Die Rolle des Zytoskeletts bei der mechanischenBelastung von humanen mesenchymalen Stammzellen 19.02.12   © 2012 Universit...
Mesenchymale Stammzellen (MSZ)           •  Stammzellnische (Knochenmark, Knorpel, Fettgewebe, Blut u. a.)                ...
Zielstellung           Hat die Modifikation des Aktinzytoskeletts durch           Inhibitoren Einfluss auf die Mechanotransd...
Zielstellung           Hat die Modifikation des Aktinzytoskeletts durch           Inhibitoren Einfluss auf die Mechanotransd...
Zytoskelett            Aktinfilamente                                                                                      ...
Fokaladhäsion und Mechanotransduktion      Integrin                                                                       ...
Fokaladhäsion und Mechanotransduktion      Integrin                                                                       ...
Fokaladhäsion und Mechanotransduktion      Integrin                                                                       ...
Fokaladhäsion und Mechanotransduktion      Integrin                                                                       ...
Fokaladhäsion und Mechanotransduktion      Integrin                                                                       ...
Aktin und Inhibitoren                                                                                            Jasplakin...
Aktin und Inhibitoren                                                                                            Jasplakin...
Aktin und Inhibitoren                                                                                            Jasplakin...
Aktin und Inhibitoren                                                                                            Jasplakin...
Aktin und Inhibitoren                                                                                            Jasplakin...
Verwendung der Inhibitoren           •  Konzentrationen ohne Beeinträchtigung der Zellvitalität                •  Jasplaki...
Kontrolle (DMSO)              Morphologie und Aktinzytoskelett                                 0,01 µM                    ...
Kontrolle (DMSO)Jasplakinolid 0,01 µM              Morphologie und Aktinzytoskelett – Jasplakinolid                       ...
Kontrolle (DMSO)              Morphologie und Aktinzytoskelett – Cytochalasin D                                 0,01 µM   ...
Kontrolle (DMSO)Cytochalasin D 0,5 µM              Morphologie und Aktinzytoskelett – Cytochalasin D                      ...
Kontrolle (DMSO)              Morphologie und Aktinzytoskelett – Latrunculin A                                 0,01 µM    ...
Kontrolle (DMSO)Latrunculin A 0,1 µM              Morphologie und Aktinzytoskelett – Latrunculin A                       1...
Mechanische Stimulation                                                                                            MSZ    ...
Mechanische Stimulation                                                                                                   ...
Mechanische Stimulation                                                                                                   ...
Mechanische Stimulation                                                                                                   ...
Aktivierung von ERK und AKT                                           Magnetfeld              Kontrolle                   ...
Aktivierung von ERK und AKT                                                                 Magnetfeld                    ...
Aktivierung von ERK und AKT – Jasplakinolid                                                                 Magnetfeld    ...
Aktivierung von ERK und AKT – Jasplakinolid                                                                 Magnetfeld    ...
Aktivierung von ERK und AKT       C                700                                                                    ...
Aktivierung von ERK und AKT – Jasplakinolid       C                700                                                    ...
Aktivierung von ERK und AKT – Jasplakinolid       C                700                                                    ...
Aktivierung von ERK und AKT – Cytochalasin D                                           Magnetfeld                         ...
Aktivierung von ERK und AKT – Cytochalasin D                                                            Magnetfeld        ...
Aktivierung von ERK und AKT – Cytochalasin D     C                        700                                             ...
Aktivierung von ERK und AKT – Cytochalasin D     C                        700                                             ...
Aktivierung von ERK und AKT – Latrunculin A                                           Magnetfeld                          ...
Aktivierung von ERK und AKT – Latrunculin A                                                          Magnetfeld           ...
Aktivierung von ERK und AKT – Latrunculin A     C                  700                                                    ...
Aktivierung von ERK und AKT – Latrunculin A     C                  700                                                    ...
Zusammenfassung           Jasplakinolid           •    verdickte Aktinbündel           •    keine Hemmung der Aktivierung ...
Zusammenfassung           Jasplakinolid           •    verdickte Aktinbündel           •    keine Hemmung der Aktivierung ...
Zusammenfassung           Jasplakinolid           •    verdickte Aktinbündel           •    keine Hemmung der Aktivierung ...
Zusammenfassung           Jasplakinolid           •    verdickte Aktinbündel           •    keine Hemmung der Aktivierung ...
Fazit           •  Inhibitoren des Aktinzytoskeletts wie Latrunculin A können              die durch mechanische Interfere...
Fazit           •  Inhibitoren des Aktinzytoskeletts wie Latrunculin A können              die durch mechanische Interfere...
Fazit           •  Inhibitoren des Aktinzytoskeletts wie Latrunculin A können              die durch mechanische Interfere...
Fazit           •  Inhibitoren des Aktinzytoskeletts wie Latrunculin A können              die durch mechanische Interfere...
Vielen Dank für Ihre Aufmerksamkeit19.02.12       © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenba...
Quellen           •    Caplan AI (2009) Why are MSZs therapeutic? New data: new insight. J Pathol 217(2): 318-24          ...
Quellen           •    Scadden DT (2006) The stem-cell niche as an entity of action. Nature 441(7097): 1075-9           • ...
Anhang19.02.12      © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach
Anhang             www.invitrogen.com19.02.12         © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Lang...
Kontrolle (ohne DMSO) Kontrolle (mit DMSO)              DMSO – Morphologie und Aktinzytoskelett                           ...
Jasp und Lat A – Morphologie    Kontrolle (ohne DMSO)                    Jasplakinolid 0,01 µM                           J...
Vitalitätstest - MTS19.02.12        © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach
Vitalitätstest - KV19.02.12        © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach
Vitalitätstest – MTS / KV19.02.12       © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach
Schematischer Ablauf des Integrinreizes19.02.12       © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Lang...
Coomassie           Latrunculin A           Jasplakinolid     Cytochalasin D19.02.12           © 2012 Universität Rostock ...
Kontrolle                                 2100                                                                            ...
Kontrolle                                 600                                                                     **      ...
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Verteidigung der Masterarbeit von Anne Langenbach: “Die Rolle des Zytoskeletts bei der mechanischen Belastung von humanen mesenchymalen Stammzellen”

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Anne Langenbach: “Die Rolle des Zytoskeletts bei der mechanischen Belastung von humanen mesenchymalen Stammzellen”

  1. 1. Die Rolle des Zytoskeletts bei der mechanischenBelastung von humanen mesenchymalen Stammzellen 19.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach
  2. 2. Mesenchymale Stammzellen (MSZ) •  Stammzellnische (Knochenmark, Knorpel, Fettgewebe, Blut u. a.) •  chemische Signale •  Zellform •  mechanische Signale www.sciencephoto.com à regenerative Medizin19.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach 2
  3. 3. Zielstellung Hat die Modifikation des Aktinzytoskeletts durch Inhibitoren Einfluss auf die Mechanotransduktion in MSZ?19.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach 3
  4. 4. Zielstellung Hat die Modifikation des Aktinzytoskeletts durch Inhibitoren Einfluss auf die Mechanotransduktion in MSZ? •  humane MSZ aus dem Knochenmark •  Modifikation des Aktinzytoskeletts •  mechanische Stimulation •  Signaltransduktion (ERK und AKT)19.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach 3
  5. 5. Zytoskelett Aktinfilamente www.sciencephoto.com19.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach 4
  6. 6. Fokaladhäsion und Mechanotransduktion Integrin Fokale Adhäsionskinase Vinculin Aktin modifiziert nach www.reading.ac.uk/nitricoxide/intro/migration/adhesion.htm19.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach 5
  7. 7. Fokaladhäsion und Mechanotransduktion Integrin Fokale Adhäsionskinase Vinculin Aktin modifiziert nach www.reading.ac.uk/nitricoxide/intro/migration/adhesion.htm19.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach 5
  8. 8. Fokaladhäsion und Mechanotransduktion Integrin Fokale Adhäsionskinase Vinculin P Aktin modifiziert nach www.reading.ac.uk/nitricoxide/intro/migration/adhesion.htm19.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach 5
  9. 9. Fokaladhäsion und Mechanotransduktion Integrin Fokale Adhäsionskinase Vinculin P Aktin ERK1/2 P modifiziert nach www.reading.ac.uk/nitricoxide/intro/migration/adhesion.htm19.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach 5
  10. 10. Fokaladhäsion und Mechanotransduktion Integrin Fokale Adhäsionskinase Vinculin P Aktin AKT P ERK1/2 P modifiziert nach www.reading.ac.uk/nitricoxide/intro/migration/adhesion.htm19.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach 5
  11. 11. Aktin und Inhibitoren Jasplakinolid G-Aktin F-Aktin Cytochalasin D Latrunculin A19.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach 6
  12. 12. Aktin und Inhibitoren Jasplakinolid G-Aktin F-Aktin Cytochalasin D Latrunculin A19.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach 6
  13. 13. Aktin und Inhibitoren Jasplakinolid G-Aktin F-Aktin Cytochalasin D Latrunculin A19.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach 6
  14. 14. Aktin und Inhibitoren Jasplakinolid G-Aktin F-Aktin Cytochalasin D Latrunculin A19.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach 6
  15. 15. Aktin und Inhibitoren Jasplakinolid G-Aktin F-Aktin Cytochalasin D Latrunculin A19.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach 6
  16. 16. Verwendung der Inhibitoren •  Konzentrationen ohne Beeinträchtigung der Zellvitalität •  Jasplakinolid: 0,01 µM •  Cytochalasin D: 0,5 µM •  Latrunculin A: 0,1 µM •  Kontrolle: 0,1 % DMSO 0,01 µM 0,1 µM19.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach 7
  17. 17. Kontrolle (DMSO) Morphologie und Aktinzytoskelett 0,01 µM 0,1 µM 19.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach 8
  18. 18. Kontrolle (DMSO)Jasplakinolid 0,01 µM Morphologie und Aktinzytoskelett – Jasplakinolid 0,01 µM 19.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach 8
  19. 19. Kontrolle (DMSO) Morphologie und Aktinzytoskelett – Cytochalasin D 0,01 µM 0,1 µM 19.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach 9
  20. 20. Kontrolle (DMSO)Cytochalasin D 0,5 µM Morphologie und Aktinzytoskelett – Cytochalasin D 0,01 µM 0,1 µM 19.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach 9
  21. 21. Kontrolle (DMSO) Morphologie und Aktinzytoskelett – Latrunculin A 0,01 µM 19.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach 10
  22. 22. Kontrolle (DMSO)Latrunculin A 0,1 µM Morphologie und Aktinzytoskelett – Latrunculin A 19.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach 10
  23. 23. Mechanische Stimulation MSZ Integrine Paramagnetische Mikrobeads = 0,2 nN / Bead modifiziert nach Kasten et al., 201019.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach 11
  24. 24. Mechanische Stimulation MSZ Integrine Paramagnetische Clustern Mikrobeads = 0,2 nN / Bead modifiziert nach Kasten et al., 201019.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach 11
  25. 25. Mechanische Stimulation MSZ Integrine Paramagnetische Clustern Mikrobeads = 0,2 nN / Bead modifiziert nach Kasten et al., 201019.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach 11
  26. 26. Mechanische Stimulation MSZ Integrine Paramagnetische Clustern Mikrobeads = 0,2 nN / Bead Reiz modifiziert nach Kasten et al., 201019.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach 11
  27. 27. Aktivierung von ERK und AKT Magnetfeld Kontrolle Clustern Reiz mit DMSO19.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach 12
  28. 28. Aktivierung von ERK und AKT Magnetfeld Kontrolle Clustern Reiz mit DMSO B 800 ** 700 phERK 600 ** Intensität in % 500 400 DMSO 0,1 % 300 Jasp 0,01 µM 200 p ≤ 0,1 100 **p ≤ 0,05 0 Kontrolle Clustern Magnetfeld Reiz n=319.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach 12
  29. 29. Aktivierung von ERK und AKT – Jasplakinolid Magnetfeld Magnetfeld Kontrolle Kontrolle Clustern Clustern Reiz Reiz mit DMSO Jasplakinolid 0,01 µM B 800 ** 700 phERK 600 ** Intensität in % 500 400 DMSO 0,1 % 300 Jasp 0,01 µM 200 p ≤ 0,1 100 **p ≤ 0,05 0 Kontrolle Clustern Magnetfeld Reiz n=319.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach 12
  30. 30. Aktivierung von ERK und AKT – Jasplakinolid Magnetfeld Magnetfeld Kontrolle Kontrolle Clustern Clustern Reiz Reiz mit DMSO Jasplakinolid 0,01 µM B 800 ** 700 phERK 600 ** Intensität in % 500 400 DMSO 0,1 % 300 Jasp 0,01 µM 200 p ≤ 0,1 100 **p ≤ 0,05 0 Kontrolle Clustern Magnetfeld Reiz n=319.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach 12
  31. 31. Aktivierung von ERK und AKT C 700 ** 600 phAKT 500 Intensität in % 400 DMSO 0,1 % 300 ** Jasp 0,01 µM 200 p ≤ 0,1 100 **p ≤ 0,05 0 Kontrolle Clustern Magnetfeld Reiz n=319.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach 13
  32. 32. Aktivierung von ERK und AKT – Jasplakinolid C 700 * 600 phAKT 500 Intensität in % 400 DMSO 0,1 % 300 * Jasp 0,01 µM 200 p ≤ 0,1 100 **p ≤ 0,05 0 Kontrolle Clustern Magnetfeld Reiz n=319.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach 13
  33. 33. Aktivierung von ERK und AKT – Jasplakinolid C 700 * 600 phAKT 500 Intensität in % 400 DMSO 0,1 % 300 * Jasp 0,01 µM 200 p ≤ 0,1 100 **p ≤ 0,05 0 Kontrolle Clustern Magnetfeld Reiz n=3 •  keine Hemmung der Aktivierung von ERK und AKT19.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach 13
  34. 34. Aktivierung von ERK und AKT – Cytochalasin D Magnetfeld Magnetfeld Kontrolle Kontrolle Clustern Clustern Reiz Reiz mit DMSO Cytochalasin D 0,5 µM19.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach 14
  35. 35. Aktivierung von ERK und AKT – Cytochalasin D Magnetfeld Magnetfeld Kontrolle Kontrolle Clustern Clustern Reiz Reiz mit DMSO Cytochalasin D 0,5 µM B 700 * * 600 phERK 500 Intensität in % 400 DMSO 0,1 % 300 CytoD 0,5 µM 200 100 p ≤ 0,1 0 **p ≤ 0,05 Kontrolle Clustern Magnetfeld Reiz n=319.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach 14
  36. 36. Aktivierung von ERK und AKT – Cytochalasin D C 700 * 600 phAKT 500 Intensität in % 400 DMSO 0,1 % ** 300 CytoD 0,5 µM 200 100 p ≤ 0,1 0 **p ≤ 0,05 Kontrolle Clustern Magnetfeld Reiz n=319.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach 15
  37. 37. Aktivierung von ERK und AKT – Cytochalasin D C 700 * 600 phAKT 500 Intensität in % 400 DMSO 0,1 % ** 300 CytoD 0,5 µM 200 100 p ≤ 0,1 0 **p ≤ 0,05 Kontrolle Clustern Magnetfeld Reiz n=3 •  keine Hemmung der Aktivierung von ERK •  Hemmung der Aktivierung von AKT nach Zugstress19.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach 15
  38. 38. Aktivierung von ERK und AKT – Latrunculin A Magnetfeld Magnetfeld Kontrolle Kontrolle Clustern Clustern Reiz Reiz mit DMSO Latrunculin A 0,1 µM19.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach 16
  39. 39. Aktivierung von ERK und AKT – Latrunculin A Magnetfeld Magnetfeld Kontrolle Kontrolle Clustern Clustern Reiz Reiz mit DMSO Latrunculin A 0,1 µM B 700 ** 600 phERK 500 * Intensität in % 400 DMSO 300 LatA 0,1 µM 200 100 p ≤ 0,1 0 **p ≤ 0,05 Kontrolle Clustern Magnetfeld Reiz n=319.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach 16
  40. 40. Aktivierung von ERK und AKT – Latrunculin A C 700 ** 600 phAKT 500 Intensität in % 400 DMSO 0,1 % 300 ** LatA 0,1 µM 200 100 p ≤ 0,1 0 **p ≤ 0,05 Kontrolle Clustern Magnetfeld Reiz n=319.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach 17
  41. 41. Aktivierung von ERK und AKT – Latrunculin A C 700 ** 600 phAKT 500 Intensität in % 400 DMSO 0,1 % 300 ** LatA 0,1 µM 200 100 p ≤ 0,1 0 **p ≤ 0,05 Kontrolle Clustern Magnetfeld Reiz n=3 •  komplette Hemmung der Aktivierung von ERK und AKT19.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach 17
  42. 42. Zusammenfassung Jasplakinolid •  verdickte Aktinbündel •  keine Hemmung der Aktivierung von ERK und AKT Cytochalasin D •  Fragmentierung des Aktinzytoskeletts •  keine Hemmung der Aktivierung von ERK •  Hemmung der Aktivierung von AKT nach mechanischer Reizung Latrunculin A •  Aktinfilamente nicht mehr parallel •  komplette Hemmung der Aktivierung von ERK und AKT19.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach 18
  43. 43. Zusammenfassung Jasplakinolid •  verdickte Aktinbündel •  keine Hemmung der Aktivierung von ERK und AKT Cytochalasin D •  Fragmentierung des Aktinzytoskeletts •  keine Hemmung der Aktivierung von ERK •  Hemmung der Aktivierung von AKT nach mechanischer Reizung Latrunculin A •  Aktinfilamente nicht mehr parallel •  komplette Hemmung der Aktivierung von ERK und AKT19.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach 18
  44. 44. Zusammenfassung Jasplakinolid •  verdickte Aktinbündel •  keine Hemmung der Aktivierung von ERK und AKT Cytochalasin D •  Fragmentierung des Aktinzytoskeletts •  keine Hemmung der Aktivierung von ERK •  Hemmung der Aktivierung von AKT nach mechanischer Reizung Latrunculin A •  Aktinfilamente nicht mehr parallel •  komplette Hemmung der Aktivierung von ERK und AKT19.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach 18
  45. 45. Zusammenfassung Jasplakinolid •  verdickte Aktinbündel •  keine Hemmung der Aktivierung von ERK und AKT Cytochalasin D •  Fragmentierung des Aktinzytoskeletts •  keine Hemmung der Aktivierung von ERK •  Hemmung der Aktivierung von AKT nach mechanischer Reizung Latrunculin A •  Aktinfilamente nicht mehr parallel •  komplette Hemmung der Aktivierung von ERK und AKT19.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach 18
  46. 46. Fazit •  Inhibitoren des Aktinzytoskeletts wie Latrunculin A können die durch mechanische Interferenz induzierte Aktivierung von ERK und AKT hemmen •  allerdings führte eine strukturelle Modifikation des Aktinzytoskeletts nicht immer zur Hemmung der Signaltransduktion •  das spricht für kompensatorische Mechanismen innerhalb des gesamten Zytoskeletts19.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach 19
  47. 47. Fazit •  Inhibitoren des Aktinzytoskeletts wie Latrunculin A können die durch mechanische Interferenz induzierte Aktivierung von ERK und AKT hemmen •  allerdings führte eine strukturelle Modifikation des Aktinzytoskeletts nicht immer zur Hemmung der Signaltransduktion •  das spricht für kompensatorische Mechanismen innerhalb des gesamten Zytoskeletts19.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach 19
  48. 48. Fazit •  Inhibitoren des Aktinzytoskeletts wie Latrunculin A können die durch mechanische Interferenz induzierte Aktivierung von ERK und AKT hemmen •  allerdings führte eine strukturelle Modifikation des Aktinzytoskeletts nicht immer zur Hemmung der Signaltransduktion •  das spricht für kompensatorische Mechanismen innerhalb des gesamten Zytoskeletts19.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach 19
  49. 49. Fazit •  Inhibitoren des Aktinzytoskeletts wie Latrunculin A können die durch mechanische Interferenz induzierte Aktivierung von ERK und AKT hemmen •  allerdings führte eine strukturelle Modifikation des Aktinzytoskeletts nicht immer zur Hemmung der Signaltransduktion •  das spricht für kompensatorische Mechanismen innerhalb des gesamten Zytoskeletts19.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach 19
  50. 50. Vielen Dank für Ihre Aufmerksamkeit19.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach 20
  51. 51. Quellen •  Caplan AI (2009) Why are MSZs therapeutic? New data: new insight. J Pathol 217(2): 318-24 •  Casella JF, Flanagan MD und Lin S (1981) Cytochalasin D inhibits actin polymerization and induces depolymerization of actin filaments formed during platelet shape change. Nature 293(5830): 302-5 •  del Rio A, Perez-Jimenez R, Liu R, Roca-Cusachs P, Fernandez JM und Sheetz MP (2009) Stretching single talin rod molecules activates vinculin binding. Science 323(5914): 638-41 •  Disanza A, Steffen A, Hertzog M, Frittoli E, Rottner K und Scita G (2005) Actin polymerization machinery: the finish line of signaling networks, the starting point of cellular movement. Cell Mol Life Sci 62(9): 955-70 •  Discher DE, Mooney DJ und Zandstra PW (2009) Growth Factors, Matrices, and Forces Combine and Control Stem Cells. Science 324(5935): 1673-7 •  Horwitz A, Duggan K, Buck C, Beckerle MC und Burridge K (1986) Interaction of plasma membrane fibronectin receptor with talin-a transmembrane linkage. Nature 320(6062): 531-3 •  Horwitz EM, Le Blanc K, Dominici M, Mueller I, Slaper-Cortenbach I, Marini FC, Deans RJ, Krause DS und Keating A (2005) Clarification of the nomenclature for MSZ: The International Society for Cellular Therapy position statement. Cytotherapy 7(5): 393-5 •  Kasten A, Müller P, Bulnheim U, Groll J, Bruellhoff K, Beck U, Steinhoff G, Möller M und Rychly J (2010) Mechanical Integrin Stress and Magnetic Forces Induce Biological Responses in Mesenchymal Stem Cells Which Depend on Environmental Factors. J Cell Biochem 111(6): 1586-97 •  Pantaloni D, Le Clainche C und Carlier MF. (2001) Mechanism of Actin-Based Motility. Science 292(5521): 1502-6 •  Pittenger MF, Mackay AM, Beck SC, Jaiswal RK, Douglas R, Mosca JD, Moorman MA, Simonetti DW, Craig S und Marshak DR (1999) Multilineage Potential of Adult Human Mesenchymal Stem Cells. Science 284(5411): 143-719.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach 18
  52. 52. Quellen •  Scadden DT (2006) The stem-cell niche as an entity of action. Nature 441(7097): 1075-9 •  Scott VR, Boehme R und Matthews TR (1988) New class of antifungal agents: jasplakinolide, a cyclodepsipeptide from the marine sponge, Jaspis species. Antimicrob Agents Chemother 32(8): 1154-7 •  Spector I, Shochet NR, Blasberger D und Kashman Y (1989) Latrunculins--novel marine macrolides that disrupt microfilament organization and affect cell growth: I. Comparison with cytochalasin D. Cell Motil Cytoskeleton 13(3): 127-44 •  www.sciencephoto.com •  www.reading.ac.uk/nitricoxide/intro/migration/adhesion.htm19.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach 19
  53. 53. Anhang19.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach
  54. 54. Anhang www.invitrogen.com19.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach
  55. 55. Kontrolle (ohne DMSO) Kontrolle (mit DMSO) DMSO – Morphologie und Aktinzytoskelett 0,01 µM 0,1 µM 19.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach
  56. 56. Jasp und Lat A – Morphologie Kontrolle (ohne DMSO) Jasplakinolid 0,01 µM Jasplakinolid 0,1 µM Kontrolle (mit DMSO) Latrunculin A 0,01 µM Latrunculin A 0,1 µM Latrunculin A 0,5 µM 0,01 µM 0,1 µM19.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach
  57. 57. Vitalitätstest - MTS19.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach
  58. 58. Vitalitätstest - KV19.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach
  59. 59. Vitalitätstest – MTS / KV19.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach
  60. 60. Schematischer Ablauf des Integrinreizes19.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach
  61. 61. Coomassie Latrunculin A Jasplakinolid Cytochalasin D19.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach
  62. 62. Kontrolle 2100 ** ** 1800 1500 phERK Intensität in % 1200 EM ** 900 DMSO 0,1 % 600 300 0 K Cl MF Reiz19.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach
  63. 63. Kontrolle 600 ** 500 400 ** phAKT Intensität in % EM 300 DMSO 0,1 % 200 100 0 K Cl MF Reiz19.02.12 © 2012 Universität Rostock | Medizinische Fakultät | MBT | Anne Langenbach

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