SlideShare ist ein Scribd-Unternehmen logo
1 von 16
Downloaden Sie, um offline zu lesen
Kvantiferon test u reumatologiji
Miloš Stefanović, laboratorijski tehničar
IGRA (Interferon-γ release assays) testovi
2001. god. FDA agencija (uprava za hranu i lekove) odobrila je
komercijalne testove za imunodijagnostiku TB koji se izvode in vitro u
uzorcima krvi.
Postoje dve generacije komercijalnih ELISA testova:
●
QuantiFERON TB Gold test
●
T-SPOT.TB (ELISPOT),
enzimski imunospot test
Princip QuantiFERON TB Gold testa
● Q-TB Gold test meri stvaranje IFN-γ nakon inkubiranja ispitivanog uzorka (16-
24h) sa kompleksom specifičnih antigena M.tuberculosis.
● Ovaj test meri koncentraciju solubilnog IFN-γ u 1 ml pune krvi.
Imunodijagnostika aktivne tuberkuloze (TB) i
latentne tuberkulozne infekcije (LTB)
●
Pod aktivnom tuberkulozom (TB) se podrazumeva infekcija izazvana
bakterijom M.tuberculosis koja ima svoju kliničku sliku, radiološku
sliku i bakteriološki nalaz. Bolest je infektivna, može se preneti na zdrave
osobe.
●
Latentna tuberkulozna infekcija (LTB) se definiše kao infekcija
M.tuberculosis complex-om, koja se potvrđuje pozitivnom reakcijom na
kožni test tuberkulinom (PPD test) i/ili pozitivnim Q-TB testom bez i
jednog kliničkog ili radiološkog znaka aktivne bolesti. Ona nije infektivna i ne
može se preneti na druge osobe.
●
Testovi koji se koriste u kliničkoj praksi za otkrivanje osoba sa LTB su in
vivo PPD test i in vitro Q-TB test koji otkrivaju upamćeni imuni
odgovor na antigene bakterija.
Prednosti QuantiFERON TB Gold testa u odnosu
na PPD test (tuberkulinski kožni test)
● Standardizovano je uzorkovanje krvi
● Samo jedna poseta pacijenta je dovoljna za testiranje
● Procenjuje se odgovor na više antigena istovremeno
● Rezultati nisu subjektivni i manja je greška u očitavanju
● Ne zavise od prethotne vakcinacije BCG vakcinom
Izvođenje QuantiFERON TB Gold testa
1.Vađenje krvi
2.Inkubiranje krvi
3.Centrifugiranje krvi
4.QFT ELISA test
5.Izračunavanje i tumačenje rezultata
Vađenje krvi
● Po 1ml krvi se vadi u tri specifično
spremljene epruvete (NIL, TB
ANTIGEN i MITOGEN)
● NIL epruveta (sivi čep) je negativna
kontrola. Sadrži fiziološki rastvor.
● TB ANTIGEN epruveta (crveni čep),
sadrži specifične TB antigene.
● MITOGEN epruveta (ljubičasti čep)
je pozitivna kontrola. Sadrži
fitohemaglutinine.
● Nakon vađenja krvi sve tri epruvete je
potrebno promućkati deset puta da bi
se unutrašnjost epruveta prekrila
krvlju.
Inkubiranje krvi
● Preporučuje se inkubiranje
uzoraka odmah nakon vadjenja
● Uzorci mogu da stoje na sobnoj
temperaturi do 16 časova ali se
ne smeju lediti ili držati u
frižideru
● Inkubiranje se vrsi na
temperaturi od 37 °C, od 16 do
24 časa
● Nakon inkubiranja uzorci se
mogu čuvati tri dana na
temperaturi od 4°C do 27°C pre
centrifugiranja
Centrifugiranje krvi
● Epruvete sa inkubiranim uzorcima se
centrifugiraju 10 min. na 3000 o/min
● Svaka epruveta sadrži gel koji razdvaja
krvnu plazmu od ćelija krvi nakon
centrifugiranja i olakšava izdvajanje
plazme
● Plazma može biti crvenija nego obično
● Ako se ELISA test ne obavlja istog dana,
plazma se može čuvati u epruveti do
mesec dana na temperaturi od 2°C do
8°C
● Za duže čuvanje potrebno je izdvojiti
plazmu u plastične epruvete i čuvati na
temperaturi nižoj od -20°C
QFT ELISA test
● QFT ELISA test se koristi
za merenje količine IFN-γ u
svakom uzorku plazme
● Ploča za ELISA test ima 96
polja na kojima je moguće
odraditi 28 uzoraka
● Pri svakom izvođenju testa
potrebno je odraditi 4
standarda kao kontrolu
● Standardi se dobijaju u
pakovanju i svaki ima
određenu vrednost IFN-γ
QFT ELISA test
● Pre testiranje je potrebno kalibrisati ELISA komponente na sobnoj
temperaturi najmanje 60 min.
● Prvo se u svako polje dodaje po 50µl konjugata, a zatim po 50µl
plazme i standarda koji se inkubiraju na sobnoj temperaturi 120 min.
● Nakon toga sledi ispiranje pa dodavanje po 100µl enzimskog
supstrata u svako polje na ploči i inkubira se 30 min.
● Za zaustavljanje reakcije se dodaje po 50µl enzimskog rastvora
(stopera)
● U roku od 5 min. treba izmeriti optičku gustinu svakog polja pomoću
čitača za mikroploče sa filterom od 450nm
● Dobijene vrednosti se koriste za izračunavanje rezultata
Izračunavanje i tumačenje rezultata
● QFT Analysis Software se
koristi za analizu podataka i
izračunavanje rezultata.
● Ovaj softver obavlja procenu
kvaliteta testa, generiše krivu
standarda i obezbeđuje rezultate
testiranja za svakog pacijenta.
Izračunavanje i tumačenje rezultata
● Pozitivan rezultat - Ukazuje na
mogućnost postojanja LTB (vrednosti za
IFN-γ u TB ANTIGEN epruveti su
iznad vrednosti od vrednosti u NIL
epruveti)
● Negativan rezultat - Znači da je veoma
mala šansa da je prisutna LTB
● Neodređeni rezultat - Izostanak
očekivanog rezultata u + i/ili - kontroli.
Ukazuje na tehničku grešku, rukovanje
uzorkom, skladištenje, zamrzavanje pre
inkubacije što dovodi do ćelijske anergije
(odsustvo reakcije na antigene) ili
ukazuje na imuni status testirane osoba,
dugoročna imunosupresija koja dovodi
do T ćelijske anergije
Izračunavanje i tumačenje rezultata
● Rezultate Q-TB testa uvek treba tumačiti u skladu sa drugim kliničkim i
laboratorijskim ispitivanjima
● Kod obolelih od RA zbog same prirode bolesti, a posebno zbog primene
imunosupresivne terapije snižen je imuni odgovor i postoji veliki rizik za TB
● Pre uključivanja imunosupresivne terapije po preprukama i vodičima
obavezno uraditi PPD i Q-TB test.
● Ako je pozitivan PPD obavezno uraditi i Q-TB ili ponoviti PPD test.
● U slučaju pozitivnog Q-TB testa doneti odluku o terapiji i hemoprofilaksi
(izonijazid).
Rezultat Q-TB GOLD testa bolesnika Instituta za
reumatologiju na biološkoj terapiji za decembar 2014
Pozitivni 5 Negativni 11
0
2
4
6
8
10
12
Rezultat koji izdaje laboratorija

Weitere ähnliche Inhalte

Was ist angesagt?

Ugrožavanje i zaštita biodiverziteta-ponavljanje
Ugrožavanje i zaštita biodiverziteta-ponavljanjeUgrožavanje i zaštita biodiverziteta-ponavljanje
Ugrožavanje i zaštita biodiverziteta-ponavljanjeEna Horvat
 
Sinteza proteina
Sinteza proteinaSinteza proteina
Sinteza proteinaMare Ković
 
Kranijalni nervi I deo
Kranijalni nervi I deoKranijalni nervi I deo
Kranijalni nervi I deodr Šarac
 
Hemija i njen_značaj,vidi se
Hemija i njen_značaj,vidi seHemija i njen_značaj,vidi se
Hemija i njen_značaj,vidi seBiljana Ristic
 
Alkeni i alkini
Alkeni i alkini Alkeni i alkini
Alkeni i alkini vvlivvli
 
Hemija r1 oksidoredukcione_reakcije_zadaci za vezbanje- oskidoredukcione reak...
Hemija r1 oksidoredukcione_reakcije_zadaci za vezbanje- oskidoredukcione reak...Hemija r1 oksidoredukcione_reakcije_zadaci za vezbanje- oskidoredukcione reak...
Hemija r1 oksidoredukcione_reakcije_zadaci za vezbanje- oskidoredukcione reak...NašaŠkola.Net
 
Zaštita od strujnog udara
Zaštita od strujnog udaraZaštita od strujnog udara
Zaštita od strujnog udaraSlobodan Božić
 
3. kpcr odraslih dr aleksandar pavkovic
3. kpcr odraslih dr aleksandar pavkovic3. kpcr odraslih dr aleksandar pavkovic
3. kpcr odraslih dr aleksandar pavkovicLKSedukacija
 
Imobilizacija gornjih ekstremiteta / Imobilizacija donjih ekstremiteta
Imobilizacija gornjih ekstremiteta / Imobilizacija donjih ekstremitetaImobilizacija gornjih ekstremiteta / Imobilizacija donjih ekstremiteta
Imobilizacija gornjih ekstremiteta / Imobilizacija donjih ekstremitetaLaraJankovic
 
Antitusici i ekspektoransi
Antitusici i ekspektoransiAntitusici i ekspektoransi
Antitusici i ekspektoransiAntonio Kobaš
 
Neuroradiologija predavanje tehnolozi
Neuroradiologija predavanje tehnoloziNeuroradiologija predavanje tehnolozi
Neuroradiologija predavanje tehnoloziMate Maričić
 
Štitasta zlezda
Štitasta zlezdaŠtitasta zlezda
Štitasta zlezdadr Šarac
 

Was ist angesagt? (20)

Solunski front
Solunski front Solunski front
Solunski front
 
Ugrožavanje i zaštita biodiverziteta-ponavljanje
Ugrožavanje i zaštita biodiverziteta-ponavljanjeUgrožavanje i zaštita biodiverziteta-ponavljanje
Ugrožavanje i zaštita biodiverziteta-ponavljanje
 
IMUNOLOGIJJA
IMUNOLOGIJJAIMUNOLOGIJJA
IMUNOLOGIJJA
 
Sinteza proteina
Sinteza proteinaSinteza proteina
Sinteza proteina
 
Kranijalni nervi I deo
Kranijalni nervi I deoKranijalni nervi I deo
Kranijalni nervi I deo
 
Termoregulacija
TermoregulacijaTermoregulacija
Termoregulacija
 
Eritrociti jelena todic i5
Eritrociti jelena todic i5Eritrociti jelena todic i5
Eritrociti jelena todic i5
 
Izmjenicna struja 5
Izmjenicna struja 5Izmjenicna struja 5
Izmjenicna struja 5
 
Hemija i njen_značaj,vidi se
Hemija i njen_značaj,vidi seHemija i njen_značaj,vidi se
Hemija i njen_značaj,vidi se
 
Alkeni i alkini
Alkeni i alkini Alkeni i alkini
Alkeni i alkini
 
Hemija r1 oksidoredukcione_reakcije_zadaci za vezbanje- oskidoredukcione reak...
Hemija r1 oksidoredukcione_reakcije_zadaci za vezbanje- oskidoredukcione reak...Hemija r1 oksidoredukcione_reakcije_zadaci za vezbanje- oskidoredukcione reak...
Hemija r1 oksidoredukcione_reakcije_zadaci za vezbanje- oskidoredukcione reak...
 
Zaštita od strujnog udara
Zaštita od strujnog udaraZaštita od strujnog udara
Zaštita od strujnog udara
 
3. kpcr odraslih dr aleksandar pavkovic
3. kpcr odraslih dr aleksandar pavkovic3. kpcr odraslih dr aleksandar pavkovic
3. kpcr odraslih dr aleksandar pavkovic
 
Atmosfera
AtmosferaAtmosfera
Atmosfera
 
Imobilizacija gornjih ekstremiteta / Imobilizacija donjih ekstremiteta
Imobilizacija gornjih ekstremiteta / Imobilizacija donjih ekstremitetaImobilizacija gornjih ekstremiteta / Imobilizacija donjih ekstremiteta
Imobilizacija gornjih ekstremiteta / Imobilizacija donjih ekstremiteta
 
Ekološki faktori
Ekološki faktoriEkološki faktori
Ekološki faktori
 
Evolucioni mehanizmi
Evolucioni mehanizmi Evolucioni mehanizmi
Evolucioni mehanizmi
 
Antitusici i ekspektoransi
Antitusici i ekspektoransiAntitusici i ekspektoransi
Antitusici i ekspektoransi
 
Neuroradiologija predavanje tehnolozi
Neuroradiologija predavanje tehnoloziNeuroradiologija predavanje tehnolozi
Neuroradiologija predavanje tehnolozi
 
Štitasta zlezda
Štitasta zlezdaŠtitasta zlezda
Štitasta zlezda
 

Andere mochten auch

Pravilno uzorkovanje za lab
Pravilno uzorkovanje za labPravilno uzorkovanje za lab
Pravilno uzorkovanje za labEva Nimčević
 
Delamanid for multidrug resistant pulmonary tuberculosis
Delamanid for multidrug resistant pulmonary tuberculosisDelamanid for multidrug resistant pulmonary tuberculosis
Delamanid for multidrug resistant pulmonary tuberculosisHaroon Rashid
 
Aditivi koji se koriste prilikom proizvodnje sladoleda
Aditivi koji se koriste prilikom proizvodnje sladoledaAditivi koji se koriste prilikom proizvodnje sladoleda
Aditivi koji se koriste prilikom proizvodnje sladoledaMilos Stefanovic
 
Pribor i materijal za laboratoriju vii 3
Pribor i materijal za laboratoriju vii 3Pribor i materijal za laboratoriju vii 3
Pribor i materijal za laboratoriju vii 3Luka Zagar
 
PPT Gori "Immunologia TB/HIV"
PPT Gori "Immunologia TB/HIV"PPT Gori "Immunologia TB/HIV"
PPT Gori "Immunologia TB/HIV"StopTb Italia
 
molecular detection of tuberculosis and rifampin resistance.
molecular detection of tuberculosis and rifampin resistance.molecular detection of tuberculosis and rifampin resistance.
molecular detection of tuberculosis and rifampin resistance.Khaled AlKhodari
 
National TB Advocates meeting at Delhi on 10th & 11th sep2015 PPT
National TB Advocates meeting at Delhi on 10th & 11th sep2015 PPTNational TB Advocates meeting at Delhi on 10th & 11th sep2015 PPT
National TB Advocates meeting at Delhi on 10th & 11th sep2015 PPTNatesan Ramalingam
 
Mdr tb & xdr tb ppt.
Mdr tb & xdr tb ppt. Mdr tb & xdr tb ppt.
Mdr tb & xdr tb ppt. Silajit Dutta
 

Andere mochten auch (11)

Tuberculosis diagnostics
Tuberculosis diagnosticsTuberculosis diagnostics
Tuberculosis diagnostics
 
Pravilno uzorkovanje za lab
Pravilno uzorkovanje za labPravilno uzorkovanje za lab
Pravilno uzorkovanje za lab
 
Delamanid for multidrug resistant pulmonary tuberculosis
Delamanid for multidrug resistant pulmonary tuberculosisDelamanid for multidrug resistant pulmonary tuberculosis
Delamanid for multidrug resistant pulmonary tuberculosis
 
Aditivi koji se koriste prilikom proizvodnje sladoleda
Aditivi koji se koriste prilikom proizvodnje sladoledaAditivi koji se koriste prilikom proizvodnje sladoleda
Aditivi koji se koriste prilikom proizvodnje sladoleda
 
Pribor i materijal za laboratoriju vii 3
Pribor i materijal za laboratoriju vii 3Pribor i materijal za laboratoriju vii 3
Pribor i materijal za laboratoriju vii 3
 
PPT Gori "Immunologia TB/HIV"
PPT Gori "Immunologia TB/HIV"PPT Gori "Immunologia TB/HIV"
PPT Gori "Immunologia TB/HIV"
 
molecular detection of tuberculosis and rifampin resistance.
molecular detection of tuberculosis and rifampin resistance.molecular detection of tuberculosis and rifampin resistance.
molecular detection of tuberculosis and rifampin resistance.
 
National TB Advocates meeting at Delhi on 10th & 11th sep2015 PPT
National TB Advocates meeting at Delhi on 10th & 11th sep2015 PPTNational TB Advocates meeting at Delhi on 10th & 11th sep2015 PPT
National TB Advocates meeting at Delhi on 10th & 11th sep2015 PPT
 
Chemotherapy of Tuberculosis
Chemotherapy of TuberculosisChemotherapy of Tuberculosis
Chemotherapy of Tuberculosis
 
TB Paru
TB ParuTB Paru
TB Paru
 
Mdr tb & xdr tb ppt.
Mdr tb & xdr tb ppt. Mdr tb & xdr tb ppt.
Mdr tb & xdr tb ppt.
 

QuantiFERON TB Gold u reumatologiji

  • 1. Kvantiferon test u reumatologiji Miloš Stefanović, laboratorijski tehničar
  • 2. IGRA (Interferon-γ release assays) testovi 2001. god. FDA agencija (uprava za hranu i lekove) odobrila je komercijalne testove za imunodijagnostiku TB koji se izvode in vitro u uzorcima krvi. Postoje dve generacije komercijalnih ELISA testova: ● QuantiFERON TB Gold test ● T-SPOT.TB (ELISPOT), enzimski imunospot test
  • 3. Princip QuantiFERON TB Gold testa ● Q-TB Gold test meri stvaranje IFN-γ nakon inkubiranja ispitivanog uzorka (16- 24h) sa kompleksom specifičnih antigena M.tuberculosis. ● Ovaj test meri koncentraciju solubilnog IFN-γ u 1 ml pune krvi.
  • 4. Imunodijagnostika aktivne tuberkuloze (TB) i latentne tuberkulozne infekcije (LTB) ● Pod aktivnom tuberkulozom (TB) se podrazumeva infekcija izazvana bakterijom M.tuberculosis koja ima svoju kliničku sliku, radiološku sliku i bakteriološki nalaz. Bolest je infektivna, može se preneti na zdrave osobe. ● Latentna tuberkulozna infekcija (LTB) se definiše kao infekcija M.tuberculosis complex-om, koja se potvrđuje pozitivnom reakcijom na kožni test tuberkulinom (PPD test) i/ili pozitivnim Q-TB testom bez i jednog kliničkog ili radiološkog znaka aktivne bolesti. Ona nije infektivna i ne može se preneti na druge osobe. ● Testovi koji se koriste u kliničkoj praksi za otkrivanje osoba sa LTB su in vivo PPD test i in vitro Q-TB test koji otkrivaju upamćeni imuni odgovor na antigene bakterija.
  • 5. Prednosti QuantiFERON TB Gold testa u odnosu na PPD test (tuberkulinski kožni test) ● Standardizovano je uzorkovanje krvi ● Samo jedna poseta pacijenta je dovoljna za testiranje ● Procenjuje se odgovor na više antigena istovremeno ● Rezultati nisu subjektivni i manja je greška u očitavanju ● Ne zavise od prethotne vakcinacije BCG vakcinom
  • 6. Izvođenje QuantiFERON TB Gold testa 1.Vađenje krvi 2.Inkubiranje krvi 3.Centrifugiranje krvi 4.QFT ELISA test 5.Izračunavanje i tumačenje rezultata
  • 7. Vađenje krvi ● Po 1ml krvi se vadi u tri specifično spremljene epruvete (NIL, TB ANTIGEN i MITOGEN) ● NIL epruveta (sivi čep) je negativna kontrola. Sadrži fiziološki rastvor. ● TB ANTIGEN epruveta (crveni čep), sadrži specifične TB antigene. ● MITOGEN epruveta (ljubičasti čep) je pozitivna kontrola. Sadrži fitohemaglutinine. ● Nakon vađenja krvi sve tri epruvete je potrebno promućkati deset puta da bi se unutrašnjost epruveta prekrila krvlju.
  • 8. Inkubiranje krvi ● Preporučuje se inkubiranje uzoraka odmah nakon vadjenja ● Uzorci mogu da stoje na sobnoj temperaturi do 16 časova ali se ne smeju lediti ili držati u frižideru ● Inkubiranje se vrsi na temperaturi od 37 °C, od 16 do 24 časa ● Nakon inkubiranja uzorci se mogu čuvati tri dana na temperaturi od 4°C do 27°C pre centrifugiranja
  • 9. Centrifugiranje krvi ● Epruvete sa inkubiranim uzorcima se centrifugiraju 10 min. na 3000 o/min ● Svaka epruveta sadrži gel koji razdvaja krvnu plazmu od ćelija krvi nakon centrifugiranja i olakšava izdvajanje plazme ● Plazma može biti crvenija nego obično ● Ako se ELISA test ne obavlja istog dana, plazma se može čuvati u epruveti do mesec dana na temperaturi od 2°C do 8°C ● Za duže čuvanje potrebno je izdvojiti plazmu u plastične epruvete i čuvati na temperaturi nižoj od -20°C
  • 10. QFT ELISA test ● QFT ELISA test se koristi za merenje količine IFN-γ u svakom uzorku plazme ● Ploča za ELISA test ima 96 polja na kojima je moguće odraditi 28 uzoraka ● Pri svakom izvođenju testa potrebno je odraditi 4 standarda kao kontrolu ● Standardi se dobijaju u pakovanju i svaki ima određenu vrednost IFN-γ
  • 11. QFT ELISA test ● Pre testiranje je potrebno kalibrisati ELISA komponente na sobnoj temperaturi najmanje 60 min. ● Prvo se u svako polje dodaje po 50µl konjugata, a zatim po 50µl plazme i standarda koji se inkubiraju na sobnoj temperaturi 120 min. ● Nakon toga sledi ispiranje pa dodavanje po 100µl enzimskog supstrata u svako polje na ploči i inkubira se 30 min. ● Za zaustavljanje reakcije se dodaje po 50µl enzimskog rastvora (stopera) ● U roku od 5 min. treba izmeriti optičku gustinu svakog polja pomoću čitača za mikroploče sa filterom od 450nm ● Dobijene vrednosti se koriste za izračunavanje rezultata
  • 12. Izračunavanje i tumačenje rezultata ● QFT Analysis Software se koristi za analizu podataka i izračunavanje rezultata. ● Ovaj softver obavlja procenu kvaliteta testa, generiše krivu standarda i obezbeđuje rezultate testiranja za svakog pacijenta.
  • 13. Izračunavanje i tumačenje rezultata ● Pozitivan rezultat - Ukazuje na mogućnost postojanja LTB (vrednosti za IFN-γ u TB ANTIGEN epruveti su iznad vrednosti od vrednosti u NIL epruveti) ● Negativan rezultat - Znači da je veoma mala šansa da je prisutna LTB ● Neodređeni rezultat - Izostanak očekivanog rezultata u + i/ili - kontroli. Ukazuje na tehničku grešku, rukovanje uzorkom, skladištenje, zamrzavanje pre inkubacije što dovodi do ćelijske anergije (odsustvo reakcije na antigene) ili ukazuje na imuni status testirane osoba, dugoročna imunosupresija koja dovodi do T ćelijske anergije
  • 14. Izračunavanje i tumačenje rezultata ● Rezultate Q-TB testa uvek treba tumačiti u skladu sa drugim kliničkim i laboratorijskim ispitivanjima ● Kod obolelih od RA zbog same prirode bolesti, a posebno zbog primene imunosupresivne terapije snižen je imuni odgovor i postoji veliki rizik za TB ● Pre uključivanja imunosupresivne terapije po preprukama i vodičima obavezno uraditi PPD i Q-TB test. ● Ako je pozitivan PPD obavezno uraditi i Q-TB ili ponoviti PPD test. ● U slučaju pozitivnog Q-TB testa doneti odluku o terapiji i hemoprofilaksi (izonijazid).
  • 15. Rezultat Q-TB GOLD testa bolesnika Instituta za reumatologiju na biološkoj terapiji za decembar 2014 Pozitivni 5 Negativni 11 0 2 4 6 8 10 12
  • 16. Rezultat koji izdaje laboratorija