Thibault Vha Vhe

Virus de l'hépatite A et E
Virus et marqueurs diagnostiques

Vincent THIBAULT
Laboratoire de Virologie

Groupe Hospitalier
Pitié-Salpêtrière
Assistance Publique Hôpitaux de Paris
V.Thibault DU_janv.-2010 1

Hépatites virales
mode de transmission préférentiel

parentéral féco-oral

B non A, non B A
1965 D 1972
1977
C E
1990 1991

F, G, TTV, autres…

Historique VHA
“La Jaunisse”
1745 : Cockayne, hépatites épidémiques
1908 : McDonald, "notion de virus…"
Reproduction de la maladie 1942 :
Volontaires (Voegt, Havens), Paul 1943 ingestion feces/serum
Entité clinique :
17-18ème siècle - 1923 Blumer - 1947 McCallum (VHA "infectious"-VHB "serum")

Visualisation : 1973 (Feinstone)
Développement de la sérologie : épidémiologie
1979 : culture (Provost et Hilleman)
1981... : Clonage, Séquences nucléotidiques
1991… : Vaccination
2006 : Déclaration obligatoire


Virus de l'hépatite A


Virus de l’Hépatite A

• Famille : Picornaviridae
Capside (entérovirus type 72)
• Genre : hépatovirus
• Taille 27-32 nm
27-32nm
ARN (+) • Non enveloppé
• Structure icosaèdrique
• ARN simple brin,
Vpg
• polarité positive
• lié de façon covalente à
une protéine Vpg


P1 prot. Capside P2 P3

0 Structurales Non structurales
7478

1B 1C 1D 2A 2B 2C 3 3C (PRO) 3D (POL) AAA
A-B
Vpg 1A
2.5kDa IRES
3
Traduction 2A A-B
VP2 VP3 VP1 2B 2C 3C (PRO) 3D (POL) poly-
protéine
VP4 2 227 AA

? Vpg
Protéase
Liaison NTP
Hélicase ARN
VP0 Polymérase

VP2 VP3 VP1 Réplication
VP4 2A

VP2 VP3 VP1 X5 – X12
VP4 Protéines de surface 2A Maturation finale
immunogénicité

Cycle de multiplication du VHA en culture de cellules
Attachement

Libération Réplication
du génome

Espace +
de Disse -
ire

Traduction
ce l l u l a

Synthèse +
de la polyprotéine
-
rane
Memb

P3
Maturation
P2 Réticulum
endoplasmique
P1
Empaquetage

Canalicule
Relargage biliaire


VHA : physiopathologie

Absence d'effet cytopathique direct :
cytolyse résultant du processus immun de
défense de l'hôte,
médiation cellulaire
médiation humorale


Propriétés Physiques du VHA
Agents Stabilité
Chaleur
Autoclavage (121°C, 20') Inactivation
100°C Inactivation
60°C Stable 1 heure
température ambiante Stable 1 mois (selles, eaux, sols)
Plusieurs jours sur surface sèche
4 h. Sur les mains
4°C Stable plusieurs mois
Congelé Stable des mois ou années
Acide-base pH 1 : stable 5 h.
PH 3-11 : stable au moins 30'
U.V. Inactivation
Chimiques
Chlore, ozone, Inactivation
glutaraldéhyde, iode
Alcool 70° 3' : inactivation partielle


Variabilité génétique
P1 prot. Capside P2 P3

0 Structurales Non structurales
7478

1B 1C 1D 2A 2B 2C 3 3C (PRO) 3D (POL) AAA
A-B
Vpg 1A
2.5kDa
Comparaison nucléotidique
7 Génotypes : IA,B ; II; IIIA,B ; IV-VII
Homme : génotype I (90%), (III, II=VII)
Singes : IV, V, VI
Sérotype unique
Nombre limité d'épitopes antigéniques VP1, VP3
Tests immunologiques
Vaccination (HM175, CR326)
virus inactivé cultivé sur MRC-5


Génotypes et
phylogénie
VP1/P2A
Génotypes : >15% variations
Sous types : 7.5% variations

D'après Nainan et al. 2006
Clin. Microb. Rev. ; 19:63-79

IV Nonhuman primate, Philippines
V Nonhuman primate, Kenya
VI Nonhuman primate, Indonesia

Phylogenetic analysis of 3,582 HAV isolates
in the VP1/P2B region (315-bp fragment).

Répartition mondiale des génotypes

Génotypes infectant l'homme en noir , les singes en rouge.
Souche PA21 (génotype IIIA), isolée d'un singe Panamanian Owl en vert.

Cristina J, Costa-Mattioli M. Virus Res. 2007 Aug;127(2):151-7.

VHA : Paramètres Biologiques
Ac anti-VHA = hépatite A ancienne ou vaccination
IgM anti-VHA = hépatite aiguë A (clinique)

protection contre réinfection
Ag foie IgG
Symptomes
Ictère

VHA Selles
IgM
VHA Sang

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 24
Semaines

IgM HAV uniquement à bon escient !

1%
11 %
82 %

Faux positifs
Roque Afonso et al. CID 2006:42 -887

Alaska : test "réflexe" si Ig-VHA totales + Ig M HAV
32 % de faux + (Castrodale CID 2005:41;e86)

Vaccination : 8 à 20 % d'IgM VHA + dans les 2 à 3 semaines suivant
l'injection…

NE RECHERCHER L'IgM anti-VHA QU'EN CAS D'HEPATITE AIGUË


Marqueurs biochimiques

Diagnostic  Transaminases (ALAT, ASAT)
 Bilirubine
 Phosphatase alcaline
 Facteurs de coagulation

Sérologie +++

IgM anti VHA : infection récente

IgG anti VHA : infection passée ou vaccination

IgM et IgG anti VHA

Diagnostic direct (-) [uniquement dans le cadre d'études]

Virémie : techniques sensibles (105 v./mL)

Recherche de virus dans les selles, prolongée, importante
(109v./mL), épidémiologie
Salive :
IgG (ELISA)
V.Thibault DU_janv.-2010 15 Génome viral (RT-PCR)

Hépatite A : le vaccin
virus inactivé
AVAXIM 160U suspension injectable seringue préremplie
 Virus de l'hépatite A souche GBM cultivée sur cellules diploïdes humaines MRC-
5 , inactivé
HAVRIX 1 440 U Elisa/ml susp inj IM Ad en seringue
HAVRIX 720 U Elisa/0,5 ml susp inj IM Enf/Nour en seringue
 Souche HM 175 du virus de l'hépatite A cultivée sur cellules humaines
diploïdes MRC5

Le schéma vaccinal habituel comprend 1 dose suivie d'un rappel (1 dose) 6 à
12 mois plus tard.
La persistance des anticorps anti-VHA après vaccination n'est
actuellement pas connue . Les données disponibles suggèrent la persistance
des anticorps anti-VHA à un niveau protecteur jusqu'à 10 ans (20 ans ?)
après primo-immunisation.

Hepatitis A Vaccine versus Immune Globulin for Post-exposure Prophylaxis
Victor et al. 2007 N Engl J Med 357;17

Difficultés diagnostiques
En routine
Adresser prélèvements
au
Centre national de référence du VHA

Pr E Dussaix
Laboratoire de virologie
Hôpital Paul Brousse
12-14 av Paul Vaillant Couturier
94804 Villejuif cedex
Tel : 01 45 59 37 21

http://invs.sante.fr/surveillance/cnr/liste

SRAS ?

Hépatite E ? Grippe


Historique VHE
Découverte dépendante de la connaissance des virus des hépatites
1955 : Inde, hépatite chez des personnes immunisées contre le
VHA, épidémie particulière. "NANBH"
Entité clinique 1980 - similitude avec l’hépatite A :
Inde : prévalence de l’hépatite A importante
Epidémie : autre virus des hépatites, contamination par l’eau
1983 : reproduction de l’hépatite non A-non B chez un volontaire
immunisé contre VHA (Balayan)
Hépatite à J36
J28-45, visualisation de particules virales > VHA (27-30nm)
Reproduction de l’infection chez le singe (cynomolgus)
Hépatite "non A - non B" à transmission entérique (ENANB)
1990 : Reyes et al. clonage et séquençage "VHE"
1991 : Tam et al. VHE
2000 : Panda et al. cDNA infectieux


VHE Virus non enveloppé
Sphérique (SRV)
Famille : Hepeviridae Surface irrégulière
Genre : Hepevirus Capside 27-34 nm
Symétrie icosaédrique

ARN simple brin
hélice droite
polarité +
7,5kb
poly-A extrémité 3’

Stabilité
Au laboratoire : instable(-70 à +8°C)
Décongélation/congélation
Tractus GI : stable (pH)

Organisation génomique
Non structurales Structurales

7 200 nt ARN polarité +
3’NC
5’ NC 28 5109 7124
Poly-A

ORF3
MeT Y Pro P X Hel RdRp ORF2

Génotypes 1-3
Protéines
DIAGNOSTIC
immunogènes

Hétérogénéité génétique
Au moins 4 groupes majeurs (<20% hétérogénéité ORF2) subdivisés
en 24 sous groupes dont homologues animaux :
Epitopes majeurs : parties C-ter de l’ORF3 et ORF2
Protection croisée entre différentes souches : un seul sérotype
 Développement de tests sérologiques (performances équivalentes entre
les différents types ?)
 Vaccin : ORF 2 recombinante

Similarités des souches humaines et animales
Bilic et al. Journal of General Virology
(2009), 90, 863–873

humaines aviaires

Unrooted phylogenetic tree of four avian HEV
and nine mammalian HEV isolates, based on
the complete genome region

Similarités des souches humaines et animales
Zhao et al. Journal of Medical Virology
81:1371–1379 (2009)

Phylogenetic tree of based on
full-length sequences HEV
genotypes 1, 2, 3, 4, and
avian HEV and the new
genotype from rabbits.



Culture et Modèles animaux

• Culture
Difficile
Culture primaire d’hépatocytes de macaques (cynomolgus)
Cellules PLC/PRF/5 hépatocarcinome (Tanaka et al. J. Gen Virol. 2007)
Cellule embryonnaire

• Modèles animaux
Primates : reproduction de la pathologie humaine
Volontaires...
VHE du porc, du poulet
Présence d’Ac chez poulet, porc, rat, souris, mouton...

VHE : Paramètres Biologiques

Titre peu élevé
protection contre réinfection ?

IgG
Symptomes

Ictère

VHE Selles
IgM
VHE Sang

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 200
Jours

HEV – virémie- selle

transmission
serum
salive

Concentré de plaquettes à J0
Transfusé à un homme de
64 ans traité pour Lymphome
non-Hodgkinien par GM IgG
autologue

IgM

Matsubayashi K, et al. Transfusion.
2008 Jul;48(7):1368-75.


Immunodépression, hépatite chronique et
stratégie diagnostique

Dans le cadre d'une investigation chez un patient immuno déprimé,
La détection du génome viral (RT-PCR) sera privilégiée !
(ceci s'applique pour de nombreux diagnostics viraux - PCR)

Kamar et al. American Journal of Transplantation 2008; 8: 1744–1748

Stratégie Diagnostique
Marqueurs non biologiques
circonstances de la maladie (voyage, autres causes, épidémie)
A adapter en fonction de la zone géographique ? (Sud versus Nord ?)

clinique : hépatite “classique”, absence de chronicité (chez
l'immunocompétent ! )

Absence de marqueurs biologiques : diagnostic d'exclusion
Absence des marqueurs des virus des autres hépatites (A, B, C, D)
Notions sérologiques pour d’autres virus (EBV, CMV, herpès)

Marqueurs sérologiques spécifiques
IgM anti-HEV
IgG anti-HEV (+++)
RT-PCR : détection du génome viral (sang, selles)


Stratégie Diagnostique
Se donner les moyens de faire le diagnostic

Diagnostic Indirect Diagnostic Direct
Recherche de l'immunité antivirale Recherche du génome sur
IgM anti VHE prélèvements sang et selles
IgG anti VHE

Diagnostic IgG IgM RT-PCR

Certain ++ ++ +

Probable - ou + - +

Douteux +++ - -

Immunité ancienne + - -


VHE et vaccination
20 µg d'antigène rHEV (capside exprimée
dans baculovirus) dans 0.5 ml de PBS sur
0.5 mg d'hydroxyde d'aluminium.
3 injections

Moyenne géométrique du taux
d'anticorps anti-VHE

Efficacité : 95,5% après 3 doses

Risque cumulé d'un premier épisode
d'hépatite E

Shrestha,et al 2007 N Engl J Med 356;9

Adresser les prélèvements
au
Centre national de référence du VHE

Dr E Nicand
Laboratoire de biologie
HIA Val de Grâce
Tel : 01 40 51 40 00

http://invs.sante.fr/surveillance/cnr/liste


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