Este documento resume un estudio que comparó los efectos del tratamiento con monofluorofosfato y fluoruro de sodio en la reparación ósea en ratas. El estudio encontró que ambos tratamientos aceleraron la reparación ósea en defectos no críticos, pero el efecto fue más rápido y marcado con monofluorofosfato. Los tratamientos aumentaron la densidad mineral ósea en la zona lesionada, la fosfatasa alcalina plasmática, y mejoraron la estructura ósea; pero redujeron la excreción de calcio fecal
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Reparación Ósea estimulada por MFP y NaF
1. Comparación de los efectos
del tratamiento con
Monofluorofosfato y Fluoruro de
Sodio sobre el proceso de
reparación ósea en ratas
Autores
Dra. Sandra Mejía
Dr. Alfredo Rigalli
2. Defectos óseos
•Críticos: Los que no tienen la posibilidad de
regenerarse por sí solos.
•No críticos: Los que sí cuentan con ella.
Crenshan, A. 1992. Cirugia Orthopedical. 8ª Ed. Panamericana. Buenos Aires.
3. El hueso largo y sus partes
Funciones del tejido óseo:
Sostén
Protección
Homeostasia fosfocálcica
http://www.aula2005.com/html/cn3eso/14locomotor/14locomotores.htm
8. El fluoruro (F-) es un mitógeno de las células óseas que produce
incremento de la masa ósea.
El mecanismo de acción sobre el osteoblasto es parcialmente
conocido y la hipótesis con mayor sustento experimental, se basa
en su actividad inhibitoria sobre la tirosin fosfatasa ácida del
osteoblasto¹ encargada de desfosforilar proteínas involucradas en
la transducción de señales.
También existe evidencia que la acción podría ser llevada a cabo
por mecanismos que involucran a las proteínas G triméricas
asociadas a adenilciclasa y fosfolipasa C. ²
En ambos casos el fluoruro prolongaría el efecto de factores de
crecimiento sobre las células involucradas.
[1] Farley, J.R; Tarbaux, N; Hall, S and Baylink, D.J. 1990. Mitogenic Action(s) Of Fluoride On Osteoblast Line Cells; Determinants Of The Response In Vitro. J. Bone Miner. Res. 5,
Supp 1: S107 113.
Lau, K.H; Farley, J.R; Freeman, T.K; Baylink, D.J.A proposed mechanism of the mitogenic action of fluoride on bone cells inhibition of the activity of an osteoblastic acid phosphatase.
Metabolism 38: 858-868. 1989.
[2] Aussel, C; Mary, D; Peyron, J.F; Pelassy, C; Ferua, B; Fehlmann, M. Inhibition and activation of interleukin 2 synthesis by direct modification of guanosine triphosphate binding
proteins. J. Immunology 140(1):215 220. 1988.
Anderson, N.G; Kilgour, E; Sturgill, T.W. 1991. Activation of mitogen activated protein kinase (mapk) in bc3h1 myocytes by fluoroaluminate. J. Biol. Chem 266:(16) 10131 - 10135.
12. LA REPARACIÓN DE UN DEFECTO
ÓSEO EN PRESENCIA DE MFP Y NaF
SERÁ MAYOR QUE EN ANIMALES
CONTROLES Y EL EFECTO SERÁ
MÁS RÁPIDO EN ANIMALES
TRATADOS CON MFP.
14. General
Determinar el efecto de la administración oral de MFP y del
NaF sobre el proceso de reparación ósea en la rata.
Específicos
Determinar el efecto de la administración de MFP o NaF
sobre la calidad del hueso neoformado.
Evaluar el efecto del tratamiento con MFP y NaF sobre el
proceso de mineralización en el sitio de la lesión y en el
hueso adyacente a través de mediciones radiológicas.
Evaluar el contenido de flúor en orina y plasma y su
relación con la reparación y calidad del hueso reparado
16.
Se seleccionaron 18 ratas hembras
IIM/Fm “e” de 7 semanas, normales.
Se produjo un defecto no crítico en la
epífisis proximal de las tibias
Se administró MFP o NaF durante 30 días
Se avaluó el efecto del tratamiento sobre
el tejido óseo.
20. Medida de la densidad mineral ósea
160.000
intensidad de gris
140.000
120.000
100.000
80.000
60.000
40.000
DMO
DMO
20.000
0
0
10
20
30
mg Ca/cm2
40
50
60
21. Medida de la fluoremia
La medición de la concentración de flúor plasmático se
realizó por potenciometría directa utilizando un electrodo
de ión específico ORION 94-09 , luego de la destilación
isotérmica
23. Medida de la fosfatasemia alcalina
La actividad de la fosfatasa alcalina plasmática se midió
utilizando un equipo comercial ALP 405 línea líquida,
laboratorio Wiener, Rosario. La técnica se fundamenta
en la medida del cambio de absorbancia a 405 nm,
generado por la hidrólisis del p-nitrofenilfosfato en medio
alcalino por la enzima fosfatasa alcalina.
24. Medida de fosfatemia
La determinación de fósforo inorgánico en plasma se
realizó por un método UV con un equipo Fosfatemia UV
de Laboratorios Wiener
25. Medida de calcio fecal
Se determinó en heces de 24 horas por Absorción
Atómica
26. Medida de la calcemia
La calcemia se determinó con un equipo CaColor
Laboratorios Wiener, Rosario por espectrofotometría a 570
nm
27. Análisis histológico
Eutanasia y disección de extremidades traseras.
Descalcificación con EDTA 10%, pH 7 por 30-35 días.
Se siguen los pasos de coloración usados para los tejidos
blandos con Hematoxilina-Eosina.
Sobre este preparado se hizo el análisis histológico.
29. Efecto del tratamiento sobre el crecimiento y sobre la
DMO del hueso no afectado por el defecto
CONTROLES
NaF
MFP
CRECIMIENTO
g/día
1.40.2
1.0 0.2
1.2 0.3
DMO
gCa/cm2.día
0.16 0.12
-0.13 0.11
0.08 0.16
30. DMO de la zona del defecto
45
CONTROL
NaF
MFP
DMO, mg/cm2
40
35
30
*
25
20
10
0
0
10
20
DIAS DE TRATAMIENTO
30
39. El tratamiento con NaF y MFP con respecto
al Control, mostró:
Aumento de la DMO en la zona del defecto
Aumento de la FAL plasmática
Disminución de la excreción de calcio fecal
Mejoramiento de la estructura ósea
estimada histológicamente.
Estos efectos fueron más marcados con el
MFP que con el NaF.
Los tratamientos no mostraron efectos
adversos.
40. Estos resultados estarían indicando que la
reparación ósea de un defecto no crítico en
ratas, ocurre independientemente del
tratamiento, pero el tratamiento con MFP y
NaF aceleraría dicho proceso.
41. TRABAJOS FUTUROS
Evaluar las propiedades biomecánicas del hueso
formado.
Evaluar la magnitud del proceso de reparación a
nivel local.
Evaluar los efectos sobre la reparación ósea con
diferentes dósis de ambas drogas.
Evaluar el efecto de ambas drogas sobre la
reparación de defectos críticos.
43. MOLÉCULAS SEÑAL EN LA ACTIVACIÓN
DE LAS FUNCIONES ÓSEAS
Activación/Inhibición
44. Inhibición de la vía Wnt
Espacio Extracelular
DVL
Frizzled
K
R
E
M
E
N
Wnt
L
R
P
5
L
R
P
6
L
R
P
6
L
R
P
5/6
Dkk-1
SOST
Núcleo
AXINA+APC+GSK3
Bcat
Bcat
Bcat
P
Esclerosin
UBIQUITINA
= PROTEOLISIS
45. Activación de la vía Wnt
Espacio Extracelular
A-M
Frizzled
A-M
MFP
MFP
L
R
P
5
A-M
MFP
Wnt
L
R
P
6
L
R
P
6
K
R
E
M
E
N
L
R
P
5/6
Dkk-1
SOST
A-M
A-M
MFP
AXINA+APC+
A-M
MFP
MFP
Esclerosin
GSK3
Núcleo
Bcat
Bcat
Bcat
Inicia la transcripción
MFP: Monofluorofosfato
AM: Alfa Macroglobulina
Interacción
P
Inicia la diferenciación y
proliferación osteoblástica