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Citología y morfología
bacteriana
Cátedra de Microbiología
Bibliografía
Brock, Madigan, Martinko, Parker. 2000 Biología de los
microorganismos, 8 ed, Prentice Hall
Prescott, Harley, Klein 1999 Microbiología, McGraw-Hill
Interamericana.
Página web de la Cátedra.
www.fq.edu.uy
Página de la Universidad de Wisconsin:
www.bact.wsic.edu
Esquema
• Microorganismos, qué son?.
• Tamaño y forma
• Diferentes formas de organización celular
• Pared (gram +, gram-, Archaea)
• Membrana.
• Citoplasma y genoma.
• Estructuras típicas:
– Fimbrias, pili, flagelo, endoesporas, inclusiones
citoplasmáticas, cápsula.
• Diferencias entre Bacteria, Archaea y
Eucarya.
Qué son los
microorganismos?
• Organismos que no pueden verse a simple
vista, al menos en parte de su ciclo
• Organismos que viven como células aisladas
o entidades que contienen acidos nucleicos
capaz de replicarse, por lo menos en parte
de su ciclo.
• Incluye algas, hongos, protozoarios,
bacterias y virus.
Historia Microbiología
• 1664, Robert Hooke, células vegetales.
• 1673, Anton van Leeuwenhoek, mercader de
telas, describe los microorganismos.
• 1877, Robert Koch, método de tinción,
desarrollo de medios de cultivo sólido.
Microscopios
• Ojo humano 0.2mm.
• Microscopio óptico , resolución
máxima 0.2 micras (1 micra).
• Microscopio electrónico, resolución
máxima 0.5nm
PROCARIOTAS
TAMAÑO: célula eucariota versus célula
procariota
Tamaños
Formas
cocos bacilos espirilos
FORMA DE LAS BACTERIAS
Area de superficie vs. volumen
Tamaño pequeño →intercambio
más eficiente, permite mayor
velocidad metabólica
Estructura celular
Pared celular
• Bacteria:
– Gram positivo
– Gram negativo
– Sin pared
• Archaea:
– Diversas estructuras
– Sin pared
Funciones de la pared
• Rigidez (mantener la forma, evitar la
lisis).
• Comunicación con el medio exterior.
• Puede estar involucrada en
patogenicidad (LPS)
• Barrera para algunas moléculas.
• Espacio periplásmico (enzimas de
transporte, hidrolíticas, etc.)
Formación de Protoplastos
Alta
concentración
de solutos
Baja concentración
de solutos
Lisozima -- proteína que rompe el enlace
glicosídico 1-4 en el peptidoglicano
Gram + Gram-Bacteria
MUREÍNA O PÉPTIDO-GLICANO
Compuesto químico característico de bacterias.
Estructura del Peptidoglicano
Pared Celular Gram Positiva
Acidos Teicoicos
Polisacáridos ácidos de paredes de Gram positivos
Unidos covalentemente al peptidoglicano(OH del C6 de NAM)
Atraviesan la pared y alcanzan la superficie de la bacteria
Unión hidrofóbica a la membrana celular
Otros compuestos químicos
característicos de la pared de Gram+
• Ácidos teicurónicos
• Ácidos micólicos
Membrana Externa de Gram Negativos
Porinas - proteinas que permiten el pasaje de moléculas
pequeñas a través de la membrana
-- específicas e inespecíficas
Lipopolisacárido (LPS)
Solo en bacterias Gram negativas
Parte de la membrana externa
Lipopolisacárido (LPS)
• Lípido A (NAG-P + grupos acilos)
• Núcleo del polisacárido
– contiene KDO (cetodesoxioctonato) otros
carbohidratos (ramnosa, ácido galacturónico)
– usualmente específico de especies
• O-antigeno
– número de repeticiones variables
– también contiene carbohidratos
– específico de cepa
• A menudo tóxico para animales - endotoxina
• Crea superficies densamente hidrofílicas
Periplasma de E. coli
Proteínas de peiplasma de E.coli.
Proteínas de unión
para amino acidos (e.g. histadina, arginina)
para azúcares (ej. glucosa, maltosa)
para vitaminas (ej. thiamina, vitamina B12)
Para iones (ej. fosfato, sulfato)
Enzimas de biosíntesis
Ensamblado de mureína
formación de fimbrias
Enzimas de degradaciónde polímeros
fosfatasas
proteasas
Enzimas detoxificantes
Beta-lactamasas (e.g. penicillinasa)
Fosforilación de aminoglicósidos
• Algunas bacterias no poseen pared
• Mycoplasma
• Membrana celular mas gruesa pueden
tener esteroles y lipoglicanos.
• Pleiomórficos
Pared celular de Archaea
• No contiene peptidoglicano
• Puede ser de
– pseudopeptidoglicano (pseudomureina) tiñe G+
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– monocapa superficial de proteina o
glicoproteina, sin pseudomureina (alg halófilos,
alg.metanogénicos y termoacidófilos) tiñe G-
• Existen Archaea sin pared
Pseudopeptidoglicano de
Archaea
Funciones de la pared
• Rigidez y resistencia osmótica (mantener la
forma, evitar la lisis).
• Comunicación con el medio exterior.
• Puede estar involucrada en patogenicidad
(LPS)
• Barrera para algunas moléculas (porinas en
gram negativos).
• Espacio periplásmico (enzimas de
transporte, hidrolíticas, etc.)
Cómo se sintetiza la pared?
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•Bactoprenol (C55 alcohol isoprenoide) -- carrier lipídico que transporta
el disacáride pentapeptido del citoplasma al periplasma y lo inserta en
la pared celular en crecimiento
•La transpeptidación, es inhibida por penicilina
Transpeptidación
Inhibido por la penicilina G.
Síntesis de peptidoglicano: transpeptidación
Inhibido por la penicilina G.
Síntesis de la pared celular
La pared celular se abre por autolisinas y se deposita nuevo péptidoglicano
Estructura:
• Bicapa fosfolipídica con proteínas
embebidas; puede contener también
hopanoides de estructura similar al
colesterol.
• En Archaea, éteres de alcohol isoprenoide,
algunas forman monocapas.
La membrana celular
Estructura de la Membrana
Citoplasmática
Los lípidos en Bacteria y Archaea
tienen diferentes enlaces químicos
Ester - Bacteria Eter - Archea
Funciones de Membrana
Citoplasmática
• Barrera de Permeabilidad
– sólo moléculas pequeñas, sin carga,
hidrofóbicas, pueden atravesar la membrana por
difusión.
• Ancla de Proteínas
– transporte, generación de energía, quimiotaxis
• Generación de fuerza proton motriz
 En fototrofas: Intracitoplasmáticas, soportan el
aparato fotosintético
(Vesículas, túbulos, tipo tilacoides)
• Síntesis de pared, y estructuras extracelulares.
Membrana
citoplasmática de E. coli
Estructura celular procariota - DNA
• No tiene núcleo. El DNA está en el citoplasma:
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cadena, circular.
• El genoma contiene 1 - 6 x 106
pares de bases (bp) en
procariotas de vida libre; 1000-5000 genes
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Procariotas
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Estructuras características
• Estructuras con funciones específicas.
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• Ejemplos:
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Fimbrias - Pili
• Fimbria - filamento proteico
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receptora durante la
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Flagelos
Flagelo
> 40 genes involucrados
1000 H+
/ revolución
Sólo detectados por técnicas de tinción específicas
Flagelos
Barra 0,5 micras
Anaerobaculum mobile sp. nov.
Flagelo insertado lateralmente
Endosporas
• Resistencia al calor, radiación, desecación.
• Producidas principalmente por los géneros Bacillus y
Clostridium
• Permite la supervivencia en ambientes desfavorables
• DNA protegido por ácido dipicolínico y proteínas
• Luego de la activación por stress, la disponibilidad de
nutrientes dispara la germinación y el crecimiento
• La localización de la espora en la célula puede ser
usada para la identificación
Estructura de la espora
Acido Dipicolinico
Característico de endosporas
Fromación de esporas
A- el ADN se duplica y enrolla alrededor del eje central
(filamento axial)
B- Uno de los cromosamas se rodea de membrana plasmática.
C- el protoplasto es rodeado por la célula madre
D- se sintetizan las cubiertas de la espora.
E- se elimina agua, se forma estructura resistente al calor.
F- se libera la espora por lisis de la célula madre.
En B. subtilis 6-7 horas, 50 genes.
Inclusiones
citoplasmáticas
• Algunas bacterias tienen estructuras internas
– gránulos de almacenamiento - polifosfato,azufre,
polihidroxibutirato (PHBs)
– vesículas de gas – flotación
– Carboxisomas, clorosomas.
Inclusiones
citoplasmáticas
Organismos donde
se encuentran
Composición Función
Glicógeno Varias bacterias
(E. coli)
poliglucosa Reserva de C y
energía
Polihidroxi
Butirato
Varias bacterias
(Pseudomonas)
Polímero de
dihidroxibutirato
Reserva de C y
energía
Polifosfato Varias bacterias
(Corinebacterium)
Polímeros de
fosfato
Reserva de
fosfato
Gránulos de S Fotótrofas del S
Litótrofas del S
S elemental Reserva de S
Vesículas de gas Bacterias acuáticas Estructura
proteica
flotación
Magnetosomas Algunas bacteris
acuáticas
Magnetita Fe3O4 Orientación en
campo
magnético
Carboxysomas Bacterias
autotróficas
Enzimas fijación
de CO2
Fijación de
CO2
Chlorosomas Bacterias verdes Lípidos, proteínas
bacterioclorofila
Captura de la
luz
Poly-ß-hydroxybutyrate (PHB)
Poly-ß-hydroxybutyrate (PHB)
Otros polisacáridos
extracelulares
• Glicocalix: Material externo a la pared celular
– Cápsulas - Material en la superficie celular
– Capas mucilaginosas - Material adherido, menos
fuertemente
– Capa S: Subunidades proteicas o glicoproteicas. G+, G-
y Archaea. Pueden constituir la pared
• Funciones
– Protección contra defensas del huésped (fagocitosis)
– Protección contra desecación
– Protección contra virus, toxinas
– Adhesión a superficies (células, objetos inanimados)
formación de biofilms.
Glicocalix
Tinción negativa
Microscoía
electrónica
Tinción negativa
Diferencia entre la estructura celular de
Bacteria, Archaea y Eucarya
Propiedad Bacteria Eucarya Archaea
Membrana
nuclear
NO SI NO
Organelos NO SI NO
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ribosoma
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Peptidoglicano
en la pared
SI NO NO
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Citologia microbiana

  • 2. Bibliografía Brock, Madigan, Martinko, Parker. 2000 Biología de los microorganismos, 8 ed, Prentice Hall Prescott, Harley, Klein 1999 Microbiología, McGraw-Hill Interamericana. Página web de la Cátedra. www.fq.edu.uy Página de la Universidad de Wisconsin: www.bact.wsic.edu
  • 3. Esquema • Microorganismos, qué son?. • Tamaño y forma • Diferentes formas de organización celular • Pared (gram +, gram-, Archaea) • Membrana. • Citoplasma y genoma. • Estructuras típicas: – Fimbrias, pili, flagelo, endoesporas, inclusiones citoplasmáticas, cápsula. • Diferencias entre Bacteria, Archaea y Eucarya.
  • 4. Qué son los microorganismos? • Organismos que no pueden verse a simple vista, al menos en parte de su ciclo • Organismos que viven como células aisladas o entidades que contienen acidos nucleicos capaz de replicarse, por lo menos en parte de su ciclo. • Incluye algas, hongos, protozoarios, bacterias y virus.
  • 5. Historia Microbiología • 1664, Robert Hooke, células vegetales. • 1673, Anton van Leeuwenhoek, mercader de telas, describe los microorganismos. • 1877, Robert Koch, método de tinción, desarrollo de medios de cultivo sólido.
  • 6. Microscopios • Ojo humano 0.2mm. • Microscopio óptico , resolución máxima 0.2 micras (1 micra). • Microscopio electrónico, resolución máxima 0.5nm
  • 8. TAMAÑO: célula eucariota versus célula procariota
  • 11. cocos bacilos espirilos FORMA DE LAS BACTERIAS
  • 12. Area de superficie vs. volumen Tamaño pequeño →intercambio más eficiente, permite mayor velocidad metabólica
  • 14. Pared celular • Bacteria: – Gram positivo – Gram negativo – Sin pared • Archaea: – Diversas estructuras – Sin pared
  • 15. Funciones de la pared • Rigidez (mantener la forma, evitar la lisis). • Comunicación con el medio exterior. • Puede estar involucrada en patogenicidad (LPS) • Barrera para algunas moléculas. • Espacio periplásmico (enzimas de transporte, hidrolíticas, etc.)
  • 16. Formación de Protoplastos Alta concentración de solutos Baja concentración de solutos Lisozima -- proteína que rompe el enlace glicosídico 1-4 en el peptidoglicano
  • 18. MUREÍNA O PÉPTIDO-GLICANO Compuesto químico característico de bacterias.
  • 20.
  • 21.
  • 22. Pared Celular Gram Positiva
  • 23. Acidos Teicoicos Polisacáridos ácidos de paredes de Gram positivos Unidos covalentemente al peptidoglicano(OH del C6 de NAM) Atraviesan la pared y alcanzan la superficie de la bacteria Unión hidrofóbica a la membrana celular
  • 24. Otros compuestos químicos característicos de la pared de Gram+ • Ácidos teicurónicos • Ácidos micólicos
  • 25. Membrana Externa de Gram Negativos Porinas - proteinas que permiten el pasaje de moléculas pequeñas a través de la membrana -- específicas e inespecíficas
  • 26. Lipopolisacárido (LPS) Solo en bacterias Gram negativas Parte de la membrana externa
  • 27. Lipopolisacárido (LPS) • Lípido A (NAG-P + grupos acilos) • Núcleo del polisacárido – contiene KDO (cetodesoxioctonato) otros carbohidratos (ramnosa, ácido galacturónico) – usualmente específico de especies • O-antigeno – número de repeticiones variables – también contiene carbohidratos – específico de cepa • A menudo tóxico para animales - endotoxina • Crea superficies densamente hidrofílicas
  • 28. Periplasma de E. coli Proteínas de peiplasma de E.coli. Proteínas de unión para amino acidos (e.g. histadina, arginina) para azúcares (ej. glucosa, maltosa) para vitaminas (ej. thiamina, vitamina B12) Para iones (ej. fosfato, sulfato) Enzimas de biosíntesis Ensamblado de mureína formación de fimbrias Enzimas de degradaciónde polímeros fosfatasas proteasas Enzimas detoxificantes Beta-lactamasas (e.g. penicillinasa) Fosforilación de aminoglicósidos
  • 29. • Algunas bacterias no poseen pared • Mycoplasma • Membrana celular mas gruesa pueden tener esteroles y lipoglicanos. • Pleiomórficos
  • 30. Pared celular de Archaea • No contiene peptidoglicano • Puede ser de – pseudopeptidoglicano (pseudomureina) tiñe G+ – pseudomureina cubierta de proteina,tiñe G+ – monocapa superficial de proteina o glicoproteina, sin pseudomureina (alg halófilos, alg.metanogénicos y termoacidófilos) tiñe G- • Existen Archaea sin pared
  • 32. Funciones de la pared • Rigidez y resistencia osmótica (mantener la forma, evitar la lisis). • Comunicación con el medio exterior. • Puede estar involucrada en patogenicidad (LPS) • Barrera para algunas moléculas (porinas en gram negativos). • Espacio periplásmico (enzimas de transporte, hidrolíticas, etc.)
  • 33. Cómo se sintetiza la pared?
  • 34. Síntesis de Peptidoglicano •Bactoprenol (C55 alcohol isoprenoide) -- carrier lipídico que transporta el disacáride pentapeptido del citoplasma al periplasma y lo inserta en la pared celular en crecimiento •La transpeptidación, es inhibida por penicilina
  • 36. Síntesis de peptidoglicano: transpeptidación Inhibido por la penicilina G.
  • 37. Síntesis de la pared celular La pared celular se abre por autolisinas y se deposita nuevo péptidoglicano
  • 38.
  • 39. Estructura: • Bicapa fosfolipídica con proteínas embebidas; puede contener también hopanoides de estructura similar al colesterol. • En Archaea, éteres de alcohol isoprenoide, algunas forman monocapas. La membrana celular
  • 40. Estructura de la Membrana Citoplasmática
  • 41. Los lípidos en Bacteria y Archaea tienen diferentes enlaces químicos Ester - Bacteria Eter - Archea
  • 42.
  • 43. Funciones de Membrana Citoplasmática • Barrera de Permeabilidad – sólo moléculas pequeñas, sin carga, hidrofóbicas, pueden atravesar la membrana por difusión. • Ancla de Proteínas – transporte, generación de energía, quimiotaxis • Generación de fuerza proton motriz  En fototrofas: Intracitoplasmáticas, soportan el aparato fotosintético (Vesículas, túbulos, tipo tilacoides) • Síntesis de pared, y estructuras extracelulares.
  • 45. Estructura celular procariota - DNA • No tiene núcleo. El DNA está en el citoplasma: “nucleoide” : zona que ocupa el DNA. • Es haploide. Genoma: una única molécula de DNA de doble cadena, circular. • El genoma contiene 1 - 6 x 106 pares de bases (bp) en procariotas de vida libre; 1000-5000 genes • No contiene histonas. • Puede contener otros elementos genéticos no indispensables para la vida: plásmidos y genomas fágicos.
  • 46. Procariotas • No tienen membrana nuclear. – No hay porcesamiento del ARNm – La transcripción está ligada a la traducción.
  • 49. Citoplasma • Proteínas (enzimas, complejos enzimáticos, estructurales) • Ribosomas (70S: 55 proteínas, rRNA 5S, 16S, 23S)- polisomas • mRNA, tRNA • Otras macromoléculas, solutos • Sin estructura visible al microscopio • No tienen citoesqueleto.
  • 50. Estructuras características • Estructuras con funciones específicas. • No todos los microorganismos las tienen. • Son características de género y especie (taxonomía) • Ejemplos: – fimbrias, flagelo, pili, endoespora, cápsula, inclusiones citoplasmáticas
  • 51. Fimbrias - Pili • Fimbria - filamento proteico corto, involucrado en funciones de adhesión a superficies. • Pelo sexual - unión a célula receptora durante la conjugación.
  • 53. Flagelo > 40 genes involucrados 1000 H+ / revolución
  • 54. Sólo detectados por técnicas de tinción específicas Flagelos
  • 55. Barra 0,5 micras Anaerobaculum mobile sp. nov. Flagelo insertado lateralmente
  • 56. Endosporas • Resistencia al calor, radiación, desecación. • Producidas principalmente por los géneros Bacillus y Clostridium • Permite la supervivencia en ambientes desfavorables • DNA protegido por ácido dipicolínico y proteínas • Luego de la activación por stress, la disponibilidad de nutrientes dispara la germinación y el crecimiento • La localización de la espora en la célula puede ser usada para la identificación
  • 59. Fromación de esporas A- el ADN se duplica y enrolla alrededor del eje central (filamento axial) B- Uno de los cromosamas se rodea de membrana plasmática. C- el protoplasto es rodeado por la célula madre D- se sintetizan las cubiertas de la espora. E- se elimina agua, se forma estructura resistente al calor. F- se libera la espora por lisis de la célula madre. En B. subtilis 6-7 horas, 50 genes.
  • 60. Inclusiones citoplasmáticas • Algunas bacterias tienen estructuras internas – gránulos de almacenamiento - polifosfato,azufre, polihidroxibutirato (PHBs) – vesículas de gas – flotación – Carboxisomas, clorosomas.
  • 61. Inclusiones citoplasmáticas Organismos donde se encuentran Composición Función Glicógeno Varias bacterias (E. coli) poliglucosa Reserva de C y energía Polihidroxi Butirato Varias bacterias (Pseudomonas) Polímero de dihidroxibutirato Reserva de C y energía Polifosfato Varias bacterias (Corinebacterium) Polímeros de fosfato Reserva de fosfato Gránulos de S Fotótrofas del S Litótrofas del S S elemental Reserva de S Vesículas de gas Bacterias acuáticas Estructura proteica flotación Magnetosomas Algunas bacteris acuáticas Magnetita Fe3O4 Orientación en campo magnético Carboxysomas Bacterias autotróficas Enzimas fijación de CO2 Fijación de CO2 Chlorosomas Bacterias verdes Lípidos, proteínas bacterioclorofila Captura de la luz
  • 64.
  • 65. Otros polisacáridos extracelulares • Glicocalix: Material externo a la pared celular – Cápsulas - Material en la superficie celular – Capas mucilaginosas - Material adherido, menos fuertemente – Capa S: Subunidades proteicas o glicoproteicas. G+, G- y Archaea. Pueden constituir la pared • Funciones – Protección contra defensas del huésped (fagocitosis) – Protección contra desecación – Protección contra virus, toxinas – Adhesión a superficies (células, objetos inanimados) formación de biofilms.
  • 68.
  • 69. Diferencia entre la estructura celular de Bacteria, Archaea y Eucarya Propiedad Bacteria Eucarya Archaea Membrana nuclear NO SI NO Organelos NO SI NO Tamaño ribosoma 70S 80S 70S Peptidoglicano en la pared SI NO NO Esteroles en membrana NO (hopanoides) SI SI Lípidos de membrana Ester unidos a glicerol Ester unido a glicerol Eter, ramificados