Os meios de cultura e as técnicas de semeio em microbiologia.

1. Meios de cultura

2. Quanto ao estado físico os meios podem ser:
SÓLIDO – Ágar-ágar (1.5%).
 Utilizado isolamento de colônias bacterianas (plaqueamento);
SEMI-SÓLIDO – Ágar-ágar (0.5/0.7%)
 Utilizado para observação de motilidade;
LÍQUIDO – Caldo.
 Utilizado para enriquecimento bacteriano;
A consistência dos meios é dada pela concentração
de “AGAR-AGAR” constituído de polissacarídeo
complexo (gelose)

3.  ÁGAR SANGUE: Crescimento das bactérias
piogênicas e observação dos três tipos de
hemólise: alfa, beta e gama.
 AGAR CHOCOLATE: Observa-se hemólise
alfa e crescimento de Streptococcus e
Haemophylus
 ÁGAR CHOCOLATE THAYER MARTIN:
Crescimento de Neisserias
 ÁGAR CHOCOLATE TELURITO DE
POTASSIO: Crescimento de
Corynebacterium;
MEIOS SÓLIDOS

4. MEIOS SÓLIDOS:
 ÀGAR TEAGUE, McCONKEY, HECTOEN
ENTERIC e SS: São seletivos (crescem
Gram negativas) e indicadores (separam as
bactérias em LACTOSE POSITIVA E
LACTOSE NEGATIVA)
 ÁGAR TCBS: Crescimento de Vibrio
 ÁGAR DNAse: Classificação dos
Staphylococcus
Teague
McConkey
DNAse

5. MEIOS SÓLIDOS cont.
Ágar-sangue
Ágar-chocolate
Ágar-Chocolate
Thayer Martin

6.  BHI (Brain Heart Infusion):
Enriquecimento de cultura de bactérias
piogênicas em secreções ou em frascos
para hemocultura
 TIOGLICOLATO: Crescimento de
bactérias anaeróbias
 TETRATIONATO: Crescimento de
bactérias do trato fecal (enriquecimento
das bactérias lactose negativas)
 ÁGUA PEPTONADA ALCALINA:
Crescimento do bacilo da cólera
MEIOS LÍQUIDOS
CALDO DE TIOGLICOLATO

7. MEIOS SEMI-SÓLIDOS
FLETCHER: utilizado em hemoculturas e
conservação de Leptospiras
URÉIA: Produção de urease

8. MEIOS ENRIQUECIDOS
São acrescentadas substâncias para aumentar o
poder nutritivo do meio
Exemplos:
BHI Ágar-sangue (sólido): 5 a 10% de sangue
desfibrinado de ovelha, coelho ou humano.
Fletcher (semi-sólido): soro de coelho, hemoglobina.
Ágar-chocolate (sólido): sangue de ovelha aquecido:
fastidiosos
Ágar Müller-Hinton:
 Infusão animal, casaminoácidos e amido: crescimento de
muitos organismos.
Ágar Thayer-Martin
 Fatores de crescimento:hemoglobina, vitaminas,
difosfopiridina e glutamina

9. MEIO SÓLIDO ENRIQUECIDO
ÁGAR-SANGUE
ÁGAR-CHOCOLATE
HEMÓLISE:
• ALFA (PARCIAL)
• BETA (TOTAL)
• GAMA (AUSÊNCIA)

10. Padrões de hemólise
Hemólise beta
Hemólise alfa
Hemólise gama

11. MEIOS SELETIVOS
Têm o objetivo de favorecer ou selecionar um tipo
bacteriano
Manitol Ágar sal: Tem 7.5% de NaCl (favorece o S. aureus);
MacConkey: Contém sais biliares e cristal de violeta 1% (inibe
os Gram positivos)
Teague, EMB: Contém eosina 2% e azul de metileno 0,5%
(Inibe os Gram positivos, selecionando os Gram negativos)
HE: sais de bile (inibição de Gram positivos e retardamento
do crescimento de Gram negativos da microbiota normal)

12. MEIOS INDICADORES
Indicam características bioquímicas/fisiológicas dos microrganismos
Ex.: se o microrganismo fermenta a lactose ou não – coloração das
colônias
 Teague: :
 modificação na cor e precipitação dos corantes como resultado da queda do pH.
 MacConkey:
 Produção de ácido pelos fermentadores de lactose: mudança do corante neutro
absorvido pelas colônias para vermelho e precipitação de sais de bile.
 Não fermentadores de lactose: colônias sem coloração ou transparentes
 HE:
 Sais de ferro (tiosulfato de sódio e citrato de amônio férrico): detecção da
produção de gas sulfídrico (H2S): precipitado negro nas colônias.

13. MEIOS DE CULTURAS SÓLIDOS
TEAGUE TEAGUE COM CRESCIMENTO
MEIO SELETIVO E INDICADOR

14. MEIOS DE CULTURAS SÓLIDOS
McConkey
MEIO SELETIVO E INDICADOR

15. MEIOS DE CULTURAS SÓLIDOS
HECTOEN ENTERIC - HE HE -COM CRESCIMENTO
MEIO SELETIVO E INDICADOR E H2S

16. Composição de meios de cultura comumente
utilizados
Agar citrato de Simmons
 Diferenciação de bacilos
entéricos Gram negativos.
 Citrato=fonte de carbono
 Crescimento = utilização sais de
amônio
 Quebra dos sais de amônio:
alcalinização do meio = indicador
azul de bromotimol : de verde
para azul.

17. Composição de meios de cultura comumente
utilizados
TSI (Triple Sugar Iron)
 Fermentadores e não-
fermentadores de glicose,
lactose e sacarose,
produção de gás e de H2S
 Fermentadores:
acidificação = amarelo
 Sais de ferro e tiosulfato:
H2S + tiosulfato: sultato
ferroso: precipitado negro.
TSI

18. Composição de meios de cultura
comumente utilizados
 Agar Bile-Esculina
 Isolamento e identificação de
Streptococcus do grupo D, incluindo os
Enterococcus.
 Streptococcus do grupo D, incluindo
Enterococcus: hidrólise da esculina.
 Reação com o citrato férrico no meio
para produzir sais de ferro insolúveis.
 Deposição dos sais de ferro:
enegrecimento do meio, indicando a
hidrólise da esculina.
.

19. Composição de meios de cultura
comumente utilizados
 Agar Mueller-Hinton
 meio transparente
 susceptibilidade de organismos a
antibióticos.
 Amido no meio:proteção dos
organismos contra substâncias
tóxicas e fonte de energia.

20. Composição de meios de cultura
comumente utilizados
 Agar Lisina Ferro
 Três parâmetros: dascarboxilação da lisina, desaminação da lisina e produção de H2S.
 Contém lisina (aminoácido), glicose (carboidrato), uma pequena quantidade de
proteína, violeta de bromocresol (indicador de pH) e tiosulfato de sódio/ citrato de
amônio férrico (fonte de enxofre e indicador de H2S).
Região inferior alcalina
(violeta) e superior
alcalina (violeta)
indicam que o
organismo descarboxila
a lisina mas não pode
desaminá-la.
Região inferior
ácida (amarelo) e
superior alcalina
(violeta) indicam que
o organismo
fermentou a glicose
mas não foi capaz de
desaminar ou
descarboxilar a
lisina.
Região inferior ácida
(amarelo) e superior
vermelho-bordeaux
indicam que o
organismo desamina
a lisina mas não é
capaz de realizar a
descarboxilação.
enegrecimento
na região inferior
indica produção
de H2S a partir
do tiossulfato de
sódio.

21. Composição de meios de cultura
comumente utilizados
 Agar Manitol-Sal
 Alta concentração de sal (7,5%):
 Staphylococcus aureus é capaz de
fermentar manitol, a única fonte de
carbono no meio
 baixa no pH: indicador vermelho de
fenol para amarelo.
 S. aureus: colônias amarelas, rodeadas
por uma área amarelada.
 Outras espécies de Staphylococcus e
Micrococcus :colônias rodeadas por uma
área avermelhada ou rosada

22. TÉCNICAS DE SEMEIO
 Para o isolamento, cultivo como também a identificação, são
necessárias técnicas adequadas de inoculação em meio de
cultura, que permitam o crescimento rápido e sem contaminação

23. TECNICAS DE SEMEIO
Cuidados:
Técnicas assépticas;
Ambiente estéril – próximo à chama (bico de Bunsen);
Alças devem ser flambadas antes e depois do uso;
Tubos, quando abertos, devem ser flambados antes e
depois do uso.

24. SEMEIO EM MEIO SÓLIDO
POR ESGOTAMENTO
 Técnica necessária para o
isolamento e obtenção de culturas puras;
 Com a alça de platina fazer estrias na superfície do
meio de cultura, até o esgotamento de todo material
presente na alça
Alça de platina

25. SEMEIO POR ESGOTAMENTO

26. SEMEIO EM MEIO SÓLIDO COM
ALÇA DE DRIGALSKY
Quantificação
Semeio uniforme;
Uso de suspensão bacteriana;
Inóculo: 50-100ųl da suspensão;
Semeio cobrindo toda a superfície do meio

27. Semeio – Alça Drigalsky

28. SEMEIO EM MEIO SÓLIDO COM “SWAB”
Técnica de antibiograma;
Suspensão bacteriana
padronizada: 0,5 na Escala de
McFarland
Umedecimento do “swab” na
suspensão;
Retirada do excesso
Semeio cobrindo toda a superfície
do meio.

29. SEMEIO EM MEIO LÍQUIDO
 Tocar com a alça de platina na amostra;
 Inocular o meio líquido;
 Incubar;
 Observar a turvação do meio.

30. SEMEIO EM PICADA
 Utilizado nas provas bioquímicas
(TSI, citrato, lisina);
 Meios sólidos em tubos inclinados
ou “slants”
 Semeio com a agulha de platina em
profundidade, e no caso do TSI na
superfície do meio

31. Semeio em picada
TSI