1. UNIVERSIDAD DE ORIENTE NÚCLEO BOLÍVAR ESCUELA CIENCIAS DE LA SALUD DEPARTAMENTO DE PARASITOLOGIA Y MICROBIOLOGIA CATEDRA: PARASITOLOGÍA. ENFERMERIA. COCCIDIOS LICENCIADA MÓNICA TAGLIOLA

2. Infección emergente: Una infección que ha aparecido recientemente en una población “ Su incidencia se ha incrementado en las últimas dos décadas” Infección re-emergente: Una infección que ha existido en el pasado pero su incidencia o distribución geográfica se ha incrementado rapidamente. Factores específicos precipitantes pueden ser identificados

6. Coccidios. Taxonomia Reino Protista Filo Apicomplexa (Sporozoa) Clase Sporozoa (Sporozoasida) Orden Eucoccidida (Eucoccidiorida) Suborden Eimeriina (Eimeriorina) Família Sarcocystidae Eimeridae Cryptosporidae Cryptosporidium C. parvum (Mamiferos) C. muris Eimeria Isospora Cyclospora Toxoplasma Sarcocystis Neospora Babesia, Theileria

8. Durante los últimos 30 años, nuestro concepto de cryptosporidiosis ha cambiado desde una enfermedad rara, asintomática, para una importante causa de diarrea en animales y humanos en todo el mundo (Mosier & Oberst, 2000). Cryptosporidiosis .

10. Tasa de infección por C. parvum entre personas inmunocompetentes e infectadas con HIV en áreas industrializadas y en vías de desarrollo. Cryptosporidium parvum

12. Variable Cyclospora Cryptosporidium Isopora Tamaño Ooquiste 8-10 4-6 20-30 x 10-19 No. esporoquistes 2 Ninguno 2 No. esporozoitos 2 4 4 ZNm Variable Si Si Autofluorescencia Verde-Azul Brillante Variable

14. Transmisión 1) Directa: persona a persona. Los ooquistes son infectantes al ser expulsados 2) A través del agua: con 30 ooquistes puede ocurrir la infección (URBANA) 3) Zoonotica: ambos genotipos están presentes en animales (RURAL)

15. Crytosporidium parvum A. Quiste. Soluc. Salina B. Quiste. ZNm A B

16. Diagnóstico A. Diagnostico parasitológico Demostración de ooquistes en heces Visualización de ooquistes/otros estadios en secreciones y biopsia intestinal 1. Métodos de concentración 2. Coloraciones (ZNm, Safranina, quimioluminescentes 3. Histología B. Detección de Antígenos en Heces Kit comerciales (IFI, IFD, ELISA) Métodos directos

17. C. Diagnostico Inmunológico IFI Ac monoclonales y policlonales ELISA Inmunoblot (Wester Blot) D. Electroforesis E. Biologia molecular: PCR Métodos indirectos

18. Al fresco. Gránulos negros en los ooquistes Contraste de fase. Flotacion de Sheather. Ooquistes refractiles. C. parvum El método de flotación de Sheather solo es usado con heces frescas

19. Kinyoun. Ooquistes de Rojo intenso con granulos negros caracteristicos. Kinyoun. Ooquistes de Rojo intenso con granulos negros caracteristicos. Diferciar de las levaduras. C. parvum Varias modificaciones de la coloración ZN ( acid-fast) pueden ser usadas. La coloración de los ooquistes varia según la modificación usada de rosado a rojo intenso.

21. Cylospora cayetanensis Taxonomía Reino Protista SubFilo Apicomplexa Subclase: Cossidiasina Orden Eucoccidiorida Familia Eimeriidae Género Cyclospora

22. Ciclo vital de C. cayetanensis

23. Identificación de ooquistes en especimenes fecales por microscopia de luz Otros métodos bajo investigación A. Microscopia Guías básicas 1) Muestras de heces multiples (al menos 3) 2) Usar métodos de concentración (Formol eter) 3) Técnica diagnostica de elección: Disponibilidad de equipos y reactivos Experiencia Tiempo y costo PUNTOS CLAVE PARA EL DIAGNOSTICO LABORATORIAL DE Cyclospora

24. PRUEBAS DIAGNOSTICAS PARA Cyclospora 1) Montaje el fresco a) Microscopia de campo brillante (Contraste diferencial por interferencia) Esferas refractiles Otros objetos con aspecto similar No permanente b) Fluorescencia bajo LUV Autofluorescencia verde (330-335 nm) Otros objetos con aspecto similar No permanente Microscopio de fluorescencia Contraste de fase: fácil

25. PRUEBAS DIAGNOSTICAS PARA Cyclospora 2) Coloración Acido-alcohol resistente modificada de Kinyoun Color rojo sobre un fondo verde azulado Pueden tener tonos variables (algunos no coloreados) Pueden no ser perfectamente redondos (colapsados o distorcionados) Gránulos y/o tener una pared característica Permanente Artefactos (errores diagnósticos) 3) Coloración con Safranina Se colorean uniformemente de rojo a naranja Requiere calentamiento (equipo adicional, p.e. microonda) 1997: Safranina modificada con calentamiento en microonda (Visvesvara et al.)

26. PRUEBAS DIAGNOSTICAS PARA Cyclospora 4) Otros Métodos: Coloración tricromica Los ooquistes pueden ser detectados pero no confirmados por este método Pueden aparecer no coloreados Cuando por Tricromico se sospecha, usar las colroaciones anteriores para confirmar Identificación histológica en biopsias intestinales No rutina Varias observaciones B. Ensayo de Esporulación C. Métodos Moleculares

27. DIFERENCIACI ÓN ENTRE OOQUISTES DE Cyclospora y Cryptosporidium

29. Yodo de D’antoni Lugol C. cayetanensis

30. Solución Salina Al fresco (heces recién emitidas: masa morular granular en su interior dejando un espacio libre entre esta y la cubierta externa .

31. Contraste de fase. Glóbulos refractiles dentro del ooquiste Contraste de fase. 2 esporoquistes. Esporozoitos no visibles C. cayetanensis

32. Kinyoun. C. cayetanensis

33. Kinyoun + Hematoxilina. Rojos sobre fondo gris. Epifluorescencia ultravioleta C. cayetanensis

34. Kinyoun. C. parvun + C. cayetanensis Kinyoun. C. parvun + C. cayetanensis C. cayetanensis

37. Kinyoun. Kinyoun. Post-tratamiento I. belli

38. Material preservado en formalina. Epifluorescencia I. belli

39. Variable Cyclospora Cryptosporidium Isopora Tamaño Ooquiste 8-10 4-6 20-30 x 10-19 No. esporoquistes 2 Ninguno 2 No. esporozoitos 2 4 4 ZNm Variable Si Si Autofluorescencia Verde-Azul Brillante Variable

40. ACIDO-ALCOHOL MODIFICADA (Kinyoun) C. parvum C. cayetanensis I. belli SAFRANINA