Resumen rápido sobre los fundamentos de la espectrofotometría de absorción, y de la ley de Lambert-Beer, y su aplicación. (Esta presentación no es de mi autoría, pero la publico para su uso)

1. Análisis espectrofotométricos

2. 1. Características de una onda
electromagnética
La radiación electromagnética es una onda,
caracterizada por sus propiedades:
Longitud de onda λ
Frecuencia ν
Amplitud A
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3. 2. Ley de Lambert y Beer
La cantidad de luz absorbida depende de:
El tipo de sustancia por la que atraviesa la
luz
La distancia que recorre la luz
La concentración de la sustancia
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4. 2. Ley de Lambert y Beer
Transmitancia ó % transmitancia
% T = (I/Io) ×100
Absorbancia: se relaciona con la Transmitancia por
medio de la ecuación:
A = -log T = -log(I/Io) = log(Io/I)
A = ε C d
donde:
ε : Coeficiente de absortividad
C: Concentración de la sustancia en análisis
d: distancia que recorre la luz
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5. 3. Espectro electromagnético
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6. 4. Efectos de la radiación UV y visible
sobre las moléculas
La radiación UV y visible al actuar sobre las moléculas
puede producir excitaciones electrónicas sobre
determinados grupos funcionales, que en el caso de
la luz visible se llaman grupos cromóforos, porque
son responsables del color.
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7. Grupos cromóforos: son grupos funcionales responsables de la
absorción de la radiación
Principalmente son:
Metales de transición
Dobles y triples enlaces C-C, sistemas aromáticos, grupo carbonilo,
imino -C=N, nitro y enlaces C-Y donde Y es un átomo con pares libres.
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Grupo hemo de
la hemoglobina Minerales

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Grupos auxocromos: son grupos sustituyentes del cromóforo y
alteran la λmax. Son auxocromos los halógenos, grupos metilo,
grupos hidroxi, alcohoxi, amino.
Efecto de los grupos auxocromos sobre los cromóforos:
• Desplazamiento batocrómico.- La absorción del cromóforo se
desplaza hacia mayores longitudes de onda
•Desplazamiento hipsocrómico.- La absorción del cromóforo se
desplaza hacia menores longitudes de onda
•Efecto hipsocrómico.- la banda presenta mayor intensidad
•Efecto hipocrómico.- la banda presenta menor intensidad

9. Grupos cromóforos:
• Grupos orgánicos con dobles enlaces conjugados
• Grupos orgánicos con estructuras aromáticas
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Β-caroteno Antocianos

10. • Absorbe una parte de la energía del espectro
visible la sustancia aparece del color
complementario

11. 5. Espectro visible
Un colorante puede absorber la luz visible y el color
que aparece es el color que se refleja. Por eso un
colorante que absorbe la luz roja, aparecerá de color
azul.
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12. Espectrofotómetro
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13. Espectrofotómetro
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14. 7. Cuantificación de sustancias con ayuda de
la espectrofotometría
Se debe realizar primero el espectro característico
de la sustancia, para encontrar la longitud de
máxima aborbancia (λ).
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15. 7. Cuantificación de sustancias con ayuda de
la espectrofotometría
Una vez determinada λmax se procede a trabajar a
esta longitud de onda para construir la curva de
calibración de la sustancia, preparando
diferentes concentraciones de la misma.
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16. 7. Cuantificación de sustancias con ayuda de
la espectrofotometría
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Curva de calibración
k = ε×d

17. 8. Estructura de algunos colorantes
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Azul de metileno
Anaranjado de metilo

18. 8. Estructura de algunos colorantes
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Rojo de metilo
Rojo congo

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¿PREGUNTAS?