SlideShare ist ein Scribd-Unternehmen logo
1 von 26
Downloaden Sie, um offline zu lesen
REAÇÃO DA POLIMERASE
EM CADEIA - PCR
Polymerase Chain Reaction
O QUE É PCR?
 É uma metodologia que se baseia na
amplificação exponencial seletiva de uma
quantidade reduzida de DNA de uma
única célula, sem o uso de um organismo
vivo.
HISTÓRICO
 Karys Mullis descreveu a PCR no final da
década de 1980.
 Em 1989, a Hoffman La Roche & Perkin-Elmer
Corporation patenteou este processo .
 O Prêmio Nobel da Química foi atribuído à
Karys Mullis pelo seu trabalho em 1993.
 Atualmente, método PCR é usado
habitualmente nos laboratórios de investigação
médica e biológica para uma variedade de
tarefas.
PARA QUE SERVE A PCR?
 Diagnóstico médico;
 Mapeamento genético;
 Detecção de doenças hereditárias;
 Clonagem de genes;
 Testes de paternidade;
 Criação de organismos transgênicos;
PARA QUE SERVE A PCR?
 Medicina Forense:
 pequenas amostras de DNA retiradas da
cena de um crime (pedaços de cabelo, gotas
de sangue ou saliva, pedaços de pêlo ou até
mesmo a minúscula quantidade de DNA
deixada em uma impressão digital) são
amplificadas para serem analisadas pelo
método de fingerprinting.
PROCEDIMENTOS
 Devem ser realizados com o maior cuidado para
evitar contaminações que possam alterar o
resultado.
 Em primeiro lugar, deve-se extrair o material
genético da célula ou outro material a ser
estudado (exemplo: vestígios de crimes) sem
danificá-lo.(Normalmente o material extraído é o
DNA (ADN), mas pode-se trabalhar com o RNA
(ARN) em uma RT-PCR que é um
desdobramento da PCR e possui outras
aplicações).
PROCEDIMENTOS:
 Após a extração do DNA, adiciona-se uma
mistura (conhecida como pré-mix) que
contém:
 dNTPs
 Primers (ou iniciadores)
 Solução Tampão.
 Enzima Taq DNA polimerase
Taq DNA polimerase
 A Taq DNA polimerase, também denominada
Taq polimerase ou apenas Taq, é uma DNA
polimerase termoestável, utilizada na
amplificação de fragmentos de DNA através da
técnica de PCR. O seu nome é devido a ter sido
identificada pela primeira vez na bactéria
Thermus aquaticus, encontrada em fontes
hidrotermais. A Taq polimerase suporta as
elevadas temperaturas usadas em PCR, tendo
uma semi-vida enzimática de 40 minutos (a
94ºC).
PROCEDIMENTOS
 Toda esta mistura é colocada no
termociclador, o qual faz ciclos de
temperatura pré-estabelecidos com
tempos exatos específicos para cada
reação (fragmento a ser amplificado).
TERMOCICLADOR
PROCEDIMENTOS
 O Ciclo da PCR, no termociclador, ocorre
em três fases:
 Fase de Desnaturação (94-96ºC)
 Fase de Hibridização ou Anelamento (50-54ºC)
 Fase de Extensão do DNA (72-76ºC)
Fase de Desnaturação
 a temperatura é elevada de 94 a 96ºC por
pouco tempo para que haja a separação
da dupla cadeia de DNA (Desnaturação)
através da quebra das pontes de
hidrogênio, dando origem a duas fitas
simples de DNA sobre as quais a síntese
posteriormente vai ocorrer
Fase de hibridização ou
anelamento
 a temperatura é reduzida entre 50 a 60ºC
dependendo da quantidade de C e G
encontrada no primer, para que os primers
se anelem (pareiem) com a fita molde de
DNA (anelamento).
Fase de Extensão do DNA
 a temperatura é elevada a 72ºC para que
a enzima taq-polimerase possa funcionar
sintetizando a nova molécula (extensão),
em seguida um novo ciclo é iniciado.
PROCEDIMENTOS
 O ciclo é repetido,em torno de 30 vezes.
 Duas cadeias são sintetizadas a partir de
cada cadeia molde em cada ciclo
completo de PCR, o que dá um
crescimento EXPONENCIAL, havendo ao
fim de n ciclos 2n vezes mais cópias do
que no início.
RESULTADOS
Nº de Ciclos Nº de Cópias
1 2
2 4
3 8
6 64
20 1.048.576
30 1.073.741.824
RESULTADOS
 O resultado é analisado através de uma
eletroforese em gel de agarose ou de
poliacrilamida e depois é interpretado com
a ajuda de um profissional competente.
VANTAGENS
 Capacidade de amplificar uma sequência
precisa de DNA.
 Simplicidade, rigor, elevada sensibilidade e
especificidade.
 Não é necessário isolar o DNA que se pretende
amplificar, mesmo que se encontre misturado
com o DNA de outras espécies, uma vez que os
primers definirão a especificidade.
 Técnica rápida, barata e segura.
LIMITAÇÕES
 Necessidade de conhecer a sequência de
DNA a amplificar para sintetizar primers
específicos.
 Relativa facilidade com que ocorre a
contaminação por DNA estranho.
 Limitada extensão da sequência.
 Incorporação errônea de bases durante a
replicação.
VARIAÇÕES DA TÉCNICA
BÁSICA DE PCR
 Nested PCR
 Hot Start
 Real time PCR
 RAPD-PCR
 Entre outras...
Nested PCR
 Para melhorar a especificidade e a
eficiência da reação, o segmento
genômico é amplificado primeiro de forma
abrangente, copiando até mesmo
seqüências localizadas fora dela, e
utilizando-se este primeiro produto, segue-
se à amplificação da real sequência-alvo.
Hot Start
 Variação da PCR onde a reação de
amplificação é iniciada a temperaturas
elevadas.
 Atividade da Taq DNA polimerase é
inibida durante a preparação da reação
 evitando a amplificação de produtos
inespecíficos,aumentando a
especificidade e melhorando o rendimento
da reação.
Real time PCR
 PCR em tempo real compreende uma
amplificação convencional de DNA, porém
a detecção do resultado é feita a longo
dos ciclos através de marcadores.
 O risco de contaminação se torna menor.
RAPD-PCR
 Consiste na amplificação randômica do
DNA, por um par de iniciadores de baixa
especificidade para com o DNA molde,
gerando assim anelamentos inespecíficos.
 Essa técnica permite a tipagem do
genoma de microorganismos,
possibilitando sua comparação entre
isolados de amostras clínicas.
BIBLIOGRAFIA
 http://virtual.unipar.br/courses/GMBM/doc
ument/aula-PCR-
MESTRADO.pdf?cidReq=GMBM
 http://www.fisiologia.kit.net/biomol/4.htm
 http://pt.wikipedia.org/wiki/PCR
OBRIGADO!!!

Weitere ähnliche Inhalte

Was ist angesagt?

Marcadores e Genômica - Aula Teórica Thiago final
Marcadores e Genômica - Aula Teórica Thiago finalMarcadores e Genômica - Aula Teórica Thiago final
Marcadores e Genômica - Aula Teórica Thiago finalThiago Pinheiro
 
Aula de Biologia Molecular sobre Síntese de Proteínas
Aula de Biologia Molecular sobre Síntese de ProteínasAula de Biologia Molecular sobre Síntese de Proteínas
Aula de Biologia Molecular sobre Síntese de ProteínasJaqueline Almeida
 
ICSC48 - Criação e manejo de primatas não humanos e cães
ICSC48 - Criação e manejo de primatas não humanos e cãesICSC48 - Criação e manejo de primatas não humanos e cães
ICSC48 - Criação e manejo de primatas não humanos e cãesRicardo Portela
 
Aula ácidos nucléicos
Aula ácidos nucléicosAula ácidos nucléicos
Aula ácidos nucléicosLar D
 
Crescimento bacteriano
Crescimento bacterianoCrescimento bacteriano
Crescimento bacterianoGildo Crispim
 
Regulação e expressão gênica bacteriana
Regulação e expressão gênica bacterianaRegulação e expressão gênica bacteriana
Regulação e expressão gênica bacterianaUERGS
 
Eletroforese - aplicação da técnica
Eletroforese  - aplicação da técnicaEletroforese  - aplicação da técnica
Eletroforese - aplicação da técnicaViviane Karolina Vivi
 
Aula Pcr
Aula PcrAula Pcr
Aula Pcrlidypvh
 
Síntese de proteínas
Síntese de proteínasSíntese de proteínas
Síntese de proteínasletyap
 
Como é feito o Exame de DNA?
Como é feito o Exame de DNA?Como é feito o Exame de DNA?
Como é feito o Exame de DNA?Gabriel Negreira
 
Aula 10 eletroforese
Aula 10   eletroforeseAula 10   eletroforese
Aula 10 eletroforeseDyego Miranda
 
Tecnologia do DNA recombinante
Tecnologia do DNA recombinanteTecnologia do DNA recombinante
Tecnologia do DNA recombinanteShaline Araújo
 
Doenças genéticas (1)
Doenças genéticas (1)Doenças genéticas (1)
Doenças genéticas (1)kajomaneto
 
Aula 2 replicação, transcrição e tradução
Aula 2   replicação, transcrição e traduçãoAula 2   replicação, transcrição e tradução
Aula 2 replicação, transcrição e traduçãoFabio Artesanatos
 

Was ist angesagt? (20)

1EM #2 Evolução
1EM #2 Evolução1EM #2 Evolução
1EM #2 Evolução
 
Marcadores e Genômica - Aula Teórica Thiago final
Marcadores e Genômica - Aula Teórica Thiago finalMarcadores e Genômica - Aula Teórica Thiago final
Marcadores e Genômica - Aula Teórica Thiago final
 
Aula de Biologia Molecular sobre Síntese de Proteínas
Aula de Biologia Molecular sobre Síntese de ProteínasAula de Biologia Molecular sobre Síntese de Proteínas
Aula de Biologia Molecular sobre Síntese de Proteínas
 
PCR
PCRPCR
PCR
 
ICSC48 - Criação e manejo de primatas não humanos e cães
ICSC48 - Criação e manejo de primatas não humanos e cãesICSC48 - Criação e manejo de primatas não humanos e cães
ICSC48 - Criação e manejo de primatas não humanos e cães
 
Dna forense
Dna forenseDna forense
Dna forense
 
Aula ácidos nucléicos
Aula ácidos nucléicosAula ácidos nucléicos
Aula ácidos nucléicos
 
Crescimento bacteriano
Crescimento bacterianoCrescimento bacteriano
Crescimento bacteriano
 
Regulação e expressão gênica bacteriana
Regulação e expressão gênica bacterianaRegulação e expressão gênica bacteriana
Regulação e expressão gênica bacteriana
 
Eletroforese - aplicação da técnica
Eletroforese  - aplicação da técnicaEletroforese  - aplicação da técnica
Eletroforese - aplicação da técnica
 
Aula Pcr
Aula PcrAula Pcr
Aula Pcr
 
Pcr
PcrPcr
Pcr
 
Expressão gênica
Expressão gênicaExpressão gênica
Expressão gênica
 
Replicação do DNA
Replicação do DNAReplicação do DNA
Replicação do DNA
 
Síntese de proteínas
Síntese de proteínasSíntese de proteínas
Síntese de proteínas
 
Como é feito o Exame de DNA?
Como é feito o Exame de DNA?Como é feito o Exame de DNA?
Como é feito o Exame de DNA?
 
Aula 10 eletroforese
Aula 10   eletroforeseAula 10   eletroforese
Aula 10 eletroforese
 
Tecnologia do DNA recombinante
Tecnologia do DNA recombinanteTecnologia do DNA recombinante
Tecnologia do DNA recombinante
 
Doenças genéticas (1)
Doenças genéticas (1)Doenças genéticas (1)
Doenças genéticas (1)
 
Aula 2 replicação, transcrição e tradução
Aula 2   replicação, transcrição e traduçãoAula 2   replicação, transcrição e tradução
Aula 2 replicação, transcrição e tradução
 

Andere mochten auch

Aula dna-extraction-purification emanuel-20_11_12.ppt-11(1)
Aula dna-extraction-purification emanuel-20_11_12.ppt-11(1)Aula dna-extraction-purification emanuel-20_11_12.ppt-11(1)
Aula dna-extraction-purification emanuel-20_11_12.ppt-11(1)Jac Costa
 
Avanços e perspectivas em Bioinformática
Avanços e perspectivas em BioinformáticaAvanços e perspectivas em Bioinformática
Avanços e perspectivas em BioinformáticaLeandro Lima
 
Bioinformática e suas aplicações
Bioinformática e suas aplicaçõesBioinformática e suas aplicações
Bioinformática e suas aplicaçõesAlex Camargo
 
Portifólio A nova LDB Alison Regis
Portifólio A nova LDB Alison Regis Portifólio A nova LDB Alison Regis
Portifólio A nova LDB Alison Regis Alison Regis
 
Introdução a bioinformatica
Introdução a bioinformaticaIntrodução a bioinformatica
Introdução a bioinformaticaUERGS
 
Ensino de botânica
Ensino de botânica Ensino de botânica
Ensino de botânica Alison Regis
 
A nova LDB Alison Regis
A nova LDB Alison Regis A nova LDB Alison Regis
A nova LDB Alison Regis Alison Regis
 
Origens da vida documentário IFCE campus Jaguaribe Zoologia
Origens da vida documentário IFCE campus Jaguaribe ZoologiaOrigens da vida documentário IFCE campus Jaguaribe Zoologia
Origens da vida documentário IFCE campus Jaguaribe ZoologiaAlison Regis
 
A geografia da evolução alison regis
A geografia da evolução alison regis A geografia da evolução alison regis
A geografia da evolução alison regis Alison Regis
 
Platyhelminthes ou apenas semelhantes a platyhelminthes
Platyhelminthes ou apenas semelhantes a platyhelminthesPlatyhelminthes ou apenas semelhantes a platyhelminthes
Platyhelminthes ou apenas semelhantes a platyhelminthesAlison Regis
 
Inteligências múltiplas
Inteligências múltiplasInteligências múltiplas
Inteligências múltiplasAlison Regis
 
Seminário genética forense
Seminário  genética forense Seminário  genética forense
Seminário genética forense Nínive Calazans
 
Extraccion Adn Qca Clinica Especializada 2009 Pdf
Extraccion Adn Qca Clinica Especializada 2009 PdfExtraccion Adn Qca Clinica Especializada 2009 Pdf
Extraccion Adn Qca Clinica Especializada 2009 PdfCESI-DESAN
 

Andere mochten auch (16)

Aula dna-extraction-purification emanuel-20_11_12.ppt-11(1)
Aula dna-extraction-purification emanuel-20_11_12.ppt-11(1)Aula dna-extraction-purification emanuel-20_11_12.ppt-11(1)
Aula dna-extraction-purification emanuel-20_11_12.ppt-11(1)
 
Avanços e perspectivas em Bioinformática
Avanços e perspectivas em BioinformáticaAvanços e perspectivas em Bioinformática
Avanços e perspectivas em Bioinformática
 
Bioinformática e suas aplicações
Bioinformática e suas aplicaçõesBioinformática e suas aplicações
Bioinformática e suas aplicações
 
Portifólio A nova LDB Alison Regis
Portifólio A nova LDB Alison Regis Portifólio A nova LDB Alison Regis
Portifólio A nova LDB Alison Regis
 
Introdução a bioinformatica
Introdução a bioinformaticaIntrodução a bioinformatica
Introdução a bioinformatica
 
câncer
 câncer câncer
câncer
 
Ensino de botânica
Ensino de botânica Ensino de botânica
Ensino de botânica
 
A nova LDB Alison Regis
A nova LDB Alison Regis A nova LDB Alison Regis
A nova LDB Alison Regis
 
Origens da vida documentário IFCE campus Jaguaribe Zoologia
Origens da vida documentário IFCE campus Jaguaribe ZoologiaOrigens da vida documentário IFCE campus Jaguaribe Zoologia
Origens da vida documentário IFCE campus Jaguaribe Zoologia
 
A geografia da evolução alison regis
A geografia da evolução alison regis A geografia da evolução alison regis
A geografia da evolução alison regis
 
Platyhelminthes ou apenas semelhantes a platyhelminthes
Platyhelminthes ou apenas semelhantes a platyhelminthesPlatyhelminthes ou apenas semelhantes a platyhelminthes
Platyhelminthes ou apenas semelhantes a platyhelminthes
 
ecologia
 ecologia ecologia
ecologia
 
Inteligências múltiplas
Inteligências múltiplasInteligências múltiplas
Inteligências múltiplas
 
Genetica forense
Genetica forense Genetica forense
Genetica forense
 
Seminário genética forense
Seminário  genética forense Seminário  genética forense
Seminário genética forense
 
Extraccion Adn Qca Clinica Especializada 2009 Pdf
Extraccion Adn Qca Clinica Especializada 2009 PdfExtraccion Adn Qca Clinica Especializada 2009 Pdf
Extraccion Adn Qca Clinica Especializada 2009 Pdf
 

Ähnlich wie técnicas moleculares no tratamento do câncer

Ähnlich wie técnicas moleculares no tratamento do câncer (20)

PCR 1
PCR 1PCR 1
PCR 1
 
Pcr 12
Pcr 12Pcr 12
Pcr 12
 
Dna invest criminal-pcr-electroforese(dn-afingerprint)
Dna invest criminal-pcr-electroforese(dn-afingerprint)Dna invest criminal-pcr-electroforese(dn-afingerprint)
Dna invest criminal-pcr-electroforese(dn-afingerprint)
 
Aula 7 mi..(1)
Aula 7 mi..(1)Aula 7 mi..(1)
Aula 7 mi..(1)
 
Daniel - Biologia Molecular.pptx
Daniel - Biologia Molecular.pptxDaniel - Biologia Molecular.pptx
Daniel - Biologia Molecular.pptx
 
M3
M3M3
M3
 
D na invest-criminal-pcr-electroforese(dnafinferprint)
D na invest-criminal-pcr-electroforese(dnafinferprint)D na invest-criminal-pcr-electroforese(dnafinferprint)
D na invest-criminal-pcr-electroforese(dnafinferprint)
 
3S_PCR_ 3-TA_2012
3S_PCR_ 3-TA_20123S_PCR_ 3-TA_2012
3S_PCR_ 3-TA_2012
 
3S_Resumo técnica de pcr
3S_Resumo técnica de pcr3S_Resumo técnica de pcr
3S_Resumo técnica de pcr
 
3S_PCR_ resumo
3S_PCR_ resumo3S_PCR_ resumo
3S_PCR_ resumo
 
Dna e RNA
Dna e RNADna e RNA
Dna e RNA
 
Patologia GáStrica
Patologia GáStricaPatologia GáStrica
Patologia GáStrica
 
Biologia molecular
Biologia molecularBiologia molecular
Biologia molecular
 
3S_PCR
3S_PCR3S_PCR
3S_PCR
 
Aplicação de RNA seq em biologia molecular
Aplicação de RNA seq em biologia molecularAplicação de RNA seq em biologia molecular
Aplicação de RNA seq em biologia molecular
 
Acidos nucleicos
Acidos nucleicosAcidos nucleicos
Acidos nucleicos
 
Engenharia GenéTica
Engenharia GenéTicaEngenharia GenéTica
Engenharia GenéTica
 
ENGENHARIA GENÉTICA
ENGENHARIA GENÉTICAENGENHARIA GENÉTICA
ENGENHARIA GENÉTICA
 
TECNICAS DE AMPLIFICACAO DE ACIDOS NUCLEICOS
TECNICAS DE AMPLIFICACAO DE ACIDOS NUCLEICOSTECNICAS DE AMPLIFICACAO DE ACIDOS NUCLEICOS
TECNICAS DE AMPLIFICACAO DE ACIDOS NUCLEICOS
 
Realtime
RealtimeRealtime
Realtime
 

técnicas moleculares no tratamento do câncer

  • 1. REAÇÃO DA POLIMERASE EM CADEIA - PCR Polymerase Chain Reaction
  • 2. O QUE É PCR?  É uma metodologia que se baseia na amplificação exponencial seletiva de uma quantidade reduzida de DNA de uma única célula, sem o uso de um organismo vivo.
  • 3. HISTÓRICO  Karys Mullis descreveu a PCR no final da década de 1980.  Em 1989, a Hoffman La Roche & Perkin-Elmer Corporation patenteou este processo .  O Prêmio Nobel da Química foi atribuído à Karys Mullis pelo seu trabalho em 1993.  Atualmente, método PCR é usado habitualmente nos laboratórios de investigação médica e biológica para uma variedade de tarefas.
  • 4. PARA QUE SERVE A PCR?  Diagnóstico médico;  Mapeamento genético;  Detecção de doenças hereditárias;  Clonagem de genes;  Testes de paternidade;  Criação de organismos transgênicos;
  • 5. PARA QUE SERVE A PCR?  Medicina Forense:  pequenas amostras de DNA retiradas da cena de um crime (pedaços de cabelo, gotas de sangue ou saliva, pedaços de pêlo ou até mesmo a minúscula quantidade de DNA deixada em uma impressão digital) são amplificadas para serem analisadas pelo método de fingerprinting.
  • 6. PROCEDIMENTOS  Devem ser realizados com o maior cuidado para evitar contaminações que possam alterar o resultado.  Em primeiro lugar, deve-se extrair o material genético da célula ou outro material a ser estudado (exemplo: vestígios de crimes) sem danificá-lo.(Normalmente o material extraído é o DNA (ADN), mas pode-se trabalhar com o RNA (ARN) em uma RT-PCR que é um desdobramento da PCR e possui outras aplicações).
  • 7. PROCEDIMENTOS:  Após a extração do DNA, adiciona-se uma mistura (conhecida como pré-mix) que contém:  dNTPs  Primers (ou iniciadores)  Solução Tampão.  Enzima Taq DNA polimerase
  • 8. Taq DNA polimerase  A Taq DNA polimerase, também denominada Taq polimerase ou apenas Taq, é uma DNA polimerase termoestável, utilizada na amplificação de fragmentos de DNA através da técnica de PCR. O seu nome é devido a ter sido identificada pela primeira vez na bactéria Thermus aquaticus, encontrada em fontes hidrotermais. A Taq polimerase suporta as elevadas temperaturas usadas em PCR, tendo uma semi-vida enzimática de 40 minutos (a 94ºC).
  • 9. PROCEDIMENTOS  Toda esta mistura é colocada no termociclador, o qual faz ciclos de temperatura pré-estabelecidos com tempos exatos específicos para cada reação (fragmento a ser amplificado).
  • 11. PROCEDIMENTOS  O Ciclo da PCR, no termociclador, ocorre em três fases:  Fase de Desnaturação (94-96ºC)  Fase de Hibridização ou Anelamento (50-54ºC)  Fase de Extensão do DNA (72-76ºC)
  • 12. Fase de Desnaturação  a temperatura é elevada de 94 a 96ºC por pouco tempo para que haja a separação da dupla cadeia de DNA (Desnaturação) através da quebra das pontes de hidrogênio, dando origem a duas fitas simples de DNA sobre as quais a síntese posteriormente vai ocorrer
  • 13. Fase de hibridização ou anelamento  a temperatura é reduzida entre 50 a 60ºC dependendo da quantidade de C e G encontrada no primer, para que os primers se anelem (pareiem) com a fita molde de DNA (anelamento).
  • 14. Fase de Extensão do DNA  a temperatura é elevada a 72ºC para que a enzima taq-polimerase possa funcionar sintetizando a nova molécula (extensão), em seguida um novo ciclo é iniciado.
  • 15. PROCEDIMENTOS  O ciclo é repetido,em torno de 30 vezes.  Duas cadeias são sintetizadas a partir de cada cadeia molde em cada ciclo completo de PCR, o que dá um crescimento EXPONENCIAL, havendo ao fim de n ciclos 2n vezes mais cópias do que no início.
  • 16. RESULTADOS Nº de Ciclos Nº de Cópias 1 2 2 4 3 8 6 64 20 1.048.576 30 1.073.741.824
  • 17. RESULTADOS  O resultado é analisado através de uma eletroforese em gel de agarose ou de poliacrilamida e depois é interpretado com a ajuda de um profissional competente.
  • 18. VANTAGENS  Capacidade de amplificar uma sequência precisa de DNA.  Simplicidade, rigor, elevada sensibilidade e especificidade.  Não é necessário isolar o DNA que se pretende amplificar, mesmo que se encontre misturado com o DNA de outras espécies, uma vez que os primers definirão a especificidade.  Técnica rápida, barata e segura.
  • 19. LIMITAÇÕES  Necessidade de conhecer a sequência de DNA a amplificar para sintetizar primers específicos.  Relativa facilidade com que ocorre a contaminação por DNA estranho.  Limitada extensão da sequência.  Incorporação errônea de bases durante a replicação.
  • 20. VARIAÇÕES DA TÉCNICA BÁSICA DE PCR  Nested PCR  Hot Start  Real time PCR  RAPD-PCR  Entre outras...
  • 21. Nested PCR  Para melhorar a especificidade e a eficiência da reação, o segmento genômico é amplificado primeiro de forma abrangente, copiando até mesmo seqüências localizadas fora dela, e utilizando-se este primeiro produto, segue- se à amplificação da real sequência-alvo.
  • 22. Hot Start  Variação da PCR onde a reação de amplificação é iniciada a temperaturas elevadas.  Atividade da Taq DNA polimerase é inibida durante a preparação da reação  evitando a amplificação de produtos inespecíficos,aumentando a especificidade e melhorando o rendimento da reação.
  • 23. Real time PCR  PCR em tempo real compreende uma amplificação convencional de DNA, porém a detecção do resultado é feita a longo dos ciclos através de marcadores.  O risco de contaminação se torna menor.
  • 24. RAPD-PCR  Consiste na amplificação randômica do DNA, por um par de iniciadores de baixa especificidade para com o DNA molde, gerando assim anelamentos inespecíficos.  Essa técnica permite a tipagem do genoma de microorganismos, possibilitando sua comparação entre isolados de amostras clínicas.