SlideShare ist ein Scribd-Unternehmen logo
1 von 98
MİKOBAKTERİLER:
MYCOBACTERİUM
TUBERCULOSİS

              Prof.Dr. A. Nedret KOÇ

         Erciyes Üniversitesi Tıp Fakültesi
  Mikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Anabilim Dalı
                       KAYSERİ
Mycobacterium cinsi
   Mycobacteriaceae ailesinin tek cinsi
   Dünyaca yaygın olan tuberküloz etkenleri
   İnsanlık tarihinde eski bir geçmişe sahip olan
    lepra etkenlerini
Tarihçe
   Villemin 1865 dolaylarında tüberküloz
    infeksiyonu belirlemesine
   1882 de Robert Koch tüberküloz basilini
    ve hastalık ile ilişkisini ilk defa kurmuş
   1886 yılında M. tuberculosis ismi
    verilmiş
   Robert Koch tüberküloz alerjisi,
    immuniteyi ve tüberkülini tarif
   Mycobacterium bovis: Sığır tüberküloz
    basili ayrı bir tür olarak 1896 da Th.
    Smith tarafından ortaya atılmış
   Mycobacterium microti:Tarla faresinden
    fare tüberküloz basili 1937 yılında izole
    edilmiş
   Mycobacterium africanum
Sınıflandırma
   Mycobacterium cinsi Mycobacteriaceae
    ailesinin tek cinsidir.
   DNA larının yüksek G+C miktarları
    (%62-70), diğer mikolik asit üreten
    Nocardia (%60-69), Rhodococcus
    (%59-69) ve Crynebacterium spp.
    (%51-59) ile benzerdir.
Mycobacterium cinsi
   Mikobakteriler içinde en sık görülmesinden
    dolayı hemen akla Mycobacterium
    tuberculosis gelir
Mycobacterium tuberculosis
    kompleksi
   Mycobacterium tuberculosis
   Mycobacterium bovis
   Mycobacterium microti
   Mycobacterium africanum
   Mycobacterium canettii
   Mycobacterium pinnipedia
   M. Caprae
   M. bovis BCG
Mycobacterium tuberculosis
      compleksi dışındakilere
   A tipik mikobakteriler
   Nontuberculous mycobacteria (NTM)
   Tüberküloz dışı mikobakteriler
Familyanın en önemli
      karakteri
   Zor boyanan,
   Boyaların uzun süre tutulması veya ısı ile
    uygulanması halinde alabilen
   Bir defa boyandıktan sonra boyaları asit ve alkol
    karışımında kolay bırakmayan,
    Asitlere dirençli çomak şeklinde bakterileri
    içermesidir
Mycobacterium cinsindeki
   Yavaş üreyenler ideal kültür ortamında katı
    besiyerinde gözle görülebilen koloniyi 7
    günde,
   Hızlı ürüyenler 7 günden önce oluştururlar.
   Runyon 1959 yılında
   Bakterilerin pigment yapıp yapmamasına,
    pigmetin ışık karşısında
   Karanlılıkta oluşmasına
   Üreme hızlarına göre ve koloni karekterlerine
    bakarak bir sınıflandırma yapmış
Fotokromojenler (Işıkta pikment
    oluşturması)
   Mycobacterium   kansasii
   Mycobacterium   marinum
   Mycobacterium   simiae
   Mycobacterium   asiaticum
Skotokromojen grup (Karanlıkta
pikment oluşturması)

   Mycobacterium   scrofulaceum
   Mycobacterium   gordonae
   Mycobacterium   szulgai
   Mycobacterium   flavescens
Non fotokromojen grup (pikment
oluşturmaz)
   Mycobacterium avium-intracellulare (MAC)
   M. haemophilum
   Mycobacterium xenopi
   M. shimoidei
   Mycobacterium ulcerans
   M. genavense
   Mycobacterium gastri
   M.nonchromogenicum
   Mycobacterium terrae complex
   Mycobacterium malmoense
   Mycobacterium triviale
Çabuk üreyenler
    Mycobacterium fortuitum coplex
    (Mycobacterium fortuitum , M. chelonae, M.
    abscessus)
   Mycobacterium smegmatis
   Mycobacterium flavescens
   Mycobacterium thermoresistibile
   Mycobacterium neoaurum
Morfoloji ve boyanma
özellikleri
   M. tuberculosis ince,
    düz, hafif kıvrık, sonu
    küt olarak biten bir basil
   Genişliği 0.3-0.6 µm
    genişlikte, 1-4 µm
    boyunda
   Zaman zaman gerçek
    dallanma görülür (Yaşlı
    kültürlerde ve lenf
    nodlarından smearlerde
    ve ayrıca spesifik
    kültürlerde)
Morfoloji ve boyanma
    özellikleri
   Sporsuz,
   Kapsülsüz
   Hareketsiz
   Asit ve alkole dirençli
   Boyanma özellikleri, fiziki bütünlüğü yanında
    hücre duvarındaki mikolik asit ve lipid bariyer
    sistemine bağlı
Boyanma
   Ehrlich-Ziehl-Neelsen
   Kinyoun asit-faz ve
   Auromin-rodamin boyama
Ehrlich-Ziehl-Neelsen
   Mavi zemin üzerinde
    parlak kırmızı boyanan
    basiller
   Dokuda ve balgamda
    vakuol ve polifosfat
    ihtiva ettiğinden dolayı
    boncuk veya tespih
    tanesi içeriyor gibi
    irregüller boyanır
   Karbon fuksin hücre
    duvarına penetre olması
    için alttan ısıtılması
    gerekir
Kinyoun asit-faz boyama
   Hücre duvarına penetrasyonunu artırmak için
    çözeltideki fenol miktarının artırıldığı soğuk
    boyama yöntemi
Mikobakterilerin asit faz
boyanması
   Hücrenin fiziksel yapısındaki lipid içermesine
    bağlı
   Hücre duvarında var olan mikolikasit ile
    boyanın kompleksinin takibinde yüzeyel
    tabakanın hidrofobisitesinin artışı bu olay da
    rol oynar
   Karbon fuksin hücre için de dışarı çıkışı
    engellenir
Auromin-rodamin boyama
   Mikobakteriler, koyu
    renkli zemin
    üzerinde parlak sarı
    ve 25X objektif ile
    kolaylıkla görülür
   Karbol-fuksin
    yöntemine göre
    daha duyarlıdır
Mycobacterial hücre duvarı
   İnce kesit elektron mikroskopisi ile plazma
    mebranını saran üç tabakadan oluşan kalın
    duvar içeriğini
   Kimyasal olarak duvar yeri komplekstir.
   Hem gram pozitif hem de gram negatif
    organizmalara benzemez
   Ağırlığının %60 ını oluşturan yüksek oranda ki
    lipidlerdir
   Mikobakterilerin türüne göre kalınlığı değişir
Mycobacterial hücre
duvarı
   Biyolojik olarak çok aktif ve bunların bir
    çoğu organizma için tek olan lipofilik
    makromoleküler kompleksini içerir
   Fosfodiester bağlar ile bağlanan
    peptidoglikan ve arabinogalaktanın
    kovalent yapısından oluşur
   Peptidoglikanları diğer bakterilerden
    farklıdır
Mycobacterial hücre
duvarı
   İnterpeptitler arası köprüler sadece
    mikobakterilerde
   Arabinozların 10 tanesinden en az biri
    mikolik asite esterifiye olur
   Mikolik asit tipik uzun zincirli yağ asitidir
   En dış tabaka peptidoglikolipid ve
    fenolik glikolipid içeren heterojen bir
    grup olan mikozidlerden oluşmuştur.
Mycobacterial hücre
duvarı
   Arabinogalaktanın terminal dalları temel
    immunolojik determinatları oluşturur
   Hücre duvarının oligomeri, Wax D,
    immunoadjuvant aktiviteden sorumlu
   peptidler tuberkülin aktivitesi için
    temeldir
   Glikolipidler;cord faktör (trehalose 6, 6’-
    dimycolate), sulfatidler, ve mikosidler
    biyolojik olarak aktiftir
Hücre duvarının etkileri
   Kimyasal ve fiziksel etkenlere direnç
   Virulans, makrofajlardan korunma
   Uzun jenerasyon süresi
   Zor boyanma ve aside dirençli boyanma
    özelliği
   Adjuvan etki
   Gecikmiş tip aşırı duyarlılık
   Ani aşırı duyarlılık
Kültürel karakterleri
   Zorunlu aeroptur
   Basit besiyerinde ürüyemez
   Yumurta-patetes (Löwenstein-Jensen),
    serum-base agar veya agar-base media
    (Middlebrook 7H-10)
   Yavaş ürer, gözle görülecek üremesi optimal
    üreme koşullarında 370C de 10-20 gün
Kültürel karakterleri
   Koloniler küçük,
    kuru siğil gibi
   Hücre yüzeyinin
    hidrofobik
    özelliğinden dolayı
    sentetik sıvı
    besiyerinde
    yüzeyinde ince zar
    gibi ürer
Kültürel karakterleri
   Noniyonik deterjan olan Tween 80
    (sorbitan monolatın polyoxyethylenenin
    derivesi) hücrelerin agregasyonunu
    önleyerek onların difüz olarak üremesini
    sağlar
   Kültürlerin çalkalamak havalandırmayı
    artırdığı için büyüme oranını artırır
   Büyüme %5-10 CO2 ile de artabilir
   CO2 sağlamak için mumlu kavonoz
    kullanılmaz
Kültürel karakterleri
   Mikobakteriler O2’li ortamı sever
   Büyüme için optimal pH 7.0 fakat 6- ile
    7.6 arasında
   Optimal üreme ısısı 370C’dir
   Diğer mikobakteri türleri için üreme ısısı
    onların spesifik doğal konaklarının
    vucud ısıları ile değişebilir
Metabolizması
   Enerjilerini glikoz ve gliserolden
    sağlarlar
    Gliserollu karbon ve enerji kaynağı
    olarak tercih ederler.
    Katalaz ve peroksidaz bütün mikobakterilerde
    vardır
   Uygun kültür koşulların da yarılanma ömrü
    14-15 saat
Besin gereksinimi

   Üremesi için bütün amino asitler, pürin
    ve pimidin baz ve B-kompleks vitamin
    ihtiyaç
   En önemli karbon kaynağı gliserol ve
    nitrojen kaynağı olarak asparjini tercih
    eder
Oksijen gereksinimi

   Oksijen mikobakterilerin invitro ve invivo
    üremesi için kriter
   Oksijen sınırlandığı ortamlarda basil latent
    kalır oksijen olduğu besiyerinde tekrar
    üremeye başlar
Mycobacterium’ ların
antijenik yapısı

   Mycobacterium’ların birçok immunoreaktif
    yapıları vardır:
   Old tuberculin
   Purified protein derivative (PPD)
   Purified antijen
   Polisakkaritler (arabinogalaktan ve
    arabinomannans)
   Phophatidyl inositol mannosides
    (fosfatil inositol mannosid)
Old tuberculin
   Tüberkülün testi (tüberküloz
    infeksiyonunun tanımlandığı cilt testi)
    için orijinal test maddesi
   İlk defa Koch 1881’de tanımlamıştır. 6
    haftalık sıvı besiyerinde kültürün
    kaynatılarak ve organizmayı filtrasyonla
    ayırarak elde edilen ısıya dayanıklı bir
    protein
Purified protein derivative
(PPD)
   Old tuberkülünün pürified preparasyonudur.
    Dünya sağlık organizasyonu tüberkülün deri
    testi için bu maddeyi önermektedirler.
Purified antijen
   65 kDa antijen (heat shock protein) deney
    hayvanında yüksek oranda geçikmiş tip
    hipersensitivity reaksiyonlarına neden olur
   Otoimmun hastalıklarında etyolojilerinde rol
    oynar.
Polisakkaritler (arabinogalaktan
       ve arabinomannan)
   İmmunolojik ve serolojik aktiviteye
    sahiptir.
   Erken cilt reaksiyonlarına neden olur.
   Bunlara karşı oluşmuş humoral antikorların
    önemi daha belirlenememiştir.
Fosfatil inositol mannosid
   Plazma membranlarında lipidleri ailesindendir
   Hücre mebranı ve hücre duvarı arasında
    nonkovalent bağlar sağlıyarak hücre yapısında
    rolü önemlidir
   Haptonik olmasına rağmen, immunolojik form
    ve serolojik aktivitede gösterir
   Makrofajları tanıma ve muhtemelen koruyucu
    immunitenin karşıtı bir rolü ile önemli
    lipoteikasit benzeri polimerler olduğu
    inanılmaktadır.
Diğer immunoreaktif
kompenentler:
   Wax D ve muramlyldipeptide
    (peptidoglikolipidler)
   Trehalose-6,6’-Dimycolate
    (trehaloso dimikulat): Cord faktör
    (İp faktör)
   Sulfatidler
Wax D ve muramlyldipeptide
(peptidoglikolipidler)
   Bu maddeler adjuvan özelliğinde
    maddelerdir.
   kombine olduğunda sinerjik immuno
    stimulatör aktivite gösterir
   Tümörlere karşı etkilidir.
Trehalose-6,6’-Dimycolate
(trehaloso dimikulat): Cord
faktör (İp faktör)
   Tüberküloz basillerin iplik şeklinde
    üreme
   Adjuvant aktivite sahiptir
   Alternatif kompleman sistemini aktivite
    eder
   Antitümor özellikleri verir
Sulfatidler
   Glikolipidler dir
   Virulent M. tuberculosis’ların nötral red
    reaksiyonları ile ilişkilidir
   Spesifik immunostimulatör özelliği küçüktür
Patojinite determinatları
   M. tuberculosis ekzotoksin ve
    endotoksin üretmezler
   Tek bir yapı, antijen, veya mekanizma
    organizmanın virulansını açıklayamaz
Bulaşıcılık
   M. tuberculosis için tek kaynak insandır
   kişiden kişiye geçişi solunum yolu ile
    olur
   Canlı tüberküloz basili içeren ve havada
    asılı halde bulunan küçük (1-5 mikron)
    damlacıkların solunum yolu ile alınması
    ve bunların alveollere yerleşmeleri ile
    gerçekleşir
Diğer geçiş yoları:
   gastrointestinal,
   deri,
   süt,
   cinsel yolla,
   hematojen yolla
   direkt hastalıktan lokal
   ven ve lenfatik yolla da bu hastalığın
    yayıldığı gösterilmiştir
Tüberküloz basilinin
      direnci
   Bir çok kimyasal dezenfektanlara diğer sporsuz
    bakterilere göre dirençlidir.
   Organik asitler ve doymamış yağ asitleri,
    %70-95 alkolle 10 dakika dayanamaz.
   Aseton iyot tentür bakterileri hızla öldürür.
   %5 sodyum hipoklorit ve %3-8 formaldehit
    10-30 dakikada öldürür.
   Kuruluğa dirençlidir.
Tüberküloz basilinin
direnci
   Ölülerin vücudunda uzun süre canlı
    kalırlar.
   Kurumuş balgamda aylarca kalır.
   Toprakta ve sularda 4-5 ay yaşayabilir.
   Güneş ışığından uzak olmak koşulu ile
    sokak tozlarında 10 gün, hastalara ait
    kitaplarda 3.5 ay canlı kalabilir.
Bağışık mekanizması ile ilgili
olaylar
   Hücresel bağışıklık rol oynar.
   Bakterilerin virulansı, hücresel aşırı duyarlık ve
    hücresel bağışıklık olaylarının karşılıklı dengesi
    ile sıkıya ilgilidir.
   Bu olayı açıklayıcı en önemli olay Koch
    fenomoni dir.
Koch fenomoni
                                Aynı kobaya hastalık sürerken
   Sağlam kobaya                canlı basilden ayrı bir yere
    tüberküloz basilinin         enjekte edersek; birinciden daha
    enjekte edersek:             çabuk yara oluştuğu, açıldığı ve
    yara oluştuğu,               yayılım olmadan iyileştiğini
                                 görülür.
    açıldığı, lenf bezleri
    olaya katıldığı,                İkinci deneyi ölü basille
    vucuda yayıldığı,                uygularsak; ikincine benzer
                                     reaksiyon oluşur
    sonunda kobayın
    öldüğü görülür
Koch fenomoni
    Birinci deneyde olay; Hücresel
    bağışıklıktır
   İkinci deneyde olay; Hücresel aşırı
    duyarlılıktır.
Aşırı duyarlığın ve direncin
saptanması

   Eski Tüberkülin: İlk R. Koch hazırlamiştır.
   PPD (Purified Protein Derivative): ilk
    Seibert ve Glenn tarafından hazırlanmıştır.
   Pratikte tüberkülün duyarlığını
    araştırrılmasında en sıklıkla kullanılan PPD ile
    uygulanan Mantoux testdir.
   Tüberkülin testi infeksiyonda ortalama 4-6
    hafta sonra olumlu hale geçer. Alerji meydana
    gelinceye kadar geçen bu zamana
    preallerjik dönem denir.
İnsanlarda ki tüberküloz
infeksiyonu
   İlk veya primer infeksiyon
   Yeniden infeksiyon ( Re-infeksiyon)
Tüberkülozun klinik önemi
   Akciğer infeksiyonu
   Seroza infeksiyono (plevral, menejit, periton)
   Eklem ve kemik tüberkülozu
   Lenf bezi tüberkülozu
   Deri tüberkülozu
   Böbrek ve genital sistem (epididim, testis,
    ovarium, uterus vb.) tüberkülozu
Tüberkülozun klinik önemi
   Bağırsak tüberkülozu
   Göz ve diğer organlar tüberkülozu
   Milyer tüberkülozu: Dirençsiz ve duyarlı
    kişilerde bakterilerin kana geçip
    yayılarak tüm organlara yerleşmesi ile
    oluşan ağır infeksiyona denir.
TANI
   Klinik tanı
   Laboratuvar tanı
Hastadan alınan klinik
örnekler:
   Balgam, bronkoalvoler lavaj, broşiyal
    yıkama, gastrik lavaj sıvısı, kan, idrar,
    dışkı, diğer vücut sıvıları (BOS, plevra,
    perikart, peritoneal ), dokular ( lenf
    nodu, cilt, diğer biyopsi örnekleri), abse
    örneği, aspirat sıvıları, deri lezyonları ve
    yaralardır
Örneklerin İşlenmesi:

   Normal steril örnekler:
   Dekontaminasyon ve homojenasyon
    işlemine gerek yoktur.
   Sıvı örnekler >3,000 devir de santrefüj
    edilir ve sediment hem sıvı hemde katı
    besiyerine inokule edilir.
Kontamine örnekler:
   Eritme ve dekontaminasyon işlemine
    tabi tutulur
Eritici ve dekontaminasyon
işleminde kullanılan yöntemler:
   NALC-NaOH yöntem (N-Acetyl-lcystein-NaOH) en
    sıklıkla kullanılır
   Sodyum hidroksit yöntem: Hem eritici hemde
    dekontamine edicidir
   Zefiran-trisodyum fosfat yöntem: Trisodyum
    fosfat eritici, zefiran dekontamine edicidir. Ancak
    zefiran bakteriostatik olduğu için özellikle BACTEC
    sistemde kullanılmaz
   Oksalik asit yöntem: Özellikle Pseudomonas spp.
    ile kontamine kültürlerler için tercih edilmelidir.
    BACTEC sistemde de kullanılabilir.
   CPD-sodyum klorit yöntem: CPD kuaternar
    ammonyum birleşiğidir
   Sülfürük asit: dekontaminasyon için kullanılır
Asit faz boyama: Ehrlich-Ziehl-
Neelsen ve Kinyoun Asit faz
boyama boyama
   Organizma vakuol ve
    polifosfat ihtiva
    ettiğinden dolayı
    boncuk veya tespih
    tanesi içeriyor gibi
    irregüller boyanaır.
   Karbon fuksin hücre
    duvarına penetre olması
    için alttan ıstılması
    veya,
   Çözeltideki fenol
    miktarının artırıldığı
    soğuk boyama yöntemi
    temeline dayanır
Asit faz boyama
   Hücrenin fiziksel yapısındaki lipid
    içermesine bağlıdır.
   Hücre duvarında var olan mikolikasit ile
    boyanın birleşmesi takibinde yüzeyel
    tabakanın hidrofobisitesinin artışı bu
    olay da rol oynar.
Flurokrom boyama: Auromin veya
auromin-rhodamin boyama

   mikobakteriler, koyu
    renkli zemin
    üzerinde parlak sarı
    ve 25X objektif ile
    kolaylıkla görülür.
   Karbol-fuksin
    yöntemine göre
    daha duyarlıdır
Kültür yöntemleri
   İn vitro ilk
    izolasyonlarında
    kompleks besiyeri
    gerekir
   bazı mikobakteriler ilk
    izolasyonlarından sonra
    basit sentetik
    besiyerinde üreyebilir
   Selektif ve nonselektif
    besiyeri vardır
Katı besiyeri
   1- Yumurtalı-baz besiyeri
   2- Agar-bas besiyeridir.
Yumurtalı-baz besiyeri
   Yumurta, patates unu, tuz ve
    gliserol ihtiva eder.
   Besiyeri ilaç duyarlılık
    testlerinde kullanılmaz.
   Lowenstein-Jensen (LJ)
    besiyeridir. En sık kullanılır
   Petragnani besiyeri LJ’den
    daha fazla malaşit yeşili ihtiva
    eder.Bu baı suşların üremesini
    inhibe edebilir
   Koloniler Yumurtalı-baz
    besiyerinden 18-24 günde
Agar-baz besiyerleri
   Bu besiyerleri transparan oldukları için
    mikroskopik koloniler kolayca görülür.
   Koloniler LJ besiyerinden daha önce
    (10-12 günde) görülür.
   En sık kullanılan Agar-baz besiyerleri
    Middlebrook 7H10, 11,12 dir.
    Bu besiyerleri antitüberkülotik
    duyarlılık testi için kullanılabilir.
    Kontaminantlar kolayca üremez.
   Besiyeri pahalıdır ve Saklama süresi
    daha kısadır. (buzdalobında 1 ay)
   Besiyeri ısı, ışık maruz kaldığında
    formaldehit salar
Sıvı besiyerleri
   Middlebrook 7H9 ve Dubos Tween
    albumin sıvı besiyeri en sık kullanılan
    besiyerleridir.
   Subkültür için stok suşlar
   Antitüberkülotik duyarlılık testi
    Sıvı besiyeri bakteri miktarı düşük olduğunu
    düşünüldüğü örneklerden izolasyonlarda
   Tween 80nin küme yapmış mikobakterileri
    dağılımını sağlar
BACTEC AFB sistem
   Radyometrik sistem olan
    BACTEC AFB sistemi
    geliştirmişlerdir.
   Karbon kaynağı olarak sadece
    14
       C ile işaretli palmitik asit
    içeren sıvı besiyerine
   Besiyerinde basil üredikçe
    ortama 14CO2 verilmektedir.
    BACTEC 460 cihazı besiyerinde
    ki 14CO2 ölçmekte ve bunu
    Growth index (üreme indeksi)
    olarak rapor etmektedir.
   M. tuberculosis 9-14 günde,
    tüberküloz dışı mikobakteriler 7
    günden önce belirlenir.
BACTEC AFB sistem

     BACTEC 13A şiseleri kan ve kemik iliği
    örnekler için kullanılır.
   BACTEC 12B şiselerine içinde
    Middlebrook 7H9, BSA, kasein
    hidrolizat, katalaz, 14C işaretli palmitik
    asit, antimikrobik ajanlardan vardır.
   M. tuberculosis kompleks diğer
    tüberküloz dışı mikobakterilerden NAP
    (P-Nitro-ß-acetylamino- ß
    -hydroxypropiophenone) testi ile ayırır.
    NAP konulan besiyerinde üreme olursa
    M. tuberculosis kompleks dir
   Antitüberkülotik duyarlılık testi için de
    kullanılabilir
Selektif Besiyeri
   LJ, Middlebrook 7H10,11 besiyerlerine
    kontaminant bakterilerin üremesini
    önlemek için konulan antimikrobiyal
    ajanlardır (penisilin, nalidiksik asit,
    sikloheksimit, linkomisin, karbenisilin,
    polimiksin, trimetoprim, amfoterisin B
    konulabilen antibiyotiklerdir
Bifazik besiyerleri: Septi-
Chek sistem
    biri sıvı (Middlebrook 7H9 20ml) diğeri 3 katı besiyeri
    (LJ, Middlebrook 7H11, çukulata besiyeri)
   Besiyerine eklenen maddeler: glikoz, gliserin, oleik
    asit, pridoksal HCI, katalaz, albumin, polimiksin,
    trimetoprim, amfoterisin B, nalidik asit, azlosilin
   Çukolata bakteriyel kontaminasyonu gösterir.
    Sistemin sensitivitesi BACTEC AFB benzerdir.
   Üreme peryodu daha uzundur, geleksel sistemlerden
    daha kısadır.
   Düşük örnekle çalışılan laboratuvarlarda kullanılabilir
   Antitüberkülotik duyarlılık testi ve kan kültürleri için
    kullanılmaz
M. haemophilus için hem
içeren besiyeri
   Middlebrook 7H10 agara hemolize koyu
    eritrositi, hemin, veya X faktör diski
    veya LJ besiyerine %1 ferrik amonyum
    sitrat eklenerek hazırlanır
MGIT (Mycobacteria Growth
Indicator Tube)
   Middlebrook 7H9 sıvı besiyeri, OADC( oleik asit,
    albumin, dekstroz, katalaz), Panta (antibiyotik) ve
    tüpün dibindeki silikona emdirilmiş halde oksijene
    duyarlı bir fluoresans gösterge maddesi içermektedir.
   Tüpte üreyen mikobakteri oksijeni kullanması, bunun
    sonucunda oluşan fluoresansın ultraviyole lambası
    altında saptanmasıdır.
   Antifungal duyarlılıkta yapılabilir.
   radyoaktif madde ve pahalı aletlere ihtiyaç
    göstermemesi üstünlüğü
   Basiller 4-14 ürer.
MB/BacT Alert kültür
sistemi
   Modifiye edilmiş Middlebrook 7H9
    besiyeri içeren kültür şişelerinde
    otomize edilen sistemde üremenin
    varlığı kolorimetrik olarak saptanır.
   Üretim süresi BACTEC sisteme ve MGIT
    ile kıyaslanabilir
Lizis-santrifüj (izolator
sistem)
   Özellikle kanda mikobakterile üretimi
    için önemlidir. İzolator sistem saponin
    ihtive eder. Bu hücreleri eritir ve
    mikobakterilerin açığa çıkmasını sağlar.
    Izolator sistemde alınan sediment LJ,
    7H11 katı veya sıvı besiyerine inokule
    edilir
İnkübasyon
   Mikobakterilerin bir çoğunun
    ürüyebilmesi için 35-37oC inkübasyon
    ısısı gerekir.
   M. marinum, M. ulcerans, M. chelonae
    veya M. haemophilum 25-33oC gibi
    daha düşük inkübasyon ısısında
    ürüyebilir
Atmosfer
   Mikobakterilerin üremesini %5-10
    CO2’lik ortam artırır. Ancak mumlu
    kavonoz mikobakterilerin inkübasyonları
    için kullanılmaz. Çünkü mikobakteriler
    O2 azaldığı ortamda üreyemez.
    Middlebrook ve LJ için CO2 ortam
    gerekir. Ancak BACTEC ve Septi-Chek
    için gerekmez
Zaman
   Mikobakteriyel kültürler negatif olarak
    tanımlamadan önce genellikle 6-8 hafta
    Cilt lezyonun da şüphenilen M. ulcerans için
    kültür 12 hafta
   Solit kültürler ilk inkübasyonlarının 3.-5.
    günün de erken üreyen mikobakteri türleri
    belirlemek için her gün incelenir. Daha sonra
    4 haftanın üzerindeki kültürler hafta iki kez
    incelenir. Daha yaşlı kültürler haftalık
    incelenir
MİKOBAKTERİLERİN
TANIMLANMASI
   Üreme hızı,                      tween 80 hidroliz,
   optimal ısı,                      tellürit redüksiyonu,
   koloni morfolojisi,              %5 NaCl’a tolerans,
   pigment üretimi,                 demir alımı,
   niasin testi,                    3 günde arilsülfataz hidrolizi,
   T2H (thiophene-2-carboxylic
    acid hydrazid) de üremesi,       MacConcey agarda
   nitrat redüksiyonu,               üreyebilmesi,
   semikuantatif katalaz,           üreaz üretimi,
    60oC’de katalaz,                 pirazinamidaz testi gibi
                                      biyokimyasal testler kullanılır
MİKOBAKTERİLERİN
TANIMLANMASI
İdentifikasyonda yeni
yöntemler:
   Kromotografik analiz, nükleik asit problar
   Kromotografik analiz: İnce tabaka
    kromotagrafi, kapiller gaz kromotografi ve
    HPLC yöntemi ile yağ komposizyonunu analizi
    ile mikobakterler tür düzeyinde identifiye
    edilebilinir.
   Direkt örnekten mikobakteriyel
    birleşenlerinide belirleyerek direkt
    belirlemedede kulanılır
Tuberkulostearik asit
(TSA)
   Gaz likit kromotografi ve kitle
    spektroskopi kombinasyonu ile klinik
    örneklerden belirlenebilir ve bu TSA
    sadece mikobakterilerde ve
    aktinomiçeslerde bulunmaktadır
   BOS ve balgamda TSA nın belirlenmesi
    tüberkülozun belirlenmesinde çabuk ve
    duyarlı bir testtir
Adenizin deaminaz (ADA)
   Adenizin inozine dönüşümünü katalizleyen
    Monosit, makrofaj ve lenfositlerin
    farklılaşmasında rol oynayan bir enzimdir.
   İnfeksiyoz mononükleoz, brusella, tifo gibi
    infeksiyonlarda, romatoit artirit, dissemine
    sistemik lupus eritematozis, lenfoma ve
    lösemi gibi hastalıklarında düzeyleri artar.
   Bundan dolayı spesifik test değildir
Lizozim
   Lizozim aktif makrofaj, monosit ve
    granülositlerden salgılanan bir
    enzimdir.
   Tüberküloz plörezilerde plevral sıvıda
    artmış olarak bulunmaktadır.
   Duyarlılığı %100, özgürlüğü %88 olarak
    bulunmuştur .
    Karsinomatöz olaylarda da yükselebilir
Kültür doğrulamak için DNA
proplar
   Mycobacterium tuberculosis kompleks,
    MAC, M. gordonae, M. kansasii’in türe
    spesifik rRNA çifti ticari olarak
    bulunmaktadır
Nükleik asit amplifikasyon ve
hibridizasyon yöntemleri

   Direkt belirlemede proplar kullanılmamakta
   Direkt örnekte belirlemelerde nükleik asiti PCR
    ile çoğaltarak özgül nükleik asit proplar
    kulanılarak saptanabilir.
   PCR eski tüberküloz öyküsü olan ölü basil
    bulunduran hastalarda da pozitiflik verebilir
Kültür yapılmadan basilin
saptanması

   PCR (Hedef nükleik asitlerin PCR ile
    çoğaltılması)
Klinik örneklerden
Mikobakteriyel antikorların
gösterilmesi
    Mikobakteriyel antjenlere maruz kalanlarda
    IgM, IgG ve IgA türü antikorlar oluşur.
    serolojik yöntemler ile belirlenebilir.
   Antikorlar hem basille infekte hemde BCG
    aşısı ve tüberkülin deri testi yapılan kişilerde
    üretildiğinden tanıda spesifitesi düşüktür
   Örnek alımının zor olduğu durumlarda
    kullanılabilir
Mikobakteriyel antijenlerin
gösterilmesi

   PPD, antijen 5 ve antijen 60 yarı saf, 33kD,
    38kD, 45kD, TB23, TB68, ve TB 72 gibi saf ve
    özgül antijenlerin saptanması
    amaçlanmaktadır.
   Vucüt sıvılarında özgül antijenlerin RIA ve
    ELISA ile gösterilmesinin duyarlılığı %39-79
    ve özgüllüğü %98-100 olarak belirlenmiştir.
    Bu konudaki çalışmalar yoğun şekilde devam
    etmektedir.
QuantiFERON®-TB Gold In-
Tube (IT) test
   ESAT-6, CFP-10 ve TB7.7(p4) proteins
    karşı oluşan interferon-γ (IFN- γ) yı ELISA
    ile ölçülmektir.
   Bu test BCG suşu ve diğer tuberkuloz dışı
    mikobakterilerde olmaması tanıda
    önemlidir
   Latent M. tuberculose tanısında tedavi
    takibinde de önerilmektedir.
Antimikobakteriyal
duyarlık testleri
   Geleneksel yöntemler
    (Broth dilüsyon ve agar
    dilüsyon yötemleri
   BACTEC duyarlılık testi
   E test yöntemi
   PCR ile genetik
    mutasyonların
    saptanması
Tedavi
   Tüberküloz tedavisi uzun ve kombine ilaçlarla
    olasıdır.
   Tedavi şekli klinik forma ve hastaya göre
    değişir.
   Antitiberkülotik ilaçlar: en sık kullanılan
    izoniasid, rifampisin, etanbutol, prazinamid ve
    streptomysin yanında daha nadir kullanılan
    sikloserin, ethionamid, kanamisin,
    kapreomisin, paraaminosalisilik asit
Epidemiyolojisi
   Dünyada
   Tüberküloz günümüzde en yaygın görülen
    infeksiyonlardan
   Dünya nüfusunun 1/3’ünü oluşturan 1.7 milyar kişinin
    tüberküloz basili ile infekte olduğu
   Hastaların %95’i gelişmekte olan ülkelerdedir.
   HIV infeksiyonu birçok ülkede tüberkülozlu hasta
    sayısının belirgin şekilde artmasından ve ilaçlara
    dirençli suşların oluşmasından sorumludur
Türkiyede tüberküloz:
   19. yüzyıldan beri Osmanlı İmparatorluğunu etkileyen
    tüberküloz salgını, 1900 lerden sonra Balkan savaşı
    ve onu izleyen 1. Dünya Savaşında yoğun yoksulluk
    sonrasında Anadolu’ya yayılmıştır.
   1940 yıllarının sonuna kadar en sık ölüm nedenidir.
    Devlet 1940 ların sonlarında verem savaşı için
    dipanserler açılmıştır.
   1949 da kontrol programı TBMM tarafından kabul
    edilmiştir.
   1953 de UNICEF ile işbirliği ile aşı kampanyalarına
    başlatılmıştır.
   1983 kadar 9 kez bu gerçekleşmiştir. 1982 de hastalık
    prevalansının binde 3.6 olduğu görülmüştür.
Korunma ve kontrol

   Korunmada en önemli olan aşılanmadır.
   BCG aşısı (Bacille Calmette Guerin): Calmette
    ve Guerin, 1908 yılında, M. Bovis’in 231
    pasajdan sonra önce hayvanlara daha sonra
    insanlara deneyerek araştırmacıların adına
    itifaten BCG aşısı (Bacille Calmette Guerin)
    adını alan aşı halen kullanılmaktadır.
Korunma ve kontrol
   Günümüzde aşı daha farklı kültür ortamında (Sauton
    besiyeri) 12-14 kültürden avirulan aşı olarak
    hazırlanmaktadır. Aşı yenidoğan bebeklere yapılıyor.
    BCG sol deltoid bölgeye intradermal olarak
    uygulanıyor. Aşılandıktan sonra 5-6 yıl sonra PPD ile
    kontrol edilerek yenilenebilir.
   Aşının en önemli komplikasyonu aksiler lenfadenittir.
   BCG aşısı; immun sistemi bozuk olan, radyasyon
    tedavisi alan,antimetabolik ve steroid alan, ateşli
    çocuklara, gebelere, deri infeksiyonu olan kişilere
    yapılmaz.
Sonuç olarak
   Mikobakterilerin klinik örneklerden
    tanımlamada her ne kadar yeni
    moleküler ve immunolojik yöntemler
    kullanılsada kesin tanı halen kültür
    yöntemleridir. Bundan dolayı kültür
    yöntemlerinin geliştirilmesine yönelik
    çalışmalar desteklenmelidir.

Weitere ähnliche Inhalte

Was ist angesagt?

otit (fazlası için www.tipfakultesi.org )
otit (fazlası için www.tipfakultesi.org )otit (fazlası için www.tipfakultesi.org )
otit (fazlası için www.tipfakultesi.org )www.tipfakultesi. org
 
Idrar yolu enfeksiyonları(fazlası için www.tipfakultesi.org)
Idrar yolu enfeksiyonları(fazlası için www.tipfakultesi.org)Idrar yolu enfeksiyonları(fazlası için www.tipfakultesi.org)
Idrar yolu enfeksiyonları(fazlası için www.tipfakultesi.org)www.tipfakultesi. org
 
parazitolojiye-giriş- (fazlası için www.tipfakultesi.org )
parazitolojiye-giriş- (fazlası için www.tipfakultesi.org )parazitolojiye-giriş- (fazlası için www.tipfakultesi.org )
parazitolojiye-giriş- (fazlası için www.tipfakultesi.org )www.tipfakultesi. org
 
Menenjit& ensefalit (fazlası için www.tipfakultesi.org )
Menenjit& ensefalit (fazlası için www.tipfakultesi.org )Menenjit& ensefalit (fazlası için www.tipfakultesi.org )
Menenjit& ensefalit (fazlası için www.tipfakultesi.org )www.tipfakultesi. org
 
Antifungal ilaçlar (fazlası için www.tipfakultesi.org )
Antifungal ilaçlar (fazlası için www.tipfakultesi.org )Antifungal ilaçlar (fazlası için www.tipfakultesi.org )
Antifungal ilaçlar (fazlası için www.tipfakultesi.org )www.tipfakultesi. org
 
çOcuklarda paraziter hastalıklar(fazlası için www.tipfakultesi.org)
çOcuklarda paraziter hastalıklar(fazlası için www.tipfakultesi.org)çOcuklarda paraziter hastalıklar(fazlası için www.tipfakultesi.org)
çOcuklarda paraziter hastalıklar(fazlası için www.tipfakultesi.org)www.tipfakultesi. org
 
Immünolojik yetmezlik sendromlari (fazlası için www.tipfakultesi.org )
Immünolojik yetmezlik sendromlari (fazlası için www.tipfakultesi.org )Immünolojik yetmezlik sendromlari (fazlası için www.tipfakultesi.org )
Immünolojik yetmezlik sendromlari (fazlası için www.tipfakultesi.org )www.tipfakultesi. org
 
Ateşli çocuğa yaklşim(fazlası için www.tipfakultesi.org)
Ateşli çocuğa yaklşim(fazlası için www.tipfakultesi.org)Ateşli çocuğa yaklşim(fazlası için www.tipfakultesi.org)
Ateşli çocuğa yaklşim(fazlası için www.tipfakultesi.org)www.tipfakultesi. org
 
Non spore forming anaerobic bacteria
Non spore forming anaerobic bacteriaNon spore forming anaerobic bacteria
Non spore forming anaerobic bacteriaBruno Mmassy
 
Stridorlu çocuğa yaklaşim (fazlası için www.tipfakultesi.org )
Stridorlu çocuğa yaklaşim  (fazlası için www.tipfakultesi.org )Stridorlu çocuğa yaklaşim  (fazlası için www.tipfakultesi.org )
Stridorlu çocuğa yaklaşim (fazlası için www.tipfakultesi.org )www.tipfakultesi. org
 
Bakterilerin beslenmesi ve üremesi (fazlası için www.tipfakultesi.org )
Bakterilerin beslenmesi ve üremesi (fazlası için www.tipfakultesi.org )Bakterilerin beslenmesi ve üremesi (fazlası için www.tipfakultesi.org )
Bakterilerin beslenmesi ve üremesi (fazlası için www.tipfakultesi.org )www.tipfakultesi. org
 
Ses kısıklığı tanı ve tedavi
Ses kısıklığı tanı ve tedaviSes kısıklığı tanı ve tedavi
Ses kısıklığı tanı ve tedavienisalpinguneri
 
Plasmodiumlar (fazlası için www.tipfakultesi.org )
Plasmodiumlar (fazlası için www.tipfakultesi.org )Plasmodiumlar (fazlası için www.tipfakultesi.org )
Plasmodiumlar (fazlası için www.tipfakultesi.org )www.tipfakultesi. org
 
Mide (fazlası için www.tipfakultesi.org)
Mide (fazlası için www.tipfakultesi.org)Mide (fazlası için www.tipfakultesi.org)
Mide (fazlası için www.tipfakultesi.org)www.tipfakultesi. org
 
Kafa deri̇si̇ ve yüz mi̇mi̇k kaslari
Kafa deri̇si̇ ve yüz mi̇mi̇k kaslariKafa deri̇si̇ ve yüz mi̇mi̇k kaslari
Kafa deri̇si̇ ve yüz mi̇mi̇k kaslariÖZAN DENTAL KLİNİK
 
Medical Microbiology Laboratory (Introduction to Medical Mycology)
Medical Microbiology Laboratory (Introduction to Medical Mycology)Medical Microbiology Laboratory (Introduction to Medical Mycology)
Medical Microbiology Laboratory (Introduction to Medical Mycology)Hussein Al-tameemi
 
Akut kronik-pankreatit (fazlası için www.tipfakultesi.org)
Akut kronik-pankreatit (fazlası için www.tipfakultesi.org)Akut kronik-pankreatit (fazlası için www.tipfakultesi.org)
Akut kronik-pankreatit (fazlası için www.tipfakultesi.org)www.tipfakultesi. org
 

Was ist angesagt? (20)

otit (fazlası için www.tipfakultesi.org )
otit (fazlası için www.tipfakultesi.org )otit (fazlası için www.tipfakultesi.org )
otit (fazlası için www.tipfakultesi.org )
 
Idrar yolu enfeksiyonları(fazlası için www.tipfakultesi.org)
Idrar yolu enfeksiyonları(fazlası için www.tipfakultesi.org)Idrar yolu enfeksiyonları(fazlası için www.tipfakultesi.org)
Idrar yolu enfeksiyonları(fazlası için www.tipfakultesi.org)
 
solunum fonksiyon testleri
solunum fonksiyon testleri solunum fonksiyon testleri
solunum fonksiyon testleri
 
parazitolojiye-giriş- (fazlası için www.tipfakultesi.org )
parazitolojiye-giriş- (fazlası için www.tipfakultesi.org )parazitolojiye-giriş- (fazlası için www.tipfakultesi.org )
parazitolojiye-giriş- (fazlası için www.tipfakultesi.org )
 
Menenjit& ensefalit (fazlası için www.tipfakultesi.org )
Menenjit& ensefalit (fazlası için www.tipfakultesi.org )Menenjit& ensefalit (fazlası için www.tipfakultesi.org )
Menenjit& ensefalit (fazlası için www.tipfakultesi.org )
 
Antifungal ilaçlar (fazlası için www.tipfakultesi.org )
Antifungal ilaçlar (fazlası için www.tipfakultesi.org )Antifungal ilaçlar (fazlası için www.tipfakultesi.org )
Antifungal ilaçlar (fazlası için www.tipfakultesi.org )
 
çOcuklarda paraziter hastalıklar(fazlası için www.tipfakultesi.org)
çOcuklarda paraziter hastalıklar(fazlası için www.tipfakultesi.org)çOcuklarda paraziter hastalıklar(fazlası için www.tipfakultesi.org)
çOcuklarda paraziter hastalıklar(fazlası için www.tipfakultesi.org)
 
Immünolojik yetmezlik sendromlari (fazlası için www.tipfakultesi.org )
Immünolojik yetmezlik sendromlari (fazlası için www.tipfakultesi.org )Immünolojik yetmezlik sendromlari (fazlası için www.tipfakultesi.org )
Immünolojik yetmezlik sendromlari (fazlası için www.tipfakultesi.org )
 
Bruselloz
BrusellozBruselloz
Bruselloz
 
Ateşli çocuğa yaklşim(fazlası için www.tipfakultesi.org)
Ateşli çocuğa yaklşim(fazlası için www.tipfakultesi.org)Ateşli çocuğa yaklşim(fazlası için www.tipfakultesi.org)
Ateşli çocuğa yaklşim(fazlası için www.tipfakultesi.org)
 
Non spore forming anaerobic bacteria
Non spore forming anaerobic bacteriaNon spore forming anaerobic bacteria
Non spore forming anaerobic bacteria
 
Stridorlu çocuğa yaklaşim (fazlası için www.tipfakultesi.org )
Stridorlu çocuğa yaklaşim  (fazlası için www.tipfakultesi.org )Stridorlu çocuğa yaklaşim  (fazlası için www.tipfakultesi.org )
Stridorlu çocuğa yaklaşim (fazlası için www.tipfakultesi.org )
 
Oral kavi̇te
Oral kavi̇teOral kavi̇te
Oral kavi̇te
 
Bakterilerin beslenmesi ve üremesi (fazlası için www.tipfakultesi.org )
Bakterilerin beslenmesi ve üremesi (fazlası için www.tipfakultesi.org )Bakterilerin beslenmesi ve üremesi (fazlası için www.tipfakultesi.org )
Bakterilerin beslenmesi ve üremesi (fazlası için www.tipfakultesi.org )
 
Ses kısıklığı tanı ve tedavi
Ses kısıklığı tanı ve tedaviSes kısıklığı tanı ve tedavi
Ses kısıklığı tanı ve tedavi
 
Plasmodiumlar (fazlası için www.tipfakultesi.org )
Plasmodiumlar (fazlası için www.tipfakultesi.org )Plasmodiumlar (fazlası için www.tipfakultesi.org )
Plasmodiumlar (fazlası için www.tipfakultesi.org )
 
Mide (fazlası için www.tipfakultesi.org)
Mide (fazlası için www.tipfakultesi.org)Mide (fazlası için www.tipfakultesi.org)
Mide (fazlası için www.tipfakultesi.org)
 
Kafa deri̇si̇ ve yüz mi̇mi̇k kaslari
Kafa deri̇si̇ ve yüz mi̇mi̇k kaslariKafa deri̇si̇ ve yüz mi̇mi̇k kaslari
Kafa deri̇si̇ ve yüz mi̇mi̇k kaslari
 
Medical Microbiology Laboratory (Introduction to Medical Mycology)
Medical Microbiology Laboratory (Introduction to Medical Mycology)Medical Microbiology Laboratory (Introduction to Medical Mycology)
Medical Microbiology Laboratory (Introduction to Medical Mycology)
 
Akut kronik-pankreatit (fazlası için www.tipfakultesi.org)
Akut kronik-pankreatit (fazlası için www.tipfakultesi.org)Akut kronik-pankreatit (fazlası için www.tipfakultesi.org)
Akut kronik-pankreatit (fazlası için www.tipfakultesi.org)
 

Ähnlich wie Mycobak (fazlası için www.tipfakultesi.org )

Mdışı lebra-nokardia-aktinomyces (fazlası için www.tipfakultesi.org )
Mdışı lebra-nokardia-aktinomyces (fazlası için www.tipfakultesi.org )Mdışı lebra-nokardia-aktinomyces (fazlası için www.tipfakultesi.org )
Mdışı lebra-nokardia-aktinomyces (fazlası için www.tipfakultesi.org )www.tipfakultesi. org
 
Mdışı lebra-nokardia-aktinomyces (fazlası için www.tipfakultesi.org )
Mdışı lebra-nokardia-aktinomyces (fazlası için www.tipfakultesi.org )Mdışı lebra-nokardia-aktinomyces (fazlası için www.tipfakultesi.org )
Mdışı lebra-nokardia-aktinomyces (fazlası için www.tipfakultesi.org )www.tipfakultesi. org
 
Hayvan doku kültürü EGEKÖK Maraton Kök Hücre
Hayvan doku kültürü EGEKÖK Maraton Kök HücreHayvan doku kültürü EGEKÖK Maraton Kök Hücre
Hayvan doku kültürü EGEKÖK Maraton Kök HücreÖkkeş Zortuk
 
Mikrobiyoloji 3.hafta ders notları
Mikrobiyoloji 3.hafta ders notlarıMikrobiyoloji 3.hafta ders notları
Mikrobiyoloji 3.hafta ders notlarıSenin Biyolojin
 
Mikotoksinle(fazlası için www.tipfakultesi.org )
Mikotoksinle(fazlası için www.tipfakultesi.org )Mikotoksinle(fazlası için www.tipfakultesi.org )
Mikotoksinle(fazlası için www.tipfakultesi.org )www.tipfakultesi. org
 
Gıda Genel Mikrobiyoloji
Gıda Genel Mikrobiyoloji Gıda Genel Mikrobiyoloji
Gıda Genel Mikrobiyoloji Didem Korkmaz
 
bakterilerin-anatomik-yapilari.pdf
bakterilerin-anatomik-yapilari.pdfbakterilerin-anatomik-yapilari.pdf
bakterilerin-anatomik-yapilari.pdfnayetMotuk
 
mikrobiyoloji 1.hafta ders notları
mikrobiyoloji 1.hafta ders notlarımikrobiyoloji 1.hafta ders notları
mikrobiyoloji 1.hafta ders notlarıSenin Biyolojin
 
BAKTERİYOSİNLER (Makale Özeti)
BAKTERİYOSİNLER (Makale Özeti)BAKTERİYOSİNLER (Makale Özeti)
BAKTERİYOSİNLER (Makale Özeti)Muhammed Özgölet
 
DEZENFEKTANT -DISINFECTANT
DEZENFEKTANT -DISINFECTANTDEZENFEKTANT -DISINFECTANT
DEZENFEKTANT -DISINFECTANTEbalci
 
Corynebacterium diphteriae ve corynebacterium türleri (fazlası için www.tipfa...
Corynebacterium diphteriae ve corynebacterium türleri (fazlası için www.tipfa...Corynebacterium diphteriae ve corynebacterium türleri (fazlası için www.tipfa...
Corynebacterium diphteriae ve corynebacterium türleri (fazlası için www.tipfa...www.tipfakultesi. org
 
BİR GRUP SENTETİK VE BİTKİSEL SEKONDER BİLEŞİĞİN MEMELİ UBİKİTİN PROTEAZOM Sİ...
BİR GRUP SENTETİK VE BİTKİSEL SEKONDER BİLEŞİĞİN MEMELİ UBİKİTİN PROTEAZOM Sİ...BİR GRUP SENTETİK VE BİTKİSEL SEKONDER BİLEŞİĞİN MEMELİ UBİKİTİN PROTEAZOM Sİ...
BİR GRUP SENTETİK VE BİTKİSEL SEKONDER BİLEŞİĞİN MEMELİ UBİKİTİN PROTEAZOM Sİ...Mustafa ULGEY
 
antimikrobial-ajanların-etki-mekanizması-ve-sınıflandır… (fazlası için www.ti...
antimikrobial-ajanların-etki-mekanizması-ve-sınıflandır… (fazlası için www.ti...antimikrobial-ajanların-etki-mekanizması-ve-sınıflandır… (fazlası için www.ti...
antimikrobial-ajanların-etki-mekanizması-ve-sınıflandır… (fazlası için www.ti...www.tipfakultesi. org
 
Yeni enzimlerin keşfinde metagenomik yaklaşımlar
Yeni enzimlerin keşfinde metagenomik yaklaşımlarYeni enzimlerin keşfinde metagenomik yaklaşımlar
Yeni enzimlerin keşfinde metagenomik yaklaşımlarONUR SEVEN DO?AN
 
Gıdalarda bozulma
Gıdalarda bozulmaGıdalarda bozulma
Gıdalarda bozulmaosmny
 

Ähnlich wie Mycobak (fazlası için www.tipfakultesi.org ) (20)

Mdışı lebra-nokardia-aktinomyces (fazlası için www.tipfakultesi.org )
Mdışı lebra-nokardia-aktinomyces (fazlası için www.tipfakultesi.org )Mdışı lebra-nokardia-aktinomyces (fazlası için www.tipfakultesi.org )
Mdışı lebra-nokardia-aktinomyces (fazlası için www.tipfakultesi.org )
 
Mdışı lebra-nokardia-aktinomyces (fazlası için www.tipfakultesi.org )
Mdışı lebra-nokardia-aktinomyces (fazlası için www.tipfakultesi.org )Mdışı lebra-nokardia-aktinomyces (fazlası için www.tipfakultesi.org )
Mdışı lebra-nokardia-aktinomyces (fazlası için www.tipfakultesi.org )
 
Hayvan doku kültürü EGEKÖK Maraton Kök Hücre
Hayvan doku kültürü EGEKÖK Maraton Kök HücreHayvan doku kültürü EGEKÖK Maraton Kök Hücre
Hayvan doku kültürü EGEKÖK Maraton Kök Hücre
 
Mikrobiyoloji 3.hafta ders notları
Mikrobiyoloji 3.hafta ders notlarıMikrobiyoloji 3.hafta ders notları
Mikrobiyoloji 3.hafta ders notları
 
Biyoloji 5
Biyoloji 5Biyoloji 5
Biyoloji 5
 
Mikotoksinle(fazlası için www.tipfakultesi.org )
Mikotoksinle(fazlası için www.tipfakultesi.org )Mikotoksinle(fazlası için www.tipfakultesi.org )
Mikotoksinle(fazlası için www.tipfakultesi.org )
 
Gıda Genel Mikrobiyoloji
Gıda Genel Mikrobiyoloji Gıda Genel Mikrobiyoloji
Gıda Genel Mikrobiyoloji
 
bakterilerin-anatomik-yapilari.pdf
bakterilerin-anatomik-yapilari.pdfbakterilerin-anatomik-yapilari.pdf
bakterilerin-anatomik-yapilari.pdf
 
mikrobiyoloji 1.hafta ders notları
mikrobiyoloji 1.hafta ders notlarımikrobiyoloji 1.hafta ders notları
mikrobiyoloji 1.hafta ders notları
 
BAKTERİYOSİNLER (Makale Özeti)
BAKTERİYOSİNLER (Makale Özeti)BAKTERİYOSİNLER (Makale Özeti)
BAKTERİYOSİNLER (Makale Özeti)
 
DEZENFEKTANT -DISINFECTANT
DEZENFEKTANT -DISINFECTANTDEZENFEKTANT -DISINFECTANT
DEZENFEKTANT -DISINFECTANT
 
Corynebacterium diphteriae ve corynebacterium türleri (fazlası için www.tipfa...
Corynebacterium diphteriae ve corynebacterium türleri (fazlası için www.tipfa...Corynebacterium diphteriae ve corynebacterium türleri (fazlası için www.tipfa...
Corynebacterium diphteriae ve corynebacterium türleri (fazlası için www.tipfa...
 
BİR GRUP SENTETİK VE BİTKİSEL SEKONDER BİLEŞİĞİN MEMELİ UBİKİTİN PROTEAZOM Sİ...
BİR GRUP SENTETİK VE BİTKİSEL SEKONDER BİLEŞİĞİN MEMELİ UBİKİTİN PROTEAZOM Sİ...BİR GRUP SENTETİK VE BİTKİSEL SEKONDER BİLEŞİĞİN MEMELİ UBİKİTİN PROTEAZOM Sİ...
BİR GRUP SENTETİK VE BİTKİSEL SEKONDER BİLEŞİĞİN MEMELİ UBİKİTİN PROTEAZOM Sİ...
 
antimikrobial-ajanların-etki-mekanizması-ve-sınıflandır… (fazlası için www.ti...
antimikrobial-ajanların-etki-mekanizması-ve-sınıflandır… (fazlası için www.ti...antimikrobial-ajanların-etki-mekanizması-ve-sınıflandır… (fazlası için www.ti...
antimikrobial-ajanların-etki-mekanizması-ve-sınıflandır… (fazlası için www.ti...
 
Ndm 1
Ndm 1Ndm 1
Ndm 1
 
Yeni enzimlerin keşfinde metagenomik yaklaşımlar
Yeni enzimlerin keşfinde metagenomik yaklaşımlarYeni enzimlerin keşfinde metagenomik yaklaşımlar
Yeni enzimlerin keşfinde metagenomik yaklaşımlar
 
Genetiğe giriş
Genetiğe girişGenetiğe giriş
Genetiğe giriş
 
Gıdalarda bozulma
Gıdalarda bozulmaGıdalarda bozulma
Gıdalarda bozulma
 
Mikrobiyom
MikrobiyomMikrobiyom
Mikrobiyom
 
Tıbbi Mikro Uyg. 5.pdf
Tıbbi Mikro Uyg. 5.pdfTıbbi Mikro Uyg. 5.pdf
Tıbbi Mikro Uyg. 5.pdf
 

Mehr von www.tipfakultesi. org (20)

Oksijen tedavisi
 Oksijen tedavisi Oksijen tedavisi
Oksijen tedavisi
 
Noninvaziv mekanik ventilasyon
Noninvaziv mekanik ventilasyonNoninvaziv mekanik ventilasyon
Noninvaziv mekanik ventilasyon
 
astım
astım astım
astım
 
Mekanik ventilasyon
Mekanik ventilasyonMekanik ventilasyon
Mekanik ventilasyon
 
Konsültasyon
KonsültasyonKonsültasyon
Konsültasyon
 
Koah
KoahKoah
Koah
 
Dr önder tani ve siniflama
Dr önder tani ve siniflamaDr önder tani ve siniflama
Dr önder tani ve siniflama
 
Diyabetes mellitus
Diyabetes mellitusDiyabetes mellitus
Diyabetes mellitus
 
Bronşektazi
BronşektaziBronşektazi
Bronşektazi
 
Bbh'da pnömoni
Bbh'da pnömoniBbh'da pnömoni
Bbh'da pnömoni
 
Astım tanı ve sınıflama
Astım tanı ve sınıflama Astım tanı ve sınıflama
Astım tanı ve sınıflama
 
Astım ve koah ilaç farmakolojisi
Astım ve koah ilaç farmakolojisiAstım ve koah ilaç farmakolojisi
Astım ve koah ilaç farmakolojisi
 
Astim tedavileri
Astim tedavileriAstim tedavileri
Astim tedavileri
 
Astim tani ve tedavi rehberi
Astim tani ve tedavi rehberiAstim tani ve tedavi rehberi
Astim tani ve tedavi rehberi
 
Astım ilaçları
Astım ilaçlarıAstım ilaçları
Astım ilaçları
 
Ape
ApeApe
Ape
 
bronkoskopi ünitesi yönetimi
bronkoskopi ünitesi yönetimi bronkoskopi ünitesi yönetimi
bronkoskopi ünitesi yönetimi
 
Akciğer kanseri
Akciğer kanseriAkciğer kanseri
Akciğer kanseri
 
Akut ve subakut öksürük
Akut ve subakut öksürükAkut ve subakut öksürük
Akut ve subakut öksürük
 
bronşit ve bronlşektazi alevlenme tedavisi
bronşit ve bronlşektazi alevlenme tedavisibronşit ve bronlşektazi alevlenme tedavisi
bronşit ve bronlşektazi alevlenme tedavisi
 

Mycobak (fazlası için www.tipfakultesi.org )

  • 1. MİKOBAKTERİLER: MYCOBACTERİUM TUBERCULOSİS Prof.Dr. A. Nedret KOÇ Erciyes Üniversitesi Tıp Fakültesi Mikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Anabilim Dalı KAYSERİ
  • 2. Mycobacterium cinsi  Mycobacteriaceae ailesinin tek cinsi  Dünyaca yaygın olan tuberküloz etkenleri  İnsanlık tarihinde eski bir geçmişe sahip olan lepra etkenlerini
  • 3. Tarihçe  Villemin 1865 dolaylarında tüberküloz infeksiyonu belirlemesine  1882 de Robert Koch tüberküloz basilini ve hastalık ile ilişkisini ilk defa kurmuş  1886 yılında M. tuberculosis ismi verilmiş  Robert Koch tüberküloz alerjisi, immuniteyi ve tüberkülini tarif
  • 4. Mycobacterium bovis: Sığır tüberküloz basili ayrı bir tür olarak 1896 da Th. Smith tarafından ortaya atılmış  Mycobacterium microti:Tarla faresinden fare tüberküloz basili 1937 yılında izole edilmiş  Mycobacterium africanum
  • 5. Sınıflandırma  Mycobacterium cinsi Mycobacteriaceae ailesinin tek cinsidir.  DNA larının yüksek G+C miktarları (%62-70), diğer mikolik asit üreten Nocardia (%60-69), Rhodococcus (%59-69) ve Crynebacterium spp. (%51-59) ile benzerdir.
  • 6. Mycobacterium cinsi  Mikobakteriler içinde en sık görülmesinden dolayı hemen akla Mycobacterium tuberculosis gelir
  • 7. Mycobacterium tuberculosis kompleksi  Mycobacterium tuberculosis  Mycobacterium bovis  Mycobacterium microti  Mycobacterium africanum  Mycobacterium canettii  Mycobacterium pinnipedia  M. Caprae  M. bovis BCG
  • 8. Mycobacterium tuberculosis compleksi dışındakilere  A tipik mikobakteriler  Nontuberculous mycobacteria (NTM)  Tüberküloz dışı mikobakteriler
  • 9. Familyanın en önemli karakteri  Zor boyanan,  Boyaların uzun süre tutulması veya ısı ile uygulanması halinde alabilen  Bir defa boyandıktan sonra boyaları asit ve alkol karışımında kolay bırakmayan,  Asitlere dirençli çomak şeklinde bakterileri içermesidir
  • 10. Mycobacterium cinsindeki  Yavaş üreyenler ideal kültür ortamında katı besiyerinde gözle görülebilen koloniyi 7 günde,  Hızlı ürüyenler 7 günden önce oluştururlar.  Runyon 1959 yılında  Bakterilerin pigment yapıp yapmamasına, pigmetin ışık karşısında  Karanlılıkta oluşmasına  Üreme hızlarına göre ve koloni karekterlerine bakarak bir sınıflandırma yapmış
  • 11. Fotokromojenler (Işıkta pikment oluşturması)  Mycobacterium kansasii  Mycobacterium marinum  Mycobacterium simiae  Mycobacterium asiaticum
  • 12. Skotokromojen grup (Karanlıkta pikment oluşturması)  Mycobacterium scrofulaceum  Mycobacterium gordonae  Mycobacterium szulgai  Mycobacterium flavescens
  • 13. Non fotokromojen grup (pikment oluşturmaz)  Mycobacterium avium-intracellulare (MAC)  M. haemophilum  Mycobacterium xenopi  M. shimoidei  Mycobacterium ulcerans  M. genavense  Mycobacterium gastri  M.nonchromogenicum  Mycobacterium terrae complex  Mycobacterium malmoense  Mycobacterium triviale
  • 14. Çabuk üreyenler  Mycobacterium fortuitum coplex (Mycobacterium fortuitum , M. chelonae, M. abscessus)  Mycobacterium smegmatis  Mycobacterium flavescens  Mycobacterium thermoresistibile  Mycobacterium neoaurum
  • 15. Morfoloji ve boyanma özellikleri  M. tuberculosis ince, düz, hafif kıvrık, sonu küt olarak biten bir basil  Genişliği 0.3-0.6 µm genişlikte, 1-4 µm boyunda  Zaman zaman gerçek dallanma görülür (Yaşlı kültürlerde ve lenf nodlarından smearlerde ve ayrıca spesifik kültürlerde)
  • 16. Morfoloji ve boyanma özellikleri  Sporsuz,  Kapsülsüz  Hareketsiz  Asit ve alkole dirençli  Boyanma özellikleri, fiziki bütünlüğü yanında hücre duvarındaki mikolik asit ve lipid bariyer sistemine bağlı
  • 17. Boyanma  Ehrlich-Ziehl-Neelsen  Kinyoun asit-faz ve  Auromin-rodamin boyama
  • 18. Ehrlich-Ziehl-Neelsen  Mavi zemin üzerinde parlak kırmızı boyanan basiller  Dokuda ve balgamda vakuol ve polifosfat ihtiva ettiğinden dolayı boncuk veya tespih tanesi içeriyor gibi irregüller boyanır  Karbon fuksin hücre duvarına penetre olması için alttan ısıtılması gerekir
  • 19. Kinyoun asit-faz boyama  Hücre duvarına penetrasyonunu artırmak için çözeltideki fenol miktarının artırıldığı soğuk boyama yöntemi
  • 20. Mikobakterilerin asit faz boyanması  Hücrenin fiziksel yapısındaki lipid içermesine bağlı  Hücre duvarında var olan mikolikasit ile boyanın kompleksinin takibinde yüzeyel tabakanın hidrofobisitesinin artışı bu olay da rol oynar  Karbon fuksin hücre için de dışarı çıkışı engellenir
  • 21. Auromin-rodamin boyama  Mikobakteriler, koyu renkli zemin üzerinde parlak sarı ve 25X objektif ile kolaylıkla görülür  Karbol-fuksin yöntemine göre daha duyarlıdır
  • 22. Mycobacterial hücre duvarı  İnce kesit elektron mikroskopisi ile plazma mebranını saran üç tabakadan oluşan kalın duvar içeriğini  Kimyasal olarak duvar yeri komplekstir.  Hem gram pozitif hem de gram negatif organizmalara benzemez  Ağırlığının %60 ını oluşturan yüksek oranda ki lipidlerdir  Mikobakterilerin türüne göre kalınlığı değişir
  • 23. Mycobacterial hücre duvarı  Biyolojik olarak çok aktif ve bunların bir çoğu organizma için tek olan lipofilik makromoleküler kompleksini içerir  Fosfodiester bağlar ile bağlanan peptidoglikan ve arabinogalaktanın kovalent yapısından oluşur  Peptidoglikanları diğer bakterilerden farklıdır
  • 24. Mycobacterial hücre duvarı  İnterpeptitler arası köprüler sadece mikobakterilerde  Arabinozların 10 tanesinden en az biri mikolik asite esterifiye olur  Mikolik asit tipik uzun zincirli yağ asitidir  En dış tabaka peptidoglikolipid ve fenolik glikolipid içeren heterojen bir grup olan mikozidlerden oluşmuştur.
  • 25. Mycobacterial hücre duvarı  Arabinogalaktanın terminal dalları temel immunolojik determinatları oluşturur  Hücre duvarının oligomeri, Wax D, immunoadjuvant aktiviteden sorumlu  peptidler tuberkülin aktivitesi için temeldir  Glikolipidler;cord faktör (trehalose 6, 6’- dimycolate), sulfatidler, ve mikosidler biyolojik olarak aktiftir
  • 26. Hücre duvarının etkileri  Kimyasal ve fiziksel etkenlere direnç  Virulans, makrofajlardan korunma  Uzun jenerasyon süresi  Zor boyanma ve aside dirençli boyanma özelliği  Adjuvan etki  Gecikmiş tip aşırı duyarlılık  Ani aşırı duyarlılık
  • 27. Kültürel karakterleri  Zorunlu aeroptur  Basit besiyerinde ürüyemez  Yumurta-patetes (Löwenstein-Jensen), serum-base agar veya agar-base media (Middlebrook 7H-10)  Yavaş ürer, gözle görülecek üremesi optimal üreme koşullarında 370C de 10-20 gün
  • 28. Kültürel karakterleri  Koloniler küçük, kuru siğil gibi  Hücre yüzeyinin hidrofobik özelliğinden dolayı sentetik sıvı besiyerinde yüzeyinde ince zar gibi ürer
  • 29. Kültürel karakterleri  Noniyonik deterjan olan Tween 80 (sorbitan monolatın polyoxyethylenenin derivesi) hücrelerin agregasyonunu önleyerek onların difüz olarak üremesini sağlar  Kültürlerin çalkalamak havalandırmayı artırdığı için büyüme oranını artırır  Büyüme %5-10 CO2 ile de artabilir  CO2 sağlamak için mumlu kavonoz kullanılmaz
  • 30. Kültürel karakterleri  Mikobakteriler O2’li ortamı sever  Büyüme için optimal pH 7.0 fakat 6- ile 7.6 arasında  Optimal üreme ısısı 370C’dir  Diğer mikobakteri türleri için üreme ısısı onların spesifik doğal konaklarının vucud ısıları ile değişebilir
  • 31. Metabolizması  Enerjilerini glikoz ve gliserolden sağlarlar  Gliserollu karbon ve enerji kaynağı olarak tercih ederler.  Katalaz ve peroksidaz bütün mikobakterilerde vardır  Uygun kültür koşulların da yarılanma ömrü 14-15 saat
  • 32. Besin gereksinimi  Üremesi için bütün amino asitler, pürin ve pimidin baz ve B-kompleks vitamin ihtiyaç  En önemli karbon kaynağı gliserol ve nitrojen kaynağı olarak asparjini tercih eder
  • 33. Oksijen gereksinimi  Oksijen mikobakterilerin invitro ve invivo üremesi için kriter  Oksijen sınırlandığı ortamlarda basil latent kalır oksijen olduğu besiyerinde tekrar üremeye başlar
  • 34. Mycobacterium’ ların antijenik yapısı  Mycobacterium’ların birçok immunoreaktif yapıları vardır:  Old tuberculin  Purified protein derivative (PPD)  Purified antijen  Polisakkaritler (arabinogalaktan ve arabinomannans)  Phophatidyl inositol mannosides (fosfatil inositol mannosid)
  • 35. Old tuberculin  Tüberkülün testi (tüberküloz infeksiyonunun tanımlandığı cilt testi) için orijinal test maddesi  İlk defa Koch 1881’de tanımlamıştır. 6 haftalık sıvı besiyerinde kültürün kaynatılarak ve organizmayı filtrasyonla ayırarak elde edilen ısıya dayanıklı bir protein
  • 36. Purified protein derivative (PPD)  Old tuberkülünün pürified preparasyonudur.  Dünya sağlık organizasyonu tüberkülün deri testi için bu maddeyi önermektedirler.
  • 37. Purified antijen  65 kDa antijen (heat shock protein) deney hayvanında yüksek oranda geçikmiş tip hipersensitivity reaksiyonlarına neden olur  Otoimmun hastalıklarında etyolojilerinde rol oynar.
  • 38. Polisakkaritler (arabinogalaktan ve arabinomannan)  İmmunolojik ve serolojik aktiviteye sahiptir.  Erken cilt reaksiyonlarına neden olur.  Bunlara karşı oluşmuş humoral antikorların önemi daha belirlenememiştir.
  • 39. Fosfatil inositol mannosid  Plazma membranlarında lipidleri ailesindendir  Hücre mebranı ve hücre duvarı arasında nonkovalent bağlar sağlıyarak hücre yapısında rolü önemlidir  Haptonik olmasına rağmen, immunolojik form ve serolojik aktivitede gösterir  Makrofajları tanıma ve muhtemelen koruyucu immunitenin karşıtı bir rolü ile önemli lipoteikasit benzeri polimerler olduğu inanılmaktadır.
  • 40. Diğer immunoreaktif kompenentler:  Wax D ve muramlyldipeptide (peptidoglikolipidler)  Trehalose-6,6’-Dimycolate (trehaloso dimikulat): Cord faktör (İp faktör)  Sulfatidler
  • 41. Wax D ve muramlyldipeptide (peptidoglikolipidler)  Bu maddeler adjuvan özelliğinde maddelerdir.  kombine olduğunda sinerjik immuno stimulatör aktivite gösterir  Tümörlere karşı etkilidir.
  • 42. Trehalose-6,6’-Dimycolate (trehaloso dimikulat): Cord faktör (İp faktör)  Tüberküloz basillerin iplik şeklinde üreme  Adjuvant aktivite sahiptir  Alternatif kompleman sistemini aktivite eder  Antitümor özellikleri verir
  • 43. Sulfatidler  Glikolipidler dir  Virulent M. tuberculosis’ların nötral red reaksiyonları ile ilişkilidir  Spesifik immunostimulatör özelliği küçüktür
  • 44. Patojinite determinatları  M. tuberculosis ekzotoksin ve endotoksin üretmezler  Tek bir yapı, antijen, veya mekanizma organizmanın virulansını açıklayamaz
  • 45. Bulaşıcılık  M. tuberculosis için tek kaynak insandır  kişiden kişiye geçişi solunum yolu ile olur  Canlı tüberküloz basili içeren ve havada asılı halde bulunan küçük (1-5 mikron) damlacıkların solunum yolu ile alınması ve bunların alveollere yerleşmeleri ile gerçekleşir
  • 46. Diğer geçiş yoları:  gastrointestinal,  deri,  süt,  cinsel yolla,  hematojen yolla  direkt hastalıktan lokal  ven ve lenfatik yolla da bu hastalığın yayıldığı gösterilmiştir
  • 47. Tüberküloz basilinin direnci  Bir çok kimyasal dezenfektanlara diğer sporsuz bakterilere göre dirençlidir.  Organik asitler ve doymamış yağ asitleri, %70-95 alkolle 10 dakika dayanamaz.  Aseton iyot tentür bakterileri hızla öldürür.  %5 sodyum hipoklorit ve %3-8 formaldehit 10-30 dakikada öldürür.  Kuruluğa dirençlidir.
  • 48. Tüberküloz basilinin direnci  Ölülerin vücudunda uzun süre canlı kalırlar.  Kurumuş balgamda aylarca kalır.  Toprakta ve sularda 4-5 ay yaşayabilir.  Güneş ışığından uzak olmak koşulu ile sokak tozlarında 10 gün, hastalara ait kitaplarda 3.5 ay canlı kalabilir.
  • 49. Bağışık mekanizması ile ilgili olaylar  Hücresel bağışıklık rol oynar.  Bakterilerin virulansı, hücresel aşırı duyarlık ve hücresel bağışıklık olaylarının karşılıklı dengesi ile sıkıya ilgilidir.  Bu olayı açıklayıcı en önemli olay Koch fenomoni dir.
  • 50. Koch fenomoni  Aynı kobaya hastalık sürerken  Sağlam kobaya canlı basilden ayrı bir yere tüberküloz basilinin enjekte edersek; birinciden daha enjekte edersek: çabuk yara oluştuğu, açıldığı ve yara oluştuğu, yayılım olmadan iyileştiğini görülür. açıldığı, lenf bezleri olaya katıldığı,  İkinci deneyi ölü basille vucuda yayıldığı, uygularsak; ikincine benzer reaksiyon oluşur sonunda kobayın öldüğü görülür
  • 51. Koch fenomoni  Birinci deneyde olay; Hücresel bağışıklıktır  İkinci deneyde olay; Hücresel aşırı duyarlılıktır.
  • 52. Aşırı duyarlığın ve direncin saptanması  Eski Tüberkülin: İlk R. Koch hazırlamiştır.  PPD (Purified Protein Derivative): ilk Seibert ve Glenn tarafından hazırlanmıştır.  Pratikte tüberkülün duyarlığını araştırrılmasında en sıklıkla kullanılan PPD ile uygulanan Mantoux testdir.  Tüberkülin testi infeksiyonda ortalama 4-6 hafta sonra olumlu hale geçer. Alerji meydana gelinceye kadar geçen bu zamana preallerjik dönem denir.
  • 53. İnsanlarda ki tüberküloz infeksiyonu  İlk veya primer infeksiyon  Yeniden infeksiyon ( Re-infeksiyon)
  • 54. Tüberkülozun klinik önemi  Akciğer infeksiyonu  Seroza infeksiyono (plevral, menejit, periton)  Eklem ve kemik tüberkülozu  Lenf bezi tüberkülozu  Deri tüberkülozu  Böbrek ve genital sistem (epididim, testis, ovarium, uterus vb.) tüberkülozu
  • 55. Tüberkülozun klinik önemi  Bağırsak tüberkülozu  Göz ve diğer organlar tüberkülozu  Milyer tüberkülozu: Dirençsiz ve duyarlı kişilerde bakterilerin kana geçip yayılarak tüm organlara yerleşmesi ile oluşan ağır infeksiyona denir.
  • 56. TANI  Klinik tanı  Laboratuvar tanı
  • 57. Hastadan alınan klinik örnekler:  Balgam, bronkoalvoler lavaj, broşiyal yıkama, gastrik lavaj sıvısı, kan, idrar, dışkı, diğer vücut sıvıları (BOS, plevra, perikart, peritoneal ), dokular ( lenf nodu, cilt, diğer biyopsi örnekleri), abse örneği, aspirat sıvıları, deri lezyonları ve yaralardır
  • 58. Örneklerin İşlenmesi:  Normal steril örnekler:  Dekontaminasyon ve homojenasyon işlemine gerek yoktur.  Sıvı örnekler >3,000 devir de santrefüj edilir ve sediment hem sıvı hemde katı besiyerine inokule edilir.
  • 59. Kontamine örnekler:  Eritme ve dekontaminasyon işlemine tabi tutulur
  • 60. Eritici ve dekontaminasyon işleminde kullanılan yöntemler:  NALC-NaOH yöntem (N-Acetyl-lcystein-NaOH) en sıklıkla kullanılır  Sodyum hidroksit yöntem: Hem eritici hemde dekontamine edicidir  Zefiran-trisodyum fosfat yöntem: Trisodyum fosfat eritici, zefiran dekontamine edicidir. Ancak zefiran bakteriostatik olduğu için özellikle BACTEC sistemde kullanılmaz  Oksalik asit yöntem: Özellikle Pseudomonas spp. ile kontamine kültürlerler için tercih edilmelidir. BACTEC sistemde de kullanılabilir.  CPD-sodyum klorit yöntem: CPD kuaternar ammonyum birleşiğidir  Sülfürük asit: dekontaminasyon için kullanılır
  • 61. Asit faz boyama: Ehrlich-Ziehl- Neelsen ve Kinyoun Asit faz boyama boyama  Organizma vakuol ve polifosfat ihtiva ettiğinden dolayı boncuk veya tespih tanesi içeriyor gibi irregüller boyanaır.  Karbon fuksin hücre duvarına penetre olması için alttan ıstılması veya,  Çözeltideki fenol miktarının artırıldığı soğuk boyama yöntemi temeline dayanır
  • 62. Asit faz boyama  Hücrenin fiziksel yapısındaki lipid içermesine bağlıdır.  Hücre duvarında var olan mikolikasit ile boyanın birleşmesi takibinde yüzeyel tabakanın hidrofobisitesinin artışı bu olay da rol oynar.
  • 63. Flurokrom boyama: Auromin veya auromin-rhodamin boyama  mikobakteriler, koyu renkli zemin üzerinde parlak sarı ve 25X objektif ile kolaylıkla görülür.  Karbol-fuksin yöntemine göre daha duyarlıdır
  • 64. Kültür yöntemleri  İn vitro ilk izolasyonlarında kompleks besiyeri gerekir  bazı mikobakteriler ilk izolasyonlarından sonra basit sentetik besiyerinde üreyebilir  Selektif ve nonselektif besiyeri vardır
  • 65. Katı besiyeri  1- Yumurtalı-baz besiyeri  2- Agar-bas besiyeridir.
  • 66. Yumurtalı-baz besiyeri  Yumurta, patates unu, tuz ve gliserol ihtiva eder.  Besiyeri ilaç duyarlılık testlerinde kullanılmaz.  Lowenstein-Jensen (LJ) besiyeridir. En sık kullanılır  Petragnani besiyeri LJ’den daha fazla malaşit yeşili ihtiva eder.Bu baı suşların üremesini inhibe edebilir  Koloniler Yumurtalı-baz besiyerinden 18-24 günde
  • 67. Agar-baz besiyerleri  Bu besiyerleri transparan oldukları için mikroskopik koloniler kolayca görülür.  Koloniler LJ besiyerinden daha önce (10-12 günde) görülür.  En sık kullanılan Agar-baz besiyerleri Middlebrook 7H10, 11,12 dir.  Bu besiyerleri antitüberkülotik duyarlılık testi için kullanılabilir. Kontaminantlar kolayca üremez.  Besiyeri pahalıdır ve Saklama süresi daha kısadır. (buzdalobında 1 ay)  Besiyeri ısı, ışık maruz kaldığında formaldehit salar
  • 68. Sıvı besiyerleri  Middlebrook 7H9 ve Dubos Tween albumin sıvı besiyeri en sık kullanılan besiyerleridir.  Subkültür için stok suşlar  Antitüberkülotik duyarlılık testi  Sıvı besiyeri bakteri miktarı düşük olduğunu düşünüldüğü örneklerden izolasyonlarda  Tween 80nin küme yapmış mikobakterileri dağılımını sağlar
  • 69. BACTEC AFB sistem  Radyometrik sistem olan BACTEC AFB sistemi geliştirmişlerdir.  Karbon kaynağı olarak sadece 14 C ile işaretli palmitik asit içeren sıvı besiyerine  Besiyerinde basil üredikçe ortama 14CO2 verilmektedir.  BACTEC 460 cihazı besiyerinde ki 14CO2 ölçmekte ve bunu Growth index (üreme indeksi) olarak rapor etmektedir.  M. tuberculosis 9-14 günde, tüberküloz dışı mikobakteriler 7 günden önce belirlenir.
  • 70. BACTEC AFB sistem  BACTEC 13A şiseleri kan ve kemik iliği örnekler için kullanılır.  BACTEC 12B şiselerine içinde Middlebrook 7H9, BSA, kasein hidrolizat, katalaz, 14C işaretli palmitik asit, antimikrobik ajanlardan vardır.  M. tuberculosis kompleks diğer tüberküloz dışı mikobakterilerden NAP (P-Nitro-ß-acetylamino- ß -hydroxypropiophenone) testi ile ayırır. NAP konulan besiyerinde üreme olursa M. tuberculosis kompleks dir  Antitüberkülotik duyarlılık testi için de kullanılabilir
  • 71. Selektif Besiyeri  LJ, Middlebrook 7H10,11 besiyerlerine kontaminant bakterilerin üremesini önlemek için konulan antimikrobiyal ajanlardır (penisilin, nalidiksik asit, sikloheksimit, linkomisin, karbenisilin, polimiksin, trimetoprim, amfoterisin B konulabilen antibiyotiklerdir
  • 72. Bifazik besiyerleri: Septi- Chek sistem  biri sıvı (Middlebrook 7H9 20ml) diğeri 3 katı besiyeri (LJ, Middlebrook 7H11, çukulata besiyeri)  Besiyerine eklenen maddeler: glikoz, gliserin, oleik asit, pridoksal HCI, katalaz, albumin, polimiksin, trimetoprim, amfoterisin B, nalidik asit, azlosilin  Çukolata bakteriyel kontaminasyonu gösterir. Sistemin sensitivitesi BACTEC AFB benzerdir.  Üreme peryodu daha uzundur, geleksel sistemlerden daha kısadır.  Düşük örnekle çalışılan laboratuvarlarda kullanılabilir  Antitüberkülotik duyarlılık testi ve kan kültürleri için kullanılmaz
  • 73. M. haemophilus için hem içeren besiyeri  Middlebrook 7H10 agara hemolize koyu eritrositi, hemin, veya X faktör diski veya LJ besiyerine %1 ferrik amonyum sitrat eklenerek hazırlanır
  • 74. MGIT (Mycobacteria Growth Indicator Tube)  Middlebrook 7H9 sıvı besiyeri, OADC( oleik asit, albumin, dekstroz, katalaz), Panta (antibiyotik) ve tüpün dibindeki silikona emdirilmiş halde oksijene duyarlı bir fluoresans gösterge maddesi içermektedir.  Tüpte üreyen mikobakteri oksijeni kullanması, bunun sonucunda oluşan fluoresansın ultraviyole lambası altında saptanmasıdır.  Antifungal duyarlılıkta yapılabilir.  radyoaktif madde ve pahalı aletlere ihtiyaç göstermemesi üstünlüğü  Basiller 4-14 ürer.
  • 75. MB/BacT Alert kültür sistemi  Modifiye edilmiş Middlebrook 7H9 besiyeri içeren kültür şişelerinde otomize edilen sistemde üremenin varlığı kolorimetrik olarak saptanır.  Üretim süresi BACTEC sisteme ve MGIT ile kıyaslanabilir
  • 76. Lizis-santrifüj (izolator sistem)  Özellikle kanda mikobakterile üretimi için önemlidir. İzolator sistem saponin ihtive eder. Bu hücreleri eritir ve mikobakterilerin açığa çıkmasını sağlar. Izolator sistemde alınan sediment LJ, 7H11 katı veya sıvı besiyerine inokule edilir
  • 77. İnkübasyon  Mikobakterilerin bir çoğunun ürüyebilmesi için 35-37oC inkübasyon ısısı gerekir.  M. marinum, M. ulcerans, M. chelonae veya M. haemophilum 25-33oC gibi daha düşük inkübasyon ısısında ürüyebilir
  • 78. Atmosfer  Mikobakterilerin üremesini %5-10 CO2’lik ortam artırır. Ancak mumlu kavonoz mikobakterilerin inkübasyonları için kullanılmaz. Çünkü mikobakteriler O2 azaldığı ortamda üreyemez. Middlebrook ve LJ için CO2 ortam gerekir. Ancak BACTEC ve Septi-Chek için gerekmez
  • 79. Zaman  Mikobakteriyel kültürler negatif olarak tanımlamadan önce genellikle 6-8 hafta  Cilt lezyonun da şüphenilen M. ulcerans için kültür 12 hafta  Solit kültürler ilk inkübasyonlarının 3.-5. günün de erken üreyen mikobakteri türleri belirlemek için her gün incelenir. Daha sonra 4 haftanın üzerindeki kültürler hafta iki kez incelenir. Daha yaşlı kültürler haftalık incelenir
  • 80. MİKOBAKTERİLERİN TANIMLANMASI  Üreme hızı,  tween 80 hidroliz,  optimal ısı,  tellürit redüksiyonu,  koloni morfolojisi,  %5 NaCl’a tolerans,  pigment üretimi,  demir alımı,  niasin testi,  3 günde arilsülfataz hidrolizi,  T2H (thiophene-2-carboxylic acid hydrazid) de üremesi,  MacConcey agarda  nitrat redüksiyonu, üreyebilmesi,  semikuantatif katalaz,  üreaz üretimi, 60oC’de katalaz,  pirazinamidaz testi gibi biyokimyasal testler kullanılır
  • 82. İdentifikasyonda yeni yöntemler:  Kromotografik analiz, nükleik asit problar  Kromotografik analiz: İnce tabaka kromotagrafi, kapiller gaz kromotografi ve HPLC yöntemi ile yağ komposizyonunu analizi ile mikobakterler tür düzeyinde identifiye edilebilinir.  Direkt örnekten mikobakteriyel birleşenlerinide belirleyerek direkt belirlemedede kulanılır
  • 83. Tuberkulostearik asit (TSA)  Gaz likit kromotografi ve kitle spektroskopi kombinasyonu ile klinik örneklerden belirlenebilir ve bu TSA sadece mikobakterilerde ve aktinomiçeslerde bulunmaktadır  BOS ve balgamda TSA nın belirlenmesi tüberkülozun belirlenmesinde çabuk ve duyarlı bir testtir
  • 84. Adenizin deaminaz (ADA)  Adenizin inozine dönüşümünü katalizleyen Monosit, makrofaj ve lenfositlerin farklılaşmasında rol oynayan bir enzimdir.  İnfeksiyoz mononükleoz, brusella, tifo gibi infeksiyonlarda, romatoit artirit, dissemine sistemik lupus eritematozis, lenfoma ve lösemi gibi hastalıklarında düzeyleri artar.  Bundan dolayı spesifik test değildir
  • 85. Lizozim  Lizozim aktif makrofaj, monosit ve granülositlerden salgılanan bir enzimdir.  Tüberküloz plörezilerde plevral sıvıda artmış olarak bulunmaktadır.  Duyarlılığı %100, özgürlüğü %88 olarak bulunmuştur .  Karsinomatöz olaylarda da yükselebilir
  • 86. Kültür doğrulamak için DNA proplar  Mycobacterium tuberculosis kompleks, MAC, M. gordonae, M. kansasii’in türe spesifik rRNA çifti ticari olarak bulunmaktadır
  • 87. Nükleik asit amplifikasyon ve hibridizasyon yöntemleri  Direkt belirlemede proplar kullanılmamakta  Direkt örnekte belirlemelerde nükleik asiti PCR ile çoğaltarak özgül nükleik asit proplar kulanılarak saptanabilir.  PCR eski tüberküloz öyküsü olan ölü basil bulunduran hastalarda da pozitiflik verebilir
  • 88. Kültür yapılmadan basilin saptanması  PCR (Hedef nükleik asitlerin PCR ile çoğaltılması)
  • 89. Klinik örneklerden Mikobakteriyel antikorların gösterilmesi  Mikobakteriyel antjenlere maruz kalanlarda IgM, IgG ve IgA türü antikorlar oluşur. serolojik yöntemler ile belirlenebilir.  Antikorlar hem basille infekte hemde BCG aşısı ve tüberkülin deri testi yapılan kişilerde üretildiğinden tanıda spesifitesi düşüktür  Örnek alımının zor olduğu durumlarda kullanılabilir
  • 90. Mikobakteriyel antijenlerin gösterilmesi  PPD, antijen 5 ve antijen 60 yarı saf, 33kD, 38kD, 45kD, TB23, TB68, ve TB 72 gibi saf ve özgül antijenlerin saptanması amaçlanmaktadır.  Vucüt sıvılarında özgül antijenlerin RIA ve ELISA ile gösterilmesinin duyarlılığı %39-79 ve özgüllüğü %98-100 olarak belirlenmiştir. Bu konudaki çalışmalar yoğun şekilde devam etmektedir.
  • 91. QuantiFERON®-TB Gold In- Tube (IT) test  ESAT-6, CFP-10 ve TB7.7(p4) proteins karşı oluşan interferon-γ (IFN- γ) yı ELISA ile ölçülmektir.  Bu test BCG suşu ve diğer tuberkuloz dışı mikobakterilerde olmaması tanıda önemlidir  Latent M. tuberculose tanısında tedavi takibinde de önerilmektedir.
  • 92. Antimikobakteriyal duyarlık testleri  Geleneksel yöntemler (Broth dilüsyon ve agar dilüsyon yötemleri  BACTEC duyarlılık testi  E test yöntemi  PCR ile genetik mutasyonların saptanması
  • 93. Tedavi  Tüberküloz tedavisi uzun ve kombine ilaçlarla olasıdır.  Tedavi şekli klinik forma ve hastaya göre değişir.  Antitiberkülotik ilaçlar: en sık kullanılan izoniasid, rifampisin, etanbutol, prazinamid ve streptomysin yanında daha nadir kullanılan sikloserin, ethionamid, kanamisin, kapreomisin, paraaminosalisilik asit
  • 94. Epidemiyolojisi  Dünyada  Tüberküloz günümüzde en yaygın görülen infeksiyonlardan  Dünya nüfusunun 1/3’ünü oluşturan 1.7 milyar kişinin tüberküloz basili ile infekte olduğu  Hastaların %95’i gelişmekte olan ülkelerdedir.  HIV infeksiyonu birçok ülkede tüberkülozlu hasta sayısının belirgin şekilde artmasından ve ilaçlara dirençli suşların oluşmasından sorumludur
  • 95. Türkiyede tüberküloz:  19. yüzyıldan beri Osmanlı İmparatorluğunu etkileyen tüberküloz salgını, 1900 lerden sonra Balkan savaşı ve onu izleyen 1. Dünya Savaşında yoğun yoksulluk sonrasında Anadolu’ya yayılmıştır.  1940 yıllarının sonuna kadar en sık ölüm nedenidir. Devlet 1940 ların sonlarında verem savaşı için dipanserler açılmıştır.  1949 da kontrol programı TBMM tarafından kabul edilmiştir.  1953 de UNICEF ile işbirliği ile aşı kampanyalarına başlatılmıştır.  1983 kadar 9 kez bu gerçekleşmiştir. 1982 de hastalık prevalansının binde 3.6 olduğu görülmüştür.
  • 96. Korunma ve kontrol  Korunmada en önemli olan aşılanmadır.  BCG aşısı (Bacille Calmette Guerin): Calmette ve Guerin, 1908 yılında, M. Bovis’in 231 pasajdan sonra önce hayvanlara daha sonra insanlara deneyerek araştırmacıların adına itifaten BCG aşısı (Bacille Calmette Guerin) adını alan aşı halen kullanılmaktadır.
  • 97. Korunma ve kontrol  Günümüzde aşı daha farklı kültür ortamında (Sauton besiyeri) 12-14 kültürden avirulan aşı olarak hazırlanmaktadır. Aşı yenidoğan bebeklere yapılıyor. BCG sol deltoid bölgeye intradermal olarak uygulanıyor. Aşılandıktan sonra 5-6 yıl sonra PPD ile kontrol edilerek yenilenebilir.  Aşının en önemli komplikasyonu aksiler lenfadenittir.  BCG aşısı; immun sistemi bozuk olan, radyasyon tedavisi alan,antimetabolik ve steroid alan, ateşli çocuklara, gebelere, deri infeksiyonu olan kişilere yapılmaz.
  • 98. Sonuç olarak  Mikobakterilerin klinik örneklerden tanımlamada her ne kadar yeni moleküler ve immunolojik yöntemler kullanılsada kesin tanı halen kültür yöntemleridir. Bundan dolayı kültür yöntemlerinin geliştirilmesine yönelik çalışmalar desteklenmelidir.