-50 kDa presente en la
placenta, el bazo y el tejido sinovial de
articulaciones de pacientes con AR.
La presencia de anti- cuerpos anti-Sa en
pacientes con AR, la sensibilidad de estos
anticuerpos en el diagnóstico de la AR llega al
40%, mientras que la especificidad es del 99%.

32. Un estudio reciente mostró que la presencia de
estos anticuerpos en suero se asociaba con una
subpoblación de varones con AR y curso agresivo.
Sa es un antígeno transportador de haptenos donde
la vimentina es el transportador y la citrulina es el
hapteno.
La citrulinación de la vimentina está estrechamente
relacionada con la apoptosis, dado que la vimentina
citrulinada es extremadamente sensible a la
digestión por las caspasas, enzimas fundamentales
en el proceso de apoptosis.
Med Clin (Barc) 2003;121(16):619-24

33. ANTICUERPOS ANTINUCLEARES
Son un Grupo de autoanticuerpos no especie
específicos dirigidos contra componentes del
núcleo celular.
Los títulos mayores a 1/160 sobre tejido congelado
y a 1/640 sobre células Hep-2, suelen verse en
pacientes con enfermedades reumáticas sistémicas.
Los diferentes autoanticuerpos producen imágenes
(patrones de tinción que les son característicos)
estos patrones pueden sugerir la presencia de
autoanticuerpos específicos que pueden
diferenciarse entre sí por patrones de tinción.

34. Reacción positiva
Una muestra es considerada positiva si la
imagen nuclear específica observada es mayor
que la del control negativo.

35. Patrones de ANA detectados mediante IFI
A continuación se describen las características
de los patrones que con mayor frecuencia se
detectan por IFI en células HEp-2 en sueros de
pacientes con enfermedades autoinmunes.
García Hernandez JL, et al. Caracterización inmunoquímica de los patrones de inmunofluorescencia (IFI)
moteado fino y moteado grueso en pacientes con enfermedades autoinmunes. Reumatol Clin. 2009;5:55.

36. El patrón homogéneo se
caracteriza por una tinción
homogénea en el núcleo, cuya
intensidad puede variar
dependiendo de la
concentración de los
anticuerpos presentes en le
suero.
La placa de la cromatina en
células en división puede estar
teñida de manera compacta ,
delineada o difusa y los
nucléolos pueden o no estar
teñidos.

37. El patrón periférico se
caracteriza por tinción
regular alrededor del núcleo;
el centro de este patrón
muestra menos tinción. La
placa de la cromatina se tiñe
de forma delineada o
compacta.

38. Los patrones de ANA que se observan con
mayor frecuencia son los moteados, tanto fino
como grueso. La descripción de estos patrones
ha generado confusión, en el sentido de que
varios autores definen el patrón moteado
grueso como aquel en el que el núcleo se
observa teñido con gránulos gruesos y el
patrón moteado fino lo definen como núcleo
teñido con gránulos finos.

39. El patrón moteado grueso se
debe definir como tinción en
el núcleo con gránulos finos o
gruesos, los nucleolos están
teñidos y la placa de la
cromatina en células en
división no se tiñe, es decir,
no hay reconocimiento de los
componentes de la
cromatina.

40. El patrón moteado fino, este
se caracteriza por tinción del
núcleo con gránulos finos o
gruesos, los nucleolos no se
tiñen así como tampoco se
tiñe la placa de la cromatina
en células en división.

41. El patrón centromérico tiene
como características que los
núcleos se tiñen con puntos
finos distribuidos de manera
homogénea en el citoplasma
de las células en interfase. La
tinción en las células en
división muestra un
punteado fino localizado en
la placa de la cromatina.

42. El patrón nucleolar tiene
como característica una
tinción intensa de los
nucleolos. La placa de la
cromatina en las
células en división se tiñe de
manera difusa debido a
reactividad cruzada de los
anticuerpos dirigidos contra
los RNA nucleolares con el
ADN de la cromatina.

43. El patrón de la lámina nuclear
o laminar es aquel en el que
se observa tinción
concentrada alrededor del
núcleo y no se extiende hacia
el citoplasma. A diferencia
del patrón periférico, la placa
de la cromatina en las células
en división es negativa.

44. El patrón centriolar se
identifica por la tinción intensa
de los centriolos en células en
división. Las estructuras
teñidas se pueden identificar
desde la fase G2, donde se ven
dos puntos muy juntos, y en
metafase, donde se localizan
en los polos de la célula.

45. Cuando se tiñen los
centriolos, los filamentos del
huso acromático y las células
en interfase tienen un patrón
moteado fino. El patrón se
define como NuMA-1(del
inglés, nuclear mitotic
apparatus) B . La tinción de
los centriolos y del huso
mitótico sin tinción del
citoplasma en células en
interfase se define como
NuMA-2 C.

46. El patrón citoplásmico que se
conoce como patrón de
filamentos intermedios o de
músculo liso y se caracteriza
por tinción en forma de hilos
en el citoplasma. Un patrón
de filamentos intermedios
con título mayor a 1:160, se
debe interpretar como un
resultado positivo para
anticuerpos antimusculo liso.

48. ANTICUERPOS ANTI ADN NATIVO
Se considera con títulos positivos si éstos son
mayores a 1/20. Se informa como positivo o
negativo.
La presencia de Ac anti ADN nativo se considera
como patognomónica de LES.
Se detecta en 60 - 70 % de casos. Este
porcentaje puede aumentar si se considera sólo
en enfermedad activa.

49. Su presencia se correlaciona con:
Nefropatía
lúpica
Manifestaciones
neurológicas
lúpicas.
El aumento es
inversamente
proporcional a
la disminución
de C3.
Los niveles
persistentes
aumentan o
disminuyen y
parecen
asociarse a un
mejor
pronóstico.

50. ANTICUERPOS ANTIHISTONAS
Pueden reaccionar con fracciones aisladas del complejo
ADN histonas o con el octámero formado por los dímeros
H1, H2A, H2B, H3, H4.
Son característicos del LES inducido por fármacos en un
90 %.
En lupus inducido por procainamida y en lupus
espontáneo predominan los anticuerpos dirigidos contra
H1 y H2A-H2B y en el lupus inducido por hidralazina
suelen reaccionar con H3-H4.

51. Es frecuente la reacción cruzada entre
anticuerpos anti-histona y FR.
Puede dar positivo en AR y Síndrome de Felty
ocasionalmente.

52. ANTI Ku
El antígeno correspondiente está formado por
dos proteínas ligadas covalentemente formando
un heterodímero que une DNA, con un posible
papel en la activación transcripcional,
replicación del DNA y proliferación celular.
Aparece en LES y en las enfermedades
musculares.

53. ANTICUERPOS CONTRA ANTÍGENOS
NUCLEARES EXTRAIBLES (ENA)
Dirigidos contra antigenos nucleares , o sea su blanco son
antígenos nucleares no histonas o complejos RNA proteínas:
SSA/RO
SSB/LA
Mi 2
RNP
 Scl 70
 Jo-1

54. ANTICUERPOS ANTI-SM Y ANTI-RNP
Los antígenos Sm y RNP están muy relacionados.
Pueden diferenciarse mediante digestión enzimática, ya
que el Sm es resistente a ARNsa y tripsina y el RNP es
sensible.
Están compuestos por ribonucleoproteínas nucleares de
pequeño tamaño "SMALL NUCLEAR RIBONUCLEO
PROTEIN" (snRNP).
Los anticuerpos anti Sm precipitan snRNP que contienen
varios tipos de ARN (U1, U2, U4, U5 y U5-ARN).

55. Reaccionan con una fracción libre del antígeno Sm y
con otra asociada al antígeno RNP.
Los anticuerpos anti-Sm son específicos en un 99 %
para LES y forman parte de los criterios
diagnósticos.
Se relacionan con actividad de la enfermedad.
Los anticuerpos anti-RNP se detectan en un 95 -100
% de pacientes con EMTC, pero no son específicos.
La Nefropatía es poco frecuente.

56. ANTICUERPOS ANTI SCL - 70 Y
ANTICENTRÓMERO
El antígeno Scl-70 es una proteína cromosómica
identificada como la enzima ADN topoisomerasa 1.
Una enzima nuclear que actúa en el ADN rompiendo
transitoriamente el esqueleto fosfodiéster del ADN y
recomponiendo los finales del ADN libre.
Son específicos para esclerodermia y aparecen en
hasta un 40 % en la esclerodermia difusa y en un 10 -
15 % en el síndrome de CREST.

57. Se asocian con la esclerosis cutánea difusa y con
mayor riesgo de fibrosis pulmonar.
Estos anti cuerpos dan lugar al patrón nuclear
difusamente granular en la IF.
La positividad de estos anticuerpos implica un
peor curso (difuso) de la enfermedad, con
afectación cutánea más grave y mayor
frecuencia de afección articular y pulmonar.

58. Los anticuerpos anticentrómero reconocen proteínas
laminares del cinetocoro cromosómico.
Son responsables de un patrón moteado característico en
la IFI
Se detectan en pacientes con:
Síndrome de CREST (70 - 85 %)
Esclerodermia difusa (10 - 30 %)
En un pequeño número con otras conectivopatías.

59. ANTICUERPOS ANTI-RO/SSA Y ANTI-LA/SSB
Los antígenos Ro/SSA y La/SSB son complejos
ribonucleoproteicos de pequeño tamaño que se
localizan en el núcleo y en citoplasma (scRNPs).
Los anticuerpos anti Ro producen IFI nuclear .
Los anticuerpos anti La precipitan los mismos
ARN y otros de origen humano y vírico.
Reconocen una proteína muy susceptible a la
degradación proteolítica.

60. Los anticuerpos anti Ro detectan:
 Síndrome de Sjögren primario (60 - 70 %)
LES (30 - 40 %)
Otras conectivopatías
Son característicos del:
 Lupus neonatal
 Lesiones cutáneas
Bloqueo cardíaco congénito
En recién nacidos cuya madre presenta
anticuerpos anti Ro.
Lupus cutáneo subagudo

61. Los anticuerpos anti Ro se han asociado a LES
con mayor frecuencia de lesiones cutáneas
fotosensibles, trombocitopenia, FR y vasculitis
cutánea.
Los anticuerpos anti La pueden aparecer junto a
los anticuerpos anti Ro.

62. ANTICUERPOS ANTI Jo 1
En pacientes con polimiositis se han identificado
diferentes anticuerpos:
• anti PM1 • anti Mi 1 y 2 • anti Jo 1
La mayoría reconocen enzimas sintetasas t-ARN y se
asocian con miositis y enfermedad intersticial
pulmonar.
Los más frecuentes son los anticuerpos anti-Jo 1,
que reconocen una subunidad de la enzima histidil-t
ARN sintetasa.

63. Se asocian con una mayor incidencia de:
El antígeno puede expresarse en el núcleo y
en el citoplasma.
Los anticuerpos anti Jo-1 son específicos de
polimiositis, se detectan en 20 - 30 % de los
casos.
Enfermedad intersticial pulmonar
Artritis
y Fenómeno de Raynaud

64. Anticuerpos Antinucleares Anti Mi-2
Está dirigida contra un antígeno nuclear y
asociado casi exclusivamente con
Dermatomiositis .
También se ve este autoanticuerpo en 10% de
los pacientes con Dermatomiositis juvenil. Los
pacientes con anti Mi-2 suelen tener inicio
agudo de la enfermedad y una buena respuesta
al tratamiento.

65. Anticuerpos anti-mitocondriales
(AMA)
Estos anticuerpos son marcadores de
diagnóstico para CBP y están dirigidos contra el
complejo enzimático de las 2-oxo-ácido
deshidrogenasas.
Los AMA en los pacientes con CBP son los
anticuerpos con mayor sensibilidad de todas las
enfermedades hepáticas y su especificidad para
distinguir pacientes con CBP de pacientes con
hepatitis autoinmune es de 92%.

66. Los antígenos blanco son la dihidrolipoamida
aciltransferasa (subunidad E2) del complejo
enzimático piruvato deshidrogenasa e incluyen
las subunidades E2 de la piruvato deshidroge-nasa
(PDC-E2), 2-oxo-ácido deshidrogenasa
(OADC-E2) y la 2-oxoglutamato deshidrogenasa
(OGDC-E2).

67. Algunas consideraciones sugieren que los AMA
no son patogénicos, ya que estos auto-anticuerpos
presentan reactividad contra las
mitocondrias de todos los tejidos y no solo las
que se encuentran en el epitelio biliar.
Es posible que el estímulo inicial para la
producción de anticuerpos, sea una infección
que provoque una modificación de los antígenos
mitocondriales, lo que podría contribuir a la
inducción de la enfermedad.
Ed Con Lab Clín 2004;7:44-52

68. Anticuerpos antifibrilina
La fibrilina es una proteína básica nucleolar loca-lizada
en la ribonucleoproteína U3, un complejo
pro- teico involucrado en la síntesis de RNA
ribosomal. Los anticuerpos anti-fibrilina se asocian
con compromiso cutáneo difuso, hipertensión
pulmonar y compromiso del tracto gastrointestinal.
Desencadenan también la diferenciación de los
fibroblastos con fenotipo normal hacia uno de tipo
profibrótico, a través de un mecanismo TGF-β
(factor de crecimiento)

69. Anticuerpos Anti-Th
Los anticuerpos anti-Th/To, dirigidos
directamente contra proteínas nucleolares que
interactúan con el RNA, se detectan sólo en el
4% de los pacientes y se asocian con
compromiso cutáneo limitado, compromiso
pulmonar y gastrointestinal. Sin embargo, éstos
no son específicos.
Rev. chil. reumatol. 2009; 25(1):17-2

70. ANTICUERPOS ANTICITOPLASMA DE
NEUTRÓFILOS (ANCA)
Los ANCA fueron definidos mediante IFI como
anticuerpos contra estructuras citoplasmáticas de
neutrófilos en sueros de pacientes con vasculitis.
Los ANCA reaccionan con diferentes proteínas de
los gránulos azurófilos del neutrófilo.
La IFI sobre neutrófilos fijados con etanol muestra
dos patrones fundamentales.

71. Son también ANCA positivos la granulomatosis de
Wegener y la poliarteritis nodosa microscópica
porque comparten algunos mecanismos
patogénicos.
La negatividad de los ANCA no excluye ninguno de
los diagnósticos.
En la granulomatosis de Wegener el patrón es C-ANCA
y pueden detectarse en más de un 90 % de
pacientes con enfermedad activa.
En las formas limitadas el porcentaje de
positivos disminuye a un 60 - 70 %.

72. Estos patrones P-ANCA están dirigidos contra
mieloperoxidasa en el 61 % de los casos, pero hay
un 39% que presenta patrones C-ANCA.
En el 80 % de los pacientes con glomerulonefritis
necrotizante segmentaria dentro o fuera del
contexto de una vasculitis necrotizante sistémica, se
detectan P-ANCA.
También la glomerulonefritis necrotizante puede
estar asociada a hemorragia pulmonar o síndrome
pulmonar-renal.

73. c-Anca : patrón de fluorescencia citoplasmático
(clásico). En este caso los anticuerpos
anticitoplasma de neutrófilos muestran un
patrón de tinción citoplasmático difuso y
granular. El antígeno diana es más
frecuentemente la proteinasa 3 (PR3).

74. P-Anca: patrón de fluorescencia perinuclear (tinción
protoplasmática) los anticuerpos anticitoplasma de
neutrófilos muestran un patrón de fluorescencia en
forma de anillo, rodeando al núcleo. El antígeno
diana es generalmente la mieloperoxidasa (MPO).

75. ANTICUERPOS ANTIFOSFOLÍPIDOS, ANTICOAGULANTE
LÚPICO Y ANTICARDIOLIPINAS
Son anticuerpos que reaccionan cruzadamente con varios
fosfolípidos, como:
• fosfatidiletanolamina
• fosfatidilserina
• fosfatidilinositol
Son anticuerpos poliespecíficos de clase IgG o IgM que
reaccionan cruzadamente con ADN y En el 80 % de los
pacientes con glomerulonefritis necrotizante segmentaria
dentro o fuera del contexto de una vasculitis necrotizante
sistémica, se detectan P-ANCA.

76. Anticuerpos responsables de falsos positivos en la serología luética
Dirigidos contra antígenos como el VDRL o el RPR.
Formados por: lecitina, cardiolipina y colesterol.
Anticoagulante lúpico
Factores capaces de inhibir en vitro las pruebas de coagulación
dependientes de fosfolípidos, pero in vivo carecen de efecto
anticoagulante.
Actúan a nivel del complejo de conversión de protrombina en
trombina, inhibiendo la formación de protrombina y trombina.
Anticuerpos anticardiolipinas
Se unen in vitro a fosfolípidos cargados negativamente
(fosfatidilserina, fosfatidilglicerol o fodfatidilinositol)

77. La presencia de anticuerpos antifosfolípidos se debe
sospechar ante cualquier falso positivo en la serología de
lúes o en presencia de alargamiento en el tiempo de
tromboplastina parcial activada por anticoagulante
lúpico.
Otras enfermedades Autoinmunes
Anemia hemolítica autoinmune
Tiroiditis de Hashimoto
Púrpura trombopénica idiopática.

78. Las manifestaciones asociadas a la presencia de
anticuerpos antifofolípido son:
Trombopenia
Trombosis venosas o arteriales
Anemia hemolítica
 Livedo reticularis
 Migrañas
Úlceras en miembros inferiore
 Valvulopatías
 ACV agudos
Abortos recurrentes

79. Este síndrome asociado a la presencia de
anticuerpos antifosfolípidos puede aparecer en
el curso de LES u otras patologías, pero muchos
pacientes con estos anticuerpos no presentan
ninguna de las patologías asociadas. En estos
casos se habla de síndrome antifosfolípido
primario.

80. Criterios diagnósticos para el anticoagulante
lúpico:
a) Prolongación del tiempo de coagulación in vitro en una
prueba fosfolípido dependiente.
b) Evidencias negativas usando mezclas con plasma
normal: el tiempo de coagulación no se corrige.
c) Evidenciar la dependencia de fosfolípidos: el tiempo de
coagulación se corrige cuando se agrega al sistema una
fuente de fosfolípidos que pueden ser plaquetas o
fosfolípidos puros.
d) Ausencia de déficit de algún factor de coagulación o de
otro inhibidor específico.

81. Principales técnicas dependientes de fosfolípidos que se
realizan en el laboratorio:
KPTT
Tiempo de coagulación con caolín (KCT)
Tiempo de veneno de víbora de Rusell diluido (DRVVT)
Los anticuerpos anticardiolipinas se estudian por RIA y
ELISA.
Estos anticuerpos se dirigen a cardiolipinas puras y hacia
un cofactor plasmático, la ß2 glicoproteína I, unido o no a
las cardiolipinas.
Se deben determinar junto con el anticoagulante lúpico
ante la sospecha de síndrome antifofolipídico.

82. Técnicas de detección de
autoanticuerpos
Inmunoflu
orescencia
Indirecta
(IFI)
Radioinmuno
analisis(RIA)
Aglutinación
ELISA
Nefelometría
D.F. Hernández Ramírez, J. Cabiedes / Reumatol Clin.
2010;6(3):173–177174

83. Inmunofluorescencia indirecta
La técnica se basa en el reconocimiento de los
anticuerpos que reconocen estructuras
antigénicas celulares nativas. La interacción se
evidencia por medio de un anticuerpo
antiinmunoglobulina humana, producido en
conejo, cabra o cobayo, dirigido contra las
fracciones constantes (Fc) de las
inmunoglobulinas IgG, IgA y/o IgM.

84. Este anticuerpo antiinmunoglobulina humano
está conjugado o acoplado a un fluoróforo
(generalmente isotiocianato de fluoresceína
[FITC]). Los resultados del reconocimiento de los
antígenos por los autoanticuerpos presentes en
el suero, plasma o cualquier otro líquido, se
evaluán en un microscopio de epifluorescencia.
Para la detección de anticuerpos que reconocen
antígenos nucleares se utilizan como sustratos
líneas celulares epiteliales humanas como las
células HEp-2 o las células HeLa.

86. En el caso de los anticuerpos contra
componentes de los gránulos primarios y
específicos de los polimorfonucleares o
anticuerpos anticitoplasma de neutrófilos
(ANCA), se utilizan neutrófilos fijados con etanol
y formalina.

87. Ensayo inmunoenzimático
Como se mencionó anteriormente, el ELISA es
una de las técnicas más utilizadas para
identificar o confirmar la especificidad de los
anticuerpos presentes en las muestras de los
pacientes con enfermedades autoinmunes.
Si bien existen diferentes tipos de ELISA, el más
utilizado en el laboratorio de diagnóstico de
autoinmunidad es el ELISA indirecto.

88. El cual se fundamenta en el reconocimiento de
los anticuerpos específicos presentes en las
muestras de los pacientes, mediante un anti-cuerpo
dirigido contra la región Fc humana de
cualquier isotipo (IgG, IgA o IgM) e inclusive de
cualquier subclase (IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1
o IgA2).
Los anticuerpos anti-Fc están unidos a enzimas
como la peroxidasa o la fosfatasa alcalina.

89. Los antígenos utilizados en las placas de ELISA
pueden ser nativos, recombinantes (antígeno
completo o epítopo específico) o sintéticos
(epítopo específico). Después de permitir la
interacción de los anticuerpos de las muestras
de los pacientes con el antígeno pegado a la
placa de ELISA

90. Se realizan lavados para eliminar los anticuerpos
inespecíficos y se agrega el anticuerpo antiinmuno
globulina humana unido a enzima, permitiendo la
interacción por un tiempo determinado.
Posteriormente, se adiciona la solución que
contiene el sustrato cromogénico específico de la
enzima (Tetrametilbenzidina [TMB] para la
peroxidasa o p-nitrofenilfosfato para la fosfatasa
alcalina) el cual cambiará de color en función de la
cantidad de anticuerpos conjugados con la enzima y
cuya cantidad depende de los anticuerpos del
paciente que reconocieron al antígeno pegado a la
placa.

91. La intensidad de coloración es directamente
proporcional a la cantidad de anticuerpo del
paciente unido al antígeno.
Engvall E, Perlman P. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Quantita- tive assay of
immunoglobulin. G Immunochem. 1971;8:871–4.

92. Electroinmunotrasferencia
La EIT, junto con el ELISA son las técnicas de
mayor sensibilidad y especificidad para la
detección de anticuerpos contra antígenos
específicos.
Se fundamenta en el reconocimiento de
anticuerpos que tienen especificidad por
antígenos que se absorben en una membrana
(de nitrocelulosa o nylon).

93. Los antígenos adsorbidos en la membrana
fueron previamente separados en geles de
poliacrilamida-dodecil sulfato de sodio (PAGE-SDS)
y transferidos a las membranas.
La unión de los anticuerpos a los antígenos
específicos se detecta mediante la adición de un
anticuerpo que reconoce la región Fc de las
inmunoglobulinas humanas, el cual está
acoplado a una enzima (fosfatasa alcalina o
peroxidasa).

94. La unión se revela con la adición de un sustrato-cromogénico
soluble (alfa-naftol/Fast red o NBT/
BCIP [cloruro de azul de tretrasodio/sal de
toluidina de 5-bromo-4- cloro-3-indolfosfato],
para cada enzima, respectivamente) el cual se
precipita en el sitio en donde se encuentra el
complejo antígeno- anticuerpo por la acción de
la enzima.
NealW. Western blotting: electrophoretic transfer of proteins from sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide
gels to unmodified nitrocellulose and radio- graphic detection with antibody and
radioiodinated protein A. Anal Biochem. 1981;112:195–203.

95. NEFELOMETRÍA
Nefelometría deriva del griego Nephele, significa
nube o neblina. Se define como la detección de
la energía lumínica dispersa o reflejada hacia un
detector que no se encuentra en el camino
directo del haz luminoso.
Las mediciones se realizan en un determinado
ángulo en relación con dicho haz. La intensidad
de luz dispersa en un determinado ángulo está
en función de la longitud de onda del rayo
incidente, del tamaño y forma de las partículas.

96. La formación de inmunocomplejos se ha
relacionado con la cuantía de dicha dispersión y se
ha empleado como fundamento para cuantificar
antígenos.
La nefelometría tiene aplicación para la
determinación de fracciones del complemento,
inmunoglobulinas, transferrina, haptoglobina,
cadenas kappa y lambda, albúmina, pre-albúmina,
proteína C reactiva, factor reumatoide, alfa 2
macroglobulina y otras proteínas.

98. GRACIAS!!!