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Características do Retículo
Endoplasmático
• Uma característica estrutural do RE é a continuidade com o
  envoltório nuclear.
• O RE é encontrado na maioria das células eucarióticas, nas
  quais ocupa, em média, 10% do volume celular,
  correspondendo a mais da metade do total de membranas
  presentes em uma célula animal.
• A quantidade de RE e sua localização no citoplasma varia de
  acordo com o tipo e o metabolismo celular.
• Nos hepatócitos, o RE é uma estrutura bastante desenvolvida
  que aparece disposto por todo o citoplasma. Em células
  secretoras polarizadas, como as células pancreáticas, o RER
  fica restrito preferencialmente à porção basal do citoplasma,
  em geral próximo ao núcleo.
Métodos de Estudo

• Microscopia de Luz
• Microscopia Eletrônica de Transmissão
• Métodos Enzimáticos ou Imunológicos (Microscopia de
  Luz e Microscopia Eletrônica). Por exemplo, a enzima
  glicose-6-fosfatase permite identificar especificamente o RE.
• Centrifugação Diferencial: após a sedimentação de
  núcleos, mitocôndrias, lisossomos e peroxissomos, pode-se
  obter a fração correspondente aos microssomos =
  fragmentos das estruturas tubulares e cisternas do RE, que
  podem ser identificadas como vesículas de aproximadamente
  100 nm de diâmetro.
Métodos de Estudo:
Microscopia de Luz




Retículo Endoplasmático
         Rugoso
    (áreas basófilas)
Métodos de Estudo: Microscopia
Eletrônica de Transmissão


   Retículo Endoplasmático Rugoso




    Retículo Endoplasmático Liso
Composição Química

Membranas
•   Bicamada lipídica com proteínas associadas.
•   30% de Lipídios: fosfolipídios, colesterol e glicolipídios.
•   70% de proteínas: proteínas estruturais, receptores ou enzimas (enzimas
    oxidativas, peptidases, hidrolases e transferases).
•   No RER, estão presentes aproximadamente 20 tipos de proteínas que não
    observadas no REL.
Luz
•   É aquosa e de composição bastante variada.
•   As substâncias mais abundantes na luz correspondem aos principais
    produtos de secreção de cada tipo celular.
•   Também podem ser encontradas proteínas solúveis residentes do RE,
    como enzimas e chaperones, as quais facilitam o processamento pós-
    traducional das proteínas.
Aspectos Funcionais

• O RE está relacionado à síntese
  e transporte de proteínas e
  lipídios.
• O RE assume diferentes
  funções, dependendo do tipo
  celular e do estado metabólico.
Síntese Protéica

• O RER apresenta-se bastante desenvolvido nas células com
  intensa síntese de proteínas destinadas à secreção.
• A associação do ribossomo com o RE é transitória e, tão logo a
  leitura do RNAm termine, o ribossomo é liberado no citoplasma até
  ser novamente engajado na síntese protéica.
                         Brotamento de                     4
                         vesícula de
                         transporte

         Ribossomo
                                                                  Vesícula transportadora
                                                                  de (glico-) proteína
                                         Cadeia            3
                                         de
                                         açúcar

                                                  Glicoproteína
                        1                   2                         R.E. RUGOSO

                     Polipeptídeo
Síntese Protéica – A Hipótese do
Sinal
•   A maquinaria básica para a síntese
    protéica que ocorre junto ao RE é a
    mesma encontrada no citoplasma.
    Como então, em alguns casos, a
    síntese protéica é direcionada para o
    RER?
•   Uma seqüência sinal composta de 20
    aminoácidos hidrofóbicos na
    extremidade N-terminal das proteínas
    direciona estas para o RER.
•   A seqüência sinal é sintetizada por
    ribossomos livres no citoplasma e,
    posteriormente é clivado, não
    permanecendo na forma final da
    proteína.
Fases da Síntese Protéica


• Reconhecimento: ligação da PRS (Partícula de Reconhecimento do
  Sinal) ao ribossomo e reconhecimento do peptídeo sinal.
• Direcionamento: a conformação adotada pela PRS facilita o seu
  reconhecimento pelo seu receptor ancorado na superfície do RE.
• Associação: o ribossomo se ancora ao seu receptor e o peptídeo
  nascente se associa ao poro de translocação (poro fisiológico que só
  se forma na presença de complexo ribossomo-peptídeo nascente na
  membrana do RE).
• Clivagem: a peptidase do sinal cliva o peptídeo sinal da estrutura da
  proteína.
• Transferência: o peptídeo em formação é transferido através do poro
  para a luz do RE.
Fases da Síntese Protéica

                                       Citosol


       Ribossomo    RNAm                    Seqüência sinal
                                            é removida

                    Seqüência-sinal
Partícula
                   União dessa
que reconhece
                   partícula
o sinal
                                                              Proteína é liberada
                                                              no interior do RER

                                                                     Membrana
                                                                      do RER
                                  Interior do RER


       Sítio receptor na membrana do RER
Fases da Síntese Protéica
Fases da Síntese Protéica
RER nas Células
Possíveis Destinos de Proteínas

    Polissomo livre   Proteína
      no citosol                  Enzima livre
                                   no citosol

                                    Proteína do
  Mitocôndria                       citoesqueleto


    Cloroplasto          Núcleo
                                    Proteína
    Peroxissomo                      nuclear
Exemplos de Células com Intensa
Síntese Protéica
                  Lúmen do ácino                                               Célula glandular
                                                                                 do epitélio
                      Ácino                                                       intestinal
                                                                                 Cavidade intestinal
                       Vesícula eliminando secreção
                                                                 Vesículas
                                (exocitose)
                                                               contendo muco
              Mitocôndria:                        Vesículas cheias de                                  Porção
               fonte de                          secreção soltando-se                                  apical
Células do      energia                         do complexo golgiense
pâncreas                                          Complexo
                                                  golgiense
                                                                 Mitocôndria
                                                                                                       Porção
                                                                                                        basal
                                                                        Núcleo
             Núcleo

                                                 Retículo endoplasmático
                                                         rugoso:
                          Entrada de aminoácidos   síntese e transporte
Síntese de Lipídios

•   A síntese de fosfolipídios
    acontece em duas etapas:
    1. Na primeira etapa: dois ácidos   Fosfolipídio
    graxos são ligados a um
    glicerolfosfato, produzindo um
    ácido fosfatídico. Essa reação                     Membrana
    acontece no citoplasma e é                          do RE
    catalisada por uma aciltranferase
    ligada à membrana do RE.
    2. Segunda etapa: acontece a
    diferenciação da cabeça polar dos
    fosfolipídios pela inserção de
    inositol, serina, etanolamina ou
    colina, formando diferentes
    fosfolipídios.
Síntese de Lipídios

• No RE, são produzidos fosfolipídios que serão utilizados na formação
  de diversas membranas celulares.

       Ácidos
       graxos          Fosfato
                                   aciltransferase

          +     +   Glicerol


           Ácido        Fosfato
         fosfatídico
                       Glicerol

                                  Membrana
                                   do RE
Síntese de Lipídios

•   Como o crescimento da bicamada lipídica
    ocorre na face citoplasmática, existem
    translocadores de fosfolipídios, em especial   Fosfolipídio
    as flipases, que se incumbem de equilibar a
    quantidade de lipídios nas duas faces da
    membrana.                                                 Membrana
                                                               do RE
•   Entretanto, a movimentação é preferencial
    para alguns dos fosfolipídios, em especial a
    fosfatidilcolina, gerando uma assimetria
    qualitativa na membrana. Essa assimetria é
    encontrada em todos os sistemas de
    membranas celulares.
Síntese de Lipídios - Colesterol

•   A síntese de colesterol também acontece
    nas membranas do RE a partir de um
    precursor, Acetil Co-A.
•   Por meio de uma série de reações
    bioquímicas, é formado o colesterol, que
    é posteriormente enviado a outras
    membranas celulares, já que ele não
    está entre os principais constituintes das
    membranas do próprio RE.
•   O colesterol ainda será aproveitado em
    outras reações que acontecem no RE,
    como na formação de ácidos biliares (no
    fígado) e hormônios esteróides (nos
    ovários, nos testículos e nas supra-
    renais).
Síntese de Hormônios Esteróides

 •   O colesterol é produzido nas membranas do RE é o precursor dos
     hormônios esteróides.
 •   A síntese desses hormônios envolve um passo intermediário que
     não ocorre nas membranas do RE, mas nas mitocôndrias.
 •   O colesterol que foi sintetizado na face citoplasmática do RE é
     carregado por proteínas transportadoras até as membranas
     mitocondriais, onde acontecem reações de hidroxilação e clivagem
     lateral, envolvendo a cadeia transportadora de elétrons do citocromo
     P450.
 •   A partir daí, forma-se um composto denominado pregnenolona, o
     qual retorna ao RE por meio de proteínas transportadoras, onde
     ocorre novas hidroxilações e clivagens laterais para formar os
     hormônios esteróides.
Comunicação entre Organelas
Modificações de Lipídios e
Proteínas

 • Alteração na conformação final de polipeptídeos.
 • Formação de pontes dissulfeto.
 • Glicosilação.
 • Adição de âncoras de glicosilfosfatidilinositol a
   proteínas.
Destoxificação


 • Hidroxilação e adição de radicais glicuronatos a
   drogas insolúveis, aumentando a solubilidade em
   água.
Armazenamento de Cálcio

   • Reserva de cálcio intracelular; envolvimento na
     contração muscular (retículo sarcoplasmático).
Glicogenólise

 • Reação de desfosforilação para obter glicose a partir do
   glicogênio.

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Reticulo Endoplasmático

  • 1.
  • 2. Características do Retículo Endoplasmático • Uma característica estrutural do RE é a continuidade com o envoltório nuclear. • O RE é encontrado na maioria das células eucarióticas, nas quais ocupa, em média, 10% do volume celular, correspondendo a mais da metade do total de membranas presentes em uma célula animal. • A quantidade de RE e sua localização no citoplasma varia de acordo com o tipo e o metabolismo celular. • Nos hepatócitos, o RE é uma estrutura bastante desenvolvida que aparece disposto por todo o citoplasma. Em células secretoras polarizadas, como as células pancreáticas, o RER fica restrito preferencialmente à porção basal do citoplasma, em geral próximo ao núcleo.
  • 3. Métodos de Estudo • Microscopia de Luz • Microscopia Eletrônica de Transmissão • Métodos Enzimáticos ou Imunológicos (Microscopia de Luz e Microscopia Eletrônica). Por exemplo, a enzima glicose-6-fosfatase permite identificar especificamente o RE. • Centrifugação Diferencial: após a sedimentação de núcleos, mitocôndrias, lisossomos e peroxissomos, pode-se obter a fração correspondente aos microssomos = fragmentos das estruturas tubulares e cisternas do RE, que podem ser identificadas como vesículas de aproximadamente 100 nm de diâmetro.
  • 4. Métodos de Estudo: Microscopia de Luz Retículo Endoplasmático Rugoso (áreas basófilas)
  • 5. Métodos de Estudo: Microscopia Eletrônica de Transmissão Retículo Endoplasmático Rugoso Retículo Endoplasmático Liso
  • 6. Composição Química Membranas • Bicamada lipídica com proteínas associadas. • 30% de Lipídios: fosfolipídios, colesterol e glicolipídios. • 70% de proteínas: proteínas estruturais, receptores ou enzimas (enzimas oxidativas, peptidases, hidrolases e transferases). • No RER, estão presentes aproximadamente 20 tipos de proteínas que não observadas no REL. Luz • É aquosa e de composição bastante variada. • As substâncias mais abundantes na luz correspondem aos principais produtos de secreção de cada tipo celular. • Também podem ser encontradas proteínas solúveis residentes do RE, como enzimas e chaperones, as quais facilitam o processamento pós- traducional das proteínas.
  • 7. Aspectos Funcionais • O RE está relacionado à síntese e transporte de proteínas e lipídios. • O RE assume diferentes funções, dependendo do tipo celular e do estado metabólico.
  • 8. Síntese Protéica • O RER apresenta-se bastante desenvolvido nas células com intensa síntese de proteínas destinadas à secreção. • A associação do ribossomo com o RE é transitória e, tão logo a leitura do RNAm termine, o ribossomo é liberado no citoplasma até ser novamente engajado na síntese protéica. Brotamento de 4 vesícula de transporte Ribossomo Vesícula transportadora de (glico-) proteína Cadeia 3 de açúcar Glicoproteína 1 2 R.E. RUGOSO Polipeptídeo
  • 9. Síntese Protéica – A Hipótese do Sinal • A maquinaria básica para a síntese protéica que ocorre junto ao RE é a mesma encontrada no citoplasma. Como então, em alguns casos, a síntese protéica é direcionada para o RER? • Uma seqüência sinal composta de 20 aminoácidos hidrofóbicos na extremidade N-terminal das proteínas direciona estas para o RER. • A seqüência sinal é sintetizada por ribossomos livres no citoplasma e, posteriormente é clivado, não permanecendo na forma final da proteína.
  • 10. Fases da Síntese Protéica • Reconhecimento: ligação da PRS (Partícula de Reconhecimento do Sinal) ao ribossomo e reconhecimento do peptídeo sinal. • Direcionamento: a conformação adotada pela PRS facilita o seu reconhecimento pelo seu receptor ancorado na superfície do RE. • Associação: o ribossomo se ancora ao seu receptor e o peptídeo nascente se associa ao poro de translocação (poro fisiológico que só se forma na presença de complexo ribossomo-peptídeo nascente na membrana do RE). • Clivagem: a peptidase do sinal cliva o peptídeo sinal da estrutura da proteína. • Transferência: o peptídeo em formação é transferido através do poro para a luz do RE.
  • 11. Fases da Síntese Protéica Citosol Ribossomo RNAm Seqüência sinal é removida Seqüência-sinal Partícula União dessa que reconhece partícula o sinal Proteína é liberada no interior do RER Membrana do RER Interior do RER Sítio receptor na membrana do RER
  • 12. Fases da Síntese Protéica
  • 13. Fases da Síntese Protéica
  • 15. Possíveis Destinos de Proteínas Polissomo livre Proteína no citosol Enzima livre no citosol Proteína do Mitocôndria citoesqueleto Cloroplasto Núcleo Proteína Peroxissomo nuclear
  • 16. Exemplos de Células com Intensa Síntese Protéica Lúmen do ácino Célula glandular do epitélio Ácino intestinal Cavidade intestinal Vesícula eliminando secreção Vesículas (exocitose) contendo muco Mitocôndria: Vesículas cheias de Porção fonte de secreção soltando-se apical Células do energia do complexo golgiense pâncreas Complexo golgiense Mitocôndria Porção basal Núcleo Núcleo Retículo endoplasmático rugoso: Entrada de aminoácidos síntese e transporte
  • 17. Síntese de Lipídios • A síntese de fosfolipídios acontece em duas etapas: 1. Na primeira etapa: dois ácidos Fosfolipídio graxos são ligados a um glicerolfosfato, produzindo um ácido fosfatídico. Essa reação Membrana acontece no citoplasma e é do RE catalisada por uma aciltranferase ligada à membrana do RE. 2. Segunda etapa: acontece a diferenciação da cabeça polar dos fosfolipídios pela inserção de inositol, serina, etanolamina ou colina, formando diferentes fosfolipídios.
  • 18. Síntese de Lipídios • No RE, são produzidos fosfolipídios que serão utilizados na formação de diversas membranas celulares. Ácidos graxos Fosfato aciltransferase + + Glicerol Ácido Fosfato fosfatídico Glicerol Membrana do RE
  • 19. Síntese de Lipídios • Como o crescimento da bicamada lipídica ocorre na face citoplasmática, existem translocadores de fosfolipídios, em especial Fosfolipídio as flipases, que se incumbem de equilibar a quantidade de lipídios nas duas faces da membrana. Membrana do RE • Entretanto, a movimentação é preferencial para alguns dos fosfolipídios, em especial a fosfatidilcolina, gerando uma assimetria qualitativa na membrana. Essa assimetria é encontrada em todos os sistemas de membranas celulares.
  • 20. Síntese de Lipídios - Colesterol • A síntese de colesterol também acontece nas membranas do RE a partir de um precursor, Acetil Co-A. • Por meio de uma série de reações bioquímicas, é formado o colesterol, que é posteriormente enviado a outras membranas celulares, já que ele não está entre os principais constituintes das membranas do próprio RE. • O colesterol ainda será aproveitado em outras reações que acontecem no RE, como na formação de ácidos biliares (no fígado) e hormônios esteróides (nos ovários, nos testículos e nas supra- renais).
  • 21. Síntese de Hormônios Esteróides • O colesterol é produzido nas membranas do RE é o precursor dos hormônios esteróides. • A síntese desses hormônios envolve um passo intermediário que não ocorre nas membranas do RE, mas nas mitocôndrias. • O colesterol que foi sintetizado na face citoplasmática do RE é carregado por proteínas transportadoras até as membranas mitocondriais, onde acontecem reações de hidroxilação e clivagem lateral, envolvendo a cadeia transportadora de elétrons do citocromo P450. • A partir daí, forma-se um composto denominado pregnenolona, o qual retorna ao RE por meio de proteínas transportadoras, onde ocorre novas hidroxilações e clivagens laterais para formar os hormônios esteróides.
  • 23. Modificações de Lipídios e Proteínas • Alteração na conformação final de polipeptídeos. • Formação de pontes dissulfeto. • Glicosilação. • Adição de âncoras de glicosilfosfatidilinositol a proteínas.
  • 24. Destoxificação • Hidroxilação e adição de radicais glicuronatos a drogas insolúveis, aumentando a solubilidade em água.
  • 25. Armazenamento de Cálcio • Reserva de cálcio intracelular; envolvimento na contração muscular (retículo sarcoplasmático).
  • 26. Glicogenólise • Reação de desfosforilação para obter glicose a partir do glicogênio.