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Universidade Federal do Ceará – UFC
      Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem
                    Curso de Odontologia
            Trabalho de Conclusão de Curso - TCC



   EFEITO DO POLIFENOL EPIGALOCATEQUINA-3-
   GALATO A 0,1% NA RESISTÊNCIA DE UNIÃO DE
SISTEMA ADESIVO AUTOCONDICIONANTE À DENTINA




             Novembro – 2011
Apresentação
   Este trabalho de conclusão de curso (TCC) está de acordo
   com o formato alternativo para TCCs, que permite a
   inserção artigos científicos de autoria do candidato.
   Assim, este TCC é composto de um artigo científico que
   será submetido ao periódico Revista Odonto Ciência
   (Journal of Dental Science).

Efeito do polifenol epigalocatequina-3-galato a 0,1% na resistência de união de
sistema adesivo autocondicionante à dentina


Effect of 0.1% epigallocatechin-3-gallate on resin-dentin bond strength of a self-etch
adhesive




  SILVEIRA FS, SILVA FILHO RO, ARAÚJO GS, NERI JR, PASSOS VF, SANTIAGO
Sumário

       Introdução

        Objetivo

      Metodologia

       Resultados

       Discussão

       Conclusão

Referências Bibliográficas
Introdução


   Ácido fosfórico (35-
   37%)




                          PEUMANS et al., 2005
Introdução


 Monômeros
 ácidos
  Condicionam
  Infiltram-se




              PEUMANS et al., 2005
Introdução

   Vantagens

                Tempo clínico reduzido;

                Técnica menos sensível;


                Menor sensibilidade pós-


                operatória.
                 PEUMANS et al., 2005; VAN MEERBEEK et al., 2011
Introdução


                                             • Camada híbrida mais
                                               uniforme;

                                             • Menor diferença entre
                                               a desmineralização e
                                               a profundidade de
                                               infiltração.




Fonte: Hashimoto et al., 2003



                                              VAN MEERBEEK et al., 2011
Introdução


    Efetividade de união?


    Durabilidade?




Fonte: marianavestphal.blogspot.com

                                      DE MUNCK et al., 2005
Introdução
   Camada híbrida
       Complexidade do substrato dentinário;




                                                     Dentina superficial   Dentina peritubular




                Fonte: Brackett et al., 2005.



                                                      Dentina profunda     Dentina intertubular




                                                BRESCHI et al., 2008; LOGUERCIO et al., 2009
Introdução
   Camada híbrida
       Degradação ao longo do tempo:



                          Hidrólise do componente
                          resinoso;

                                 Degradação das fibras
                                 colágenas;
                                 Metaloproteinases da matriz
                                 (MMPs)
                                       MMP-2               MMP-9


            HASHIMOTO et al., 2000; DE MUNCK et al., 2003; BRESCHI et al., 2008
Introdução
   Sistemas autocondicionantes
                              Monômeros
                              acídicos
                                       O
                      H
                          O
                                          H
                                                   O
                                      O
                                                   O
                                                       H
                                           P
                              H
                                  O
                                               O




                                          HEGDE & MANJUNATH, 2011
Introdução
   Sistemas autocondicionantes
       Monômeros ácidos ativam MMPs
                            NH2




                                    SH        NH2




                                  MMP ativa
                                  Pro-
                                  MMP




                                                    NISHITANI et al., 2006
Introdução

   Inibidores de MMPs


            Podem aumentar a durabilidade de
            união
                      Preservação da camada
           Soluções           híbrida
          inibidoras               Manutenção da
                                 resistência de união




         CARRILHO et al., 2007a; CARRILHO et al., 2007b; BRESCHI et al., 2010
Introdução

    Inibidores de MMPs
        Utilização da Clorexidina associada ao procedimento
         adesivo:
          Resultados satisfatórios  preservação da camada híbrida;
          Capaz de manter a resistência de união ao longo do tempo.




          Clorexidina
         Fonte: Sabane, 2009


HEBLING et al., 2005; CARRILHO et al., 2007a; CARRILHO et al., 2007b; ZHOU et al., 2009
Introdução

   Clorexidina
        Efeitos sobre odontoblastos?




   Inibidores mais específicos;
   Características favoráveis como baixa toxicidade e atividade anti-
    inflamatória.


                                                      LESSA et al., 2010
Introdução
   Epigalocatequina-3-galato (EGCG)




                           Flavonóide
                           Chá verde (Camellia sinesis)
                           50-80%
                      Potente Inibidor de MMP-2 e MMP-9




                             MANNELLO, 2006; DELL’AICA et al., 2007
Introdução
   Epigalocatequina-3-galato (EGCG)



       Capaz de prevenir a perda resistência de união ao
        longo do tempo em adesivo de condicionamento total
        de 2 passos.




                                             SANTIAGO et al., 2011
Objetivo

   Este trabalho tem por objetivo avaliar o efeito do EGCG a
    0,1% na resistência de união de um sistema adesivo
    autocondicionante à dentina, no período imediato e após
    seis meses de estocagem, tendo a clorexidina a 2% e a
    água destilada como controles.

   Serão testadas as hipóteses nulas de que não existe
    diferença estatística nos valores de resistência de união
    entre os grupos no período imediato e após 6 meses de
    estocagem.
Metodologia
   Aprovação no Comitê de Ética em Pesquisa - UFC


       Ofício N° 105/11
       Protocolo Nº 103/11
Metodologia
   Preparo dos dentes
       27 terceiros molares humanos hígidos;

       Armazenados em solução de timol a 0,01%.




        27           Disco          Superfície        Lixa de
    terceiros     diamantado        Dentinária     carbeto de
     molares                                       silício #120
                                                    Imagens
                                                   adaptadas
Metodologia

   Preparo dos dentes




                                          Criar um padrão
           60 segundos                   uniforme de smear
                                                layer.


                            Lixa de
                          carbeto de
                          silício #600
                                                  Imagens
                                                  adaptadas
Metodologia

   Procedimento de adesão
    Processo de randomização  Microsoft Excel 2007®



Grupos (n=9)       Tratamento dentinário             Adesivo

G1                 Água destilada
                                                      Adper™ Easy One (3M
G2                 Digluconato de Clorexidina a 2%     ESPE, St. Paul, MN,
                                                             EUA)
G3                 EGCG a 0,1%
Metodologia

   Procedimento de adesão

                                   SECAGEM
                             •Jatos de ar por 30
                             segundos.




                                            Imagens
                                            adaptadas
Metodologia

   Procedimento de adesão
                                              Reidratação

                               G1 - Água destilada
                               G2 - Clorexidina a 2%*
                               G3 - EGCG a 0,1%**
                               * FGM, Joinville, SC, Brasil - lote #210211
                               ** Sigma-Aldrich, Saint Louis, EUA - lote #029K
                               1228




       5µL – 60 segundos


                                                              Imagens
                                                              adaptadas
Metodologia

   Procedimento de adesão
                             REMOÇÃO EXCESSO
                                APLICAÇÃO DO
                                    ADESIVO
                             • SISTEMA ADESIVO
                                Adper Easy One ®
                             • Papel Absorvente
                             • (3M
                                Aplicar o adesivo
                             • Superfície úmida
                                ESPE, segundos
                                por 20 St.Paul, MN,
                             • EUA – lote # de ar
                                Aplicar um jato
                                402261) 5 segundos
                                leve por
                             • Fotopolimerizar por
                                10 segundos




                                            Imagens
                                            adaptadas
Metodologia

   Procedimento de adesão

                             PLATÔ DE RESINA
                             • 5 Incrementos
                               Fopolimerizados
                             • 1mm cada
                               individualmente
                             (Filtek Z250; 3M ESPE, St.
                             • 20 segundos
                             Paul, MN, EUA - lote
                             • 500 mW/cm
                             #1030600122 )
                                                    2

                             (Variable Intensity Polymerizer –
                             VIPTM Junior; Bisco
                             Inc., Schaumburg, IL, EUA)




                                                    Imagens
                                                    adaptadas
Metodologia

   Armazenamento




                              • Água destilada
                              • 37 C
                              • 24 horas




                                           Imagens
                                           adaptadas
Metodologia

   Obtenção dos espécimes




    • Cortes seriados e perpendiculares entre si;
    • 1 milímetro de distância entre os corte;
    * Disco diamantado (Extec modelo 12205; Extec Corp.®, Enfield, CT, EUA)
    ** Cortadeira metalográfica (Labcut 1010; Extec Corp.®, Enfield, CT, EUA)

                                                                                Imagens
                                                                                adaptadas
Metodologia

   Obtenção dos espécimes

                                                    • Aleatoriamente
            Imediato (T0)
                                                          divididos
                                                    • Água destilada
                                  •   Medição de pH (TEC-3MP;
            6 meses (T1)                            • 37 C
                                      TECNAL, Piracicaba, SP, Br
                                      asil);
                                  •   Troca da solução;
                 quinzenalmente
             12 meses             •   Monitoramento do
                (T2)                  crescimento bacteriano.



                                                                Imagens
                                                                adaptadas
Metodologia

   Teste de microtração
                            •   Medição da secção
                                transversal da interface
                                adesiva;
                            •   Dispositivo de Geraldeli
                                (Odeme
                                Biotechnology, Joaçaba, SC, Brasil
                                );

                            •   Cola a base de cianocrilato
                            •   Velocidade de 0,5 mm/min
                                (Instron 3345; Instron
                                Inc., Canton, MA, EUA).
Metodologia

   Análise do Modo de Fratura
    Lupa estereoscópica (Stereo Zoom® Leica S8
    APO, Leica Microsystems, Wetzlar, Alemanha)  80
    x;
Natureza da Falha

     Adesiva (A);
     Coesiva em resina (CR);

     Coesiva em dentina (CD);

     Mista (M).
Metodologia

   Análise Estatística

       Kolgomorov-Smirnov;

       Análise de Variância a dois critérios (two-way ANOVA);

       Teste de Tukey;

       SPSS         17.0          para     Windows           (SPSS
        Inc., Chicago, IL, EUA);

       Significância estatística foi pré-fixada em p<0,05.
Resultados
   Teste de resistência mecânica de união

    Tabela 1. Valores de resistência de união expressos em Mpa ± desvio padrão (n*), de
    acordo com a solução de reidratação.




    O valor de n corresponde ao número de dentes usados em cada grupo (índice usado na análise estatística), enquanto
    que n* refere-se ao número de espécimes (palitos) testados. Letras maiúsculas diferentes nas colunas e letras
    minúsculas diferentes nas linhas representam diferença estatística significante (p<0,05).
Resultados

Gráfico 1. Distribuição dos modos de fratura expressos em
porcentagem, de acordo com os grupos experimentais (T0).

80
70
60
                                          Adesiva
50
                                          Mista
40
                                          Coesiva em Resina
30
                                          Coesiva em Dentina
20
                                          Falha Prematura
10
 0
        G1         G2         G3
Resultados

Gráfico 2. Distribuição dos modos de fratura expressos em
porcentagem, de acordo com os grupos experimentais (T1).

80
70
60
                                          Adesiva
50
                                          Mista
40
                                          Coesiva em Resina
30
                                          Coesiva em Dentina
20
                                          Falha Prematura
10
 0
        G1         G2        G3
Discussão

   As soluções de pré-tratamento dentinário não
    modificaram a resistência de união imediata à
    dentina;
   A hipótese nula para o teste imediato foi aceita.

   Após 6 meses de armazenamento, os valores do
    G1 diferiram dos demais grupos;
   Portanto, a segunda hipótese nula foi rejeitada.
Discussão




   A literatura reporta que o uso da clorexidina, em
    concentrações que variam de 0,002 a 4%, não interfere no
    procedimento adesivo imediatamente após a sua
    aplicação, independente da estratégia adesiva empregada.




            CARRILHO et al., 2007b; LOGUERCIO et al., 2009; ZHOU et al., 2009
Discussão

   Santiago et al., em 2011, relataram que o EGCG a 0,1%
    não foi capaz de modificar a resistência de um adesivo de
    condicionamento total;

   O EGCG parece não causar alterações significativas na
    estrutura da camada híbrida capaz de prejudicar a
    eficiência de união imediata à dentina.




                                              SANTIAGO et al., 2011.
Discussão




   Armazenamento em água  degradação;
   A perda de resistência adesiva ao longo do tempo 
    sistemas de condicionamento total e adesivos
    simplificados.




                         DE MUNCK et al., 2003; DE MUNCK et al., 2011
Discussão




   Entretanto, estudos mostram maior degradação da camada
    híbrida e menores valores de resistência de união para
    adesivos autocondicionantes de um passo.




                                        VAN MEERBEEK et al., 2011
Discussão


   Van Meerbeek et al., em uma revisão sistemática sobre
    restaurações de lesões cervicais não cariosas, mostraram
    que as maiores taxas anuais de falhas ocorreram nos
    adesivos simplificados de passo único.




                                          VAN MEERBEEK et al., 2010
Discussão


   A rápida degradação da camada híbrida está relacionada à
    maior hidrofilia desses adesivos, que permite uma maior
    absorção de água e, consequentemente, maior incidência
    de hidrólise do componente resinoso;
   Técnica autocondicionante  aumento da síntese de
    MMP-2 em odontoblastos humanos.




                                                    LIU et al., 2011
Discussão

   A clorexidina é um inibidor não específico de MMPs, com
    amplo espectro de ação mesmo em baixas concentrações
    (DELL’AICA et al., 2007);
   A inibição enzimática ocorre através de dois principais
    mecanismos: quelação de íons metálicos (MMP-2 e MMP-
    9) e interação com grupos sufidril ou cisteína (MMP-8)
    (GENDRON et al., 1999);
   Vários autores comprovaram sua eficácia na preservação
    da integridade da camada híbrida (LIU et al., 2011).
Discussão

   O polifenol EGCG tem sido bastante estudado nas áreas
    médicas pelo seu potencial quimiopreventivo ao
    câncer,      uma     vez     que    possui      propriedades
    antioxidantes, antimutagênicas, e anti-inflamatórias;
   A capacidade de inibir a atividade gelatinolítica foi descrita
    na literatura para as enzimas MMP-2 e MMP-9;
   Vários estudos in vivo e in vitro mostraram que os
    polifenóis possuem atividade antimicrobiana, sendo
    capazes de interferir seletivamente em características de
    virulência específicas de S. mutans.




                                        MANNELLO, 2006; YOO et al., 2011
Discussão

   O mecanismo de ação do EGCG na inibição das MMPs
    ainda é controverso. Ele degrada de forma irreversível a
    molécula de MMP-2 ou promove alterações permanentes
    na sua estrutura ou no seu sítio catalítico;
   O EGCG, em diferentes concentrações (0,02%, 0,1% e
    0,5%), associado a um adesivo de condicionamento total
    de dois passos foi decisivo na manutenção da resistência
    de união à dentina após 6 meses de armazenamento.




                               CHENG et al., 2003; SANTIAGO et al., 2011
Conclusão

    EGCG a 0,1%, assim como, a clorexidina a
    2%,      quando     associados   ao    adesivo
    autocondicionante de passo único, podem
    contribuir para a melhoria da durabilidade de
    união das restaurações adesivas.
Referências
                                             Bibliográficas
   Breschi L, Martin P, Mazzoni A, Nato F, Carrilho M, Tjäderhane L, et al. Use of a specific MMP-inhibitor
(galardin) for preservation of hybrid layer. Dental materials  official publication of the Academy of Dental
                                                              :
Materials [Internet]. 2010 Jun [cited 2011 Sep 14];26(6):571-8. Available from:
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20299089
   Breschi L, Mazzoni A, Ruggeri A, Cadenaro M, Di Lenarda R, De Stefano Dorigo E. Dental adhesion
review: aging and stability of the bonded interface. Dent Mater [Internet]. 2008 Jan [cited 2011 Jul
10];24(1):90-101. Available from: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17442386
   Carrilho MRO, Carvalho RM, de Goes MF, di Hipolito V, Geraldeli S, Tay FR, et al. Chlorhexidine
Preserves Dentin Bond in vitro. J Dent Res [Internet]. 2007 Jan 1 [cited 2011 Oct 29];86(1):90-94. Available
from: http://jdr.sagepub.com/cgi/doi/10.1177/154405910708600115
    Carrilho MRO, Geraldeli S, Tay F, de Goes MF, Carvalho RM, Tjaderhane L, et al. In vivo Preservation
of the Hybrid Layer by Chlorhexidine. J Dent Res [Internet]. 2007 Jun 1 [cited 2011 Aug 23];86(6):529-533.
Available from: http://jdr.sagepub.com/cgi/doi/10.1177/154405910708600608
   Cheng X, Kuzuaya M, Kanda S, Maeda K, Sasaki T, Wang Q, et al. Epigallocatechin-3-gallate binding
to MMP-2 inhibits gelatinolytic activity without influencing the attachment to extracellular matrix proteins but
enhances MMP-2 binding to TIMP-2. Arch Biochem Biophys [Internet]. 2003 Jul 1 [cited 2011 Nov
5];415(1):126-132. Available from: http://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S0003986103002212
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degradation of adhesive-dentin interfaces produced by mild self-etch adhesives. Eur J Oral Sci [Internet].
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    De Munck J, Van Landuyt K, Peumans M, Poitevin A, Lambrechts P, Braem M, et al. A Critical Review
of the Durability of Adhesion to Tooth Tissue: Methods and Results. J Dent Res [Internet]. 2005 Feb 1
[cited 2011 Jun 29];84(2):118-132. Available from:
http://jdr.sagepub.com/cgi/doi/10.1177/154405910508400204
Referências
                                            Bibliográficas
   De Munck J, Van Meerbeek B, Yoshida Y, Inoue S, Vargas M, Suzuki K, et al. Four-year Water
Degradation of Total-etch Adhesives Bonded to Dentin. J Dent Res [Internet]. 2003 Feb 1 [cited 2011 Oct
30];82(2):136-140. Available from: http://jdr.sagepub.com/cgi/doi/10.1177/154405910308200212
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of the Activities of Matrix Metalloproteinases 2 , 8 , and 9 by Chlorhexidine. Clin Diagn Lab Immunol.
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  Hashimoto M, Ohno H, Kaga M, Endo K, Sano H, Oguchi H. In vivo Degradation of Resin-Dentin
Bonds in Humans Over 1 to 3 Years. J Dent Res [Internet]. 2000 Jun 1 [cited 2011 Jul 20];79(6):1385-
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   Liu Y, Tjäderhane L, Breschi L, Mazzoni A, Li N, Mao J, et al. Limitations in bonding to dentin and
experimental strategies to prevent bond degradation. J Dent Res [Internet]. 2011 Aug [cited 2011 Aug
29];90(8):953-68. Available from:
http://www.pubmedcentral.nih.gov/articlerender.fcgi?artid=3148178&tool=pmcentrez&rendertype=abstract
Referências
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  Mannello F. Natural Bio-Drugs as Matrix Perspectives on the Horizon  Metalloproteinase Inhibitors 
                                                                       ?                             :
New. Recent Pat Anticancer Drug Discov. 2006;1(1):91-103.
    Nishitani Y, Yoshiyama M, Wadgaonkar B, Breschi L, Mannello F, Mazzoni A, et al. Activation of
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  Pashley DH, Tay FR, Yiu C, Hashimoto M, Breschi L, Carvalho RM, et al. Collagen Degradation by
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    Peumans M, Kanumilli P, De Munck J, Van Landuyt K, Lambrechts P, Van Meerbeek B. Clinical
effectiveness of contemporary adhesives: a systematic review of current clinical trials. Dent Mater
[Internet]. 2005 Sep [cited 2011 Jul 10];21(9):864-81. Available from:
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16009415
   Santiago SL, Osorio R, Neri JR, Mendonça J, Carvalho RM, Fernandes CADO, Toledano M. Effect of
epigallocatechin-3-galate on the preservation of resin-dentin bond strength. Abstract of 89TH IADR. 2011.
   Van Meerbeek B, Peumans M, Poitevin A, Mine A, Van Ende A, Neves A, et al. Relationship between
bond-strength tests and clinical outcomes. Dent Mater [Internet]. 2010 Feb [cited 2011 Nov 4];26(2):e100-
21. Available from: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20006379
    Van Meerbeek B, Yoshihara K, Yoshida Y, Mine a, De Munck J, Van Landuyt KL. State of the art of
self-etch adhesives. Dent Mater [Internet]. 2011 Jan [cited 2011 Jul 24];27(1):17-28. Available from:
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21109301
Referências
                                           Bibliográficas
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Streptococcus mutans. Caries Res [Internet]. 2011 Jan [cited 2011 Oct 11];45(4):327-35. Available from:
http://www.pubmedcentral.nih.gov/articlerender.fcgi?artid=3130978&tool=pmcentrez&rendertype=abstract
  Zhou J, Tan J, Chen L, Li D, Tan Y. The incorporation of chlorhexidine in a two-step self-etching
adhesive preserves dentin bond in vitro. J Dent [Internet]. 2009 Oct [cited 2011 Oct 31];37(10):807-12.
Available from: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19615807
Agradeciment
                            os
   A Deus;

   Aos meus Pais: Jailma e Jairton;

   Aos meus companheiros de faculdade, de PET e de vida: Gustavo
    Santos e Rafael Carvalho;

   Aos doutorandos Jiovanne Neri e Vanara Passos;

   Ao meu orientador Prof. Dr. Sérgio Santiago;

   Ao Laboratório do Programa de Pós-Graduação em Odontologia
    (PPGO), por meio da Coordenadora do Programa Profa. Dra. Lidiany
    Karla Azevedo Rodrigues.
felipedsilveira@gmail.co

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EFEITO DO POLIFENOL EPIGALOCATEQUINA-3-GALATO A 0,1% NA RESISTÊNCIA DE UNIÃO DE SISTEMA ADESIVO AUTOCONDICIONANTE À DENTINA - Apresentação de TCC - Felipe Dantas

  • 1. Universidade Federal do Ceará – UFC Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem Curso de Odontologia Trabalho de Conclusão de Curso - TCC EFEITO DO POLIFENOL EPIGALOCATEQUINA-3- GALATO A 0,1% NA RESISTÊNCIA DE UNIÃO DE SISTEMA ADESIVO AUTOCONDICIONANTE À DENTINA Novembro – 2011
  • 2. Apresentação Este trabalho de conclusão de curso (TCC) está de acordo com o formato alternativo para TCCs, que permite a inserção artigos científicos de autoria do candidato. Assim, este TCC é composto de um artigo científico que será submetido ao periódico Revista Odonto Ciência (Journal of Dental Science). Efeito do polifenol epigalocatequina-3-galato a 0,1% na resistência de união de sistema adesivo autocondicionante à dentina Effect of 0.1% epigallocatechin-3-gallate on resin-dentin bond strength of a self-etch adhesive SILVEIRA FS, SILVA FILHO RO, ARAÚJO GS, NERI JR, PASSOS VF, SANTIAGO
  • 3. Sumário Introdução Objetivo Metodologia Resultados Discussão Conclusão Referências Bibliográficas
  • 4. Introdução Ácido fosfórico (35- 37%) PEUMANS et al., 2005
  • 5. Introdução Monômeros ácidos  Condicionam  Infiltram-se PEUMANS et al., 2005
  • 6. Introdução  Vantagens Tempo clínico reduzido; Técnica menos sensível; Menor sensibilidade pós- operatória. PEUMANS et al., 2005; VAN MEERBEEK et al., 2011
  • 7. Introdução • Camada híbrida mais uniforme; • Menor diferença entre a desmineralização e a profundidade de infiltração. Fonte: Hashimoto et al., 2003 VAN MEERBEEK et al., 2011
  • 8. Introdução Efetividade de união? Durabilidade? Fonte: marianavestphal.blogspot.com DE MUNCK et al., 2005
  • 9. Introdução  Camada híbrida  Complexidade do substrato dentinário; Dentina superficial Dentina peritubular Fonte: Brackett et al., 2005. Dentina profunda Dentina intertubular BRESCHI et al., 2008; LOGUERCIO et al., 2009
  • 10. Introdução  Camada híbrida  Degradação ao longo do tempo: Hidrólise do componente resinoso; Degradação das fibras colágenas; Metaloproteinases da matriz (MMPs) MMP-2 MMP-9 HASHIMOTO et al., 2000; DE MUNCK et al., 2003; BRESCHI et al., 2008
  • 11. Introdução  Sistemas autocondicionantes Monômeros acídicos O H O H O O O H P H O O HEGDE & MANJUNATH, 2011
  • 12. Introdução  Sistemas autocondicionantes  Monômeros ácidos ativam MMPs NH2 SH NH2 MMP ativa Pro- MMP NISHITANI et al., 2006
  • 13. Introdução  Inibidores de MMPs Podem aumentar a durabilidade de união Preservação da camada Soluções híbrida inibidoras Manutenção da resistência de união CARRILHO et al., 2007a; CARRILHO et al., 2007b; BRESCHI et al., 2010
  • 14. Introdução  Inibidores de MMPs  Utilização da Clorexidina associada ao procedimento adesivo:  Resultados satisfatórios  preservação da camada híbrida;  Capaz de manter a resistência de união ao longo do tempo. Clorexidina Fonte: Sabane, 2009 HEBLING et al., 2005; CARRILHO et al., 2007a; CARRILHO et al., 2007b; ZHOU et al., 2009
  • 15. Introdução  Clorexidina  Efeitos sobre odontoblastos?  Inibidores mais específicos;  Características favoráveis como baixa toxicidade e atividade anti- inflamatória. LESSA et al., 2010
  • 16. Introdução  Epigalocatequina-3-galato (EGCG) Flavonóide Chá verde (Camellia sinesis) 50-80% Potente Inibidor de MMP-2 e MMP-9 MANNELLO, 2006; DELL’AICA et al., 2007
  • 17. Introdução  Epigalocatequina-3-galato (EGCG)  Capaz de prevenir a perda resistência de união ao longo do tempo em adesivo de condicionamento total de 2 passos. SANTIAGO et al., 2011
  • 18. Objetivo  Este trabalho tem por objetivo avaliar o efeito do EGCG a 0,1% na resistência de união de um sistema adesivo autocondicionante à dentina, no período imediato e após seis meses de estocagem, tendo a clorexidina a 2% e a água destilada como controles.  Serão testadas as hipóteses nulas de que não existe diferença estatística nos valores de resistência de união entre os grupos no período imediato e após 6 meses de estocagem.
  • 19. Metodologia  Aprovação no Comitê de Ética em Pesquisa - UFC Ofício N° 105/11 Protocolo Nº 103/11
  • 20. Metodologia  Preparo dos dentes  27 terceiros molares humanos hígidos;  Armazenados em solução de timol a 0,01%. 27 Disco Superfície Lixa de terceiros diamantado Dentinária carbeto de molares silício #120 Imagens adaptadas
  • 21. Metodologia  Preparo dos dentes Criar um padrão 60 segundos uniforme de smear layer. Lixa de carbeto de silício #600 Imagens adaptadas
  • 22. Metodologia  Procedimento de adesão Processo de randomização  Microsoft Excel 2007® Grupos (n=9) Tratamento dentinário Adesivo G1 Água destilada Adper™ Easy One (3M G2 Digluconato de Clorexidina a 2% ESPE, St. Paul, MN, EUA) G3 EGCG a 0,1%
  • 23. Metodologia  Procedimento de adesão SECAGEM •Jatos de ar por 30 segundos. Imagens adaptadas
  • 24. Metodologia  Procedimento de adesão Reidratação G1 - Água destilada G2 - Clorexidina a 2%* G3 - EGCG a 0,1%** * FGM, Joinville, SC, Brasil - lote #210211 ** Sigma-Aldrich, Saint Louis, EUA - lote #029K 1228 5µL – 60 segundos Imagens adaptadas
  • 25. Metodologia  Procedimento de adesão REMOÇÃO EXCESSO APLICAÇÃO DO ADESIVO • SISTEMA ADESIVO Adper Easy One ® • Papel Absorvente • (3M Aplicar o adesivo • Superfície úmida ESPE, segundos por 20 St.Paul, MN, • EUA – lote # de ar Aplicar um jato 402261) 5 segundos leve por • Fotopolimerizar por 10 segundos Imagens adaptadas
  • 26. Metodologia  Procedimento de adesão PLATÔ DE RESINA • 5 Incrementos Fopolimerizados • 1mm cada individualmente (Filtek Z250; 3M ESPE, St. • 20 segundos Paul, MN, EUA - lote • 500 mW/cm #1030600122 ) 2 (Variable Intensity Polymerizer – VIPTM Junior; Bisco Inc., Schaumburg, IL, EUA) Imagens adaptadas
  • 27. Metodologia  Armazenamento • Água destilada • 37 C • 24 horas Imagens adaptadas
  • 28. Metodologia  Obtenção dos espécimes • Cortes seriados e perpendiculares entre si; • 1 milímetro de distância entre os corte; * Disco diamantado (Extec modelo 12205; Extec Corp.®, Enfield, CT, EUA) ** Cortadeira metalográfica (Labcut 1010; Extec Corp.®, Enfield, CT, EUA) Imagens adaptadas
  • 29. Metodologia  Obtenção dos espécimes • Aleatoriamente Imediato (T0) divididos • Água destilada • Medição de pH (TEC-3MP; 6 meses (T1) • 37 C TECNAL, Piracicaba, SP, Br asil); • Troca da solução; quinzenalmente 12 meses • Monitoramento do (T2) crescimento bacteriano. Imagens adaptadas
  • 30. Metodologia  Teste de microtração • Medição da secção transversal da interface adesiva; • Dispositivo de Geraldeli (Odeme Biotechnology, Joaçaba, SC, Brasil ); • Cola a base de cianocrilato • Velocidade de 0,5 mm/min (Instron 3345; Instron Inc., Canton, MA, EUA).
  • 31. Metodologia  Análise do Modo de Fratura Lupa estereoscópica (Stereo Zoom® Leica S8 APO, Leica Microsystems, Wetzlar, Alemanha)  80 x; Natureza da Falha  Adesiva (A);  Coesiva em resina (CR);  Coesiva em dentina (CD);  Mista (M).
  • 32. Metodologia  Análise Estatística  Kolgomorov-Smirnov;  Análise de Variância a dois critérios (two-way ANOVA);  Teste de Tukey;  SPSS 17.0 para Windows (SPSS Inc., Chicago, IL, EUA);  Significância estatística foi pré-fixada em p<0,05.
  • 33. Resultados  Teste de resistência mecânica de união Tabela 1. Valores de resistência de união expressos em Mpa ± desvio padrão (n*), de acordo com a solução de reidratação. O valor de n corresponde ao número de dentes usados em cada grupo (índice usado na análise estatística), enquanto que n* refere-se ao número de espécimes (palitos) testados. Letras maiúsculas diferentes nas colunas e letras minúsculas diferentes nas linhas representam diferença estatística significante (p<0,05).
  • 34. Resultados Gráfico 1. Distribuição dos modos de fratura expressos em porcentagem, de acordo com os grupos experimentais (T0). 80 70 60 Adesiva 50 Mista 40 Coesiva em Resina 30 Coesiva em Dentina 20 Falha Prematura 10 0 G1 G2 G3
  • 35. Resultados Gráfico 2. Distribuição dos modos de fratura expressos em porcentagem, de acordo com os grupos experimentais (T1). 80 70 60 Adesiva 50 Mista 40 Coesiva em Resina 30 Coesiva em Dentina 20 Falha Prematura 10 0 G1 G2 G3
  • 36. Discussão  As soluções de pré-tratamento dentinário não modificaram a resistência de união imediata à dentina;  A hipótese nula para o teste imediato foi aceita.  Após 6 meses de armazenamento, os valores do G1 diferiram dos demais grupos;  Portanto, a segunda hipótese nula foi rejeitada.
  • 37. Discussão  A literatura reporta que o uso da clorexidina, em concentrações que variam de 0,002 a 4%, não interfere no procedimento adesivo imediatamente após a sua aplicação, independente da estratégia adesiva empregada. CARRILHO et al., 2007b; LOGUERCIO et al., 2009; ZHOU et al., 2009
  • 38. Discussão  Santiago et al., em 2011, relataram que o EGCG a 0,1% não foi capaz de modificar a resistência de um adesivo de condicionamento total;  O EGCG parece não causar alterações significativas na estrutura da camada híbrida capaz de prejudicar a eficiência de união imediata à dentina. SANTIAGO et al., 2011.
  • 39. Discussão  Armazenamento em água  degradação;  A perda de resistência adesiva ao longo do tempo  sistemas de condicionamento total e adesivos simplificados. DE MUNCK et al., 2003; DE MUNCK et al., 2011
  • 40. Discussão  Entretanto, estudos mostram maior degradação da camada híbrida e menores valores de resistência de união para adesivos autocondicionantes de um passo. VAN MEERBEEK et al., 2011
  • 41. Discussão  Van Meerbeek et al., em uma revisão sistemática sobre restaurações de lesões cervicais não cariosas, mostraram que as maiores taxas anuais de falhas ocorreram nos adesivos simplificados de passo único. VAN MEERBEEK et al., 2010
  • 42. Discussão  A rápida degradação da camada híbrida está relacionada à maior hidrofilia desses adesivos, que permite uma maior absorção de água e, consequentemente, maior incidência de hidrólise do componente resinoso;  Técnica autocondicionante  aumento da síntese de MMP-2 em odontoblastos humanos. LIU et al., 2011
  • 43. Discussão  A clorexidina é um inibidor não específico de MMPs, com amplo espectro de ação mesmo em baixas concentrações (DELL’AICA et al., 2007);  A inibição enzimática ocorre através de dois principais mecanismos: quelação de íons metálicos (MMP-2 e MMP- 9) e interação com grupos sufidril ou cisteína (MMP-8) (GENDRON et al., 1999);  Vários autores comprovaram sua eficácia na preservação da integridade da camada híbrida (LIU et al., 2011).
  • 44. Discussão  O polifenol EGCG tem sido bastante estudado nas áreas médicas pelo seu potencial quimiopreventivo ao câncer, uma vez que possui propriedades antioxidantes, antimutagênicas, e anti-inflamatórias;  A capacidade de inibir a atividade gelatinolítica foi descrita na literatura para as enzimas MMP-2 e MMP-9;  Vários estudos in vivo e in vitro mostraram que os polifenóis possuem atividade antimicrobiana, sendo capazes de interferir seletivamente em características de virulência específicas de S. mutans. MANNELLO, 2006; YOO et al., 2011
  • 45. Discussão  O mecanismo de ação do EGCG na inibição das MMPs ainda é controverso. Ele degrada de forma irreversível a molécula de MMP-2 ou promove alterações permanentes na sua estrutura ou no seu sítio catalítico;  O EGCG, em diferentes concentrações (0,02%, 0,1% e 0,5%), associado a um adesivo de condicionamento total de dois passos foi decisivo na manutenção da resistência de união à dentina após 6 meses de armazenamento. CHENG et al., 2003; SANTIAGO et al., 2011
  • 46. Conclusão  EGCG a 0,1%, assim como, a clorexidina a 2%, quando associados ao adesivo autocondicionante de passo único, podem contribuir para a melhoria da durabilidade de união das restaurações adesivas.
  • 47. Referências Bibliográficas  Breschi L, Martin P, Mazzoni A, Nato F, Carrilho M, Tjäderhane L, et al. Use of a specific MMP-inhibitor (galardin) for preservation of hybrid layer. Dental materials  official publication of the Academy of Dental : Materials [Internet]. 2010 Jun [cited 2011 Sep 14];26(6):571-8. Available from: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20299089  Breschi L, Mazzoni A, Ruggeri A, Cadenaro M, Di Lenarda R, De Stefano Dorigo E. Dental adhesion review: aging and stability of the bonded interface. Dent Mater [Internet]. 2008 Jan [cited 2011 Jul 10];24(1):90-101. Available from: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17442386  Carrilho MRO, Carvalho RM, de Goes MF, di Hipolito V, Geraldeli S, Tay FR, et al. Chlorhexidine Preserves Dentin Bond in vitro. J Dent Res [Internet]. 2007 Jan 1 [cited 2011 Oct 29];86(1):90-94. Available from: http://jdr.sagepub.com/cgi/doi/10.1177/154405910708600115  Carrilho MRO, Geraldeli S, Tay F, de Goes MF, Carvalho RM, Tjaderhane L, et al. In vivo Preservation of the Hybrid Layer by Chlorhexidine. J Dent Res [Internet]. 2007 Jun 1 [cited 2011 Aug 23];86(6):529-533. Available from: http://jdr.sagepub.com/cgi/doi/10.1177/154405910708600608  Cheng X, Kuzuaya M, Kanda S, Maeda K, Sasaki T, Wang Q, et al. Epigallocatechin-3-gallate binding to MMP-2 inhibits gelatinolytic activity without influencing the attachment to extracellular matrix proteins but enhances MMP-2 binding to TIMP-2. Arch Biochem Biophys [Internet]. 2003 Jul 1 [cited 2011 Nov 5];415(1):126-132. Available from: http://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S0003986103002212  De Munck J, Mine A, Van den Steen PE, Van Landuyt KL, Poitevin A, Opdenakker G, et al. Enzymatic degradation of adhesive-dentin interfaces produced by mild self-etch adhesives. Eur J Oral Sci [Internet]. 2010 Oct [cited 2011 Aug 2];118(5):494-501. Available from: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20831584  De Munck J, Van Landuyt K, Peumans M, Poitevin A, Lambrechts P, Braem M, et al. A Critical Review of the Durability of Adhesion to Tooth Tissue: Methods and Results. J Dent Res [Internet]. 2005 Feb 1 [cited 2011 Jun 29];84(2):118-132. Available from: http://jdr.sagepub.com/cgi/doi/10.1177/154405910508400204
  • 48. Referências Bibliográficas  De Munck J, Van Meerbeek B, Yoshida Y, Inoue S, Vargas M, Suzuki K, et al. Four-year Water Degradation of Total-etch Adhesives Bonded to Dentin. J Dent Res [Internet]. 2003 Feb 1 [cited 2011 Oct 30];82(2):136-140. Available from: http://jdr.sagepub.com/cgi/doi/10.1177/154405910308200212  Dell’Aica I, Caniato R, Biggin S, Garbisa S. Matrix proteases, green tea, and St. John’s wort: biomedical research catches up with folk medicine. Clin Chim Acta [Internet]. 2007 May [cited 2011 Oct 31];381(1):69-77. Available from: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17382921  Gendron R, Grenier D, Sorsa T, Mayrand D. Inhibition of the Activities of Matrix Chlorhexidine Inhibition of the Activities of Matrix Metalloproteinases 2 , 8 , and 9 by Chlorhexidine. Clin Diagn Lab Immunol. 1999;6(3):437-439.  Hashimoto M, Ohno H, Kaga M, Endo K, Sano H, Oguchi H. In vivo Degradation of Resin-Dentin Bonds in Humans Over 1 to 3 Years. J Dent Res [Internet]. 2000 Jun 1 [cited 2011 Jul 20];79(6):1385- 1391. Available from: http://jdr.sagepub.com/cgi/doi/10.1177/00220345000790060601  Hebling J, Pashley DH, Tjäderhane L, Tay FR. Chlorhexidine Arrests Subclinical Degradation of Dentin Hybrid Layers in vivo. J Dent Res. 2005;84(8):741-746.  Hegde MN, Manjunath J. Bond strength of newer dentin bonding agents in different clinical situations. Oper Dent [Internet]. 2011 [cited 2011 Oct 1];36(2):169-76. Available from: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21777099  Lessa FCR, Aranha AMF, Nogueira I, Giro EMA, Hebling J, Costa CADS. Toxicity of chlorhexidine on odontoblast-like cells. J Appl Oral Sci. [Internet]. 2010;18(1):50-58. Available from: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20379682  Liu Y, Tjäderhane L, Breschi L, Mazzoni A, Li N, Mao J, et al. Limitations in bonding to dentin and experimental strategies to prevent bond degradation. J Dent Res [Internet]. 2011 Aug [cited 2011 Aug 29];90(8):953-68. Available from: http://www.pubmedcentral.nih.gov/articlerender.fcgi?artid=3148178&tool=pmcentrez&rendertype=abstract
  • 49. Referências Bibliográficas  Loguercio AD, Stanislawczuk R, Lg P, Ja C, Influence RA, Reis A. Influence of chlorhexidine digluconate concentration and application time on resin – dentin bond strength durability. Eur J Oral Sci. 2009;(23):587-596.  Mannello F. Natural Bio-Drugs as Matrix Perspectives on the Horizon  Metalloproteinase Inhibitors  ? : New. Recent Pat Anticancer Drug Discov. 2006;1(1):91-103.  Nishitani Y, Yoshiyama M, Wadgaonkar B, Breschi L, Mannello F, Mazzoni A, et al. Activation of gelatinolytic/collagenolytic activity in dentin by self-etching adhesives. Eur J Oral Sci [Internet]. 2006 Apr [cited 2011 Oct 30];114(2):160-6. Available from: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16630309  Pashley DH, Tay FR, Yiu C, Hashimoto M, Breschi L, Carvalho RM, et al. Collagen Degradation by Host-derived Enzymes during Aging. J Dent Res [Internet]. 2004 Mar 1 [cited 2011 Oct 31];83(3):216-221. Available from: http://jdr.sagepub.com/cgi/doi/10.1177/154405910408300306  Peumans M, Kanumilli P, De Munck J, Van Landuyt K, Lambrechts P, Van Meerbeek B. Clinical effectiveness of contemporary adhesives: a systematic review of current clinical trials. Dent Mater [Internet]. 2005 Sep [cited 2011 Jul 10];21(9):864-81. Available from: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16009415  Santiago SL, Osorio R, Neri JR, Mendonça J, Carvalho RM, Fernandes CADO, Toledano M. Effect of epigallocatechin-3-galate on the preservation of resin-dentin bond strength. Abstract of 89TH IADR. 2011.  Van Meerbeek B, Peumans M, Poitevin A, Mine A, Van Ende A, Neves A, et al. Relationship between bond-strength tests and clinical outcomes. Dent Mater [Internet]. 2010 Feb [cited 2011 Nov 4];26(2):e100- 21. Available from: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20006379  Van Meerbeek B, Yoshihara K, Yoshida Y, Mine a, De Munck J, Van Landuyt KL. State of the art of self-etch adhesives. Dent Mater [Internet]. 2011 Jan [cited 2011 Jul 24];27(1):17-28. Available from: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21109301
  • 50. Referências Bibliográficas  Yoo S, Murata RM, Duarte S. Antimicrobial Traits of Tea- and Cranberry-Derived Polyphenols against Streptococcus mutans. Caries Res [Internet]. 2011 Jan [cited 2011 Oct 11];45(4):327-35. Available from: http://www.pubmedcentral.nih.gov/articlerender.fcgi?artid=3130978&tool=pmcentrez&rendertype=abstract  Zhou J, Tan J, Chen L, Li D, Tan Y. The incorporation of chlorhexidine in a two-step self-etching adhesive preserves dentin bond in vitro. J Dent [Internet]. 2009 Oct [cited 2011 Oct 31];37(10):807-12. Available from: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19615807
  • 51. Agradeciment os  A Deus;  Aos meus Pais: Jailma e Jairton;  Aos meus companheiros de faculdade, de PET e de vida: Gustavo Santos e Rafael Carvalho;  Aos doutorandos Jiovanne Neri e Vanara Passos;  Ao meu orientador Prof. Dr. Sérgio Santiago;  Ao Laboratório do Programa de Pós-Graduação em Odontologia (PPGO), por meio da Coordenadora do Programa Profa. Dra. Lidiany Karla Azevedo Rodrigues.