Micro biologia clinica

Introducción a la Microbiología Clínica Conceptos básicos Bacterias Mecanismos de la acción patógena Factores determinantes de la acción patógena Factores de virulencia Relación huésped – bacteria Agentes antimicrobianos (antibióticos o Atb) Virus Clasificación de los virus Antivirales Hongos Características principales Clasificación de los hongos Formas de crecimiento Esterilización (anexo 1) Bioseguridad (anexo 2) Diagnústico de las enfermedades infecciosas (anexo 3) Enf. Infecciosas (anexo 4) Bibliografía CONCEPTOS BÁSICOS BIOLOGÍA SISTEMÁTICA ECOLOGÍA MICROBIOLOGIAPARASITOLOGIA PROCARIOTAS - EUCARIOTAS - SUBCELULAR EUCARIOTAS BACTERIAS HONGOS VIRUSPROTOZOARIOS METAZOARIOS HELMINTOS ARTROPODOS MICROBIOLOGIA = Ciencia que se encarga del estudio de los microbios (Hongos, Bacterias y Virus). MICROBIO O MICROORGANISMO = Son organismos muy pequeños, de tamaño microscópico, dotados de individualidad, con una organización biológica elemental. Pueden ser unicelulares multicelulares (los conformados por células indiferenciadas, que al asociarse no forman tej. , pues cada una de ellas constituye un organismo completo, independiente y dotado de la capacidad de reproducción). MICROBIOLOGIA CLÍNICA = Es una disciplina aplicada de la medicina que estudia los microorganismos capaces de provocar enfermedades en los seres vivos. TEORIA MICROBIANA DE LAS INFECCIONES = la misma resulta de la semejanzas existentes entre los procesos fermentativos y las enfermedades infecciosas (por ej. Ambos se producen por causa de microorganismos) POSTULADO DE KOCH = Por el se establecen las condiciones que debe reunir un microorganismo para ser considerado como agente causal de una determinada enfermedad infecciosa. Tales condiciones son : Demostrar la presencia del microorganismo en todas las personas enfermas y su ausencia en las personas sanas. Que el microorganismo pueda ser aislado en un cultivo sólido a partir de las lesiones producidas en el enfermo. Que el microorganismo pueda reproducir la enfermedad, al ser inoculado en un animal de experimentación susceptible. Que el microorganismo pueda ser aislado nuevamente a partir de las lesiones producidas en dicho animal. Que el microorganismo induzca una respuesta inmune especifica en el huésped detectada por serología (por la aparición de anticuerpos específicos). INOCULO = Es la Cantidad o Número de Gérmenes infectantes que son introducidos accidental o voluntariamente en los tejidos vivos o en medios de cultivos especiales. PROFILAXIS =Conjunto de medidas, medios yo terapéutica que se emplean para preservar al individuo y/o la comunidad de determinada enfermedad. ORGANIZACION ESTRUCTURAL DE LOS MICROORGANISMOS : ESTRUCTURAREINOMICROORGANISMOSUSCEPTIBILIDAD A :CELULARANIMALCELULARVEGETALCELULARFUNGIHONGOSANTIMICÓTICOSCELULARPROTISTACELULARPROCARIOTASBACTERIASANTIBIÓTICOSSUBCELULAR-----------VIRUSANTIVIRALES CELULAS EUCARIOTAS = Este tipo de célula está dividida en compartimientos limitados por membranas internas. Sus principales características son : Membrana Citoplasmática = Es una bicapa lipídica, compuesta por proteínas, fosfolípidos y esteroles. Actúa como membrana limitante (ayuda a mantener la forma) y como barrera osmótica. En cierto tipo de células podemos visulizar Cilios y Flagelos. En los Hongos además de esta membrana pueden presentar Pared o Cubierta Celular, la cual está compuesta de polisacáridos. Citoplasma =Presenta organelas (compartimientos internos rodeados por una membrana propia); entre estas encontramos Retículo endoplasmático, Aparato de Golgi, Vacuolas, Lisosomas; Mitocondrias, Cloroplastos (realizan la fotosíntesis en las plantas), Centríolos, Ribosomas (80 s). Además el citoplasma cuenta con una estructura reticular denominada citoesqueleto, compuesto por microtúbulos y microfilamentos. Núcleo = Contiene el material hereditario. Este decimos que es verdadero puesto que el compartimiento nuclear se halla verdaderamente separado del citoplasma por la membrana nuclear. El ADN está organizado en 2 o más cromosomas que codifican el material hereditario; cada cromosoma está compuesto por filamentos en doble hélice de ADN, donde cada cadena presenta uniones protéicas y de histonas. División = La división celular puede ocurrir ya sea por mitosis o por meiosis , según el tipo celular. Motilidad = La movilidad por parte algunos tipos celulares puede llevarse a cabo mediante Flagelos, Pseudópodos, Fagocitosis, Endocitosis,y Pinocitosis CELULAS PROCARIOTAS = Este tipo de células no están divididas en compartimientos ni poseen núcleo verdadero. Sus principales características son : Pared Celular = Es una estructura gruesa y rígida (a excepción de los micoplasmas) que sirve para dar forma a la célula procariota, evitar la lisis osmótica y la acción de agentes externos nocivos. En su estructura se halla un polímero específico, la mureína o Péptidoglicano. Membrana Citoplasmática = Esta no presenta esteroles en su composición. Asociada a ella hay mesosomas (repliegues internos) y enzimas generadoras de ATP. Citoplasma = No presenta organelas . Es de aspecto granular, donde se distinguen granulaciones mayores (sustancias de reserva) y granulaciones submicroscópicas (ribosomas – 70 s). Inmersos en el citoplasma encontramos ADN extracromosómico (Plásmido) enrollado en forma circular, los cuales contienen información genética para la síntesis de sustancias no indispensables. Nucleoide = Contiene el material hereditario y de especificidad (ADN cromosómico), conformando 1 solo cromosoma dispuesto como 1 filamento en doble hélice, apelotonado en algún sitio del citoplasma. .En las cadenas hay ausencia de Histonas. Decimos que no es un núcleo verdadero porque no posee una membrana que lo separe netamente del citoplasma División = La división celular ocurre por división o fisión binaria , la cual puede ser por fisión , conjugación o por medio de un bacteriófago (virus que infecta a una bacteria , y por lo que el genoma viral se recombina con el genoma de la bacteria) Motilidad = Por Flagelos Pilis o Fimbrias = Permiten la Adherencia a receptores de las Células huéspedes y la transferencia de material genético entre algunas bacterias BACTERIAS Son Microorganismos procariotas, unicelulares, de tamaño microscópico (del orden de los micrones). CARACTERÍSTICAS PRINCIPALES : Están contenidas en una Pared Celular Poseen ambos tipos de ácidos nucleicos (ADN y ARN) Se multiplican por fisión binaria (tipo de reproducción asexual, donde la replicación es lineal, comenzando en un extremo de la cadena de ADN y terminando en el otro, decimos que es semiconservadora ya que c/u de las cadenas complementarias sirven de molde para la síntesis de otra). Pueden ser : Aerobias o Anaerobias Móviles o Inmóviles Patógenas (causan enfermedades en el organismo al que invaden) o Saprofitas (es decir, viven libres en la naturaleza, se nutren de materia inorgánica u orgánica, siendo responsables de la transformación de la materia orgánica en mineral y de los ciclos del N y del C en la naturaleza). ESTRUCTURA BACTERIANA : los diferentes componentes bacterianos se dividen en : 1. PARED CELULAR 2. MEMBR. CITOPLASMÁTICA ELEMENTOS OBLIGADOS3. CITOPLASMA (Constantes)4. RIBOSOMAS 5. NUCLEOIDE A. GLUCOCALIX B. FLAGELO ELEMENTOS C. FIMBRIAS FACULTATIVOS D. CAPSULA (Inconstantes)E. ESPORAS F. PLASMIDOS 1.- PARED CELULAR : Es una estructura gruesa y rígida presente en casi todas las especies bacterianas dando forma a la bacteria; se halla separada de la Memb. Citoplasmática por el Espacio Periplasmático (este espacio virtual es más manifiesto en las bacterias Gram – , y, allí encontramos proteínas y enzimas como la fosfatasa alcalina y ácida, desoxiribonucleasas, ribonucleasas y penicilinazas). Se pone en evidencia utilizando la Tinción de Gram (la que permite distinguir bacterias Gram - , bacterias Gram + y bacterias sin pared (género Micoplasma y formas L – Bacterianas) o bien utilizando tinción de Ziehl Neelsen podemos observarla en el caso de los bacilos Acido Alcohol Resistentes (BAAR). Composición : Su principal componente es el Péptidoglicano o Mureína (en el caso de las Gram : N- Acetilglucosamina + N – Acetilmurámico; y en el caso de las BAAR : N – Acetilglucosamina + N – Glicosil murámico) Propiedades y Funciones: 1= Brinda protección y resistencia a la bacteria frente a los posibles cambios de presión osmótica del medio en el que se encuentra y a la acción de ciertos agentes externos. 2= Presenta Poros que actúan como filtros, permitiendo el pasaje de agua y metabolitos esenciales. 3= Presenta antígenos de tipo y grupo específicos. 4= Participa en la división (multiplicación) bacteriana (se invagina junto con la membrana plasmática) 5= En las bacterias Gram – tiene poder patógeno debido a que presenta endotoxinas (Lípido A). 6= Es el sustrato donde actúan los  - Lactámicos y otros antimicrobianos. 7= Resulta ser el fundamento del método de Gram Síntesis de la Pared : Los precursores son sintetizados en el citoplasma bacteriano, luego son transportados a través de la MP, se forma y elonga un polímero lineal y finalmente se establecen puentes de unión entre los polímeros constitutivos. La síntesis de la pared es inhibida por los  - Lactámicos. Esquema de los diferentes tipos de pared celular : 2.- MEMBRANA CITOPLASMÁTICA (MP): Es una bicapa lipídica sin esteroles, que presenta inclusiones de proteínas y glicolípidos que forman poros. También presenta enzimas , bajo control cromosómico, como Fosfatasa alcalina, Hidrolasas, Penicilinasas. Su cara externa presenta la proteína fijadora de penicilina (dicha proteína interviene en la formación del peptidoglicano o mureína y funciona como sitio diana para la acción de los  - Lactámicos); su cara interna se relaciona con el ARNm, Ribosomas y el Nucleoide. Propiedades y Funciones : 1 – Actúa como una activa y selectiva barrera osmótica 2 – Participa en la síntesis de la pared celular y la cápsula 3 – Realiza síntesis de ATP 4 – Es el sustrato donde actúan ATB como la Polimixina B (que alteran su permeabilidad) En las bacterias Gram + podemos distinguir repliegues de la MP, denominados Mesosomas. Mesosomas : - Mesosomas Septales = Estos repliegues participan en la división celular. - Mesosomas Laterales = participan en funciones de secreción (Ej. Secreción de  - Lactamasa) 3.- CITOPLOASMA : Es una masa coloidal constituida por agua (85 %), minerales y fermentos. No contiene sistemas membranosos (organelas). Presenta un aspecto granuloso, distinguiéndose : a.- Granulaciones mayores o microscópicas : Son vacuolas que almacenan sustancias de reserva, glucógeno, líquidos o gases. b. Granulaciones Submicroscópicas : Son ribosomas. 4.- RIBOSOMAS : Son gránulos de unos200  de diámetro, ricos en ARN y proteínas. Poseen un coeficiente de sedimentación de 70s (30s – 50s). Su función es realizar la síntesis de proteínas. Son el sitio diana donde actúan varios antimicrobianos como loa Aminoglucósidos, tetraciclinas, Cloramfenicol, Macrólidos y Lincosaminas (inhiben la síntesis protéica de la bacteria). 5.- NUCLEOIDE : (ADN CROMOSÓMICO) Consiste en un único cromosoma (filamento de ADN) que se encuentra apelotonado (en su estructura en doble hélice no presenta puentes de histonas). En algunos puntos entra en relación con la MP o con sus Mesosomas. Propiedades y Funciones : Confiere a la bacteria sus peculiaridades genéticas. Interviene en el mecanismo de transferencia hereditaria. Regula la Síntesis Protéica. Induce los cambios que llevan a la división celular Es el sitio de acción donde actúan antibióticos como las Quinolonas (Ac. Nalidixico, Norfloxacina,etc) , la Rifampicina y el Metroidazol. Tipo de Replicación : La replicación es lineal, comenzando en un extremo y terminando en el otro. El ADN Cromosómico se autoreproduce por un mecanismo semiconservador , donde la cadena complementaria se separa y sirve de molde para la síntesis de otra cadena. A.- GLUCOCÁLIX =Es una delgada capa externa compuesta por Polisacáridos (Levano o Dextrano) que facilitan la adherencia de la bacteria. B.- FLAGELO = Se trata de una estructura helicoidal que se comporta como órgano locomotor de la bacteria, además presenta el Ag H (específico de tipo) que es el responsable de la aglutinación flagelar.. C.- FIMBRIAS O PILIS = Se trata de estructuras filamentosas carentes de movilidad, constituidas por una proteína llamada Pilina. Por lo general están presentes en las bacterias Gram – , mientras que en las bacterias Gram + sólo se describen en el Corinebacterium Renale y algunos Streptococos. Propiedades y Funciones : Propiedad Antigénica Brindan Adherencia : ya sea a superficies de látex , hematíes y/o al glucocálix de las células epiteliales. Algunos tipos de Pilis (F e I) intervienen en la transferencia de material genético por conjugación Pili F = Filamento Sexual, largo , responsable de transmisión hereditaria Pili I = Filamento corto, responsable de la transmisión del factor Col (productor de bacteriocinas) D.- CAPSULA = Estructura compleja, de grosor variable que rodea a una o más bacterias. Puede estar presente tanto en bacterias Gram – como Gram +. Composición : Agua (90%) y polímeros orgánicos (en el género Bacillus : polisacáridos y polipéptidos) Propiedades y Funciones : Propiedad Antifagocitaria : Dificulta o impide la fagocitosis, lo cual potencia su virulencia ya que favorece la multiplicación y facilita la invasión Brinda Protección frente a Fagos y ATB : Dificulta la fijación de bacteriófagos e impide el pasaje de ATB que puedan afectar a la bacteria. Propiedades Antigénicas : Induce la producción de anticuerpos protectores (esto es útil en la producción de algunas vacunas) Permite la diferenciación de tipos serológicos dentro de la misma especie ya sea por aglutinación con sueros tipo o por el fenómeno de vitrifacción o de Quellung (hinchazón de la cápsula) Orienta a la clasificación mediante : Pruebas bioquímicas o inmunológicas. Microscopía de contraste de fase (donde se la observa como un halo claro y refringente) Tinción negativa con Tinta China. Síntesis de Cápsula : Se realiza a partir de la MP. E.- ESPOROS = Son elementos de reproducción y/o de resistencia a un medio adverso que presentan algunas bacterias , especialmente del género bacilar. Su forma, tamaño y ubicación varía según la especie. Tipos : Endosporas : espora presente en el interior de la bacteria. Destinada a germinar originando la forma vegetativa de la que deriva Exosporas : esporo que permanece libre en el ambiente, constituyendo la forma de resistencia bacteriana ante condiciones adversas o desfavorables (nutrición, desecación, temperatura, presencia de agentes químicos, presiones, etc.) Propiedades y Funciones : Son resistentes al calor, a la desecación, a las presiones, a los agentes químicos, a los rayos U.V. y radiaciones ionizantes. Mantienen la virulencia de la forma vegetativa de la que derivan. Tiene un muy bajo metabolismo, que les permite permanecer viables por períodos tiempo indefinidos. Tiene propiedades inmunogénicas. Germinación ESPOROCondiciones del MedioFORMA VEGETATIVA Esporulación F.- PLASMIDOS = (ADN EXTRACROMOSOMICO) Se trata de una estructura esférica, que codifica independiente del nucleoide y que contiene información genética para sintetizar sustancias que no son indispensables para la bacteria. El ADN extracromosómico se transmite por Herencia a las bacterias hijas Conjugación a otras bacterias (no hijas) Tipos y Funciones : Los Plásmidos se clasifican por los caracteres que expresan y se designan según esas propiedades Plásmido “Ent” : Codifica la síntesis de enterotoxinas. Plásmido “Inv” : Da a las bacterias enteroinvasivas la capacidad de penetración a las células epiteliales del intestino. Plásmido “K” : Codifica la Producción de los Ag de superficie de la Escherichia Coli. Plásmido “Hly” : Codifica la producción de  - Hemolisina, responsable de la lisis de hematíes Factor F (sexual) : Son plásmidos autotransferibles, responsables de la transferencia de genes por conjugación que codifican la producción de pilis sexuales o F. Factor Col : codifican la producción de bacteriocinas (compuestos similares a los ATB) que resultan letales para otras bacterias . Factor R (de resistencia) : Es un plásmido, presente en ciertas bacterias Gram – , que codifica los mecanismos de resistencia a uno o más ATB. MECANISMOS DE LA ACCION PATÓGENA : COLONIZACIÓN = Es la capacidad de llegar a la superficie del huésped por una puerta de entrada (piel o mucosas), formar o establecer una colonia en el epitelio y resistir la acción de los sistemas locales de defensa . Se entiende por colonia bacteriana a la agrupación de bacterias originadas a partir de una bacteria madre que se establecen y extienden por determinado medio. Las bacterias patógenas pueden proceder : Del Exterior = llegan al organismo por una puerta de entrada causando infecciones exógenas. Del Propio Organismo = son bacterias oportunistas, que integraban la población de la flora normal, y que por determinados factores alcanzaron la capacidad de producir infecciones endógenas. En cualquier caso , para iniciar la infección, los microorganismos deben fijarse o adherirse a las células y colonizar el epitelio. PENETRACIÓN = Se denomina así a la capacidad de las bacterias para atravesar la barrera cutáneo – mucosa, alcanzar los tejidos subyacentes y ponerse en contacto con el medio interno del huésped, manifestando su acción patógena. Respecto a este punto, podemos decir que existen : Bacterias Sin poder de Penetración : Estas bacterias No Precisan atravesar el epitelio para Expresar su Acción Patógena. Estas se adhieren, se multiplican, colonizan el epitelio donde liberan una exotoxina soluble que al ser absorbida en la mucosa puede ejercer o una acción local o general. Ejemplos (Bordetella Pertusi, Vibrio Cholerae; Corinebacterium Diphtheriae) Bacterias con capacidad de Penetración Pasiva : Estas bacterias atraviesan pasivamente el epitelio, ya sea mediante : 1.- un vector de transmisión (artrópodos y otros insectos) : las bacterias son inoculadas a través del epitelio intacto. 2.- heridas, quemaduras, catéteres, etc.: las bacterias atraviesan un epitelio que presente alteraciones anatómicas y funcionales Bacterias con Capacidad de Penetración Activa : Estas bacterias penetran activamente el epitelio, mediante endocitosis realizada por la célula huésped. Ej. Escherichia Coli, Shigella, etc. MULTIPLICACIÓN E INVACION = MULTIPLICACIÓN : Hace referencia a la capacidad de reproducirse y alcanzar un Nº crítico que les permita para invadir y desarrollar su acción patógena, sorteando los mecanismos defensivos del huésped. Para ello necesitan obtener del organismo los elementos nutritivos, necesarios para su crecimiento y reproducción; cuando no los encuentran, no pueden multiplicarse y por ende no pueden desarrollar la infección o ésta es controlada con mayor facilidad en un lapso de tiempo breve. INVASIÓN : Es la Capacidad de favorecer la difusión de la infección bacteriana en el organismo (ésta se debe a la producción de algunos metabolitos, enzimas y otras sustancias) ya sea interfiriendo los mecanismos defensivos del huésped o facilitando la penetración del microorganismo. Factores que favorecen la Invasión : En su mayoría son enzimas hidrolíticas que actúan sobre : a.- Células y tejidos : Colagenazas Hialuronidasa (Staphylococo Aureus, Streptococo Pyogenes, etc.) b.- Desdoblamiento de :Proteínas (por parte de proteasas) Mucina (Mucinasas) Lípidos (lipasas) Ac. Nucléicos (Nucleassa) c.- Proceso de Coagulación Coagulasa (transforma fibrinógeno en fibrina) Ej. : Staphylococo Aureus Quinasa (Transforma plasminógeno en plasmina) Ej. : Streptococo Pyogenes, Staphylococo Aureus. CAPACIDAD LESIONAL = Es aquella capaz de producir alteraciones y/o lesiones en las células y tejidos del huésped, responsables del cuadro patológico. Estas alteraciones pueden ser producidas por acción directa (presencia de Antígenos capsulares, somáticos o flagelares) o por mecanismos de acción Indirectos (producción de Sust. Tóxicas para las células huéspedes), lo cuales producen un proceso inflamatorio y ponen en marcha mecanismos inmunológicos responsables del cuadro clínico. Factores Intervinientes: ACCION TOXICA : Determinada por la producción de Exotoxinas y/o Endotoxinas Exotoxinas = Son sustancias de naturaleza proteica que se liberan de forma directa o a través de vesículas, sin que se produzca lisis bacteriana. Frecuentemente están codificadas por plásmidos o fagos; a veces consisten en 2 o más subunidades (una de las cuales sirve para adherirse y entrar a la cél. huésped , mientras que otra activa o inhibe determinada función celular). Tiene una acción Específica y las podemos clasificar en Neurotoxinas (toxina : diftérica, tetánica, botulínica, etc) y Enterotoxinas.(toxina de : Bordetella Pertusis, Clostridium Perfringes, Clostridium Difficile, Shigella Dysenteriae, etc.). Algunas toxinas al ser inactivadas (con formaldehído)no alteran su antigenicidad, y los toxoides resultantes proporcionan algunas de las vacunas más eficaces (Ej. Toxoide tetánico y toxoide diftérico) Endotoxinas = Son sustancia de naturaleza lipopolisacárida, localizadas en la superficie celular del microorganismo y que son liberadas por lisis bacteriana. Son producidas principalmente por las bacterias Gram – de los géneros Escherichia, Salmonella, Shigella y Klebsiella. Los lipopolisacáridos (LPS)estimulan una gran variedad de respuestas por parte del huésped. Desde el punto de vista clínico, los efectos más importantes de los LPS son la fiebre y el colapso vascular o shock. La fiebre, actualmente se atribuye a la acción de citoquinas sobre el hipotálamo (principalmente la IL-1 y el factor tumoral o TNF) y puede beneficiar al huésped, al microorganismo o a ambos . En respuesta a los LPS, los macrófagos son quienes producen estsas2 citoquinas. El shock por Endotoxinas (shock séptico) se suele asociar con la diseminación sistémica del microorganismo y, el ejemplo más común es las septicemia por bacterias Gram - como Escherichia Coli, Nesisseria meningitidis, etc. MECANISMOS INFLAMATORIOS : Ya sea por mecanismos de acción directa o indirecta, las bacterias ponen en marcha el proceso inflamatorio; permitiendo que lleguen al foco inflamatorio los Fagocitos. Si el microorganismo fuere capaz de producir la destrucción de los Fagocitos, la liberación de enzimas lisosómicas desde estos últimos, ampliarán aún más la reacción inflamatoria y llevando a alteraciones patológicas como la formación de granulomas. MECANISMOS INMUNOLÓGICOS : Las alteraciones patológicas también pueden deberse a fenómenos de hipersensibilidad. La simple Rta. Inmune ya representa la producción de una serie de reacciones como vasodilatación, edema, hiperplasia ganglionar, infiltración celular, etc.; estas en condiciones normales apenas influyen en el cuadro clínico , pero si se produce un fenómeno de hipersensibilidad (respuesta inmune exagerada) el mismo puede ser el responsable de procesos patológicos graves o incluso causales de muerte. FACTORES DETERMINANTES DE LA ACCIÓN PATÓGENA : Son la Adherencia, la Acción Tóxica y otros componentes bacterianos : ADHERENCIA = Es el factor más importante en el momento de la colonización. Se lleva a cabo mediante la utilización de adhesinas que interactúan con los receptores superficiales de la célula huésped. ACCION TOXICA = Como vimos ésta se debe a la producción de Exotoxinas y/o Endotoxinas, por ejemplo : Toxinas de Amplia Acción BACTERIATOXINA ELAB.ESTRUCTURAMec. de AcciónEnfermedad (Órganos más afectados)Corinebacterium DiphtheriaeToxina DiftéricaSubunidad A+Subunidad BInhibe la síntesis protéica a nivel ribosomalDifteria (Faringe y/o piel, corazón, Nervios periféricos). Las alteraciones cardíacas, la parálisis muscular y nerviosa conducen a la muerte por falla cardiaca y paro respiratorio.Bacillus AnthracisCitotoxina de B. AntthracisFactor Letal+Fac. Edematógeno+Ag Protector- Produce aumento del AMPc, lo que aumenta la permeabilidad ocasionando edema pulmonarCarbunco o ántrax (Pulmón)Las alteraciones causadas (edema, Hemorragias) llevan a la formación de trombos y a una falla circulatoria.Pseudomona AeruginosaToxina  - de la P. AeruginosaSubunidad A+Subunidad BProduce lisis celularProduce alteraciones necróticas en el hígado y otros órganos, por lo que es responsable de diversas infecciones Neurotoxinas BACTERIATOXINA ELAB.ESTRUCTURAMec. de AcciónEnfermedad (órganos más Afectados)Clostridium TetaniToxina Tetánica o Tetanospasmina(Regulada por plasmidos)Subunidad A+Subunidad BBloqueo de la inhibi-ción Simpática a nivel del SNC Tétanos (neuronas). Las alteraciones que se producen llevan a parálisis espástica, espasmos musculares y convulsionesClostridium BotulinumToxina Botulínica(Regulada por Fagos)Subunidad A+Subunidad BBloque la liberación de Acetilcolina en el SNPBotulismo (uniones neuro – musculares). Las alteraciones causadas provocan una parálisis flácidaClostridium Perfringens  - ToxinaSubunidad A+ Subunidad BLisis celular de hema-tíes, leucocitos plaque-tas y cél. endotelialesGangrena Gaseosa Enterotoxinas (citotónica y citotóxica) BACTERIATOXINA ELAB.ESTRUCTURAMec. de AcciónEnfermedad (el aparato digestivo es el más afectado)Vibrio CholeraeToxina Colérica2 A + 5 BInhibe las Síntesis protéica y Aumenta niveles de AMPcColera . Escherichia Coli-Tox. Citotónica termolábil-Tox. Citotónica termosestable -Verotoxina (Citotóxica)2 A + 5 B2 A + 5 BSubunidad A y BIdem a toxina coléricaAumenta el GMPcActúa sobre el endotelio de los vasos sanguíneos intestinalesGastroenteritisDiarrea del viajeroDisentería (diarrea hemorrágica) OTROS COMPONENTES BACTERIANOS = Como por ejemplo los antígenos flagelares, capsulares, de pared o somáticos; que son capaces de favorecer la Respuesta Inmune. FACTORES DE VIRULENCIA : FERMENTOS = Son enzimas como Mucinasas, Glicosidasas o Neuraminidasas que descomponen las proteínas del moco, facilitando l penetración. FACTORES DE SUPERFICIE = Como la Cápsula y/o los Antígenos de Pared que inhiben la fagocitosis y la acción de sustancias bactericidas de la mucosa. PROTEASAS Ig A =Es una Enzima proteolítica que descompone la Ig A (subclase 1) desactivando el sistema local de defensa de la mucosa. La sintetizan microorganismos como Neisseria Meningitidis, Neisseria Gonorrhoeae, Streptococo Pneumaoniae y Haempophylus Influenzae, etc. BACTERIOCINAS = Son sustancias que actúan como antibióticos frente a otras bacterias , lo que les permite competir con bacterias integrantes de la flora normal microbiana del huésped. CLASIFICACION DE LAS BACTERIAS Se basa en la afinidad o no por la tinción de Gram, su morfología y en la utilización o no de O2 en su metabolismo, las bacterias son divididas en 3 grandes grupos : Gram - , Gram + y aquellas que no se tiñen con Gram (ej. Las BAAR); a su vez estos grupos pueden estar conformados por bacterias Aerobias o Anaerobias facultativas y bacterias Anaerobias Estrictas. Ver a continuación un Esquema de Clasificación de las bacterias : BACTERIAS AEROBIAS O ANAEROBIAS FACULTATIVAS Bacterias Gram +Forma y DistribuciónBacterias Gram –Forma y DistribuciónStreptococosCocos dispuestos de a pares o en cadenaNeisseriasAcinetobacterMoraxellaCocosCocosCocosSataphylococosCocos en racimoEnterobacterias sp.Pseudomonas sp.BacilosBaciloBacillusBacilo EsporuladoVibrioComaCorinebacteriumBaciloHelicobaceterCampilobacerEspiralEspiral BACTERIAS ANAEROBIAS ESTRICTAS Bacterias Gram +Forma y DistribuciónBacterias Gram –Forma y DistribuciónPeptoesteptococosCocos en cadenaVeillonelaCocoPeptococosCocos en racimoBacteroidesBaciloClostridiumBacilo EsporuladoFusobacteriumAhusadaActnomycesBacilo------ BACTERIAS QUE NO SE TIÑEN CON GRAM MYCOPLASMAS : No tienen Pared MICOBACTERIUM (TUBERCULOSO Y LEPRAE) : Son BAAR (bacilos ácido alcohol resistentes), se tiñen con Ziehl Neelsen. No pedir Cultivo ESPIRILOS (TREPONEMA PALIDUM) : es una espiroqueta, que se tiñe con Giemsa o impregnación Argéntica; visibles a la microscopía de campo oscuro o de contraste de fase. No pedir Cultivo CHLAMIDEAS (PNEUMONIAE Y TRACHOMATIS) : Son de Parásitos Intracelular Obligados RELACION HUÉSPED – BACTERIA : CONCEPTO DE : INFECCIÓN BACTERIANA= Es la entrada, establecimiento y multiplicación de bacterias en la superficie o interior del huésped que va asociada a una Respuesta específica ; pudiendo o no ser acompañada de manifestaciones clínicas. COLONIZACIÓN BACTERIANA= Capacidad de las bacterias para establecerse y multiplicarse en la piel y/o mucosas del huésped en cantidades suficientes que permitan mantener un cierto número poblacional; sin que su presencia establezca o determine Respuestas clínicas ni inmunológicas. INFECCIÓN INAPARENTE o SUBCLÍNICA (ASINTOMÁTICA) : Es aquel establecimiento de bacterias , que si bien induce una respuesta orgánica específica, no va seguida de manifestaciones clínicas. Esto se debe a que hay un escaso Nº de Bacterias, a que éstas son poco virulentas o a que el huésped presenta un normal funcionamiento de sus defensas. ENFERMEDAD INFECCIOSA : Son aquellas enfermedades causadas por múltiples agentes patógenos(bacterias, virus, hongos y parásitos). Dichos agentes interactúan con el organismo humano de diferentes maneras, resultando así una relación que está dada por : Presencia del Agente, Toxinas o Enzimas Enfermedad Infecciosa Respuesta Inmune del Huésped Las enfermedades infecciosas se produce cuando tras el establecimiento de las bacterias surgen alteraciones y/o manifestaciones clínicas. Esto se debe a que hay un gran Nº de Bacterias, a que estas son muy virulentas o a que determinadas circunstancias produjeron una depresión de los mecanismos defensivos del huésped, lo que interfiere con la Respuesta Inmunitaria. PATOGENICIDAD O PODER PATÓGENO = Es la capacidad de producir daño o enfermedad por parte de una determinada especie de microorganismo. Hace referencia a la especie. El poder patógeno no solo depende de la especie de microorganismo sino también de las características del huésped: Nº de Bacterias + Virulencia (Mecanismos de Acción Patógena y factores de virulencia) Enfermedad Grado de Resistencia Organica (Grado de Resist. Específica e Inespecífica del Huésped) VIRULENCIA = Es el mayor o menor grado de Patogenicidad que posee un microorganismo. Hace referencia a la cepa de determinado microorganismo. CONCEPTO DE FLORA BACTERIANA NORMAL :Es la población de microorganismos que residen en piel y/o mucosas de las personas sanas. Tales microorganismos en su mayoría son bacterias, hongos, virus y parásitos. La composición de la FN es variable y depende de factores como las características zonales del organismo, la edad, el sexo, su alimentación, la higiene personal, el clima, las condiciones socioeconómicas de la población y el grado de saneamiento ambiental. Respecto a las características zonales del organismo, diremos que estas difieren según : Condiciones físico – químicas (humedad Temperatura y pH) Potencial de oxidoreducción Condiciones nutritivas (cantidad y calidad de nutrientes) Presencia de receptores específicos en la MP de las células huéspedes. Presencia de Sust. Inhibidoras (Lisozimas, Bacteriocinas, Ac. Grasos no saturados, Ig A secretoria) Cabe destacar que los microorganismos están ampliamente distribuidos en la naturaleza, por ello el hombre se encuentra expuesto constantemente a los mismos desde su nacimiento (en el pasaje por el canal vaginal) y luego por contacto y exposición. El hombre presenta zonas potenciales de colonización que reúnen las condiciones fisico- químicas, nutricionales, etc. que pueden resultar adecuadas o no para la supervivencia y multiplicación de diversas especies de microorganismos. IMPORTANCIA DE LA FLORA NORMAL = Sirve como Barrera frente a microorganismos patógenos u oportunistas En el tubo digestivo es beneficiosa para la digestión de productos no atacables por los fermentos digestivos del sujeto, así como también contribuyen a la síntesis de algunas vitaminas como la vit. K CONCEPTO DE BACTERIOFAGO o FAGO : Virus cuyo huésped natural son las bacterias, en las que se reproducen. En algunas especies bacterianas los Fagos juegan un papel importante en la trasmisión de información genética de una bacteria a otra, pudiendo (mediante trasducción) ser los encargados de trasmitir factores de resistencia a los antibióticos, como ocurre con los Staphylococos. En otros casos el ingreso de un fago a una bacteria determina que el genoma viral se integre al de la bacteria, de tal forma que los genes parasitados por el fago pueden determinar que se expresen nuevos caracteres en el fenotipo (Lisogenia por fagoconversión); así el Corinebacterium Diphtheriae sólo será patógeno ( por lo tanto toxigénico) cuando se halle parasitado por un fago. AGENTES ANTIMICROBIANOS (ANTIBIÓTICOS O ATB) .- TIPOS : Pueden ser Bactericidas o Bacteriostáticos Bactericidas : ATB con capacidad para destruir microorganismos sensibles o susceptibles, sin que medie la participación de las defensas humorales o celulares del huésped. Bacteriostáticos : ATBG que inhiben de forma reversible los procesos metabólicos esenciales de cierta bacteria. Origen de Agentes Microbianos : ATB Verdaderos : Son sustancias de origen biológico como por ej. las penicilinas, quienes derivan de un hongo del género penicillium. Quimioterápicos verdaderos : Son sustancias que derivan de síntesis química, como por ej. las sulfamidas, las cuales surgieron de los estudios realizados sobre las anilinas. Agentes Antimicrobianos Nuevos : Son Sustancias obtenidas por manipulación molecular de ATB verdaderos y/o Quimioterápicos verdaderos, con el fin de ampliar sus espectros de acción sobre microorganismos o bien para mejorar sus características farmacológicas. .- CLASIFICACIÓN SEGÚN SU SITIO DE ACCIÓN : Acción del ATBFamiliaDrogaEn General tienen eficacia frente aInhibidor de la Síntesis de Pared - LACTÁMICOSPEPTÍDICOSOtrosPenicilinasCefalosporinasMonobactámicosCarbapenemasVANCOMICINATEICOPLANINABACITRACINAFosfomicinaCicloserinaStreptococos, Staphylococo y Treponema Pallidum (no resistente a la penicilina), Neisseria Gonorrhoeae, Clostridium, Bacillus, Pseudomona, Enterobacterias, etc. No actúa frente a bacterias Gram – Bacterias Gram + y Staphylococos resistentes a la penicilina. No actúan sobre las bacterias Gram – Alterar la Permeabilidad de la Memb. PlasmáticaPOLIPEPTIDICOSPOLIMIXINA BPOLIMIXINA E (colistina)Sólo actúan frente a bacterias Gram – Actuar por Competencia MetabólicaSULFONAMIDASDIAMINOPIRIMIDINASSulfamidaTrimetroprimaBacterias Gram + sintetizadoras de Ac Fólico como ChalamydeasInfecciones : Urinarias y respiratorias (no estrepto-cósicas) y gastrointestinales por ShigellaAlterar la Información GenéticaQUINOLONASANSAMICINASMETRONIDAZOLAc. NalidixicoNorfloxacinaCiprofloxacinaRifampicinaBacterias Gram + como Gram – utilizándose en I.U., I.de Tej Blandos, I. R. No Neumocósicas.Bacterias Gram + como Gram – (Mycobacterium Tuberculoso, Haemophylus Infleuenzae, Chalmydeas)Inhibidores de la Síntesis ProtéicaMACROLIDOSLINCOSAMIDASANFENICOLESAMINOGLUCÓSIDOSTETRACICLILNASESPECTINOMICINAEritromicinaRoxitromicinaAzitromicinaClaritromicinaLINCOSAMIDACLINDAMICINACLORAMFENICOLEstreptomicinaGentamicinaAmikacinaKanamicinaNeomicinaTobramicinaNetilmicinaVIBRAMICINAMINOCICLINASStreptococo Pneumoniae, Corinebacterium, Micoplasma, Chlamydeas, Clostridium Tetani, Campylobacter. Se utiliza también como reemplazo de las penicilinas en personas alérgicas Bacteroides y otros Anaerobios. No son útiles en meningitis ni para Clostridium DificcileSalmonella Tiphy, BacteroidesBacterias Gram + y Gram – . No actúan sobre bacterias AnaeróbiasEnterobacterias, Micoplasma, Rickettsias, Chlamydea (bacterias Gram + y Gram – ) Ver esquema de ATB al Dorso : .- RESISTENCIA BACTERIANA A LOS ATB : Debido al uso excesivo, inadecuado, frecuente e irracional de los ATB, las bacterias las bacterias se volvieron más resistentes a ellos; esto contribuyó a la selección de especies resistentes y a la aparición de microorganismos multiresistentes, que ante el vacío ecológico creado por el mal uso de ATB, encuentran condiciones favorables para la multiplicación y proliferación Los diferentes tipos de resistencia son : Resistencia Natural Resistencia Secundaria Resistencia Mutacional Resistencia Transferible .- SUSCEPTIBILIDAD DE LAS BACTERIAS A LOS ATB : Cuando la resistencia bacteriana comenzó a ser un fenómeno frecuente (debido al mal uso de los ATB) adquirió gran importancia el empleo de pruebas de sensibilidad antimicrobianas, ya que estas nos permiten determinar la respuesta a ellos por parte de cepas individuales dentro de cada especie. El empleo de ATB para cada antibiograma se debe decidir en función de : la especie aislada, de los ATB disponibles en la institución y del foco de la infección. CONCEPTO DE ANTIBIOGRAMA : Conjunto de procedimientos que permiten determinar la sensibilidad in vitro de un microorganismo ante un determinado ATB. Las pruebas de sensibilidad o susceptibilidad antimicrobianas que se utilizan para determinar la actividad de un ATB frente a una cepa en particular, son principalmente de 2 tipos : DILUCIÓN EN CALDO = Puede realizarse en medios de cultivos líquidos o sólidos. Es un método cuantitativo que sirve para determinar la sensibilidad y resistencia de las bacterias. Consiste en determinar el crecimiento de una bacteria en presencia de concentraciones decrecientes de ATB. Este método permite determinar la CIM (concentración Inhibitoria mínima) y la CBM (concentración bactericida mínima). Para determinar la CIM se utilizan una serie de tubos de ensayo en los cuales se va colocando sucesivamente el ATB a doble dilución; luego se siembra el microorganismo. La CIM corresponderá al primer tubo de ensayo donde no se observe turbidez (la turbidez indica que existe crecimiento bacteriano). Para determinar la CBM seleccionamos los tubos donde no observemos turbidez y sembramos su contenido sobre un medio de cultivo sólido, luego observaremos si hay o no desarrollo de colonias. LA CBM corresponderá a aquella dilución donde no ha crecimiento bacteriano alguno. DIFUSIÓN EN DISCOS DE AGAR = Se realiza en medios sólidos y es la prueba más usada (de rutina) en los laboratorios. Permite probar la eficacia de varios ATB al mismo tiempo. Con este método determinamos la CIM . Para ello se siembra, en un medio de cultivo sólido (Agar), una suspensión de microorganismos (108 UFC/ml ) y sobre esto se colocan discos o monodiscos de papel embebidos en concentraciones arbitrarias y conocidas de ATB. En el Agar húmedo , el ATB difunde desde los discos, con lo cual su concentración va decreciendo a partir del disco. Luego se incuba adecuadamente (EJ. 24 – 48 HS) y a continuación observaremos los Halos de Inhibición del Crecimiento Bacteriano; inmediatamente medimos (en mm) el diámetro que poseen los halos de inhibición. El Punto de corte de los halos , corresponde a un valor de CIM equivalente a la concentración de ATB que se alcanza en suero. Finalmente se compara la lectura realizada con tablas internacionales y se determina la sensibilidad o resistencia del microorganismo, clasificando a la cepa como Sensible (S) o Resistente y/o Intermedia (R) para ese ATB. CIM : (CONCENTRACION INHIBITORIA MINIMA) Es la concentración más baja de un ATB capaz de inhibir el crecimiento de un microorganismo en condiciones estandarizadas. CIM por E–Test : Consiste en aplicar sobre un medio de cultivo, donde se encuentra el microorganismo a ensayar, tiras plásticas que llevan incluidas un gradiente de concentración de un determinado ATB. Luego se incuba adecuadamente y se observa la formación de una elipse de inhibición de crecimiento. Las Ventajas de este método frente al de CIM por Dilución : Brinda un resultado de la CIM más exacto Es en método menos laborioso Las Desventajas de CIM por E – Test frente al de CIM por Dilución : No se puede determinar CBM Es un método muy costoso CBM : (CONCENTRACION BACTERICIDA MINIMA) Es la concentración más baja de un ATB capaz de destruir una porción predeterminada de un inóculo (en general el 99,9 %) en un tiempo determinado. Corresponde a la dilución donde no se observa crecimiento alguno de microorganismos. Es importante que la concentración de ATB en el foco de infección supere por lo menos 10 veces la CBM. Las situaciones clásicas que requieren realizar una CBM son : Infecciones en pacientes neutropénicos severos. Meningitis Endocarditis Osteomielitis Como guía para seleccionar la dosis adecuada a ser administrada, puede utilizarse la medición de la concentración de ATB en el suero del paciente; para lo cual se toma una muestra de suero del paciente (bajo tratamiento ATB) antes de la administración de una nueva dosis endovenosa (en el valle de la curva de concentración) y luego se toma otra muestra al terminar la infusión endovenosa (en el pico de la curva de concentración). Esto permite determinar el PIS y el PBS para monitorear y eventualmente corregir la dosificación del ATB empleado. PIS : (PODER INHIBITORIO DEL SUERO) Es la mayor dilución de un ATB en el suero del paciente, capaz de inhibir el desarrollo visible de un microorganismo. PBS : (PODER BACTERICIDA DEL SUERO) Es la mayor dilución de un ATB en el suero del paciente, capaz de matar al inóculo en un 99,9 % VIRUS Son microorganismos subcelurares, que se comportan como parásitos intracelulares estrictos CARACTERÍSTICAS GENERALES : Poseen tamaño ultramicroscópico (invisibles al M.O., salvo el Poxvirus). Su estructura elemental está formada por 1 sólo tipo de ácido nucléico (ARN o ADN), contenido en la capside, la que a su vez puede o no estar rodeada por una envoltura lipoprotéica o peplos. Carecen de organelas y no poseen ribosomas (sólo algunos virus mayores contienen algunos fermentos). En medios inanimados se comportan como partículas inhertes ya que en ellos son incapaces de crecer y multiplicarse. En el medio intracelular el Ácido Nucleico viral utiliza los mecanismos de biosíntesis de la célula huésped para replicarse e inducir la síntesis específica de sus proteínas que al integrarse al genoma replicado originarán nuevos viriones. No son sensibles a los ATB pero el Interferón inhibe su mecanismo de replicación. ESTRUCTURA y MORFOLOGIA : ACIDO NUCLEICO : Como ya dijimos posee un solo tipo de Ac. Nucleico (ARN o ADN) que puede encontrarse en forma monocatenaria, bicatenaria, lineal o circular. La función del ácido nucleico es suministrar la información para programar, en la célula huésped, la síntesis de sus propios componentes. CAPSIDE : Es una cubierta proteica que rodea al Ac. Nucleico viral, protegiéndolo y facilitándole la penetración en la célula susceptible. Está compuesta por subunidades proteicas, llamadas CAPSÓMEROS, los cuales se acoplan siguiendo un orden simétrico que le confiere al virus su morfología particular : Simetría Icosaédrica = Los capsómeros forman una figura geométrica compuesta por 20 caras, 30 aristas y 12 vértices. Simetría Helicoidal = Lo capsómeros adoptan la forma de un espiral rígido o con aspecto de resorte o pelota. Simetría Mixta = Los capsómeros dan una simetría combinada de las 2 anteriores; por ej. a los Bacteriófagos (virus que parasitan bacterias) quienes presentan una cabeza de simetría Icosaédrica y una cola de simetría helicoidal especializada en inyectar el Ácido Nucleico a la bacteria Simetría Compleja = Como por ej. la del Poxvirus. ENVOLTURA O PEPLOS : Se trata de una membrana Lipoprotéica que envuelve la nucleocapside viral (Ácido Nucleico + Capside) protegiéndola. En algunos virus, de la envoltura parten proyecciones o espículas de naturaleza glucoprotéica. Según la presencia o no de envoltura, los virus pueden dividirse en : Virus Desnudos = Su nucleocapside no se encuentra rodeada de peplos; son resistentes a las condiciones del medio ambiente, a la bilis y esto se debe a la estructura proteica de la capside. Virus Envueltos = Su nucleocapside está rodeada por peplos; estos virus son sensibles a factores ambientales tales como : sequedad, al pH gástrico a la bilis, etc. debido a que el peplos por su estructura lipídica torna más vulnerable al virus. CONCEPTO DE VIRION : Se denomina así a la partícula viral completa posea o no envoltura. CONCEPTO DE VIROIDE : Partícula de ARN sin proteínas que infecta a vegetales CONCEPTO DE PRION : Partícula proteica infectante, sin Ac. Nucleico que causa enfermedades en animales como la encefalitis espongiforme (mal de la vaca loca) CLASIFICACIÓN de los VIRUS : Virus ADN : Virus ADN(Familia)Virus de Importancia MédicaEstructura del ADNSimetría de la CapsideCon o sin Envoltura (Peplos)ADENOVIRIDAE- AdenovirusBicatenario, lineal, configurado en sentido + y – IcosaédricoDesnudoPAPOVIRIDAE- Papilomavirus Humano- Poliomavirus (JC y BC)Bicatenario, circular, configurado en sentido + y – IcosaédricoDesnudoHERPESVIRIDAE- Herpes Simples (VHS)- Varicela Zoster (VVZ)- Citomegalovirus (CMV)- Epstein-Barr (VEB)Bicatenario, lineal configurado en sentido + y – IcosaédricoEnvueltoHEPADNAVIRIDAE- Virus de la Hepatitis B (VHB)Bicatenario, circular incompleto, configurado en sentido + y – IcosaédricoEnvueltoPOXVIRIDAE- Virus de la Viruela (VV)- Virus de la VacciniaBicatenario, lineal, configurado en sentido + y – ComplejaEnvueltoPARVOVIRIDAE- Virus B19Monocatenario, lineal configurado en sentido + o – IcosaédricoDesnudo Virus ARN : Virus ARN (Família)Virus de Importancia MédicaEstructura del ARNSimetría de la CapsideCon o sin Envoltura (Peplos)CALCIVIRIDAE- Virus NorwalkMonocatenario, Configurado en sentido +IcosaédricaDesnudoPICORNAVIRIDAE- Virus de la Hepatitis A (VHA)- Enterovirus: Virus ECHO Virus Coxsackie A y B- Rinovirus- PoliovirusMonocatenario, lineal, configurado en sentido +IcosaédricaDesnudoREOVIRIDAE- Rotavirus- ReovirusBicatenario, lineal Configurado en sentido + y – IcosaédricaDesnudoRETROVIRIDAE- HIV- HTLVMonocatenario, lineal, segmentado en 2, configurado en sentido +IcosaédricaEnvueltoTOGAVIRIDAE- Virus de la Rubéola- Virus de la Fiebre AmarillaMonocatenario, lineal, no segmentado, configurado en sentido +IcosaédricaEnvueltoCORONAVIRIDAE- CoronavirusMonocatenario, lineal, no segmentado, configurado en sentido +HelicoidalEnvueltoORTHOMYXOVIRIDAE- Virus Influenza (o virus de la gripe)Monocatenario, lineal segmentado en 8, configurado en sentido – HelicoidalEnvueltoPARAMYXOVIRIDAE- Virus ParaInfluenza- Virus Sincitial Rspirat.- Virus de la Parotiditis- Virus del SarampiónMonocatenario, lineal, no segmentado, Configurado en sentido – HelicoidalEnvueltoRHABDOVIRIDAE- Virus de la RabiaMonocatenario, lineal, no segmentado, Configurado en sentido – HelicoidalEnvueltoARENOVIRIDAE- Virus de la Coriomeni-ngitis Linfocítica (VCL)Monocatenario, Circular, segmentado en 2 con extremos cohesivos, configurado en sentido – HelicoidalEnvueltoFILOVIRIDAE- Virus del Ebola- Virus de MarburgMonocatenario, lineal, configurado en sentido – ComplejaEnvuelto REPLICACIÓN VIRAL : Los virus carecen de metabolismo y se comportan como partículas inhertes en medios inanimados, pero dentro de las células susceptibles, el Ac. Nucleico viral emplea los mecanismos de biosíntesis célula para replicarse e inducir la síntesis de proteínas específicas que posteriormente se integraran al genoma replicado para originar nuevos viriones, los cuales se liberaran de la célula huésped para luego infectar otras células. Las etapas de la Replicación Viral son : Iniciación, Expresión y replicación, ensamblaje y liberación. (Ver esquema) ETAPA DE INICIACIÓN : Comprende los pasos de Adsorción (Adherencia), Penetración y Desnudamiento. Adsorción o Adherencia a la Célula : Este hecho dependerá de la interacción entre las moléculas de la capside (virus desnudos) y/o del peplos (virus envueltos), con las moléculas superficiales de la MP (receptores) de la célula huésped . Penetración : El virión puede entrar en la célula huésped por : Traslación directa a través de la MP Virus Desnudos Por captación del virión a través de fagosomas Por fusión del peplos a la MPVirus Envueltos Desnudamiento o pérdida de la cubierta : El peplos y/o la capside se desprenden y el Ac. Nucleico viral es liberado hacia el citoplasma celular ETAPA DE EXPRESIÓN Y REPLICACIÓN : La forma en que se da la replicación viral dependerá de la naturaleza de su Ácido Nucleico. Esta etapa comprende 3 pasos a saber : la Síntesis de ARNm viral, la Traducción del ARNm viral y la Replicación del Genoma viral (ácido nucleico viral) : Síntesis del ARNm Viral = Los Virus cuyo Genoma es ADN : Utilizan la ARN polimerasa del huésped para transcribir directamente del ADN viral, la síntesis del ARNm viral. Los virus cuyo genoma es ARN : Utilizan una ARN polimerasa viral, la cual puede estar contenida en la nucleocapside o ser sintetizada después de la infección a la célula. Los Virus ARN Bicatenario = Utilizan una Polimerasa Viral para transcribir una cadena en ARNm viral. Los Virus ARN Monocatenarios = Tienen 3 vías para distintas para formar ARNm viral. Es importante aclarar que esto dependerá del sentido (+ ó – ) de configuración de la cadena del ARN viral (es decir si tiene o no la secuencia necesaria de bases para la traducción) : Los Virus ARN de Cadena configurada en Sentido + : Es decir que tiene la secuencia de bases necesarias para la traducción; por lo tanto utilizan directamente esta cadena de ARN como ARNm viral. Los Virus de Cadena configurada en Sentido – : Es decir no tienen la secuencia de bases necesarias para la traducción; por lo tanto utilizan una polimerasa viral que transcriba dicha cadena de ARN en una cadena de ARN configurada en sentido +, que podrá actuar como ARNm viral. Los Retrovirus : (ARN Monocatenarios de cadena configurada en sentido +) Primero utilizan una Transcriptasa Inversa Viral, contenida en su nucleocapside, que lo transcriba en una cadena de ADN Monocatenario configurada en sentido – , inmediatamente después se forma ADN Bicatenario que ingresa al núcleo celular integrándose al genoma del huésped. Luego ese ADN viral (integrado al genoma celular), por obra de una polimerasa del huésped será transcrito en ARNm viral VIRUS ADN VIRUS ARN BicatenarioVIRUS ARN Monocatenario RETROVIRUS (ARN Monocatenario) Cadena + Cadena – Cadena + Cadena + Cadena – Cadena de ADN Monocatenario – Cadena + ADN Bicatenario Transcribe directamenteUtilizada como Utilizada Directamente como desde el ADN el Ingresa al Núcleo Celular y se integra al genoma del huésped ARNm VIRAL En los Ribosomas será traducido a Proteínas Virales necesarias para formar el nuevo virión Traducción del ARNm Viral = Ocurre en los Ribosomas citoplasmáticos de la célula huésped; el ARNm viral los utiliza para sintetizar proteínas virales (enzimas y moléculas reparadoras) que le permitan replicar el genoma viral, así como también induce la síntesis de proteínas necesarias para la formación de la capside. Replicación del Genoma Viral = Para ello utiliza las polimerasas virales y/o las del huésped para actuar sobre el Ac. Nucleico viral, transformándolo en una plantilla de transcripción configurada en sentido contrario al original, que servirá de molde para la producción de numerosas cadenas de Ac. Nucleicos virales (con la configuración original) En los Virus ADN : la replicación del genoma ocurre en el núcleo de la célula huésped (excepto el Poxvirus, que se replica en el citoplasma), previa utilización de una polimerasa (viral o del huésped). Por ejemplo : en el Herpes Virus, el ARNm viral traducido en los ribosomas citoplasmáticos produce una ADN polimerasa indispensable para síntesis de nuevo ADN viral; mientras que el Adenovirus utiliza enzimas virales y del huésped para conseguir el mismo fin. En los Virus ARN : la replicación del genoma ocurre en citoplasma de la célula huésped (excepto los virus de la gripe o Influenza y el virus del sarampión que se replican en el núcleo). El mecanismo de replicación dependerá del tipo de cadena y del sentido de su configuración: Virus ARN Monocatenario configurado en sentido + : El ARN viral (de configuración +) es utilizado directamente como ARNm viral y en los ribosomas, al ser traducido, produce una ARN polimerasa viral que originará, a partir de la plantilla de ARN de configuración +, un ARN viral de configuración – , que luego es trascripto repetidamente en muchas cadenas positivas, formando la progenie. (Ej. Poliovirus) Virus ARN Monocatenario configurado en sentido – : El ARN viral (de configuración –), primeramente por obra de una polimerasa viral es trascripto en ARNm viral de sentido +, éste será traducido en los ribosomas produciendo una ARN polimerasa viral, ésta polimerasa luego origina, a partir de la plantilla de ARN de configuración – , un ARN viral de configuración +, que será trascripto repetidamente en muchas cadenas negativas; es decir, se forma la progenie. (Ej. Virus de la Rabia) Virus ARN Bicatenarios : En este tipo de virus la polimerasa viral actúa sobre la cadena de ARN de configuración – transcribiéndola en ARNm viral de sentido +, luego ésta cadena actúa como plantilla para la síntesis de nuevas cadenas de sentido – a fin de reestablecer la condición bicatenaria de la progenie. (Ej. Rotavirus) Retrovirus (ARN Monocatenarios de sentido +) : En este tipo de virus el ARN viral, por obra de una transcriptasa inversa, se transforma en ADN viral el cual se integrará al genoma del huésped en el núcleo celular; allí utiliza una ARN polimerasa del huésped para transcribir a partir del ADN viral la síntesis de ARN viral. ETAPA DE ENSAMBLAJE Y LIBERACIÓN DE LA PROGENIE VIRAL : El Ensamblaje de viriones consiste en la formación de una nueva nucleocapside, puede darse en el núcleo o en el citoplasma de la célula huésped. La Liberación de viriones consiste en el desprendimiento de los virios del medio intracelular, esto puede darse por: Citólisis de la célula huésped : Los virus desnudos utilizan este mecanismo que consiste en la lisis celular cuando está repleta de nuevos viriones Gemación : mecanismo utilizado por los virus envueltos (los que poseen peplos). Este tipo de virus originan su envoltura a partir de zonas específicas de la MP y/o de la Memb. Nuclear, donde previamente el ARNm viral insertó proteínas y glucoproteínas. Por este mecanismo no siempre se causa la muerte inmediata de la célula huésped (por destrucción de su MP); de tal forma que la célula infectada puede continuar liberando viriones durante largos períodos de tiempo. ANTIVIRALES CONCEPTO DE DROGAS ANTIVIRALES : Son drogas que interfieren con el ciclo intracelular de la replicación, impidiendo la formación de una progenie viral infecciosa. Su mecanismo de acción interfiere con los pasos bioquímicos esenciales de la replicación viral. CONCEPTO DE ACCION VIRUCIDA : Son soluciones formoladas, fenoladas, iodadas, Ac. Oxidantes, Hipocloritos, etc., que actúan directamente sobre la partícula viral infectante, antes de que ingrese al huésped susceptible. Son utilizadas en la desinfección de ambientes y equipamiento. CONCEPTO DE INMUNOMODULADORES : Son drogas que modifican la respuesta inmune del huésped, induciendo la destrucción de las células infectadas y/o evitando que la acción citotóxica del virus genere un daño que ponga en peligro la vida del individuo. Dentro de este grupo de drogas se incluyen los INTERFERONES PRINCIPALES ANTIVIRALES : AMANTADINA Y RIMANTADINA : Son útiles en la profilaxis contra infecciones por Virus Influenza Tipo A; actuando sobre la etapa de iniciación de la replicación viral. Sus efectos adversos más importantes son : el insomnio y el nerviosismo (los que desaparecen al suprimir el tratamiento). RIBAVIRINA : Actúa frente al Virus Sincitial Respiratorio (VSR), Virus Influenza Tipos A y B, Virus ParaInfluenza, Virus del Sarampión, Virus de la Hepatitis A y HIV Efectos Adversos En Aerosol : No se observa una toxicidad significativa. Por Vía Oral y/o Intravenosa : Provoca Anemia transitoria y Aumento de la Bilirrubina. GANCICLOVIR : Tiene acción frente a la replicación del Citomegalovirus; empleándose para el tratamiento de la colitis, esofagitis, retinitis y neumonías causadas por este virus en pacientes inmunodeprimidos. Entre sus Efectos Adversos destacamos: A largo plazo puede ser responsable de una mielosupresión. ACICLOVIR : Es un antiviral eficaz en infecciones por Virus Herpes Simples y Herpes Zoster VIDARAVINA : Es activa contra las células mutadas por infección del Virus Herpes Simples (resistentes al Aciclovir), por lo que resulta efectivo en el tratamiento del Herpes Neonatal, la Encefalitis Herpética, la Queratitis Herpética. También tiene acción frente al Virus Varicela Zoster por lo que resulta muy útil actualmente para tratar la varicela de los inmunodeprimidos. Entre sus efectos adversos destacamos : Trastornos Gastrointestinales (Náuseas, Vómitos y Diarreas) Trastornos Neurológicos (Parestesia, Ataxia, etc) A elevadas dosis : puede causar anemia megaloblástica, Leucopenia y trombocitopenia. AZIDOTIMIDINA (AZT), DDI, DDC, 3TC, 4DT : Actúan como análogos de nucleósidos , inhibiendo la síntesis de ADN por bloqueo de la transcriptasa inversa de los retrovirus (HTLV, HIV 1 Y 2) Efectos Adversos : Mielosupresión, la cual no se prolonga más allá de los 6 meses. INDINAVIR, RITONAVIR Y NELFINAVIR : Son Activos contra el HIV HONGOS Son microorganismos de estructura celular eucariota (pudiendo ser unicelulares o pluricelulares); son heterótopos, aclorófilos y de metabolismo adsortivo. De Vida Libre = Estas especies digieren la materia orgánica mediante liberación de enzimas al medio externo (adsorción) Hay Especies Oportunistas =Son especies de vida libre que se pueden adquirir por inhalación o a través de heridas, tras lo cual pueden integrarse la flora microbiana normal (como la Cándida), siendo inofensivos para el huésped a menos que este presente compromiso de sus defensas. Patógenas = Son especies capaces de captar nutrientes directamente desde los tej. del huésped. CARACTERISTICAS PRINCIPALES : Poseen una pared celular rígida que contiene quitina, glucano, manano y otros polisacáridos. La MP es rica en esteroles Su citoplasma presenta Organellas (mitocondrias, Ret. Endoplasmático, etc) y además existe Flujo Citoplasmático. Poseen núcleo verdadero (Núcleo rodeado de Mem. Nuclear) y contiene varios pares de cromososmas (los filamentos de ADN están unidos por puentes histonas y proteínas). Tipo de reproducción : Sexual (hongos perfectos) o Asexual (hongos Imperfectos) Se cultivan sólo en medios ácidos, donde se desarrollan lentamente ya sea en forma de Levaduras o de filamentos (Hifas y/o Micelios). CLASIFICACIÓN de los HONGOS: SEGÚN LA FORMA DE CRECIMIENTO Y ESTRUCTURA 1.- LEVADURAS 2.- FILAMENTOSOS 3.- DIMORFICOS SEGÚN EL TIPO DE REPRODUCCIÓN a.- INPERFECTOS (realizan reproducción de tipo asexual) b.- PERFECTOS (realizan reproducción de tipo sexual) ESTRUCTURA Y MORFOLOGIA : (levaduriforme, filamentosa, dimórfica) LEVADURIFORME = Son Hongos Unicelulares de forma oval, inmóviles que se reproducen por gemación, bipartición o un proceso intermedio entre ambas. FILAMENTOSA = Son Hongos Pluricelulares, formados por estructuras tubulares denominadas Hifas; las que se desarrollan, ramifican y entrelazan conformando una estructura llamada Micelio. HIFAS : Son túbulos cilíndricos ramificados, de diámetro variable, tabicados o no, constituidos por una pared celular rígida, delgada y transparente que contiene una masa citoplasmática multinucleada y móvil. Las hifas pueden tener una serie de elementos que cumplen diferentes funciones, como por ejemplo : Rizoides = Penetran en el sustrato primitivo en busca de alimentos Depredadores = para la captura Órganos Aspersorios = Para la fijación Estolones = Para la búsqueda de nuevas zonas nutricionales MICELIOS : Conjunto de hifas ramificadas, entrelazadas y de disposición variable. Los Micelios pueden ser : Micelio Aéreo o Reproductor = Es la parte del micelio que se proyecta por encima del sustrato y que se encarga de función reproductora y de dispersión de la especie mediante esporas. Micelio Vegetativo = Es la parte del micelio que penetra en el sustrato (superficie del suelo, plantas, alimento, etc.)para absorber sustancias nutricionales. PSEUDOMICELIO : Es una estructura de transición entre la colonia ( talo) unicelular o pluricelular que presentan algunos hongos unicelulares como la Cándida. DIMÓRFICA = Son Hongos que pueden existir tanto en forma de levadura o filamentosa, según el medio en el que se encuentren. Ej. Histoplasma Capsulatum, Coccidioides, Paracoccidioides, Blastomyces, Sporothrix, etc. FORMAS DE CRECIMIENTO : Por ESPORAS : Las esporas son elementos de reproducción y resistencia que se forman por condensación del citoplasma y contenido nuclear, de manera que de una célula madre se origina 4 o más elementos hijos (cada uno de los cuales contiene una parte del núcleo primitivo); las esporas están envueltas por una cubierta resistente (consistente en 2 membranas , una interna y otra externa) y pueden albergar una o más células divididas por septos. Poseen un esporo germinativo de donde surgirá una nueva hifa en el momento del desarrollo. Tipos : Exosporas o Conidios : Esporas asexuales que nacen por brotación en el extremo de un filamento de micelio; según su tamaño se designarán como micro o macroconidios. Endosporas o Gonidios : Son esporas que se forman en el interior del esporangio (vesícula que contiene esporas) Clamidiosporas : Son esporas asexuales de pared gruesa y en reposo Cigosporas : Son esporas formadas por la conjugación entre los filamentos de micelio Por OIDIOS : Estadio imperfecto de los hongos de la familia Erysiphaceae que permite el crecimiento por separación de un parte del micelio y posterior reproducción por gemación (reproducción asexual) REPRODUCCIÓN : Puede ser de dos tipos : ASEXUAL : La realizan los denominados hongos imperfectos. Se da a partir de un micelio, sin conjugación nuclear, ni reducción de cromosomas. Puede llevarse a cabo por : Brotación o Gemación = Consiste en la formación de una yema en una determinada zona de la célula madre; a medida que la célula hija aumente de tamaño se irá separando de la célula madre. Bipartición (Esporulación – Germinación) : Mediante este mecanismo se forman esporas que luego , en un medio adecuado, germinarán. La Célula vegetativa (directamente): TALOSPORAS (astrosporas, blastosporas y clamidiosporas) Estructuras Especiales: CONIDIOS (esporas asexuales que surgen Esporas desarrolladas por gemación y que se liberan por a partir de hifas abstricción; según su tamaño se nombran como micro o macroconidios ESPORANGIOSPORAS (estas se forman dentro de una estructura sacular , llamada esporan-gioforo, en los extremos de las hifas no tabicadas) Fragmentación : Por este mecanismo las hifas se fragmentan y c/u de esos fragmentos crecerá y regenerará, dando origen a una nueva colonia. SEXUAL : Este tipo de reproducción la realizan los denominados hongos perfectos. Consiste en fusión de 2 núcleos haploides sexualmente diferentes, de la unión surge una célula diploide (zigoto) que por división meiótica originará 4 células haploides , las cuales se rodean por una gruesa cubierta constituyendo las esporas (ej. zigosporas, ascosporas, oosporas). CLASIFICACION DE LAS MICOSIS PROVOCADAS – ANTIMICÓTICOS EMPLEADOS : MICOSIS SUPERFICIALES : Se pueden tratar con Itraconazol Tipo de Micosis SuperficialLocalización de la LesiónGénero y Forma de CrecimientoEnfermedad RepresentativaAntimicótico Empleado en el TratamientoCutáneaPelo y Estrato Córneo de la piel (muerta)Malassezia (levadura)Microsporum (filamentoso)Trichophyton (filamentoso)Epidermophyton (filament.)Tiña VersicolorDermatofitósis (Tiñas)KetaconazolGriseofulvinaMiconazol, Econazol, Fluconazol, Isoconazol, Ketaconazol y ClotrimazolSubcutáneaTej. Celular SubcutáneoSporothrix (dimórfico)Varios Géneros (filament.)EsporotricosisMicetomaAnfotericina B MICOSIS PROFUNDAS : Se pueden tratar con Itraconazol (a criterio médico) Tipo de Micosis SuperficialLocalización de la LesiónGénero y Forma de CrecimientoEnfermedad RepresentativaAntimicótico Empleado en el TratamientoSistémicasOraganosInternosHistoplasma (Levadura)Coccidioides (levadura)Paracoccidioides (levadura)Blastomyces (Levadura) HistoplasmósisCoccidioidomicosisParacoccidioidmicosisBlastomicosisAnfotericina BOportunistasOrganosInternosAspergillus (Filamentoso)Candida (levadura)CryptococcusAspirgilosisCandidiasisCriptococosisMiconazol, Econazol, Fluconazol, Isoconazol, Ketaconazol y Clotrimazol ESTERILIZACIÓN (ANEXO 1) ESTERILIZAR =Procedimiento Físico–Químico que mata toda forma de vida , en estado vegetativo y/o esporulado (forma de activa y forma de resistencia respectivamente). DESINFECTAR = Es eliminar todos los Microorganismos pero no sus formas de resistencia. DESINFECTANTE = Sustancia química que produce la desinfección de material y que, por sus características, resulta tóxica o irritante para los tejidos vivos; por lo que su uso está limitado a objetos y/o superficies inanimadas. ANTISÉPTICO = Es una solución que puede provocar inhibición del crecimiento microbiano y/o la muerte de los microorganismos; y que , por sus características químicas puede ser aplicada sobre tejidos vivos (piel, mucosas, heridas, etc.) AGENTES ESTERILIZANTES : QUÍMICOS SUST. QUÍMICAS EN SOLUCIÓN Glutaraldehído, Alcoholes Jabones, Detergentes Metales Pesados (Cu++ - Ag+) Halógenos (Cl – o Yodo) Azul de Metileno (colorante) GASES O VAPORES Oxido de Etileno Glicoles FISICOS CALOR HUMEDO : El calor desnaturaliza las proteínas y los Microorganismos mueren por coagulación. Vapor a Presión Atmosférica = (Autoclave) Basado en el principio de que el agua calentada en un recipiente cerrado genera vapor que queda retenido bajo presión, alcanzando altas temperaturas sin hervir (a 1 atm de presión alcanza una Temperaturas de 130 ºC y esteriliza los materiales en 30 min.) Además el vapor tiene la capacidad de permear sust. porosas por condensación. Es Utilizado para esterilizar ropa y medios de cultivo, látex, gomas, etc. Tindalización = Utilizada para sust. sensibles a las altas temperaturas bajo presión, pero que pueden soportar 100 ºC. Durante 3 días, dejando periodos de incubación a 37 ºC durante 24 hs entre c/u de ellos, el material se calienta a 100 ºC durante 30 - 60 min. (en el primer calentamiento mueren las formas vegetativas de los microorganismos). Luego se incuba. La incubación permite que algunas formas de resistencia germinen, por lo que el segundo calentamiento sirve para eliminarlas y el tercer calentamiento tiene por finalidad asegurar una buena esterilización Vapor ajo Presión Ebullición CALOR SECO : Se emplean temperaturas más elevadas que desnaturalizan proteínas matando a los microorganismos por oxidación. Flameado = Utilizado para esterilizar artículos metálicos. Mediante incineración se destruyen microorganismos presentes en materiales patógenos, gasas, colchones, ropa, etc. Aire Caliente = Se emplean temperaturas de 160 ºC, requiriéndose un cierto tiempo para que el aire caliente penetre (por lo que el objeto debe ser expuesto unas 2 hs.). El aire caliente actúa sobre los objetos por conducción (el calor es absorbido desde la superficie externa del objeto hasta calentar su interior), lo que hace que los microorganismos se deshidraten antes que se coagulen sus proteínas, por lo que su muerte es un proceso de oxidación o de incineración lenta. FILTRACIÓN : Consiste en hacer pasar los líquidos a través de filtros que retienen a los microorganismos. Este método se emplea con toda sustancia que pueda ser alterada por el calor ( ya sean sueros, vitaminas o medios de cultivo) RADIACIONES NO IONIZANTES : Rayos Infrarrojos = Tienen acción calorífica sobre el objeto irradiado Rayos U.V. = Actúan por 3 mecanismos a) Uniéndose a proteínas y bases a las que alteran; b) producen O3 en contacto con el aire y este elemento interacciona con las bacterias; c) transforma en parte el agua en agua oxigenada. RADIACIONES IONIZANTES : Incluyen Rayos X y Rayos Gamma, quienes producen inactivación del genoma bacteriano y muerte. Permiten la esterilización en frío (radioestrilización) en todos aquellos materiales que pueden ser alterados por acción del calor. BIOSEGURIDAD (ANEXO 2) MATERIAL BIOLÓGICO = Material orgánico o inorgánico que pueda contener o ser reservorio de agentes patógenos. EXPOSICIÓN = Contacto de : - Piel y mucosas no intactas - Piel y mucosas intactas pero por tiempo prolongado con material biológico - Lesión percutánea - Área extensa ACCIDENTE BIOLÓGICO = Toda exposición accidental de un individuo a un material biológico. Los procedimientos básicos ante un accidente biológico son : 1.- Manejo adecuado del personal expuesto 2.- Reporte del accidente (en ficha epidemiológica) 3.- Evaluación clínica del personal expuesto 4.- Tratamiento del personal expuesto CONCEPTO DE BIOSEGURIDAD = Es una disciplina encargada de prevenir accidentes biológicos, para ello se vale de un conjunto de medidas y controles destinados a disminuir el riesgo de exposición a agentes infecciosos o patógenos en clínicas, hospitales, industrias, etc. Objetivos Primarios: 1.- Proteger la vida del individuo, la comunidad y el medio ambiente. 2.- Evitar el contagio y/o infección del operador o terceros en un laboratorio que maneje material biológico Pretende : a.- Alertar sobre los riesgos potenciales b.- Brindar conocimientos necesarios sobre lasque permitan adoptar las normas de conducta apropiadas para medidas preventivas y de acción inmediatamanejar material biológico frente a un accidente biológico TIPOS DE ACCIDENTE BIOLÓGICOPRECAUCIONES UNIVERSALESPor Herida Cortante o Punzante1. Considerar toda muestra como peligrosa y tratarla como talPor contacto con piel lesionada2. Tener la vacunación específicaPor Inoculación Parenteral3. Cubrir correctamente cualquier lesión cutáneaPor Inhalación 4. Lavarse meticulosamente las manos después de manipular muestras y antes de salir del laboratorio (al concluir la tarea)Por Ingesta5. Uso de protectores de barrera (guantes, máscaras, bata, etc.)Por Rotura de Recipiente contenedor de material infeccioso6. Esterilizar correctamente los instrumentos y desinfectar las superficies. BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIODISCIPLINA DEL PERSONAL DE LABORATORIOTener conocimiento del elemento de riesgoNo ingresar efectos personales al laboratorioSaber como manejar elementos de riesgo y usar el equipamiento necesario para hacerloControlar el equipo y quitar elementos innecesarios del área de tareaAdoptar técnicas apropiadas para la contención del elemento de riesgoLimpiar y ordenar las superficies de trabajoSolicitar los elementos necesarios para implementar dichas técnicas y todas las medidas de protección No llevarse a la boca dedos u objetos (etiquetas para rotular, etc.)Convertirse en docente para el personal recién incorporado al equipo de trabajo del laboratorioNo guardar alimentos ni bebidas en la zona de trabajoObservar y hacer observar las medidas de precaución universales.No fumar, No comer, No beber ni maquillarse en el área de trabajo---No secar las manos sobre la indumentaria particular (usar las toallas descartables)---Observar las normas generales de higiene ---Evitar las distracciones y permanecer en el lugar de trabajo (en lo posible hasta concluir las tareas programadas) NIVELES DE BIOSEGURIDAD : Si se trabaja con microorganismos potencialmente peligrosos o letales, las precauciones deberán extremarse. Según la peligrosidad del microorganismo, los niveles de bioseguridad se clasifican en : NIVEL de BIOSEGURIDADTIPO de AGENTEa MANIPULARMEDIDAS a ADOPTAR NIVEL 1 (de Bajo Riesgo)Apatógenos para el hombreMedidas Generales o de precaución universales NIVEL 2 (de Riesgo Moderado)Acceso sólo a personal de laboratorio, Prohibir el ingreso a la población de alto riesgo (Ancianos, Niños, Embarazadas e inmunodeprimidos)Patógenos de riesgo moderado- VHB (Virus de la Hepatitis B)- SalmonellaProcedimientos de Riesgo Moderado :- Exhibir visiblemente en los accesos , las debidas señales de Riesgo Biológico y los requerimientos para ingresar.- Trabajar en Cabinas de Flujo Laminar de Seguridad Biológica- Personal con vacunación específica- Usar guantes y delantal (quitárselos antes de abandonar la zona de trabajo)- Residuos y animales de experimentación deben ser decontaminados antes de su eliminación- Evitar el uso de jeringas, agujas y las prácticas que generen aerosoles- Realizar control de roedores e insectos y no permitir el acceso a animales que no sean los de experimentación. NIVEL 3 (de Alto Riesgo)Acceso restringido sólo a personal autorizado del laboratorio.Registro obligatorio de accidentes Registrar visitas y el acceso del personal de servicio.Patógenos de riesgo moderado y que por el tipo de procedimiento empleado adquieren alto riesgo : - Mycobacterium Tuberculosis, Brucella, etc. - HIV y Virus oncogénicosPatógenos capaces de causar la muerte : - Bacillus AntrhacisProcedimientos de Riesgo Moderado y de Alto Riesgo para la Vida :- Exhibir en los acceso las señales de peligro recomendadas y registrar el ingreso de visitas autorizadas- Inicial y periódicamente tomar muestras de suero del personal involucrado (para detectar posibles contaminaciones)- Trabajar en cabinas de seguridad y emplear filtros Hepa interpuestos en la línea de vacío- Usar indumentaria protectora y sistemas de protección contra aerosoles- Sellar tapas y rotores en centrífugas- Utilizar cajas de contención para animales de infectados- Limpiar y desinfectar meticulosamente las superficies de trabajo al finalizar la tarea NIVEL 4 (de Alto Riesgo para la Vida)Acceso Altamente Restringido , sólo personal especializadoRegistro Obligatorio AccidentesAgentes Patógenos Exóticos y Altamente Peligrosos :- Virus Lassa, - Virus Machupo , - Virus Junín, - Virus del EbolaProcedimientos de alto Riesgo para la Vida : - Exhibir en los accesos las señales de peligro correspondientes y llevar registro de visitas autorizadas- Trabajar en áreas especiales donde existan barreras de aire con el exterior y cabinas de alta seguridad- El personal debe ducharse y cambiarse íntegramente al ingresar y al salir- El pasaje de material limpio y/o contaminado se efectuará por canales especiales donde se puede efectuar la decontaminación- Realizar decontaminación Periódica DIAGNOSTICO DE LAS ENFERMEDADES INFECCIOSAS (ANEXO 3) El Diagnóstico definitivo de las Enf. Infecciosas se basa en : Diagnóstico Clínico =Consiste en la evaluación de signos y síntomas, lo que nos llevará a establecer un Diagnóstico Presuntivo. Diagnóstico Complementario = Comprende métodos y/o estudios como: -Imagenológicos -BioquímicosContribuyen a establecer o a completar el diagnóstico definitivo -Histopatológicos, etc. Diagnóstico Microbiológico = Comprende un conjunto de procedimientos y técnicas por los cuales podemos llegar a conocer al agente etiológico de la enfermedad y su susceptibilidad. Para llegar a ello es imprescindible que se realice precozmente (de manera que sea beneficioso para el paciente y la comunidad). Debe ser lo más exacto posible (para que nos permita instaurar una terapéutica adecuada) En una Enfermedad Infecciosa se requiere : Aislamiento e identificación del Agente Etiológicode forma Rápida y Específica Esto permite instaurar una Terapia Adecuada Eliminar el Agente Patógeno Con el objetivo de Disminuir la Morbimortalidad Diagnóstico Definitivo : Paciente Infectado SintomáticoAsintomático Examen ClínicoExamen MicrobiológicoExámenes Complementarios Diagnóstico PresuntivoPedido o solicitud de estudioDiagnóstico de Confirmación Recolección de Muestra Métodos DirectosMétodos Indirectos MicroscopíaCultivo, etcPruebas SerológicasPruebas de Hipersensibilidad Identificación de germen 1.- La Solicitud de Examen Microbiológico : El pedido para el examen microbiológico debe contener los siguientes datos : Datos Filiatorios del Paciente Tipo de Muestra, Fecha de Obtención y Condiciones de la Toma de Muestra Datos Clínicos Estado Inmunitario Tratamiento Medicamentoso previo a la toma de muestra Determinación a Realizar por el laboratorio Todos estos datos brindan información indispensable para el procesamiento y posterior interpretación de la muestra. 2.- La Muestra : (ejemplos) Tipo de MuestraProcedenciaToma de Muestra medianteExudado FaringeoTRS (Faringe, Amigdalas palatinas, etc)Hisopado Faringeo EsputoTRIExpectoración Material MucupurulentoTRILavado BronquialCepillado (Protegido) BronquialPunción PulmonarSangreCompartimiento Vascular (venas)Punción venosaSueroCompartimiento Vascular (venas)Punción venosaLCRConducto Raquídeo (en segmento Lumbar)Punción Lumbar (entre L4 y L5)OrinaAparato UrinarioMicción Espontánea, Micción al Asecho Punción Suprapúbica, Punción de SondaExudadoUretralUretraHisopado UretralHeces o Materia Fecal (con sangre, pus, moco) IntestinoDefecación Espontánea (una porción representativa)Exudado Purulento o sospechosovariableHisopado o Frotis de lesión mucocutáneaLíquido de LesionesvariableFrotis de la lesiónColecciones purulentas y AbscesosvariablePunción En cualquier diagnóstico microbiológico es muy importante realizar una adecuada toma de muestra (realizada en el sitio exacto y que sea representativa), no menos importante es la conservación y el transporte del material a analizar; ya que de todo esto dependerá que los resultados obtenidos sean correctos. Para garantizar esto se toman las medidas adecuadas para cada caso ; pero minimamente se ponen en práctica una serie de Medidas Generales que son las siguientes : Evitar cualquier tipo de contaminación externa. Tomar la muestra, en lo posible, antes de la administración de ATB. Colocar una cantidad representativa (suficiente) del material a estudiar en recipiente estéril. Los recipientes deben ser cerrados (para mantener la muestra inalterable), luego rotulados correctamente e ir acompañados de la solicitud que contengan los datos necesario para procesar la muestra. Enviar la muestra lo más rápido posible al laboratorio bien conservar en un ambiente apropiado (heladera o a Temp. ambiente – según sea el caso). Utilizar medios de transporte apropiados para mantener la viabilidad de los microorganismos, presentes en la muestra, durante un tiempo prolongado. 3.- TIPOS DE DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO : POR METODOS DIRECTOS : Pueden ser Específicos o Inespecíficos. Estos métodos permiten demostrar : la presencia de un Microorganismo o agente etiológico, los componentes del mismo (sus antígenos), las sustancias producidas por su metabolismo (metabolitos) y/o su genoma. Comprende Examen Citológico al M.O. (visualización), Cultivos, Aislamiento e Identificación del germen, Antibiograma . EXAMEN CITOLÓGICO AL MO : (Examen en Fresco y técnicas de campo oscuro). Mediante estas técnicas podemos detectar agentes etiológicos (como bacterias y hongos) y visualizar también otros elementos como hematíes, Leucocitos Polimorfo nucleares (PMN) y algunos parásitos. Cabe señalar que un recuento alto de PMN por campo indica que hay una reacción inflamatoria, pero no siempre indica infección bacteriana aguda, pues este recuento también puede ser indicativo de alergias, neoplasias, etc. Mediante la técnica de campo oscuro, aplicada en material patológico, podemos visualizar Treponemas y Leptospiras EXAMEN CITOLOGICO COLOREADO : (coloración o tinción del preparado a observar en el MO) Tipos de Tinciones : A.- Tinción o Coloración Negativa = Sirve para visualizar algunas Bacterias y Hongos, por Ej. Cápsula del Criptococcus Neoformans (presente en el LCR en una meningitis micótica) B.-Tinción o Coloración Simple = (Giemsa) : Nos permiten la visualización de algunas Bacterias, Hongos y Parásitos C.- Tinción o Coloración Diferencial = (Gram, Ziehl – Neelsen, Kin Youn, Auramina – Rodamina, Gueguen, etc). La coloración más utilizada para la detección de bacterias sin duda es la de Gram y en casos de los acilos Ácido Alcohol Resistentes o BAAR la basiloscopía (ziehl – Neelsen y Kin Ypun) y Gueguen para los hongos. 1.- Coloración de Gram (Exámen bacteriológico): Es sencilla de realizar, rápida y de gran riqueza informativa, es por ello que aún no se pudo reemplazar la utilidad de esta tinción. Gram permite clasificar las bacterias en Gram+ y Gram- en función de su estructura de pared; a demás nos informa su morfología y disposición en el espacio, lo cual nos orienta hacia un diagnóstico. Fundamento de la Tinción de Gram : TécnicaElementoBacterias Gram-Bacterias Gram+1- ColoranteVioleta de CristalColor VioletaColor Violeta2- MordienteLugol (Yodo)Color VioletaColor Violeta3- DecoloranteAcetona + AlcoholSe DecoloraNo se Decolora4- ContrasteAzul de MetilenoColor RosadoColor Violeta 2.- Coloración de Ziehl – Neelsen (Basiloscopía) : Es útil para identificar BAAR, se basa en la propiedad que presentan estas bacterias para resistir la decoloración con un alcohol y un ácido fuerte, tras haber sido previamente teñidas; ésta propiedad se debe a la presencia de ácidos micólicos en su pared. Fundamento de la Tinción de Ziehl – Neelsen : TécnicaElementoBAARNO BAAR1- ColoranteFuscinaColor RojoColor Rojo2- MordienteCalorColor RojoColor Rojo3- DecoloranteAcido Fuerte + AlcoholColor RojoDecolora4- ContrasteAzul de MetilenoRojo sobre AzulAzul CULTIVOS : Son ambientes artificiales que contienen los elementos nutritivos y las condiciones físico- químicas que permiten el desarrollo, crecimiento, conservación y estudio de los microorganismos. Existen diferentes medios de cultivo (tipos) : a.- Cultivos Comunes : Son los que contienen un medio base (Agar – Agar) para el desarrollo de microorganismos. b.- Cultivos Enriquecidos : Son aquellos medios destinados a lograr un crecimiento más rápido o a lograr el desarrollo de ciertos gérmenes; por Ej. Agar – Sangre; Agar – Chocolate; Agar – Cerebro – Corazón ; Caldo de Selenito; etc. c.- Cultivos Selectivos : Son aquellos medios que permiten el desarrollo de un determinado microorganismo, impidiendo el desarrollo de otros, por Ej. Lowestein – Jensen; TCBS; Medios SS; Levine; Tayer – Martín (con bilis o con taurocolato); etc. d.- Cultivos Diferenciales : Son aquellos medios, como la urea, el citrato, el indol, SIM, etc., que contienen una sustancia que al combinarse con algún producto del metabolismo bacteriano producen una reacción característica (por Ej. Un cambio de color) que permitirá su identificación. e.- Cultivo virológico : (evidencia indirecta de crecimiento en cultivos celulares). Los virus no tienen la capacidad de crecer en cultivos sólidos para bacterias u hongos; y como son considerados como parásitos intracelulares obligados, se necesitan para su desarrollo de células vivas. Para reralizar el aislamiento de virus podemos utilizar : Cultivos Celulares Hevos Embrionados Animales de Experimentación Debido al elevado costo, la necesidad de personal experimentado e infraestructura especial, no son utilizados en el diagnóstico clínico de los laboratorio. Por ello en la actualida han cobrado importancia los Métodos rápidos de Diagnóstico (microscopía Electrónica, Técnicas Inmunológicas y Moleculares (ver más a delante). Procedimiento para el cultivo : 1.- Realizar la siembra del microorganismo (contenido en la muestra) en un medio de cultivo apropiado. 2.- Incubar para generar un crecimiento visible. Es necesario que el médico solicitante conozca cuales son los períodos razonables para realizar las diversas clases de cultivos y que el laboratorio establezca un sistema para informar resultados preliminares. En Bacteriología Clínica = se requiere de un período de incubación mínimo de entre 48 – 72 HS a una temperatura de entre 35º C y 37º C En Virología Clínica = se requiere aproximadamente entre 30 – 45 días de incubación En Micología clínica = se requiere aproximadamente de entre 7 – 15 días de incubación; empleándose universalmente como medio de cultivo el Agar – Saboureaud; al que se le puede adicionar ATB (para inhibir el desarrollo de bacterias contaminantes) o Cicloheximida (para inhibir el desarrollo de hongos contaminantes). 3.- Si se observa el crecimiento de colonias se realiza una nuevamente una coloración de Gram (ésta se diferencia de la primera tinción de Gram por que no visualizaremos ni hematíes ni Leucocitos, sólo observaremos lo que se desarrolló tras la incubación del cultivo). 4.- Realizar el Recuento de Colonias (expresando en UFC / ml) y observar las características de la colonia. El recuento de colonias generalmente es un recurso que se utiliza mayormente en muestras de orina (2da. Porción) en infecciones urinarias; lavado bronquial en infecciones del TRI y en muestras de catéteres. IDENTIFICACIÓN DE GERMEN : Bacterias y hongos pueden ser identificados, tras su aislamiento en cultivos sólidos son identificados por : A.- Las características Macroscópicas de la Colonia. B.- Pruebas Bioquímicas Específicas para cada género microbiano; por Ej. Para los Hongos se pueden realizar: 1- Auxograma = Estudia el poder de Asimilación 2- Zimograma = Estudia el poder Fermentativo ANTIBIOGRAMA : Sirve para registrar la susceptibilidad de un determinado germen a los ATB. Se define como el conjunto de procedimientos que permiten determinar la sensibilidad in vitro de un microorganismo frente a un determinado ATB. METODOS DIRECTOS RAPIDOS : A.- TÉCNICAS DE INMUNOMARCADO : Conjunto de técnicas utilizadas para la detección de antígenos del germen. Puede realizarse a partir de las muestras donde se eliminan los antígenos como por Ej. las tomadas del foco de infección (es la muestra que ofrece mayor rendimiento), del suero, del LCR o de la orina (esta última es una muestra alternativa dada la facilidad de obtención y la posibilidad de su concentración). Las técnicas más utilizadas son : Inmunofluorescencia Directa (IFD) = Consiste en la unión de un Anticuerpo marcado con Isotiocinato de fluoresceína a su Antígeno correspondiente, y la posterior detección mediante microscopía de fluorescencia. Las principales ventajas de esta técnica son su sencillez, rapidez y la posibilidad de efectuar un diagnóstico etiológico en pacientes previamente tratados con ATB. En el Diagnóstico. En líneas generales esta técnica se aplica en detección de : Streptococo Pyogenes, Haemophilus Influenzae, Chlamydia Trachomatis, Pneumocystis Carinii, Cryptosporidium, etc. Enzimoinmunoanálisis (EIA) = Es ampliamente utilizadaen el Diagnóstico virológico(Ej. Antígeno p24 del HIV; Ag del VSR, Ag del Rotavirus,etc). También resulta útil en el diagnóstico de otras enfermedades infecciosas causadas por Chlamydia Trachomatis, Streptococo Pyogenes, Neisseria Gonorhoeae, Cryptococcus Neoformans, Cryptosporidium, etc. Aglutinación en Látex (AL) = Algunas de estas Pruebas resultan útiles en el diagnóstico de Meningitis Bacteriana en niños parcialmente tratados o en aquellos donde la respuesta inflamatoria y diversos índices bioquímicos del LCR no permiten diferenciar claramente entre una Meningitis Bacteriana y una Viral. Sin embargo su uso cuantitativo es limitado en la identificación de Agentes Etiológicos. Actualmente la AL tiene un empleo importante en muestras como LCR y Suero, donde se la utiliza para la detección de antígenos fúngicos del Cryptococcus Neoformans (hongo responsable de meningitis). Dicha Prueba tiene una sensibilidad mayor a la dela Tinta China en LCR; mientras que su especificidad se ve disminuida ante la presencia de factor reumatoideo u otras proteínas de interferencia que inducen resultados de falsos positivos, los cuales pueden eliminarse tratando las muestras con una proteasa. También hay pruebas de AL diseñadas para los Streptococos del Grupo A, las cuales, si bien son muy específicas son relativamente Sensibles, de manera que las pruebas que resultaren negativas deben ser respaldadas por un cultivo. Actualmente, en los inmunodeprimidos, tiene mucha importancia en la búsqueda de Antígenos Fúngicos la prueba de Aglutinación de Partículas de Látex (APL) Coaglutinación = También estas Pruebas resultan útiles en el diagnóstico de Meningitis Bacteriana en niños parcialmente tratados o en aquellos donde la respuesta inflamatoria y diversos índices bioquímicos del LCR no permiten diferenciar claramente entre una Meningitis Bacteriana y una Viral. Contrainmunoelectroforésis (CIE) = Inmunoperoxidasa = B.- TÉCNICAS MOLECULARES : Son un conjunto de técnicas que hoy en día posibilitan la Detección del Genoma de un determinado microorganismo, aunque la cantidad de inóculo en la muestra sea muy bajo. Estas Técnicas Comprenden : Hibridación con Sondas de Ac. Nucléico = Estas sondas genéticas consisten en una molécula de Ac Nucleico monocatenario y marcado con un isótopo radiactivo (Ej. 32 P) que, tras hibiridarse (unirse) a una secuencia complementaria de ADN, permite su detección . Empleando sondas específicas podemos detectar el agente etiológico presente en una muestra, sin necesidad de realizar un cultivo de la misma. También la construcción de sondas genéticas para ciertos factores de virulencia (toxinas), posibilita detectar a los microorganismos que transporten los genes que los codifican; por Ej. tanto la Hibridación con Sondas para la Enterotoxina de la Escherichia Coli como la Hibridación con Sondas para la Toxina Colérica del Vibrio Cholerae pueden ser aplicadas directamente en las heces para luego detectar el agente patógeno respectivo. Esta Técnica también se emplea para detectar el genoma de: Chlamydia Trachomatis, Neisseria Gonorrhoeae, Streptococo Pyogenes, Histoplasma Capsulatum, etc. Reacción en Cadena de la polimerasa (PCR) = Cuando conocemos la secuencia de nucleótidos, o parte de ella, de un determinado gen; podemos añadir secuencias de nucleótidos conocidos (cebadores) apropiados para la muestra lo que permitirá que una ADNpolimerasa genere gran cantidad de copias del gen estudiado, las cuales serán fácilmente identificables con una electroforésis. La PCR tiene una gran sensibilidad por lo cual los laboratorios clínicos están accediendo cada vez más a su uso, tan es así que la PCR está reemplazando al cultivo para la detección rápida del HIV; y ya se anticipan muchas otras aplicaciones como la detección de microorganismos no cultivables, de crecimiento lento o de difícil cultivo. Sin embargo se trata de una técnica compleja que requiere de cuidados extremos para evitar contaminaciones que lleven a resultados de falsos positivos. Dot Blot = Slot Blot = Southern Blot = Northern Blot = POR METODOS INDIRECTOS : Son métodos que permiten detectar las huellas que el germen dejó tras su contacto con el sistema inmunológico del huésped (anticuerpos circulantes y/o células sensibilizadas contra determinado microorganismo). Comprende Pruebas Serológicas y Pruebas de Hipersensibilidad Retardada o Celular. SEROLOGIA : Son método que permite determinar niveles de Anticuerpos en el suero del paciente. En el desarrollo de estas técnicas es conveniente extraer 2 muestras de suero (una en el período agudo de la enfermedad y otra en el período de convalecencia) para comparar los niveles de anticuerpos dosados en cada período; estos sueros obtenidos (muestras) en cada período y luego comparados se denominan como muestras pareadas. Los resultados se expresan cuantitativamente, denominándose Titulo a la mayor dilución del suero del paciente en la cual aún se puede detectar los anticuerpos contra un germen determinado. Se considera que hay infección reciente cuando se registra un aumento del Título de Anticuerpos en 2 o más diluciones de suero (Ej. de 1/16 a 1/64); entonces consideramos que hay una infección resiente Decimos que se produjo una seroconversión cuando los niveles de Anticuerpos superen 4 veces los valores del Título. Excepto en el caso de dosaje de IgM, en donde se recomienda extraer una sola muestra de suero en casos particulares de infección reciente (por Ej. Influenza tipo b, etc) . Si el agente infeccioso es poco frecuente (viris de la Rabia, HIV o Toxina Botulínica), la presencia de Anticuerpos específicos en una sola muestra permite establecer el diagnóstico. Dentro de las técnicas más utilizadas en la detección de Anticuerpos citamos : 1.- Inmunofluorescencia Indirecta (IFI) = 2.- Fijación del Complemento (FC) = 3.- ELISA = 4.- EIA = 5.- Contrainmunoelectroforesis (CIE) = 6.- Inmunodifusión en Gel de Agar (IDGA) = 7.- Inmunomicroscopía Electrónica Empleadas para virus 8.- Inhibición de la Hemaglutinación REACCIONES DE HIPERSENSIBILIDAD RETARDADA : Son reacciones intradérmicas como la (PPD, tricofitina, candidina, histoplasmina, coccidioidina, paracoccidioidina, Aspergilina, etc.) donde se efectúa una inoculación intradérmica no letal con antígenos de cierto microorganismo para tras 24 – 48 Hs poner en evidencia la sensibilidad del huésped frente a ese microorganismo. Una prueba cutánea positiva en un individuo sano indica contacto previo con el microorganismo, y adquiere gran utilidad en los estudios epidemiológicos. ENF. INFECCIOSAS (ANEXO 4) ENFERMEDADES INFECCIOSAS = Son aquellas enfermedades causadas por múltiples agentes pató

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