Este documento describe un experimento en el que se administró cloroformo a una rata por vía intraperitoneal para observar sus efectos. La rata experimentó síntomas como vómito, cefalea y náuseas antes de morir a los 30 minutos. Luego, se destiló el cloroformo de los órganos de la rata y se realizaron pruebas como la reacción de Dunas y Roseboom que confirmaron la presencia de cloroformo. El objetivo era estudiar los efectos de una intoxicación por cloroformo y validar mé

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UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MACHALA
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Y DE LA SALUD
CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA
LABORATORIO DE TOXICOLOGÍA
Profesor: Bioq. Farm. Carlos García MSc.
Alumno: Mónica Elizabeth Lapo.
Curso: 5to Paralelo: A
Grupo N° 7 10
Fecha de Elaboración de la Práctica: Lunes, 22 de junio del 2015
Fecha de Presentación de la Práctica: Lunes, 29 de Junio del 2015
PRÁCTICA N° 4
TÍTULO DE LA PRÁCTICA: INTOXICACIÓN POR CLOROFORMO.
TOXICO: Metanol
ANIMAL DE EXPERIMENTACIÓN: Rata wistar.
VÍA DE ADMINISTRACIÓN: Intraperitonial
VOLUMEN ADMINISTRADO: 10ml
TIEMPOS:
o Inicio de la práctica: 8:05am
o Deceso del animal: 30 min
o Hora de disección: 08:07 a 08:20 am
o Inicio de la destilación: 8:25 am
o Finalización de la destilación: 09:00 am
o Final de la práctica: 10:30 am
SINTOMAS:
 Vomito
 Cefalea
 Vértigo
 nauseas

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OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA
1. Observar la reacción que presenta la rata wistar ante una Intoxicación.
2. Distinguir la sintomatología de la intoxicación por cloroformo con relación a otras sustancias
toxicas.
3. Determinar el tiempo en que actúa el toxico en el organismo de la rata wistar para causarle la
muerte
4. Conocer mediante diversas pruebas de identificación la presencia de cloroformo en la rata
wistar.
MATERIALES SUSTANCIAS
 Bata de laboratorio
 Equipo de destilación
 Mechero
 Guantes de látex
 Gorro
 Campana
 Zapatones
 Espátula
 Mascarilla
 Pipetas
 Erlenmeyer
 Tubos de ensayo
 Vasos de precipitación
 Jeringuilla de 10cc
 Instrumentos de disección
PROCEDIMIENTO
Para la realización de ésta práctica se efectúan los siguientes pasos:
1) Primeramente aplicar las normas de BIOSEGURIDAD.
2) A continuación se deben tener todos los materiales listos en la mesa de trabajo.
3) Con la jeringuilla tomamos 10 ml de cloroformo e inyectamos a la rata wistar (vía
intraperitoneal).
4) Colocamos a la rata wistar en la campana.
5) Observar la sintomatología del toxico en el animal de experimentación.
6) Esperamos el tiempo de defunción.
7) Una vez muerto la rata wistar se procede a amarrarlo en la tabla de disección.
 Acido tartárico
 Alcohol de 95ª
 Nitrato de plata
 Potasa alcohólica
 percloruro de hierro
 beta naftol
 solución alcohólica concentrada de
potasa
 timol
 resorsinol

 Piridina
 cristal de yodo
 clorhidrato de piperacina
 reactivo de Benedict
EQUIPOS
 Balanza analítica

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8) Tomamos el bisturí # 11 y lo colocamos en el soporte de bisturí y procedemos a
rasurar a la rata.
9) Con mucho cuidado cortar la piel, ejerciendo presión sobre las costillas y con una
jeringa aspirar la sangre.
10) Retirar los órganos sin excepción de uno y los colocamos en un vaso de
precipitación.
11) Luego procedemos a trocear muy fino los órganos con unas tijeras.
12) Transvasamos a un balón y colocamos las perlas de vidrio, agregar además una
pequeña cantidad de ácido tartárico y unos 3ml de agua destilada.
13) Preparar 20 ml de NaOH al 20%, colocarlo en un erlenmeyer.
14) Armar el equipo de destilación y poner las vísceras a destilar durante 30 minutos y
con la ayuda de lámparas de alcohol calentar con movimientos circulares.
15) Finalmente en el destilado se realizan las reacciones de identificación:
Reacciones:
1.-En el fondo de un tubo de ensayo se mezclan unas cuantas gotas de cloroformo con otras
tantas de alcohol de 95ª que contiene un poco de nitrato de plata, se inflama la mezcla y se
observa que esta arde con un llama bordeada de verde y que el ácido clorhídrico formado
reacciona con el nitrato de plata disuelto originando un precipitado de cloruro de plata.
Reacción de dunas.- al adicionar unas gotas de destilado que contiene cloroformo a unos
mililitros de potasa alcohólica (proporción 1:10), se originan formiatos y cloruro de potasio.
CHCl3 + 4 KOH ClK + HCO2K + H 2 O
Se neutralizan la mezcla, y se separan en dos porciones a una porción se le agrega percloruro
de hierro produciendo un color rojo en frio o un precipitado en caliente.
A la otra porción se le agrega solución de nitrato de plata produciéndose un precipitado de
cloruro de plata que se disuelve en amoniaco diluido.
2. Reacción de Lustgarten.- al calentar la muestra con unos miligramos de beta naftol y
una solución alcohólica concentrada de potasa (preferentemente un trozo de potasa y
algunas gotas de alcohol), se obtiene un franco color azul.
Si se sustituye el B-naftol por timol el color es Amarillo mas o menos oscuro; con
resorsinol la coloración es roja – violáceo y con la piridina rojo.
3. Reacción de fujiwara.-En un tubo de ensayo, se vierte 2ml de lejía de sosa 1:2 con una
capa de 2mm de piridina y luego la muestra que contiene el cloroformo; se agitan, podemos
por unos instantes en baño de María y se deja en reposo; se convierte en una materia
coloreada que varía del rosa al rojo vivo, soluble en piridina .Esta reacción sensible para
unos pocos microgramos de cloroformo y es aplicable en la orina de algún sujeto que haya
absorbido de 15-20 g de agua clorofórmica.

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4. Reacción de roseboom.- se disuelve un pequeño cristal de yodo en la solución muestra y
se agregan unos pocos miligramos de clorhidrato de piperacina ; si el cloroformo está
presente en la muestra, la coloración violeta inicial cambia a amarilla rojiza al disolverse el
alcaloide.
5. Reacción de Benedict.- si la solución muestra contiene cloroformo, reduce el reactivo de
Benedict, y de acuerdo a la concentración del toxico puede producirse una gama de colores
que van desde el verde, amarillo, naranja o rojo ladrillo.
GRÁFICOS

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REACCIONES DE RECONOCIMIENTO
Muestra inicial
ó destilado
 Reacción con alcohol y nitrato de plata:
Reacción Positivo no característico precipitado (+) : llama bordeada verde (-)
 Reacción de Dunas
Reacción Positivo característico coloración roja
Antes Después
Antes Después

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 Reacción de Lustgarten
Reacción Positivo no característico coloración amarilla (timol)
 Reacción de Fujiwara
Reacción Positivo no característico Coloración transparente
 Reacción de Roseboom
Reacción Positivo característico Coloración violeta amarilla rojiza
Antes Después
Antes Después
Antes Después

7. “Todo es veneno, nada es veneno, todo depende de la dosis” Página 7
Reacción de benedict
Reacción positivo no característico verde, amarillo, naranja o rojo ladrillo
OBSERVACIONES
 En la realización de ésta práctica al haber administrado el cloroformo por vía
intraperitoneal al sujeto de experimentación inmediatamente pudimos analizar y
percibir la diversa sintomatología en la rata wistar, entre ellos: perdida de
actividad motora, cefalea, vértigo y nauseas.
 Cabe recalcar que a través de las pruebas en medios biológicos, observamos la
coloración de las reacciones lo cual corroboro para determinar la presencia del
toxico (cloroformo) en el animal de experimentación.
CONCLUSIONES
 En la realización de esta práctica se aprendió a reconocer los síntomas provocados
luego de administración de un tóxico (cloroformo) al organismo de un animal de
experimentación (rata wistar).
 Es importante mencionar que al realizar las reacciones de reconocimiento de este
toxico entre ellas: la reacción con alcohol y nitrato de plata, reacción de dunas,
reacción de Lustgarten, reacción de Roseboom, reacción de Benedict. La mayoría
dieron resultados positivos característicos lo que nos indica que si hubo presencia
de cloroformo en la muestra.
RECOMENDACIONES
 Asegurarse que el equipo esté correctamente sellado, ya que de esta forma logramos
impedir el escape de los vapores en el proceso de la destilación, evitando así una
intoxicación.
Antes Después

8. “Todo es veneno, nada es veneno, todo depende de la dosis” Página 8
 Utilizar el equipo de protección adecuado: bata de laboratorio, gorro, zapatones,
guantes, mascarilla.
 Aplicar todas las normas de bioseguridad en el laboratorio.
 Utilizar pipetas específicas para cada reactivo.
 Preparar correctamente las sustancias a la concentración requerida
 Acatar las sugerencias y guías expuestas por el ayudante, para de esta manera
obtener muy buenos resultados en la realización de la práctica.
CUESTIONARIO
.
¿CUÁLES SON LAS PROPIEDADES FÍSICO-QUÍMICAS DEL
CLOROFORMO?
El cloroformo es un líquido incoloro, volátil y no inflamable con un característico
olor
dulzón.
Factor de conversión
(20 o C, 101 kPa): 4,97 mg/m3 = 1ppm
Peso molecular: 119,38
Fórmula molecular: CHCl3
Solubilidad: ligeramente soluble en agua, miscible con alcohol, éter, benceno,
sulfuro de carbono y tetracloruro de carbono.
Punto de fusión: –63 oC
Punto de ebullición: 62 oC
Presión de vapor: 21 kPa a 20 oC
Densidad: 4,1 veces la del aire
Límite de explosividad: –
Umbral de olor: 20 ppm (100 mg/m3)
¿CUALES SON LOS USOS MAS COMUNES DEL CLOROFORMO?
Fue utilizado como un anestésico temprano en cirugía y odontología y por esta razón
las personas que trabajan con el material deben evitar la inhalación de sus vapores.
Hoy en día el cloroformo tiene un importante número de usos tales como:
 En química se utiliza en la separación orgánica.
 En la fabricación de plásticos que se utiliza en el proceso de unión.
 Se utiliza en síntesis orgánica.
 Se utiliza como un precursor en la fabricación de teflón (antiadherente).
 En la Primera Guerra Mundial el cloroformo fue usado como arma química.

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¿DESCRIBA EL PROCESO DE METABOLIZACION DEL
CLOROFORMO?
El cloroformo es metabolizado por vías oxidativas y reductoras. En condiciones
normales, el metabolismo oxidativo es la vía principal, y el metabolismo reductivo
no juega un papel significativo. El cloroformo también se conjuga con ácido
glucurónico (conjugación mercaptúrica).6
El metabolismo del cloroformo es más rápido en ratones que en ratas, mientras que
en los tejidos humanos (hígado y riñón), porque tienen un déficit en la actividad del
isoenzima CYP2E1, que es la responsable del metabolismo del cloroformo
¿INDIQUE EL TRATATMIENTO PARA CLOROFORMO?
En vista de que el cloroformo sufre conjugación mercaptúrica en su paso por el
organismo, algunos autores proponen a la N-acetilcisteína como un posible
tratamiento de las intoxicaciones con cloroformo. La N-acetilcisteína, por su
capacidad de inhibir la formación de radicales libres generados por el cloroformo y
sus metabolitos, ha presentado efectividad en algunos casos en el tratamiento de
intoxicaciones por cloroformo, incluso combinado con otros antioxidantes naturales,
como la vitamina E.
BIBLIOGRAFÍA
No hay ninguna fuente en el documento actual. WEBGRAFÍA
Cloroformo.2014 EcuRed
de: http://www.ecured.cu/index.php/Triclorometano
 Piridina.2014 EcuRed
De: http://www.ecured.cu/index.php/Piridina
AUTORIA
BQF. Carlos García
Machala 29 de Junio del 2015
 FIRMA
______________
Mónica Lapo

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GLOSARIO
CLOROFORMO
Triclorometano. También llamado cloroformo o tricloruro de metilo, es un compuesto
químico de fórmula química CHCl3. Puede obtenerse por cloración como derivado
del metano o del alcohol etílico o, más habitualmente en la industria farmacéutica,
utilizando hierro y ácido sobre tetracloruro de carbono. A temperatura ambiente, es un
líquido volátil, no inflamable, incoloro, de olor dulzón.
BETA NAFTOL
2-Naftol, o β-naftol, es un sólido cristalino incoloro de fórmula C10H7OH, es un
isómero de 1-naftol, que difieren según la ubicación el hidroxilo de naftaleno. Los
naftoles son los homólogos del naftaleno de fenol, con el grupo hidroxilo más
reactivo que en los fenoles. Ambos isómeros son solubles en alcohol, éter y
cloroformo. Se pueden utilizar en la producción de tinta s en la síntesis orgánica. Por
ejemplo, 2-naftol se hace reaccionar para formar 1,1'-Binaftaleno-2,2'-diol. Es uno de
los derivados de la naftalina más importantes, se parecen a los fenoles en sus
propiedades químicas y tiene distintas aplicaciones en la industria química.
TIMOL
El timol (2-isopropil-5-metilfenol) es una sustancia cristalina incolora con un olor
característico que está presente en la naturaleza en los aceites esenciales del tomillo o
del orégano, que se encuentra a la vez el cimeno y el timeno.
El timol se caracteriza por su poder desinfectante y fungicida. Por su sabor agradable
está presente en la formulación de diversos enjuagues bucales, pastas de dientes etc.
Una disolución de 5 % timol en etanol se utiliza para la desinfección dermal y contra
infecciones con hongos.
REACCION BENEDICT
La reacción benedict o prueba de benedict identifica azucares reductores como
lactosa, glucosa, maltosa. Se utiliza el reactivo de benedict el mismo que consta de
sulfato cúprico, citrato e sodio, carbonato anhidro de sodio.
PIRIDINA
Piridina. Es un líquido incoloro de olor característico desagradable. Pertenece a la
familia de los compuestos aromáticos heterocíclicos, y está estructuralmente
relacionada al benceno, siendo la única diferencia entre ellos el reemplazo de un
grupo CH del anillo bencénico por un átomo de nitrógeno

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ANEXO:
CLOROFORMO
Generalidades
El cloroformo es el triclorometano (CHCl3). Inicialmente se empleó como agente
anestésico, pero poco después se abandonó este uso por s gran toxicidad hepática y renal.es
un líquido incoloro y no inflamable, de olor y sabor dulzón, extremadamente volátil y muy
liposoluble.
Fuentes de exposición
Está disponible como disolvente en laboratorios y en la industria química.se ha prohibido
su uso como sustancia aromática en pastas de dientes y otros productos como resultado de
su efecto carcinogénico en animales después de exposiciones crónicas. La intoxicación
aguda y crónica puede ocurrir por exposición a sus vapores.
Toxicocinetica y mecanismo de acción
El cloroformo es un anestésico potente y origina una profunda depresión del SNC. Entra en
el organismo por vía respiratoria, digestivo dérmico. En humanos puede producir la muerte
con la ingestión oral de tan solo 10ml .exposiciones prolongadas o repetidas a los vapores

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pueden producir hepatotoxicidad, severa que se característica por necrosis centrolobular.
Asimismo se ha descrito degeneración grasa del hígado, el riñón el corazón. El mecanismo
de lesión parece ser la oxidación a nivel hepático del cloroformo a fosgeno a través del
sistema microsomal. También se forma fosgeno cuando los vapores de cloroformo se
exponen al calor de una llama. El fosgeno inhalado se convierte en ácido hidroclorhidrico y
dióxido de carbono cuando reacciona con el agua en el alveolo; y el ácido produce edema
pulmonar.
Cuadro clínico
La severidad de los síntomas por exposición aguda, vía respiratoria, digestivo, dérmica, está
en relación directa con la dosis absorbida. El cloroformo, cuando se inhala, produce todos
los niveles de anestesia, teniendo un margen de seguridad muy estrecho, debido a que causa
fallo cardiaco y respiratorio de forma casi simultánea. No puede detectarse por el olfato
hasta que su concentración excede de 400 ppm. Una exposición durante 10 minutos a
concentraciones de 1000 ppm produce síntomas generales como nauseas, vómitos, vértigo
cefaleas .exposiciones a una concentración de 1000 a 4000 ppm origina desorientación y
concentraciones de 10000 a 20000 ppm dan lugar a pérdida de conciencia, pudiendo
originar la muerte.
Dependiendo de la dosis absorbida va a producir alteraciones más o menos importantes de
la función hepática, renal y cardiaca.
El cloroformo, por su acusado poder como disolvente de grasas, en contacto con la piel da
lugar a dermatitis local, y en los ojos produce irritación corneal.
Reacciones en medio biológico
El material de la investigación se somete a destilación con arrastre de vapor en medio acido
tartárico, y en el destilado se realiza las reacciones de identificación.
1.-En el fondo de un tubo de ensayo se mezclan unas cuantas gotas de cloroformo con otras
tantas de alcohol de 95ª que contiene un poco de nitrato de plata, se inflama la mezcla y se
observa que esta arde con un llama bordeada de verde y que el ácido clorhídrico formado
reacciona con el nitrato de plata disuelto originando un precipitado de cloruro de plata.
Reacción de dunas.- al adicionar unas gotas de destilado que contiene cloroformo a unos
mililitros de potasa alcohólica (proporción 1:10), se originan formiatos y cloruro de potasio.
CHCl3 + 4 KOH ClK + HCO2K + H 2 O

13. “Todo es veneno, nada es veneno, todo depende de la dosis” Página 13
Se neutralizan la mezcla, y se separan en dos porciones a una porción se le agrega
percloruro de hierro produciendo un color rojo en frio o un precipitado en caliente.
A la otra porción se le agrega solución de nitrato de plata produciéndose un precipitado de
cloruro de plata que se disuelve en amoniaco diluido.
Reacción de Lustgarten.- al calentar la muestra con unos miligramos de beta naftol y una
solución alcohólica concentrada de potasa (preferentemente un trozo de potasa y algunas
gotas de alcohol), se obtiene un franco color azul.
Si se sustituye el B-naftol por timol el color es Amarillo as o menos oscuro; con
resorsinol la coloración e roja – violáceo y con la piridina rojo.
Reacción de fujiwara.-En un tubo de ensayo, se vierte 2ml de lejía de sosa 1:2 con una
capa de 2mm de piridina y luego la muestra que contiene el cloroformo; se agitan, podemos
por unos instantes en baño de María y se deja en reposo; se convierte en una materia
coloreada que varía del rosa al rojo vivo, soluble en piridina .Esta reacción sensible para
unos pocos microgramos de cloroformo y es aplicable en la orina de algún sujeto que haya
absorbido de 15-20 g de agua clorofórmica.
Reacción de roseboom.- se disuelve un pequeño cristal de yodo en la solución muestra y
se agregan unos pocos miligramos de clorhidrato de piperacina ; si el cloroformo está
presente en la muestra, la coloración violeta inicial cambia a amarilla rojiza al disolverse el
alcaloide.
Reacción de Benedict.- si la solución muestra contiene cloroformo, reduce el reactivo de
Benedict, y de acuerdo a la concentración del toxico puede producirse una gama de colores
que van desde el verde, amarillo, naranja o rojo ladrillo.
Efectos Potenciales de Salud
 Inhalación: Actúa como anestésico relativamente potente. Irrita el tracto respiratorio
y produce efectos en el sistema nervioso central, incluyendo dolor de cabeza,
somnolencia, mareos. La exposición a altas concentraciones puede resultar en
inconsciencia e inclusive muerte. Puede causar daño hepático y desórdenes
sanguíneos. La exposición prolongada puede llevar a la muerte debida una
frecuencia cardíaca irregular y desórdenes renales y hepáticos.
 Ingestión: Causa quemaduras severas de boca y garganta, dolor pectoral y vómitos.
Grandes cantidades pueden causar síntomas similares a los de la inhalación.
 Contacto con la Piel: Causa irritación cutánea causando enrojecimiento y dolor.
Elimina los aceites naturales. Puede ser absorbido a través de la piel.

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 Contacto con los Ojos: Los vapores causan dolor e irritación ocular. Las
salpicaduras pueden causar severa irritación y posible daño ocular.
 Exposición Crónica: La exposición prolongada o repetida a los vapores puede
causar daño al sistema nervioso central, corazón, hígado y riñones. El contacto con
el líquido elimina las grasas y puede causar irritación crónica de la piel con grietas y
resequedad y la correspondiente dermatitis. Se sospecha que el cloroformo es un
carcinógeno en humanos.
Estabilidad y reactividad
Estabilidad: Establo bajo condiciones ordinarias del uso y del almacenaje. el pH disminuye
en la exposición prolongada a la luz y al aire debido a la formación de HCl.
Productos peligrosos de la descomposición: Monóxido de carbono del producto de mayo,
bióxido de carbono, cloruro de hidrógeno y fosgeno cuando está calentado a la
descomposición.
Polimerización peligrosa: No ocurrirá.
Manejo
Guarde en un envase resistente a la luz, cerrado herméticamente y almacene en un área
fresca, seca y bien ventilada. Proteja contra los daños físicos. Aísle de las substancias
incompatibles. Use equipo de protección especial para realizar el mantenimiento o donde
las exposiciones puedan exceder los niveles de exposición establecidos. Lávese las manos,
la cara, los antebrazos y el cuello al salir de las áreas restringidas. Dese un baño de
regadera, deseche la ropa exterior, cámbiese la ropa vistiendo ropa limpia al terminar el día.
Evite la contaminación cruzada de las ropas de calle. Lávese las manos antes de comer y no
coma, ni beba, ni fume en el trabajo. Los envases de este material pueden ser peligrosos
cuando están vacíos ya que retienen residuos del producto (vapores, líquido); observe todas

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las advertencias y precauciones que se alistan para el producto. Umbral de olor del
cloroformo: 250 mg/m3. El umbral de olor sólo sirve como advertencia de la exposición; si
no siente el olor, no significa que usted no está siendo expuesto.
Desechos:
En pequeñas cantidades puede dejarse evaporar en una campana extractora. En caso de
grandes cantidades, debe mezclarse con combustible, como queroseno, e incinerarse en
equipo especializado para evitar la generación de fosgeno.
ALMACENAMIENTO:
Los recipientes que contienen este producto deben ser almacenados en lugares alejados de
la luz directa del sol, ya que se descompone lentamente a productos como el fosgeno.
INFORMACIÓN TOXICOLÓGICA
DATO TOXICOLÓGICOS:
Chloroform: LD50 oral en ratas: 908 mg/kg; LD50 piel de conejos: > 20 gm/kg; LC50
inhalación en ratas: 47702 mg/m3/4H; irritación data: piel de conejos 10 mg/24H abierta
leve; Ojo de conejos: 20 mg/24H moderada; Ha sido investigado como tumorígeno,
mutagénico y causante de efectos reproductivos.
Se han observado defectos al nacimiento en ratas y ratones expuestos a la inhalación de
cloroformo a concentraciones en el aire mayores de 100 ppm. La ingestión de cloroformo
por animales de laboratorio gestantes, ha causado feto toxicidad pero no defectos al
nacimiento y sólo a niveles que causan severos efectos en la madre
INFORMACIÓN ECOLÓGICA
Esta sustancia puede ser peligrosa para el ambiente; debería prestarse atención especial al
agua.
 Ecotoxicidad
Algas (Chlamydomonas reinhardii) EC50 = 13,3 mg/l (72 horas)
Crustáceos (Artemia salina) EC50 = 68 mg/l (10 horas)
Peces (Brachydanio rerio) LC50 = 100 mg/l (48 horas)
 Movilidad
Coeficiente de reparto octanol/agua como log Pow: 1,97