test de coombs direct et indirect

1. rPar : S / Abdessemed

2. Abdsalah
 Principe : ce test est utilisé pour la mise
en évidence de la fixation in vivo
d’immunoglobulines ou de complément
sur les hématies.
Il est effectué pour le diagnostic de la
maladie hémolytique du nouveau-né
(MHNN) et les anémies hémolytiques
auto immune (AHAI).

3. Abdsalah

4. Abdsalah
LE TEST DE
COOMBS DIRECT
 5 ml de sang
sur tube
citraté.
LE TEST DE
COOMBS
INDIRECT
 5 ml de sang
sur tube sec.

5. Abdsalah
 1. centrifuger le sang total a
3000trs/min pendant 5minutes.
 2. éliminer le plasma, et laver les
hématies 6fois avec l’eau physiologique.
 3. préparer une suspension a 5% dans
l’eau physiologique.

6. Abdsalah
 4. dans un tube a hémolyse, déposer deux
gouttes de la suspension et une goutte de
l’antiglobuline polyvalente.
 5. mélanger et centrifuger a 1000trs/min
pendant une minute.
 6. ne pas oublier le témoin, utiliser
simultanément :
 Hématies O RH+ sensibilisé par un anti D
mis en présence d’antiglobuline.

7. Abdsalah
 Observer l’agglutination
en décollant doucement la
pastille d’hématies au
fond du tube.
 Une réaction positive est
caractérisée par une
agglutination qui signifie
une fixation des
Anticorps sur les
hématies
 Absence d’agglutination =
réaction négative

8. Abdsalah
 Principe : c’est un test permettant la
recherche et l’identification d’Allo-
Anticorps présent dans le sérum du
sujet à l’aide de globules rouges de
structure Antigénique connue.
 Il est effectué pour la recherche
d’agglutinines irrégulières (RAI),
Le phénotypage.


9. Abdsalah

10. Abdsalah
 1. Récupérer le sérum par centrifugation
du sang a analyser a une vitesse de
3000trs/min pendant 5minutes.
 2.laver trois fois les hématies de groupe O
et préparer une suspension a 5% dans l’eau
physiologique.
 3.Déposer dans une tube a hémolyse une
goutte de la suspension et 2goutte a sérum
a tester.

11. Abdsalah
 4. Mélanger le tube et incubé a 37C
pendant 45 minutes
 5. Laver les hématies 3 fois avec l’eau
physiologique puis décanter complètement
l’eau de lavage.
 6. Ajouter une goutte d’antiglobuline
polyvalente.

12. Abdsalah
 7. Mélanger et centrifuger a une vitesse
de 1000-2000 trs/min pendant une minute.
 8. Observer l’agglutination en décollant
doucement la pastille d’hématies au fond
du tube.
 9. Aux tube donnant une réaction négative,
on ajoute une goutte de suspension
d’hématies sensibilisées avec une IgG pour
valider les réactions.

13. Abdsalah
 Une hémolyse ou une agglutination, après
incubation a 37C = réaction positive.
 Une hémolyse ou une agglutination, après
adition d’Antiglobuline = réaction positive.
 Réaction négative, absence d’hémolyse ou
d’agglutination, sous réserve d’une
validation par l’agglutination d’hématies
sensibilisées a l’IgG sinon le test doit être
refait.

14. Abdsalah