1. PENANGANAN SAMPEL

2. Cara Pengambilan Sampel
SPUTUM

3. PENDAHULUAN
Spesimen untuk Pemeriksaan Mikrobiologi ->
tatacara
 Pengambilan
 Penampungan
 Penyimpanan
 Pemberian label
 Cara pengiriman spesimen
Tujuan:
 tidak dicemari oleh bakteri lain,
 bakteri di dalam spesimen tidak mati

4. Pemberian Identitas
– Formulir permintaan pemeriksaan
• Nomor urut
• Nomor identitas sediaan dahak
• Nama tersangka penderita
• Umur dan jenis kelamin
• Alamat lengkap
• Nomor registrasi laboratorium
 Label wadah :
 Tanggal pengambilan spesimen
 Identitas pasien (terutama nama dan nomor urut).
 Jenis sampel

5. Wadah
 Bermulut lebar
 Bertutup ulir
 Terbuat dari plastik
 Steril
 Tidak mudah pecah

6. Persiapan Penderita
Untuk memperoleh kualitas dahak yang baik maka
penjelasan yang harus diberikan oleh seorang
petugas laboratorium yaitu :
• Memberi penjelasan mengenai pentingnya
pemeriksaan dahak, baik pemeriksaan dahak yang
pertama maupun pemeriksaan dahak ulang
• Memberi penjelasan mengenai cara batuk yang
benar untuk mendapatkan dahak yang kental dan
purulen

7. PENGUMPULANSPUTUM:
Ada 3 cara :
1.Dahak semalam : dahak yg dikumpulkan selama 24 jam dirumah penderita, kmd
dibawa ke laboratorium utk diperiksa.
2.Dahak pagi : dahak yg dikeluarkan pend pada waktu bangun pagi
3.Dahak sewaktu : dahak yg dihasilkan oleh penderita pada stp kunjungan.
 Untuk mendptkan hsl yg sebaik2nya disarankan dahak pagi atau dahak
semalam sebanyak 3-5 ml stp wadah dahak

8. Cara pengambilan dahak :
• Pasien dalam posisi berdiri atau jika pasien
lemah, pasien boleh duduk agak condong
kedepan. Pasien disuruh berkumur2 dahulu
sebelum pengambilan dahak,
• Pagi hari setelah bangun tidur biasanya
rangsangan batuk sangat kuat, tetapi penderita
dianjurkan utk menahannya kuat2, tarik nafas
dalam2.
• Kmd segera batukkan sekuat –kuatnya sampai
merasakan dahak yg dibatukkan keluar dari
dada bukan dari tenggorok.

9. Bagi pasien yg sulit mengeluarkan dahak :
• Gelitik bagian anak lidah /batang tenggorok
dengan lidi kapas.
• Masukkan saline/PZ dingin sebanyak 5-10
ml atau aquadest steril kedalam batang
tenggorokan sedikit demi sedikit.
• Penderita disuruh menjemur diri dibawah
matahari dengan posisi tidur telungkup
diatas dipan dengan kedua tangan jatuh
bebas dan batuk kalau dada terasa panas.

10. • Tampung dahak yg keluar dlm wadah yg
disediakan, bersihkan bagian mulut
wadah, baru ditutup setelah dipastikan
yang ditampung dahak bukan liur/ludah.

11. Penyimpanan Spesimen
• Semua specimen harus dikirim ke
laboratorium secepat mungkin segera
setelah pengambilan.
• Bila hal ini tidak dapat dilakukan simpan
dalam lemari es pada suhu 2-8 0C, jangan
lebih dari satu malam.
• Jika tidak ada lemari es dan penundaan
pengiriman sekitar lebih dari 3 hari maka
harus diberi pengawet yaitu campuran
dari 1 % cetyl pyridinium chloride (CPC)
dan 2 % sodium choride

12. Pengiriman Spesimen
Sebelum pengiriman dilakukan, petugas harus
meneliti kembali setiap isi kotak sediaan:
• Pastikan setiap sediaan Sputum yang akan
dikirim disertai formulir yang sudah diisi
lengkap
• Nomor identitas setiap sediaan harus cocok
dengan nomor yang ada di dalam formulir.

13. PEMERIKSAAN SECARA
MIKROSKOPIS
(PEMBUATAN SLIDE
BTA)

15. PROSEDUR PENGECATAN

28. Setelah itu diperiksa dengan Mikroskop
pada perbesaran Objektif 100x

30. SKALA PELAPORAN MENURUT IUATLD
(International Union Against Tuberculosis
Lung Diseases)
• Laporkan BTA negatif, jika tdk ditemukan kuman
dlm 100 lp.
• Laporkan BTA positif jika ditemukan kuman dg
cara :
– 1- 9 BTA /100 lp : laporkan jumlahnya (scanty)
– 10-99 BTA/100 lp : 1 +
– 1-10 BTA/lp : 2 + (Dibaca minimal
50 lap pandang)
– > 10 BTA/lp : 3 + (dibaca min 20 lap
pandang)

31. Selain pengecatan Zielh-Nelson dapat pula dilakukan
pengecatan Tan Thiam Hok (TTH) (Sebelumnya :
Kinyoun Gabbet) dan Fluorochrome

32. Cara Kerja
• Sputum dioleskan diatas objek gelas
• Biarkan sampai kering -- fiksasi dengan
melewatkan diatas nyala api (tiga kali)
• Letakkan objek gelas diatas rak
• Tuangkan ZN A carbol fuchsin (menutupi seluruh
permukaan objek gelas)
• Lewatkan diatas nyala api sampai zat warna tsb
mengeluarkan asap dan tidak sampai mendidih.
Diamkan selama 5 menit

33. Lanjutan...
• Cuci dengan air yang mengalir
• Tambah dengan larutan ZN B asam alkohol
sampai bersih (3x)
• Pencucian ulang dengan air yang mengalir
• Tambah larutan ZN C Methylen blue (10-20
detik)
• Cuci dengan air yang mengalir dan
dikeringkan dan dilihat dibawah mikroskop.

34. Niacin Test
 Reagensia
A. Aquadest steril atau air garam
fisiologis
B. Aniline 4% didalam etanol
C. Cyanogen bromida 10%
 Reagen no. 2 dan no. 3 dapat
disimpan didalam lemari es
 Kalau terjadi perubahan buatlah
larutan yang baru

35. Cara Pemeriksaan
A. Tambahkan 0,5 – 1 ml aquadest/air garam steril
kedalam kedalam kultur bakteri yang akan diperiksa,
kultur dalam tabung Louwenstein Yensen umur 3 -4
minggu. Tusuk-tusuk koloni dan media dengan pipet
pasteur/batang kaca steril.
B. Diamkan 15 menit untuk memberi kesempatan niacin
yang diproduksi bakteri terextractie.
C. Ambil 0,3 – 0,5 ml cairan yang didalam tabung media,
masukkan kedalam tabung reaksi kecil yang bersih.
D. Tambahkan larutan anilin dan cyanogen bromide sama
banyak(hati-hati karena dapat menimbulkan gas air
mata)
E. Niacin test positi(+) terjadi warna kuning

36. SENSITIVITY TEST
1. Metode
banyak cara yang dapat dilakukan
untuk uji kepekaan M. Tbc terhadap
obat-obat tubercolostatica, misalna
dengan MIC (secara absolut),
membandingkan dengan strain H37RV
(cara ratio) dan menghitung berapa%
yang resisten pada kadar obat tertinggi
(cara proporsional).

37. Lanjutan...
2. Cara Penanaman
 Pelaksanaan penanaman dapat dilakukan secara langsung setelah pengolahan
(untuk sputum yang BTA positif) atau secara tidak langsung (untuk sputum yang
BTA negatif). Yang dimaksud secara tidak langsung yaitu bakterinya dibiarkan
tumbuh dahulu pada media yang tidak mengandung obat, setelah tumbuh
koloninyadibuat suspensi kemudian ditanam pada media yang mengandung
obat.
 Untuk metode absolut, ratio, dan proposional dapat dikerjakan sebagai berikut:
 Endapan yang diperoleh dari pengolahan atau suspensi koloni bakteri dari
kultur, ditanam pada 2 tabung LY yang tidak mengandung obat dan LY-LY
yang mengandung obat, misalnya:
a. Streptomycin : 100 mcg/ml, 50 mcg/ml,10 mcg/ml
b. INH : 100mcg/ml, 10 mcg/ml, 1 mcg/ml
c. PAS : 100mcg/ml, 10 mcg/ml, 1 mcg/ml
d. Myambutol : 100mcg/ml, 10 mcg/ml, 1 mcg/ml
Penanaman dilakukan seperti kultur.
 Diusahakan volume yang ditanam pada masing-masing LY adalah sama,
kemudian diratakan pada seluruh permukaan LY
 Juga ditanam strain H37Rv pada media LY yang tidak mengandung obat
dan pada media LY yang mengandung obat seperti yang diatas
 Semuanya masuk inkubator 37oC sampai 8 minggu

38. Lanjutan...
3. Pembacaan
Pada minggu I dilakukan pembacaan 2
kali yaitu pada hari ke-4 dan hari ke-7
dilihat ada tidaknya pertumbuhan
bakteri tbc
Pada minggu II dan seterusnya dilihat ada
tidaknya pertumbuhan bakteri tbc, 1 kali
tiap 1 minggu.

39. Lanjutan...
4. Penilaian
 Sensitif : Apabila pada LY yang tanpa
obat tumbuh bakteri tbc, dan pada LY
yang mengandung tidak tumbuh
 Resistant : Apabila pada LY yang tanpa
obat tumbuh bakteri tbc, dan pada LY
yang mengandung juga tumbuh
 Ragu-ragu : Apabila pada LY yang
tanpa obat tidak tumbuh bakteri tbc,
dan pada LY yang mengandung tidak
tumbuh. Ini harus diulangi

40. KULTUR
Cara pengolahan
 Metode dengan alkali
1. kedalam tabung vacutainer/pemusing steril,
masukkan 1 bagian sampel dan 1 bagian NaOH 4 %
tutup rapat dengan tutup karet
2. Kocok dengan Khan Shaker 210 kocokan/menit
selama 10 menit (sampai homogen)
3. Pusingkan 3000 rpm selama 5 menit
4. Supernatan di buang, sedimennya langsung ditanam
atau dicuci dahilu dengan air garam steril 2 kali.
Dapat juga sedimennya di netralkan dengan HCl 1 N,
sebagai indikator digunakan 0,04 % fenol red
5. sedimen ini yang ditanam pada media Lauwensten
Yensen atau kudo

41. Metode dengan Asam
1. kedalam tabung vacutainer/pemusing steril,
masukkan 1 bagian sampel dan 1 bagian H2SO4 5
%, tutuplah yang rapat dengan tutup karet
2. Kocok dengan Kahn Shaker 210 kocokan/menit
selama 15 menit
3. Pusingkan 3000 rpm selama 10 menit
4. Supernatan dibuang kedalam larutan desinfektan.
Sedimennya di cuci dengan air garam steril 2 kali
atau di netralkan dengan NaOH 4%, sebagai
indikator di gunakan Fenol Red 0,04%
5. sedimen inilah yang ditanam pada Louwenstein
Yensen atau Kudo

42. PENANAMAN
 1. Media yang dipakai antara lain Lowenstain
Yensen dan Kudoh
 2. Sedimen hasil pengolahan sampel diambil
dengan pipet pasteur steril, diteteskan
pada permukaan media, kemudian
diratakan, atau diambil dengan lidi kapas
steril lalu dipulaskan pd permukaan media
sampai rata.
Setelah ditanami, tabung media ditutup
rapat. Kalau screw cup cukup
dikencangkan, kalau tutup kapas, kapasnya
dicelupkan dulu ke dalam solid panas.

43. Inkubasi dan Pembacaan
 Media yang ditanami diinkubasikan
pada 37oC sampai 8 minggu.
 Pembacaan I dilakukan pada hari ke-5
setelah inkubasi (terutama untuk melihat
adanya rapid growers)
 Pembacaan II dan seterusnya dilakukan
setiap 1 minggu 1 kali, sampai 8
minggu.

44. SEKIAN
&
TERIMA KASIH