1) El documento describe las investigaciones recientes sobre el uso del ADN fetal libre en sangre materna para fines de diagnóstico prenatal no invasivo. 2) Se ha demostrado que el ADN fetal puede usarse para determinar el sexo fetal, el grupo sanguíneo Rh, y anomalías cromosómicas como la trisomía 21. 3) Los niveles elevados de ADN fetal en la sangre materna temprana pueden predecir el desarrollo posterior de preeclampsia y restricción del crecimiento intrauterino.

1. Interno: Cristián Gálvez Araya
Docente Coordinador: Dr. Juan Quezada
Docente Guía: Dr. Carlos Saavedra
Internado de Gineco-Obstetricia
Universidad de Valparaíso
Campus San Felipe
25-07-2012

2. Tabla de Contenidos
 Introducción.
 Generalidades DNA Fetal.
 Investigaciones Recientes: Usos.
- DNA Fetal en Orina materna.
- Determinación del Sexo fetal.
- Determinación del Grupo Rh.
- DNA fetal y Parto Pretérmino.
- DNA fetal y Anomalías Cromosómicas.
- DNA fetal y Preeclampsia/RCIU.
- Otras Patologías Estudiadas.
 Conclusiones.
 Bibliografía.

4. 1. Introducción
Diagnóstico Prenatal: Más Gestantes > 35 años
 Técnicas No Invasivas:
- Ultrasonido.
Avances Genética Molecular
- RNM.
 Técnicas Mínimamente Invasivas:
- DNA Fetal Libre.
- Diagnóstico Genético Preimplantacional.
 Técnicas Invasivas:
- Biopsia de Vellosidades Coriales.
- Amniocentesis.
- Cordocentesis.
S.L. Collins et Col., Prenatal diagnosis: Types and techniques, Early human development 88, 3-8, 2012.

5. 1. Introducción
Anormalidad
Ultrasonido
PROCEDIMIENTO
INVASIVO

6. 1. Introducción
Complicaciones Métodos Invasivos:
- Metrorragia (1 a 40 %)
- Aborto Espontáneo (0,5 a 5 %)
- Infección
- Incompatibilidad Rh en la Madre
- Ruptura de Membranas
*** Poseen una “ventana de tiempo”

7. 1. Introducción
Células Fetales en Sangre Materna (`70) :
Enriquecimiento – Purificación – Análisis Genético (DNA).
 Células Trofoblásticas: Desde vellosidades coriónicas, 4-5 semanas
de gestación. Prop: 1 cada 10 linfocitos maternos.
Limitación: Atrapadas en pulmones, Discrepancia genética
trofoblasto/embrión.
 Linfocitos: Desde 7-8 semanas de gestación. Prop: 1/800-60.000
Limitación: Persisten hasta más de 5 años post término.
 Eritroblastos: Los más fáciles de identificar (Hb fetal), V ½ 90 días en
sangre materna. 50% del total de Eritroblastos en sangre.
Reproducción Humana, J.Remonhí, Instituto Valenciano de Infertilidad, Editorial McGraw-Hill
2º Edición, año 2002.

8. 2. Generalidades DNA Fetal
Ventajas DNA Fetal („90) vs Células Fetales:
Se encuentra en mayor proporción para un mismo volumen de
sangre.
No se obtienen falsos positivos por persistencia de embarazos
anteriores.
Se requieren menos pasos en su procesamiento.
Limitaciones:
- Exceso de DNA libre derivado de la madre.
- DNA libre fetal es mucho más fragmentado que el materno.
Técnica: PCR Cuantitativa en Tiempo Real.
(Método de elección)
S. Illanes et Cols, Cell-Free fetal DNA in maternal plasma: an important advance to link fetal genetics
to obstetric ultrasound, Ultrasound Obstet Gynecol 25, 317-322, 2005.

9. 2. Generalidades DNA Fetal
Origen del DNA libre fetal:
 Placenta (desaparición post alumbramiento, RNAm
genes expresión placentaria, característica estructural de
la placenta).*****
 Destrucción de células hematopoyéticas fetales (extensa
apoptosis en sangre materna).
 Invasión Trofoblástica (14 días postconcepción).
 Difusión directa del Líquido Amniótico.
S. Illanes et Cols, Cell-Free fetal DNA in maternal plasma: an important advance to link fetal genetics
to obstetric ultrasound, Ultrasound Obstet Gynecol 25, 317-322, 2005.

10. 2. Generalidades DNA Fetal
El DNA posee una vida media muy corta,
suceso que reafirma la hipótesis de la
existencia de una fuente contínua de su
producción durante el embarazo.
DNA fetal corresponde al 3% del total de
DNA libre en sangre materna en estadíos
tempranos, y al 6% en el término del
embarazo
Fermín González et Cols, Diagnóstico prenatal genético no invasivo: reflexión bioética, Cuad.
Bioét., 22, 2011.

11. 2. Generalidades DNA Fetal
Clearance de DNA fetal:
Bastantes grupos han investigado, la mayoría de los cuales
resolvieron una rápida eliminación post término (*). Sería
detectable hasta 48 hrs. post parto.
Los pocos trabajos que han mostrado persistencia, incluso
años posterior al término, no obtuvieron falsos positivos
relacionados a dicho DNA al estudiar grupo sanguíneo y
sexo fetal (**).
(*) Benachi A et Cols. Fetal DNA in maternal serum: does it persist after pregnancy? Hum Genet
2003; 113: 76–79. / Johnson-Hopson CN et Cols. Evidence against the longterm persistence of
fetal DNA in maternal plasma after pregnancy. Hum Genet 2002; 111: 575.
(**) Costa JM et Cols. [First trimester fetal sex determination in maternal serum using real-time
PCR.] [Article in French] Gynecol Obstet Fertil 2002; 30: 953–957. / Finning KM et Cols. Prediction
of fetal D status from maternal plasma: introduction of a new noninvasive fetal RHD genotyping
service. Transfusion 2002; 42: 1079–1085.

12. 2. Generalidades DNA Fetal
RNAm Fetal en Sangre Materna (2000):
- Sorprendentemente permanece estable las muestras.
- Desde la 4º semana de gestación (RNAm del
lactógeno placentario y de la sub beta HCG).
- Nuevamente, la placenta parece ser la principal fuente.
- Hay una correlación entre niveles de RNAm y la
cantidad de proteínas en sangre materna.
- Resultados han tomado mayor fuerza gracias al
desarrollo de la tecnología Microarray (1995).

13. 2. Generalidades DNA Fetal

15. 3. Investigaciones
Recientes: Usos.

16. 3.1. DNA Fetal en Orina materna.
“Cell-free fetal DNA
either was not present or
did not amplify in
maternal urine”
S. Illane et Cols, Detection of cell-free fetal DNA in maternal urine, Prenatal Diagnosis; 26: 1216–
1218, 2006.

17. 3.2. Determinación del Sexo fetal.
Young-Ho Yang et Cols, Noninvasive Prenatal Diagnosis using Cell-Free Fetal DNA in Maternal
Plasma: Clinical Applications, Journal of Genetic Medicine, 8:1-16, 2011.

18. 3.2. Determinación del Sexo fetal.
Young-Ho Yang et Cols, Noninvasive Prenatal Diagnosis using Cell-Free Fetal DNA in Maternal
Plasma: Clinical Applications, Journal of Genetic Medicine, 8:1-16, 2011.

19. 3.2. Determinación del Sexo fetal.
Young-Ho Yang et Cols, Noninvasive Prenatal Diagnosis using Cell-Free Fetal DNA in Maternal
Plasma: Clinical Applications, Journal of Genetic Medicine, 8:1-16, 2011.

20. 3.2. Determinación del Sexo fetal.
S. Illanes et Cols., Early detection of cell-free fetal DNA in maternal plasma, Early Human
Development 83, 563–566, 2007.

21. 3.2. Determinación del Sexo fetal.

22. 3.2. Determinación del Sexo fetal.
- La determinación del sexo fetal es fiable a partir de 7
semanas de gestación, pero las señales masculinas puede
ser detectado tan pronto como 2 semanas postconception.
- Enorme impacto en la práctica clínica para el manejo de
los trastornos genéticos ligados a X, e incluso se ha
utilizado para guiar la terapia fetal en casos prenatales en
riesgo de deficiencia de 21-alfa hidroxilasa.

23. 3.2. Determinación del Sexo fetal.

24. 3.2. Determinación del Sexo fetal.

25. 3.3. Determinación del Grupo Rh.
Young-Ho Yang et Cols, Noninvasive Prenatal Diagnosis using Cell-Free Fetal DNA in Maternal
Plasma: Clinical Applications, Journal of Genetic Medicine, 8:1-16, 2011.

26. 3.3. Determinación del Grupo Rh.
Young-Ho Yang et Cols,
Noninvasive Prenatal
Diagnosis using Cell-Free
Fetal DNA in Maternal Plasma:
Clinical Applications, Journal
of Genetic Medicine, 8:1-16,
2011.

27. 3.3. Determinación del Grupo Rh.
- Amniocentesis implica un riesgo de 17% de
hemorragia feto-materna (sensibilización).
- Expectativas:
a) Realización de esta prueba a todas las mujeres Rh (-)
para administrar anti-D sólo a aquellas con un feto
positivo.
b) Pruebas para otros antígenos de grupos sanguíneos.

28. 3.5. DNA fetal y Parto Pretérmino.
S. Illanes et Cols, Free fetal DNA levels in patients at risk of preterm labour, Prenatal Diagnosis:
31: 1082–1085, 2011.

30. 3.6. DNA fetal
Y Anomalías
Cromosómicas.
Sinuhe Hahn et Cols, Determination
of fetal chromosome aberrations from
fetal DNA in maternal blood: has the
challenge finally been met?, Expert
reviews in molecular medicine, 13,
2011.

31. 3.6. DNA fetal y Anomalías Cromosómicas.
Andrew B. Sparks et Cols, Noninvasive prenatal
detection and selective analysis of cell-free DNA
obtained from maternal blood: evaluation for
trisomy 21 and trisomy 18, AJOG, 206, 319,
2012.

32. 3.7. DNA fetal y Preeclampsia/RCIU
S. Illanes et Cols., Increased free fetal DNA levels in early pregnancy plasma of women who
subsequently develop preeclampsia and intrauterine growth restriction, Prenatal Diagnosis; 29:
1118–1122, 2009.

33. 3.7. DNA fetal y Preeclampsia/RCIU
S. Illanes et Cols., Increased free fetal DNA levels in early pregnancy plasma of women who
subsequently develop preeclampsia and intrauterine growth restriction, Prenatal Diagnosis; 29:
1118–1122, 2009.

34. 3.7. DNA fetal y Preeclampsia/RCIU
Por cada unidad (1GE/mL) en
la que ffDNA aumenta,
la probabilidad de tener PE o
RCIU con término antes de las
35 semanas aumenta en 1,67
veces (IC 1,13 a 2,47).
“Incremento en apoptosis de
células trofoblásticas”.
S. Illanes et Cols., Increased free fetal DNA levels in early pregnancy plasma of women who
subsequently develop preeclampsia and intrauterine growth restriction, Prenatal Diagnosis; 29:
1118–1122, 2009.

35. 3.7. DNA fetal y Preeclampsia/RCIU
Levente Lazar et Cols., Relationship of circulating cell-free DNA leves to cell-free fetal DNA leves,
clinical characteristics and laboratory parameters in preeclampsia, BMC Medical Genetics, 10:120,
2009.

36. 3.7. DNA fetal y Preeclampsia/RCIU
Levente Lazar et Cols., Relationship of circulating cell-free DNA leves to cell-free fetal DNA leves,
clinical characteristics and laboratory parameters in preeclampsia, BMC Medical Genetics, 10:120,
2009.

37. 3.7. DNA fetal y Preeclampsia/RCIU
Levente Lazar et Cols., Relationship of circulating cell-free DNA leves to cell-free fetal DNA leves,
clinical characteristics and laboratory parameters in preeclampsia, BMC Medical Genetics, 10:120,
2009.

38. 3.8 Otras Patologías estudiadas.
- Distrofia Muscular.
- Fibrosis Quística.
- Enfermedad de Huntington.
- Talasemia.

39. 4. Conclusiones
 DNA fetal constituye una potente herramienta de diagnóstico
prenatal no invasivo, especialmente en grupos de riesgos de
anomalías cromosómicas y desórdenes ligados a cromosomas
sexuales.
 No es posible obtener DNA fetal de la orina materna, siendo la
mejor alternativa su aislamiento desde una muestra de sangre
materna.
 Las actuales técnicas de biología molecular permiten adecuados
niveles de sensibilidad y especificidad para realizar diagnósticos
con el DNA fetal en sangre materna.
 DNA fetal está presente desde los 14 días postconcepción y
hasta 48 hrs. post término.

40. 4. Conclusiones
 DNA permite establecer un diagnóstico mínimamente invasivo y
extremadamente precoz del sexo fetal, grupo Rh, anomalías
cromosómicas y enfermedades hereditarias.
 Examen a través de DNA fetal ya ha sido incorporado a ciertos
protocolos de manejo clínico en algunos países desarrollados.
 DNA fetal no ha demostrado ser de utilidad para anticipar un
probable parto de pretérmino.
 DNA fetal en sangre materna aumenta notablemente en
gestaciones que posteriormente desarrollan preeclampsia y
RCIU.

42. 5. Bibliografía
 S.L. Collins et Col, Prenatal diagnosis: Types and techniques, Early human
development 88, 3-8, 2012.
 S. Illanes et Cols, Cell-Free fetal DNA in maternal plasma: an important advance to link
fetal genetics to obstetric ultrasound, Ultrasound Obstet Gynecol 25, 317-322, 2005.
 Benachi A et Cols. Fetal DNA in maternal serum: does it persist after pregnancy? Hum
Genet 2003; 113: 76–79. / Johnson-Hopson CN et Cols. Evidence against the longterm
persistence of fetal DNA in maternal plasma after pregnancy. Hum Genet 2002; 111:
575.
 Costa JM et Cols. [First trimester fetal sex determination in maternal serum using real-
time PCR.] [Article in French] Gynecol Obstet Fertil 2002; 30: 953–957.
 Finning KM et Cols. Prediction of fetal D status from maternal plasma: introduction of a
new noninvasive fetal RHD genotyping service. Transfusion 2002; 42: 1079–1085.
 Levente Lazar et Cols., Relationship of circulating cell-free DNA leves to cell-free fetal
DNA leves, clinical characteristics and laboratory parameters in preeclampsia, BMC
Medical Genetics, 10:120, 2009.
 Sinuhe Hahn et Cols, Determination of fetal chromosome aberrations from fetal DNA in
maternal blood: has the challenge finally been met?, Expert reviews in molecular
medicine, 13, 2011.

43. 5. Bibliografía
 S. Illanes et Cols, Detection of cell-free fetal DNA in maternal urine, Prenatal
Diagnosis; 26: 1216–1218, 2006.
 Andrew B. Sparks et Cols, Noninvasive prenatal detection and selective analysis of cell-
free DNA obtained from maternal blood: evaluation for trisomy 21 and trisomy 18, AJOG,
206, 319, 2012.
 Young-Ho Yang et Cols, Noninvasive Prenatal Diagnosis using Cell-Free Fetal DNA
in Maternal Plasma: Clinical Applications, Journal of Genetic Medicine, 8:1-16, 2011.
 S. Illanes et Cols, Free fetal DNA levels in patients at risk of preterm labour, Prenatal
Diagnosis: 31: 1082–1085, 2011.
 S. Illanes et Cols., Increased free fetal DNA levels in early pregnancy plasma of
women who subsequently develop preeclampsia and intrauterine growth restriction,
Prenatal Diagnosis; 29: 1118–1122, 2009.
 Reproducción Humana, J.Remonhí, Instituto Valenciano de Infertilidad, Editorial
McGraw-Hill 2º Edición, año 2002.
 Manual Obstetricia y Ginecología, Pontificia Universidad Católica de Chile, año 2010.