Test de chimiosensibilité in vitro pour évaluer la sensibilité des isolats de Plasmodium aux antipaludiques - Présentation de la 5e édition du Cours international « Atelier Paludisme » - Mhadji NAOUIROU - Médecin - Direction Général de la Santé - Anjouan, Union des Comores - sedamir_2@yahoo.fr

1. TESTS DE CHIMIOSENSIBILITE IN VITROTESTS DE CHIMIOSENSIBILITE IN VITRO
POUR EVALUER LA SENSIBILITE DESPOUR EVALUER LA SENSIBILITE DES
ISOLATS PLASMODIUM AUXISOLATS PLASMODIUM AUX
ANTIPALUDIQUESANTIPALUDIQUES
NAOUIROU MHADJI, MEDECIN,COMORESNAOUIROU MHADJI, MEDECIN,COMORES
EVALUATION
par les FACILITATEURS

2. PLANPLAN
I- INTRODUCTIONINTRODUCTION
IIII-- POURQUOI SPOURQUOI S’’INTERESSER A LA CHIMIOSENSIBILITE ?INTERESSER A LA CHIMIOSENSIBILITE ?
IIIIII-- LES TESTS UTILISES,IN VITRO, POUR EVALUER LALES TESTS UTILISES,IN VITRO, POUR EVALUER LA
RESISTANCE DES PLASMODIUM AUX ANTIPALUDIQUESRESISTANCE DES PLASMODIUM AUX ANTIPALUDIQUES
IVIV--CONCLUSIONCONCLUSION

3. INTRODUCTION
• La réponse parasitaire =résistance aux
antipaludique =>obstacle pour la réussite
des stratégies de lutte
• La réponse humaine =tests in vivo et des
tests in vitro =>définir et localiser le
problème
=>évaluer la sensibilité d’un
nouveau molécule

4. Définition de la chimiorésistance
des parasites du paludisme:
• Selon OMS:
aptitude d’une souche de
parasite du paludisme à
survivre ou à se reproduire
malgré l’administration et
l’absorption d’un médicament
employé à des doses égales ou
supérieures aux doses
ordinairement recommandées
mais comprises dans les limites
de tolérance du sujet
• Selon Basco et Ringwald:
conditions de définition de la
chimiorésistance:
-échec thérapeutique
-CI50% élevée
-identité des populations
parasitaires avant le traitement
et lors d’une rechute
-présence de mutation sur le
gène de résistance
-taux plasmatique témoignant
d’une bonne absorption aux
médicaments

5. CHIMIOSENSIBILITE
POURQUOI?

6. Tableau I : Sensibilité in vitro des isolats de P. falciparum aux antipaludiques en 2002
Chloroquine:CI50>70nM,QU:CI50>800nM, amo:CI50>70nM, pyr:CI50>2000nM

7. Sensibilité à la chloroquine en 2003
FCM29 CI50=253.6nM

9. TESTS DE PHENOTYPAGE
Culture du parasite
en présence de concentration croissante
de divers antipaludiques
TESTS DE GENOTYPAGE
identification de mutations en cause dans
la chimiorésistance
TESTS DE SENSIBILITE IN VITROTESTS DE SENSIBILITE IN VITRO
CONDITIONS DE LA CULTURE IN VITRO !!

10. TESTS DETESTS DE
PHENOTYPAGEPHENOTYPAGE
MicroscopieMicroscopie
(Optique)(Optique)
ColorimColoriméétrietrie
--pLDHpLDH
--HRPIIHRPII
isotopieisotopie
(hypoxanthine(hypoxanthine
trititritiéée)e)
--DesjardinsDesjardins
--Le BrasLe Bras
CytometrieCytometrie
en fluxen flux
MicrofluorimetrieMicrofluorimetrie
-Pico green
-Sybr Green
EmpêcheEmpêche
la maturationla maturation
des trophozoitesdes trophozoites
en schizontesen schizontes
DDéétecter et quantifiertecter et quantifier
Les LDH et HRPIILes LDH et HRPII
Produites parProduites par
les parasites en pceles parasites en pce
Des antipaludiquesDes antipaludiques
Mesure de la
radioactivité dans un
compteurcompteur à
scintillation
Incorporée dans le
Noyau du parasite
mature
DDééceler et quantifierceler et quantifier
Les hLes héématiesmaties
ParasitParasitéé apraprèèss
marquage de lmarquage de l’’ADNADN
ParasitParasitéé parpar
le Thiazole orangele Thiazole orange
Mesure laMesure la
FluorescenceFluorescence
incorporincorporéée dans lee dans le
Noyau du parasiteNoyau du parasite
(ADN)(ADN)

11. Tests nTests n’’intintééressant pas lressant pas l’’ADNADN
--microscopiemicroscopie
--colorimcoloriméétrietrie
AVANTAGES ET INCONVENIENTS DESAVANTAGES ET INCONVENIENTS DES
TESTSTESTS
•• Tests intTests intééressant ADNressant ADN
CytometrieCytometrie
IsotopieIsotopie
MicrofluorimetrieMicrofluorimetrie

12. -temps++
-milieu++
-sensibilité bonne
-coût++
-personnel++
-facile à manier
Pico Green,Pico Green,
Sybr greenSybr green
-coût++++
-personnel+++
-temps++
-sensibilité bonne
-risque nul
-personnel++
CytometrieCytometrie
en fluxen flux
--cocoûûtt éélevlevéé
--personnel qualifipersonnel qualifiéé
--milieu+++milieu+++
--risque + + +risque + + +
--temps +++temps +++
Temps à être abandonné
Isotopie:Isotopie:
--DesjardinsDesjardins
--LebrasLebras
inconvénientsAvantages
Tests(ADN)

13. --temps++temps++
--personnel+++personnel+++
--sensibilitsensibilitéé++++
--facilefacile
--cocoûût++t++colorimcoloriméétrietrie
--temps +++temps +++
--difficiledifficile
--sensibilitsensibilitéé
--cocoûût+t+
--personnel++personnel++
--facile sur le terrainfacile sur le terrainmicroscopiemicroscopie
inconvinconvéénientsnientsavantagesavantages
Tests non ADNTests non ADN

14. CONCLUSIONCONCLUSION
•• TESTS IN VITRO=>SENSIBILITE DES ANTIPALUDIQUETESTS IN VITRO=>SENSIBILITE DES ANTIPALUDIQUE
INTERVIENNENT DANS TROIS CAS:INTERVIENNENT DANS TROIS CAS:
--éévaluer la rvaluer la réésistance croissistance croiséée dese des
mméédicamentsdicaments
--éévaluer la sensibilitvaluer la sensibilitéé initiale dinitiale d’’un mun méédicamentdicament
destindestinéé àà être adoptêtre adoptéé
--surveiller dans lsurveiller dans l’’espace et dans le temps laespace et dans le temps la
sensibilitsensibilitéé du parasite aux mdu parasite aux méédicamentdicament

15. MERCI DE
VOTRE
ATTENTION!

16. Références bibliographiques
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le site:le site: www.whqlibdoc.who.intwww.whqlibdoc.who.int//hqhq/2002//2002/who_CSD_CSR_Ewho_CSD_CSR_E
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pereniserpereniser la surveillance de la sensibilitla surveillance de la sensibilitéé dede pasmodiumpasmodium falciparumfalciparum
aux antipaludiquesaux antipaludiques àà Madagascar,Madagascar,www.pasteur.mgwww.pasteur.mg//antipaludique.pdfantipaludique.pdf