1. Marcadores Genéticos y Pruebas de Filiación

3. ADN PRESENTE EN EL GENOMA HUMANO DNA EXPRESIVO 30% DNA NO CODIFICANTE 70% Secuencias repetidas en tándem 10% SINEs: Alu LINEs: L1 Minisatélites Microsatélites Satélites: Clásicos Alfoides Secuencias dispersas 15 - 20% ADN REPETITIVO 20 – 30%

10. … MINISATELITES EJEMPLO Combinaciones de genotipos en seis individuos, para tres alelos VNTR, llamados A, B, C : AA, BB, CC, AB, AC, BC

11. MICROSATELITES

17. Pruebas de Filiación

20. Área de extracción Calidad y aseguramiento Cabina de flujo laminar Pipetas debidamente calibradas y uso de puntas anti-aerosol Trabajo en parejas Equipo de protección

21. DNA cadena templado Forward primer Reverse primer Amplificación con sets de primers específicos en multiplex P C R Cómo se detectan las Short Tandem Repeats (STRs) – microsatélites ? 7 repeats 8 repeats AATG

22. 170 bp 195 bp Diferentes sets de primers generan difentes productos de PCR TCAT repeat unit

24. ABI Prism 3100 Equipo analizador genético Electroforesis de capilar Set de 16 capilares

25. Corrido electroforético capilar, en acrilamida, Determinación de perfiles Análisis de bandas por tamaños y fluorescencia Cómo lee los amplificados en el equipo 3100 ?

26. Electroforogramas Con ladder

27. Power Plex 16 Genotipificación (mujer)

28. 3 sistemas genéticos, uno exclusión Genotipificación (trio)

29. Presunto padre: 11, 12 Madre: 13, 14 Hijo: 12, 13 Cómo se determinan los AOPs ? AOP = 12 Comparando los alelos del hijo con los de la madre, se establece el alelo heredado de la madre y por descarte el paterno

30. DIVERSIDAD POBLACIONAL Por qué se requiere de cálculos estadísticos ? Cada grupo tiene diferente frecuencia de sus alelos

31. Población de Referencia Muestreo poblacional 13 Loci STR La frecuencia de los alelos de un sistema son típicas para cada población

32. STRs Frecuencias alélicas HUM-TH01 * Proc. Int. Sym. Hum. ID (Promega) 1997, p. 34 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 6 7 8 9 9.3 10 Pob. Caucasica Pob. negra Pob. Hispanicas Alelos: # de repeticiones Frequencias

33. ADN Que tan probable es que sea el padre una vez se ha demostrado que posee todos los AOPs. En qué consiste el Cotejo de paternidad ? Contrastar los resultados obtenidos con dos hipótesis

39. Casos simples: PP, M, H ó Presunto Padre fallecido - ADN extraído de sus restos óseos . Cuáles son los casos que normalmente se procesan para pruebas de filiación ?

40. Determinar todo los posibles genotipo de un hijo de esta pareja de presuntos abuelos paternos Posibles hijos Caso complejo : PP no disponible. Presuntos Abuelos Paternos, Madre, Hijo

41. Deducir el perfil genético del presunto padre con los AOPs de los hijos reconocidos. Perfil genético del PP Caso complejo : PP no disponible. Disponibles los hijos reconocidos del PP, Madre, Hijo

42. Cálculo de un índice de paternidad comparando únicamente la frecuencia de los alelos compartidos padre-hijo. Resultados PRUEBA DE Paternidad DNA TEST Caso complejo : Ausencia de uno de los progenitores. Índice de paternidad o maternidad

43. Caracteristicas deseables de los STRS en la identificación Forense

44. CASO Planteamiento del Problema: Establecer la filiación entre una hija demandante con un presunto padre, se cuenta con madre biológica.

45. RESULTADOS STR’s AUTOSÓMICOS H AOP

46. PROBABILIDAD DE PATERNIDAD

47. CONCLUSIÓN Con los resultados obtenidos del análisis de los STR’s autosómicos no es posible excluir al presunto padre ( PP ) de ser el padre biológico de la hija H. IP acumulado es de : 127. 545,0257 W(Po:0.5) = 99.9992 % IP: Indice de Paternidad W: Probabilidad de Paternidad

50. EN GENERAL EL GRAN RETO DE LA PRUEBA EN GENÉTICA FORENSE ES LA CORRECTA VALORACIÓN DE LA PRUEBA, SU CORRECTA COMUNICACIÓN A LOS TRIBUNALES Y EL CORRRECTO ENTENDIMIENTO POR ESTOS DEL SIGNIFICADO DE LA PROBABILIDAD Angel Carracedo

51. Single Nucleotide Polymorphisms (SNPs )

57. Por qué es importante el ADN Mitocondrial en identificación humana? HV I HV II Es una molécula circular Posee 16.569pb. Se localiza dentro de la matriz de la doble membrana de la mitocondria. Región Control (No codificante) Región Codificante 16024-16365 73-340

60. SNPs de ADN Mitocondrial Amplificación y Secuenciación directa de los fragmentos de interés

61. ADN mitocondrial: Interpretación y valoración de resultados

62. ADN mitocondrial: Interpretación y valoración de resultados - Heteroplasmia: El ADNmt se hereda exclusivamente por vía materna, en un individuo cabe esperar un único tipo de ADNmt, sin embargo esto no es así siempre y por el contrario a lo que cabría esperar podemos encontrar individuos en los que coexisten más de un tipo de ADNmt. A este fenómeno lo denominamos heteroplasmia La teoría de bottleneck o cuello de botella

63. La teoría de bottleneck o cuello de botella Un número de genomas de ADNmt se reduce a un número relativamente pequeño durante un paso de la oogénesis. Este subgrupo de la población de moléculas de ADNmt es trasmitida por el proceso de bottleneck, y esta población fundadora se replicará hasta producir aproximadamente 100.000 copias de ADNmt en el óvulo maduro. Este subgrupo, podría por tanto, contener una población homogénea de moléculas de ADNmt o una población heterogénea de genomas mitocondriales. La mezcla transmitida puede manifestarse presentando diferentes proporciones entre las distintas poblaciones de genomas mitocondriales para distintos descendientes y/o a lo largo de diferentes genes

64. La secuencia de una muestra problema es inequívocamente diferente de una muestra de referencia, es decir, al menos se presentan dos puntos de discrepancia diferentes, en este caso podemos excluir que el cabello proceda del sospechoso. Ambas muestras presentan numerosas discrepancias con respecto a la secuencia de Anderson, concretamente 6 para MD y otras 6 discrepancias para MR, a su vez entre las muestras MD y MR existen 8 puntos discrepantes entre ambas muestras.

65. La muestra dubitada, pelo (MD), como nuestra muestra de referencia, sangre del sospechoso (MR), presentan los mismo puntos de discrepancia con respecto la secuencia de Anderson y por tanto coinciden entre si nucleótido a nucleótido. En este caso no podemos excluir que dicho pelo pueda proceder del sospechoso. Será obligatorio en este caso de coincidencia evaluar el peso de dicha coincidencia.