Unidad 2

INSTITUTO TECNOLÓGICO DE Cd. ALTAMIRANO.
Lic. En Biología/ 4to semestre

MICROBIOLOGIA
UNIDAD 2: Alumna: Wendy Campos Ayala.
TÉCNICAS
MICROBIOLOGICAS
.
Docente: Erika Oropeza Bruno

2.1 ESTERILIZACIÓN

Método de control del crecimiento microbiano que
involucra la eliminación de todas las formas
de vida microscópicas,
incluidos virus, esporas y hongos. La temperatura
utilizada para la destrucción de los mismos, es de
100 °C en adelante. Es un término absoluto que
implica la pérdida de la viabilidad mediante la
destrucción de todos
los microorganismos contenidos en un objeto, área
específica o sustancia, acondicionando de tal modo
la posterior propagación o contaminación a otros
objetos o al medio ambiente.

2.1.1 MÉTODOS DE ESTERILIZACIÓN

Ebullición Vapor

Pasteurización Tyndalización

Aire caliente Radiación

Radiación
Flama directa
Ionizante, no
e Indirecta
Ionizante

Radiación
calor seco
Infrarroja

Calor Húmedo
Métodos Radiación
Físicos Ultravioleta

2.1.2MÉTODOS QUÍMICOS

• Etanol
Alcohol • Alcohol
isopropílico

• Formol
Aldehídos • Glutaraldehí
do

• Xileno
Fenoles

Óxido de etileno

Peróxido de
Hidrógeno

2.2MEDIOS DE CULTIVO

consta de un gel o una solución que cuenta con los
nutrientes necesarios para permitir, en condiciones
favorables de pH y temperatura, el crecimiento
de virus, microorganismos, células, tejidos
vegetales o incluso pequeñas plantas. Según lo que
se quiera hacer crecer, el medio requerirá unas u
otras condiciones

Generalmente se presentan desecados
en forma de polvo fino o granular antes
de ser preparados; ya preparados
pueden encontrarse en estado sólido,
semisólido o líquido. El objetivo último
del cultivo es variado: antibiograma,
identificación, multiplicación.

2.2.1CLASIFICACIÓN

cualidades físicas
• líquidos
• semisólidos formulación:
• sólidos • químicamente definidos
• complejos

uso:
medio selectivo
medio diferencial
medio de enriquecimiento
medio mínimo
medio de transporte

USOS DE LOS MEDIOS

Medio General: medio en donde crecen todo tipo de microorganismos, excepto los que necesitan condiciones especiales (por ejemplo, agar CLED).

Medio Selectivo: permite seleccionar el crecimiento de una especie o grupo determinado (hongos, bacterias entéricas, protozoos.)

• medio diferencial: permite identificar una especie con otra, ambas en el mismo medio. Puede ser por su crecimiento, su metabolismo, su
respiración, etc. (por ejemplo, medio de McConkey

medio de enriquecimiento: contiene los nutrientes necesarios para apoyar el crecimiento de una amplia variedad de microorganismos, se utiliza para
la cosecha de diferentes tipos de microorganismos en un mismo medio.

medio mínimo: contiene la mínima cantidad de nutrientes posible que permite el crecimiento de una especie.

medio de transporte: preparado para servir como almacenamiento temporal a especímenes transportados; mantienen su viabilidad y su concentración Simple

2.2.2 PRPARACIÓN DEL CULTIVO

Los medios de cultivo se pueden
preparar en el laboratorio a partir de
cada uno de sus constituyentes
básicos, o por simple rehidratación de
productos asequibles comercialmente
(medios de cultivo deshidratados).
Generalmente se prefiere el uso de
los medios de cultivo deshidratados
porque, además de simplificar el
trabajo, con ellos se tiene mayor
probabilidad de obtener resultados
reproducibles

CONTROL DE CALIDAD

 El Control de Calidad en la preparación y evaluación de los medios de cultivo
es considerado como una esencial y buena práctica de laboratorio, necesaria
para mantener el nivel y la ejecución de cualquier técnica microbiológica.

Proceso continuo que se extiende desde las materias primas ; a través del
productor hasta el producto final utilizado en los diferentes departamentos de
análisis y diagnóstico microbiológico.

EL MÉTODO DE SIEMBRA POR ESTRÍA EN PLACA

método más fácil y el más usado para obtener cultivos axénicos. Para ello, con un asa de siembra se toma una
muestra de la población mixta y a continuación se hacen estrías sobre la superficie de un medio sólido preparado
en una placa Petri

(a las placas Petri también se les denomina simplemente placas). Conforme se van haciendo estrías en zigzag
con el asa, cada vez se van depositando en la superficie del medio menos microorganismos. A continuación, se
flamea el asa, se toca en la región donde se han realizado las últimas estrías y se continúa la siembra con la
misma técnica, en la superficie de medio sin sembrar aún. Repitiendo este proceso varias veces se logra separar
células individuales. A continuación, las placas se incuban en un lugar adecuado, permitiendo que las células
aisladas experimenten un número suficiente de divisiones para formar colonias visibles. Aunque cada colonia
posiblemente representa un clon derivado de una sola célula, no podemos asegurarlo. Quizás, dos células
quedaron depositadas tan juntas que han originado una única colonia mixta. Por tanto, para asegurarnos de que
hemos obtenido un cultivo axénico, conviene repetir el procedimiento a partir deuna colonia bien aislada en
la primera placa. Las colonias que se desarrollen la segunda vez, serán, casi con toda seguridad, cultivos axénico

LOS MÉTODOS DE VERTIDO EN PLACA Y EXTENSIÓN EN PLACA

las muestras diluidas se mezclan con agar fundido y se vierten en
placa.Algunas colonias quedarán embebidas en el agar y otras crecerán
en la superficie. Las colonias superficiales se extenderán y serán más
grandes. En el segundo método (extensión en placa), las muestras
diluidas se siembran directamente en la superficie de la placa de
agar, extendiéndolas con avuda de un asa de Diralsky de cristalestéril.
La suspensión se absorbe en el agar, dejando las células microbianas
sobre la superficie. En ambas técnicas las placas se incuban hasta la
aparición de las colonias. Como en el método de siembra por estría, no
existe la seguridad de que las colonias que aparecen en las placas
sembradas por extensión o en el agar solidificado sembrado por el
método del vertido en placas sean cultivos axénicos hasta que se repita
el proceso. Las dos técnicas de siembra por dilución presentan la
ventaja de que permiten obtener un mayor número de colonias aisladas
que el método de siembra por estría, por tanto se eligen cuando se ha
de seleccionar una cepa partir de una mezcla con varios tipos de
microorganismos.

Los métodos de siembra se utilizan para inocular por distintos métodos sobre un medio
de cultivo apropiado una muestra que contenga bacterias con el fin de reproducirlas para
aumentar el número de individuos de la población y formar colonias encaso de medios
solidos

2.3.1 ESTRIA CRUZADA

El método de estrías es el mas utilizado para el
aislamiento de colonias bacterianas. es un
método rápido y simple de agotamiento
progresivo y continuo del inoculo sobre un medio
solido para obtener un numero complejo de
reducción de bacterias estas distribuidas
individualmente sobre la superficie de la caja de
Petri que al incubar, cada una originara colonias.

2.3.1 DILUCIONES

preparar una disolución menos concentrada a partir
de una más concentrada.

Una dilución es una mezcla homogénea, uniforme y
estable, formada por dos o más sustancias
denominadas componentes. La sustancia presente
en mayor cantidad suele recibir el nombre de
solvente, y a la de menor cantidad se le llama soluto
y es la sustancia disuelta. El soluto puede ser un
gas, un líquido o un sólido, y el disolvente puede ser
también un gas, un líquido o un sólido.

2.4 FACTORES AMBIENTASLES QUE AFECTAN A
LOS MICROORGANISMOS

ACIDOS
pH Y LA
ORGANICO
ACIDEZ.
S SALES DE
ACTIVIDAD
CURADO Y
DE AGUA SUBSTANCIAS
REDUCIDA. ANALOGAS

GASES
RADIACION COMO
IONIZANTE. CONSERVA
DORES.

RADIACION
ULTRAVIOL OXIGENO
ETA.

FACTORES AGUA Y
TEMPERATU
AMBIENTALE ACTIVIDAD
RA
S DE AGUA

2.5 MORFOLOGIA COLONIAL Y MICROSCOPICA

2.5 MORFOLOGIA COLONIAL Y MICROSCOPICA

Una colonia se define como
una masa visible de
microorganismos, todos
originados de una sólo célula
madre.

de manera que una
colonia constituye
todos originados de una
clones de bacterias,
sólo célula madre
todas genéticamente
similares

2.6 MÈTODOS DE TINCIÒN

estudiar
tinciones biológicas
la morfología de
Una tinción o color son utilizadas
Los diferentes otros materiales (por
ación es una también para
colorantes pueden ejemplo, las
técnica auxiliar marcar células
ser utilizados para estructuras
utilizada en citometría de
aumentar la lamelares de
en microscopía para flujo y para marcar
definición y polímeros
mejorar el contraste proteínas ó ácidos
examinar grandes semicristalinos de
en la imagen vista nucleicos
cortes de tejido las estructuras de
al microscopio en electroforesis en
dominio de bloques
gel
de copolímeros.

2.6.1 TINCIÒN SIMPLE

se llama así porque nada mas usan un (1) solo
colorante, que puede ser azul de metileno, cristal
violeta o carbolfucsina. Con este tipo de tinción tu
vas a poder crear un contraste con el medio
donde estas haciendo el frotes o tinción y vas a
poder observar la morfología y la
disposiciónbacteriana. La importancia esta en
que es muy fácil de aplicar. Un ejemplo de uso de
tinción simple esta cuando quieres ver levaduras
y diferenciar las vivas de las muertas. Las
levaduras muertas se tiñen en su interior y se ven
con el mismo color del tinte que aplicaste. Las
levaduras vivas no se tiñen por dentro.

2.6.2 TINCIÒN DIFERENCIALES: GRAM, ACIDO
RESISTENTE, KANAYSI, ALBERT

Un medio diferencial consiste en
un medio de cultivo que es capaz de
distinguir dos microorganismos por su
crecimiento diferencial en el mismo,
usando las propiedades metabólicas
de ambos en presencia de un
determinado nutriente y de un
indicador que evidencia por ejemplo,
un pH ácido en su entorno.


tinción de Gram o coloración de
Gram es un tipo de tinción diferencial empleado
en Bacteriología para la visualización de bacterias,
sobre todo en muestras clínicas. Debe su nombre
al bacteriólogo danés Christian Gram, que
desarrolló la técnica en 1884. Se utiliza tanto para
poder referirse a la morfología celular bacteriana
como para poder realizar una primera aproximación
a la diferenciación bacteriana,
considerándose Bacteria Gram positiva a las
bacterias que se visualizan de color moradas
y Bacteria Gram negativa a las que se visualizan
de color rosa o rojo o grosella.


Ácido-alcohol resistencia es la
propiedad física de algunas bacterias a la
resistencia a la decoloración de la fucsina
básica (rojo) la cual penetra en la célula por
acción del fenol y el calor.
Las bacterias ácido-alcohol resistentes no
pueden ser clasificados según la tinción de
Gram, la cual es la técnica más común en la
microbiología contemporánea, sin embargo
puede ser teñido con algunas tinciones
concentradas combinadas con calor. Una vez
teñida tiene la capacidad de resistir la
decoloración de una combinación de alcohol-
ácido, el cual es el decolorante más común en
los protocolos de tinción de bacterias, de
donde viene el nombre Alcohol-ácido
resistente.

2.7 MÈTODOS DE CONSERVACIÒN DE CEPAS

los tres objetivos que hay que alcanzar para
conservar correctamente las cepas microbianas en
los laboratorios de microbiología son: que
el cultivo a conservar sea puro, evitando que se
produzcan contaminaciones durante el proceso de
conservación; que durante el tiempo de
conservación sobrevivan al menos el 70-80% de las
células, y por último, que estas células
permanezcan gené-ticamente estables.
métodos agrupándolos en tres apartados, que son:
Métodos de elección o de conservación a largo
plazo, métodos alternativos y métodos restringidos

2.8 ANALISIS DE AGUA

Las Normas Mexicanas de Análisis de Agua
establecen los métodos de prueba que
permitan determinar los parámetros que
definen la calidad de los diferente tipos de
agua. Para facilitar su consulta en esta
página estas normas mexicanas se han
clasificado en:

1.- Muestreo, Procedimientos y Vocabulario
2.- Parámetros biológicos y toxicidad

BIBLIOGRAFIAS

Pommerville, Jeffrey C. (2010). Alcamo’s fundamentals of Microbiology (4ta edición).
Jones and Bartlett Publishers

http://www.unavarra.es/genmic/curso%20microbiologia%20general/09-
factores%20de%20supervivencia.htm

http://www.ecured.cu/index.php/Medio_de_cultivo_(Microbiolog%C3%ADa)

http://es.scribd.com/doc/14173131/5-Tecnicas-Basicas-Para-El-Cultivo-de-
Microorganismo

http://perso.wanadoo.es/sergioram1/medios_de_cultivo.htm

http://es.wikipedia.org/wiki/%C3%81cido-alcohol_resistencia

http://www.cect.org/docs/cons.pdf

http://www.conagua.gob.mx/Contenido.aspx?n1=2&n2=16&n3=2&n4=141

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