Aula prática de Imunologia ICS - UFBA: Imunofluorescencia

1. UNIVERSIDADE FEDERAL DA BAHIA INSTITUTO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE – ICSDEPARTAMENTO DE BIOINTERAÇÃODISCIPLINA: IMUNOLOGIA I – ICS 045 IMUNOFLUORESCÊNCIA Trabalho realizado pela Acadêmica de Medicina Veterinária da UFBA Aretha Alves Borges da Silva sob orientação dos Professores Robert Schaer, Roberto Meyer, Claudia Brodskin e Ricardo Portela. Atualizado em Fevereiro de 2010.

2. CARACTERÍSTICAS BÁSICAS

5. Testequalitativo/semi-quantitativo.

7. Nos testes de imunofluorescência são empregados conjugados constituídos de anticorpos ligados covalentemente a moléculas reveladoras denominadas fluorocromos.

8. 1941: primeira vez que anticorpos foram conjugados com fluorocromos.

10. São utilizados vários fluorocromos diferentes nos laboratórios clínicos para imunofluorescência.

12. A reação imunofluorescente que é desencadeada no microscópio de epifluorescência ocorre através da emissão de luz de cor quando o fóton é excitado por luz de curto comprimento de onda (UV).

13. Para deixar passar somente a emissão secundária desejada, devem-se utilizar filtros apropriados dependendo da cor do fluorocromo.

15. IMUNOFLUORESCÊNCIA DIRETA (IFD)

16. IMUNOFLUORESCÊNCIA DIRETA (IFD) Y O anticorpo específico marcado com Fluorocromo (conjugado) é adicionado e se fixa ao antígeno, formando um imunocomplexo estável. Y Y Y Y Y O anticorpo não ligado é removido por lavagens. O preparado é observado em microscópio de fluorescência. Antígeno pesquisado Y Conjugado

18. Alta especificidade e sensibilidade

19. Possibilidade de detecção de proteínas intracelulares e de sua localização.

20. DESVANTAGENS

21. Alto custo do microscópio de fluorescência

22. Necessidade de um conjugadoparacadaantígenoque se desejaidentificaroulocalizar

24. Detecção direta de microrganismos em secreções, na urina, nas fezes, em cortes de tecidos etc. Também é utilizada na fenotipagem de células tumorais.

26. IMUNOFLUORESCÊNCIA INDIRETA (IFI) PARA A PESQUISA DE ANTÍGENOS Incuba-se a célula ou tecido em que se quer pesquisar o antígeno com o anticorpo específico obtido em animal ou um monoclonal, levando à formação de um imunocomplexo. Y Y Y Y Y Y Realiza-se lavagem para retirada do anticorpo não ligante excedente. A preparação é incubada com um conjugado antiimunoglobulina, marcado com fluorocromo, produzido em outra espécie de animal. Antígeno pesquisado Y Y Y Y Y Conjugado O preparado é observado em microscópio de fluorescência. Y Anticorpo Monoclonal

27. IMUNOFLUORESCÊNCIA INDIRETA (IFI) PARA A PESQUISA DE ANTICORPOS Antígenos padronizados são fixados a lâminas de vidro. O soro do paciente é diluído, colocado sobre o antígeno e incubado para permitir a formação do complexo antígeno-anticorpo. Y Y Y Y Y Y Realizam-se lavagens para a retirada dos anticorpos não ligados. A preparação é incubada com o conjugado fluorescente e, se houver anticorpo no soro, o conjugado reage com o anticorpo específico para o antígeno. Antígeno padronizado Y Conjugado Observa-se o preparado em microscópio de fluorescência. Y Y Y Y Y Anticorpo pesquisado

29. Sensibilidade

30. Especificidade

31. Reprodutibilidade

32. De simples padronização e execução

33. O mesmo conjugado pode ser usado em sistemas diferentes

34. Para determinar as classes e subclasses de anticorpos são utilizados conjugados específicos

35. DESVANTAGENS

36. Necessidade de microscópio de fluorescência

37. Subjetividade na leitura

39. Medicina humana

40. Diagnóstico sorológico de várias doenças infecciosas como a Doença de Chagas, a SIDA/AIDS, as hepatites e complexos em doenças auto-imunes.

41. Medicina Veterinária