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MSc. ITZELA DAVIS
Ivestigadora Acuícola
Diagnóstico molecular
    g
de la
Hepatopancreatitis
Necrotizante (NHP-B)
             (NHP-
en camarones
Litopenaeus vannamei
en Panamá
   Panamá.
INTRODUCCIÓN

Durante su rápida expansión, l
D     t     á id          ió la
camaronicultura en Panamá, ha estado
muy afectada por las enfermedades,
convirtiéndose éstas en el problema
más grande de la industria, causando
pérdidas millonarias .
La mayoría de las enfermedades se
hicieron evidentes en la última década
hi i        id t       l últi   dé d
del siglo pasado, en donde una gran
parte de estas fueron causadas por virus,
más sin embargo las enfermedades de
origen bacteriano también han
representado un riesgo para esta
industria.
• La responsabilidad que asumimos, como
 institución ligada a la industria camaronera
                                   camaronera.

• La necesidad de conocer los problemas
  patológicos como ente investigador que
  somos.
  somos

• La prevención y control que debe haber
  para combatir las enfermedades.
¿Q
           ¿QUÉ ES NHP-B?
                   NHP-
         NHP-
         NHP-B: Es una Alphaproteobacteria gram
                         p p               g
         negativa.
         Morfología: Pleomórfica; similar a las
         ricketsias
         Encontrada en t jid blando de camarones
         E     t d     tejido bl d d
         marinos.




Tejido saludable                       Tejido afectado
LESIONES CAUSADAS POR LA
HEPATOPANCREÁTITIS NECROTIZANTE
      (NHP-
      (NHP-B) EN EL ÓRGANO
HEPATOPANCREÁTICO DEL CAMARÓN
ANTECEDENTES
En 1985, en Texas (USA) se observaron anomalías en
p
poblaciones de camarones cultivados en estanques tales como
                                                q
lento crecimiento, flacidez notoria, reducción del consumo de
alimento y reducción en las poblaciones (mortalidad), estudios
realizados revelaron que estas anomalías son consecuencia de
    i                                   í                i
la enfermedad Hepatopancreatitis Necrotizante o Necrosis
Hepatopancreática (NHP) la cual ha causado serias epizootias
                     (NHP),
en países como Venezuela, Brasil, Ecuador, Panamá, Costa Rica
y otros, Boletín Nicovita 1996.
IHHNV
                  1990



SEPTICEMIA                     STV
BACTERIANA                     1995

               PRINCIPALES
              ENFERMEDADES
                   EN LA
             CAMARONICULTURA
                EN PANAMÁ


   WSSV                         BP
   1999                        1988



                 NHPB
                 1993
- 1993 NHP, FINCAS CAMARONERAS EN PANAMÁ.

- DESCONOCIMIENTO SOBRE LA ENFERMEDAD.

- EVENTOS PATOLÓGICOS ASOCIADOS CON
               Ó
 VIBRIOSIS.

- MORTALIDADES NO CUANTIFICADAS.
Signos clínicos observados
OBJETIVOS GENERALES
  J
 Detectar la presencia de la
 Hepatopancreatitis Necrotizante (NHP-B) en
   p   p                         (     )
 camarones Litopenaeus vannamei en
 Panamá..
OBJETIVOS ESPECÍFICOS
 - Determinar la distribución de la
   Hepatopancreatitis Necrotizante en fincas
   camaroneras de las Provincias de Herrera, Coclé, Los
   Santos y Veraguas.

 - Detectar la prevalencia de la Hepatopancreatitis
   Necrotizante en fincas del área de Coclé.

 - Relacionar algunas de las variables presentes en los
   cultivos con la presencia de la enfermedad.

 - Implementar el diagnóstico de esta enfermedad
   en la Unidad de PCR de la Estación Ing Enrique
                                      Ing.
   Enseñat.
MATERIALES
    Y
 MÉTODOS
ESTUDIO DE DISTRIBUCIÓN
                   17 FINCAS




7 COCLÉ
7 COCLÉ    3 VERAGUAS    2 LOS SANTOS
                         2 LOS SANTOS     5 HERRERA
                                          5 HERRERA




          PARA UN TOTAL DE 153 MUESTRAS
ESTUDIO DE PREVALENCIA
                6 FINCAS




                PROVINCIA DE
                   COCLÉ




PPF     PLG   LRC     CMC      CMS   DPM



                192 MUESTRAS
Corte de tejido y fijación en etanol al 95%.
La detección de la NHP-B se realiza con
                     NHP-
técnicas de biología molecular que consisten
en una reacción en cadena de la Polimerasa
(PCR) , con el Kit IQ2000-NHP-B, elaborado
                   IQ2000-NHP-
e pec c e e para e e fin.
específicamente p      este
RESULTADOS
    Y
 DISCUSIÓN
ESTUDIO DE DISTRIBUCIÓN
                      17 FINCAS




  7 COCLÉ
  7 COCLÉ     3 3 VERAGUAS
                VERAGUAS     22LOS SANTOS
                                LOS SANTOS   5 HERRERA
                                             5 HERRERA




              1 POSITIVA      1 POSITIVA     2 POSITIVAS
2 POSITIVAS
ESTUDIO DE PREVALENCIA

                          6 FINCAS



                     PROVINCIA DE
                        COCLÉ




PPF      PLG        LRC        CMC           CMS    DPM
                              3 POSITIVAS          4 POSITIVAS




                   192 muestras procesadas


               PARA UN 4 % DE PREVALENCIA
                  EN EL ÁREA ESTUDIADA
Positivo
severo                negativo
           Positivo
            leve
ANÁLISIS E
INTERPRETACIÓN DE
RESULTADOS
- NINGUNA DE LAS VARIABLES
RELACIONADAS (TEMPERATURA, OXÍGENO,
                                Í
PH, SALINIDAD Y DENSIDAD DE SIEMBRA)
DEMOSTRÓ UNA RELACIÓN DE
     OS Ó           CÓ
DEPENDENCIA SIGNIFICATIVA CON LA
PRESENCIA DE LA ENFERMEDAD
                 ENFERMEDAD.
VALORES DE LA SALINIDAD AL MOMENTO DE LA TOMA
                                DE MUESTRA


         CMS


         CMC                                       +
                                                  POSITIVA



         DPM                                                  +
   CAS




                                                             POSITIVA
                                                                             Serie1
FINC




         LRC


         PLG


         PPF


               0     10    20     30      40      50         60         70
                                SALINIDAD (ppt)
A pesar de que no se encontró dependencia significativa
 entre la presencia de la necrosis y la salinidad, siendo la
 probabilidad de error d 0 418 i di que l d casos
     b bilid d d         de 0.418, indica      los dos
 positivos se dieron en salinidades que estaban con valores
 mayores de 43ppt es decir una con salinidad de 43-54ppt y
 la otra con valores de 55-63ppt.
                            63

   Dependencia entre la necrosis y la salinidad
          Frecuencia ‚
           Porcentaje ‚31-42 ‚43-54 ‚55-65 ‚ Total
                       ‚31-    ‚43-     ‚55-
             ƒƒƒƒƒƒƒƒƒ ƒƒƒƒƒƒƒƒ ƒƒƒƒƒƒƒƒ ƒƒƒƒƒƒƒƒ
             ƒƒƒƒƒƒƒƒƒˆƒƒƒƒƒƒƒƒˆƒƒƒƒƒƒƒƒˆƒƒƒƒƒƒƒƒˆ
                 0 ‚ 9 ‚ 9 ‚ 4 ‚ 22
                   ‚ 37.50 ‚ 37.50 ‚ 16.67 ‚ 91.67
             ƒƒƒƒƒƒƒƒƒˆƒƒƒƒƒƒƒƒˆƒƒƒƒƒƒƒƒˆƒƒƒƒƒƒƒƒˆ
                 1‚ 0‚ 1‚ 1‚ 2
                   ‚ 0.00 ‚ 4.17 ‚ 4.17 ‚ 8.33
             ƒƒƒƒƒƒƒƒƒˆƒƒƒƒƒƒƒƒˆƒƒƒƒƒƒƒƒˆƒƒƒƒƒƒƒƒˆ
             Total       9    10      5     24
                     37.50 41.67 20.83 100.00
Grados de libertad = 2 Chi-calculada = 1.745 Prob.= 0.418
                         Chi-
CONCLUSIONES
- Estos estudios han demostrado que la
  enfermedad está di t ib id por l 4
     f     d d tá distribuida        las
  provincias estudiadas.
- Existe una prevalencia de la enfermedad en
  el área de Coclé.
- Por los resultados obtenidos y la literatura
  consultada, podemos concluir que la
  enfermedad puede aparecer tanto en
  salinidades bajas como en las altas, pero que
                                 altas
  posiblemente tiene preferencia por las altas.
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  • 2. Diagnóstico molecular g de la Hepatopancreatitis Necrotizante (NHP-B) (NHP- en camarones Litopenaeus vannamei en Panamá Panamá.
  • 3. INTRODUCCIÓN Durante su rápida expansión, l D t á id ió la camaronicultura en Panamá, ha estado muy afectada por las enfermedades, convirtiéndose éstas en el problema más grande de la industria, causando pérdidas millonarias .
  • 4. La mayoría de las enfermedades se hicieron evidentes en la última década hi i id t l últi dé d del siglo pasado, en donde una gran parte de estas fueron causadas por virus, más sin embargo las enfermedades de origen bacteriano también han representado un riesgo para esta industria.
  • 5. • La responsabilidad que asumimos, como institución ligada a la industria camaronera camaronera. • La necesidad de conocer los problemas patológicos como ente investigador que somos. somos • La prevención y control que debe haber para combatir las enfermedades.
  • 6. ¿Q ¿QUÉ ES NHP-B? NHP- NHP- NHP-B: Es una Alphaproteobacteria gram p p g negativa. Morfología: Pleomórfica; similar a las ricketsias Encontrada en t jid blando de camarones E t d tejido bl d d marinos. Tejido saludable Tejido afectado
  • 7. LESIONES CAUSADAS POR LA HEPATOPANCREÁTITIS NECROTIZANTE (NHP- (NHP-B) EN EL ÓRGANO HEPATOPANCREÁTICO DEL CAMARÓN
  • 8. ANTECEDENTES En 1985, en Texas (USA) se observaron anomalías en p poblaciones de camarones cultivados en estanques tales como q lento crecimiento, flacidez notoria, reducción del consumo de alimento y reducción en las poblaciones (mortalidad), estudios realizados revelaron que estas anomalías son consecuencia de i í i la enfermedad Hepatopancreatitis Necrotizante o Necrosis Hepatopancreática (NHP) la cual ha causado serias epizootias (NHP), en países como Venezuela, Brasil, Ecuador, Panamá, Costa Rica y otros, Boletín Nicovita 1996.
  • 9. IHHNV 1990 SEPTICEMIA STV BACTERIANA 1995 PRINCIPALES ENFERMEDADES EN LA CAMARONICULTURA EN PANAMÁ WSSV BP 1999 1988 NHPB 1993
  • 10. - 1993 NHP, FINCAS CAMARONERAS EN PANAMÁ. - DESCONOCIMIENTO SOBRE LA ENFERMEDAD. - EVENTOS PATOLÓGICOS ASOCIADOS CON Ó VIBRIOSIS. - MORTALIDADES NO CUANTIFICADAS.
  • 12. OBJETIVOS GENERALES J Detectar la presencia de la Hepatopancreatitis Necrotizante (NHP-B) en p p ( ) camarones Litopenaeus vannamei en Panamá..
  • 13. OBJETIVOS ESPECÍFICOS - Determinar la distribución de la Hepatopancreatitis Necrotizante en fincas camaroneras de las Provincias de Herrera, Coclé, Los Santos y Veraguas. - Detectar la prevalencia de la Hepatopancreatitis Necrotizante en fincas del área de Coclé. - Relacionar algunas de las variables presentes en los cultivos con la presencia de la enfermedad. - Implementar el diagnóstico de esta enfermedad en la Unidad de PCR de la Estación Ing Enrique Ing. Enseñat.
  • 14. MATERIALES Y MÉTODOS
  • 15. ESTUDIO DE DISTRIBUCIÓN 17 FINCAS 7 COCLÉ 7 COCLÉ 3 VERAGUAS 2 LOS SANTOS 2 LOS SANTOS 5 HERRERA 5 HERRERA PARA UN TOTAL DE 153 MUESTRAS
  • 16. ESTUDIO DE PREVALENCIA 6 FINCAS PROVINCIA DE COCLÉ PPF PLG LRC CMC CMS DPM 192 MUESTRAS
  • 17.
  • 18. Corte de tejido y fijación en etanol al 95%.
  • 19. La detección de la NHP-B se realiza con NHP- técnicas de biología molecular que consisten en una reacción en cadena de la Polimerasa (PCR) , con el Kit IQ2000-NHP-B, elaborado IQ2000-NHP- e pec c e e para e e fin. específicamente p este
  • 20.
  • 21.
  • 22.
  • 23. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
  • 24. ESTUDIO DE DISTRIBUCIÓN 17 FINCAS 7 COCLÉ 7 COCLÉ 3 3 VERAGUAS VERAGUAS 22LOS SANTOS LOS SANTOS 5 HERRERA 5 HERRERA 1 POSITIVA 1 POSITIVA 2 POSITIVAS 2 POSITIVAS
  • 25. ESTUDIO DE PREVALENCIA 6 FINCAS PROVINCIA DE COCLÉ PPF PLG LRC CMC CMS DPM 3 POSITIVAS 4 POSITIVAS 192 muestras procesadas PARA UN 4 % DE PREVALENCIA EN EL ÁREA ESTUDIADA
  • 26. Positivo severo negativo Positivo leve
  • 27. ANÁLISIS E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS - NINGUNA DE LAS VARIABLES RELACIONADAS (TEMPERATURA, OXÍGENO, Í PH, SALINIDAD Y DENSIDAD DE SIEMBRA) DEMOSTRÓ UNA RELACIÓN DE OS Ó CÓ DEPENDENCIA SIGNIFICATIVA CON LA PRESENCIA DE LA ENFERMEDAD ENFERMEDAD.
  • 28. VALORES DE LA SALINIDAD AL MOMENTO DE LA TOMA DE MUESTRA CMS CMC + POSITIVA DPM + CAS POSITIVA Serie1 FINC LRC PLG PPF 0 10 20 30 40 50 60 70 SALINIDAD (ppt)
  • 29. A pesar de que no se encontró dependencia significativa entre la presencia de la necrosis y la salinidad, siendo la probabilidad de error d 0 418 i di que l d casos b bilid d d de 0.418, indica los dos positivos se dieron en salinidades que estaban con valores mayores de 43ppt es decir una con salinidad de 43-54ppt y la otra con valores de 55-63ppt. 63 Dependencia entre la necrosis y la salinidad Frecuencia ‚ Porcentaje ‚31-42 ‚43-54 ‚55-65 ‚ Total ‚31- ‚43- ‚55- ƒƒƒƒƒƒƒƒƒ ƒƒƒƒƒƒƒƒ ƒƒƒƒƒƒƒƒ ƒƒƒƒƒƒƒƒ ƒƒƒƒƒƒƒƒƒˆƒƒƒƒƒƒƒƒˆƒƒƒƒƒƒƒƒˆƒƒƒƒƒƒƒƒˆ 0 ‚ 9 ‚ 9 ‚ 4 ‚ 22 ‚ 37.50 ‚ 37.50 ‚ 16.67 ‚ 91.67 ƒƒƒƒƒƒƒƒƒˆƒƒƒƒƒƒƒƒˆƒƒƒƒƒƒƒƒˆƒƒƒƒƒƒƒƒˆ 1‚ 0‚ 1‚ 1‚ 2 ‚ 0.00 ‚ 4.17 ‚ 4.17 ‚ 8.33 ƒƒƒƒƒƒƒƒƒˆƒƒƒƒƒƒƒƒˆƒƒƒƒƒƒƒƒˆƒƒƒƒƒƒƒƒˆ Total 9 10 5 24 37.50 41.67 20.83 100.00 Grados de libertad = 2 Chi-calculada = 1.745 Prob.= 0.418 Chi-
  • 30. CONCLUSIONES - Estos estudios han demostrado que la enfermedad está di t ib id por l 4 f d d tá distribuida las provincias estudiadas. - Existe una prevalencia de la enfermedad en el área de Coclé. - Por los resultados obtenidos y la literatura consultada, podemos concluir que la enfermedad puede aparecer tanto en salinidades bajas como en las altas, pero que altas posiblemente tiene preferencia por las altas.